1.一种用于胃癌早期诊断及预后评估的NDRG4基因甲基化检测的试剂盒,其特征在于:包括一对NDRG4基因启动子区甲基化特异性扩增引物及荧光定量探针,具体核苷酸序列如下:
上游引物:5'-TGGGATGGGGATGTTTTTGT-3' ;
下游引物:5'-CCTCCAAACCCCCTATAACC-3';
荧光定量探针:5'-6-FAM-AAAACGACGCTACCGTAATCTTTA-BHQ1-3'。
2.根据权利要求1所述的用于胃癌早期诊断及预后评估的NDRG4基因甲基化检测的试剂盒,其特征在于包括荧光定量甲基化特异性PCR反应体系,其组成为:20 μl 的荧光定量甲基化特异性PCR反应体系的组成为:2×HotTaq Mater Mix 10.0 ul;5 μM的上、下游引物各1.0 μl;2 μM的探针1.0 μl;H2O 5.0 μl,DNA样本模板2.0 μl;荧光定量甲基化特异性PCR反应条件如下:(1)95℃ 预变性10min;(2)95℃变性15s,60℃退火45s,共45个循环,期间连续采集荧光信号;(3)40℃维持10min,每例标本设三个复孔,Qiagen EpiTect methylated DNA作为阳性对照和Qiagen EpiTect unmethylated DNA作为阴性对照,水为空白对照。
3.根据权利要求1所述的用于胃癌早期诊断及预后评估的NDRG4基因甲基化检测的试剂盒,其特征在于所述试剂盒还包括检测参照基因ACTB甲基化程度的甲基化特异性引物对及探针,具体核苷酸序列如下:
上游引物:5'-TGGTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGT-3' ;
下游引物:5'-AACCAATAAAACCTACTCCTCCCTTAA-3' ;
荧光定量探针:
5'-6-FAM-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA-BHQ1-3' 。
4.根据权利要求1-3所述的用于胃癌早期诊断及预后评估的NDRG4基因甲基化检测的试剂盒的用途,其特征在于:可用于制备胃癌早期诊断和预后评估的试剂或试剂盒。