在种和/或亚种水平鉴定从临床样品分离的菌株的方法与流程

文档序号:11126181阅读:来源:国知局

技术特征:

1.使用MALDI-TOF-MS分析,在种和/或亚种水平鉴定从临床样品分离的菌株的非诊断目的的方法,包括在进行MALDI-TOF-MS分析前将病菌分类成组的步骤,其中所述分析包括以下步骤:将待鉴定菌株的谱图特征谱与包含所述待鉴定菌株所属的病菌组的种和/或亚种的代表性菌株的特征性MALDI-TOF-MS谱图的参考数据库的峰相比较,所述数据库对于每个代表性菌株包含,与具有最高强度并任意设置为1的峰相比,出现在至少2种亚培养物中、具有大于0.05的相对强度的一组峰。

2.权利要求1的方法,其中所述数据库对于每个代表性菌株包含,与具有最高强度并任意设置为1的峰相比,具有大于0.1的相对强度的一组峰。

3.权利要求1或2的方法,其中所述分类步骤是基于生长条件和/或菌落特征,和/或通过显微镜检查的细菌形态,和/或革兰氏染色,和/或简单的表型试验。

4.权利要求1-3中任一项的方法,包括在整个完整的细胞上或者在裂解后获得的或对应于细胞组分的级分的蛋白质提取物上进行MALDI-TOF-MS技术。

5.权利要求1-4中任一项的方法,包括在进行MALDI-TOF-MS分析前,向分离的菌落中添加苯甲酸衍生物作为基质培养基,所述衍生物选自包括DHB的组。

6.权利要求1-5中任一项的方法,其中每个谱图是来自含有待分析菌株的孔的不同区域的至少400个,优选地大于1000个,甚至大于2000个激光发射的总和,在m/z 500-50000的范围内分析所述谱图。

7.权利要求6的方法,包括使用至少1000个激光发射。

8.权利要求7的方法,包括使用至少2000个激光发射。

9.权利要求6-8中任一项的方法,其中在m/z 500-20000的范围内分析所述谱图。

10.权利要求9的方法,其中在m/z 2000-20000的范围内分析所述谱图。

11.权利要求1-10中任一项的方法,其中待鉴定菌株选自包括细菌的组。

12.权利要求11的方法,其中所述细菌是凝固酶阴性葡萄球菌属。

13.权利要求11的方法,其中所述细菌是非发酵革兰氏阴性杆菌。

14.权利要求1-10中任一项的方法,其中待鉴定菌株选自包括酵母的组。

15.权利要求1-10中任一项的方法,其中待鉴定菌株选自包括霉菌的组。

16.获得由在通过种和/或亚种的代表性菌株的MALDI-TOF-MS分析获得的谱图中所选的峰构成的数据库的方法,所述方法包括以下步骤:

-使用一组菌株,每一个种或亚种由一个或多个菌株所代表,和

-记录通过使用MALDI-TOF-MS得到的这种组的每个菌株的谱图,并保留相对强度大于0.02的峰,所述峰存在于至少2种亚培养物,优选地5种或甚至10种或更多种亚培养物中。

17.权利要求16的方法,其中对于每个代表性菌株,所选的峰与具有最高强度并任意设置为1的峰相比,具有大于0.05的相对强度。

18.权利要求16的方法,其中对于每个代表性菌株,所选的峰与具有最高强度并任意设置为1的峰相比,具有大于0.1的相对强度。

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