多价抗体的制作方法

技术特征：

1.一种重组融合蛋白，其包含：

重链，其在序列上从N端开始包含，名称为V_H1的可变结构域、C_H1区和名称为V_H2的另外的可变结构域，

轻链，其在序列上从N端开始包含，名称为V_L1的可变结构域、CL结构域和名称为V_L2的可变结构域，

其中所述重链和轻链经匹配提供由V_H1和V_L1的第一可变结构域对形成的第一结合部位，以及由V_H2和V_L2的第二可变结构域对形成的第二结合部位，

其中在形成结合部位的可变结构域对之间存在二硫键，并且

所述融合蛋白缀合至PEG聚合物。

2.权利要求1的重组融合蛋白，其中在V_H1和V_L1的第一可变结构域对之间和/或V_H2和V_L2的第二可变结构域对之间存在二硫键。

3.权利要求1或权利要求2的重组融合蛋白，其中在V_H2和V_L2的第二可变结构域对之间存在二硫键。

4.权利要求1至3的任一项的重组融合蛋白，其中V_H2的氨基酸通过肽键直接连接至C_H1的氨基酸。

5.权利要求1的重组融合蛋白，其中V_H2通过接头间接连接至C_H1。

6.权利要求1至5的任一项的重组融合蛋白，其中V_L2通过肽键直接连接至CL的氨基酸。

7.权利要求1至5的任一项的重组融合蛋白，其中V_L2通过接头间接连接至CL。

8.权利要求5或权利要求7的重组融合蛋白，其中所述接头具有SEQ ID NO:226中给出的序列。

9.权利要求1至8的任一项的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白通过溶剂可及的半胱氨酸被PEG化。

10.权利要求1至9的任一项的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白通过CH1和/或CL的链间半胱氨酸被PEG化。

11.权利要求1至9的任一项的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白通过轻链中的工程改造的半胱氨酸被PEG化，其中所述工程改造的半胱氨酸的位置选自，按照Kabat编号系统编号的位置5、7、9、10、12、14、15、16、17、18、20、22、24、26、27、28、30、31、34、39、41、42、43、55、56、57、60、61、63、67、68、69、70、72、74、76、77、79、81、107、108、109、110、114、121、122、123、126、127、128、129、143、144、145、147、149、151、152、153、156、157、158、159、160、161、167、168、169、170、171、190、195、197、199、200、202、203、205、206、210、211、212和213。

12.权利要求1至11的任一项的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白通过轻链中的工程改造的半胱氨酸被PEG化，其中所述工程改造的半胱氨酸的位置选自，按照Kabat编号系统编号的位置77、107、109、143、145、149和210。

13.权利要求1至12的任一项的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白通过重链中的工程改造的半胱氨酸被PEG化，其中所述工程改造的半胱氨酸的位置选自，按照Kabat编号系统编号的位置3、7、8、9、10、13、15、16、17、21、26、40、43、57、58、61、62、64、65、66、68、70、72、82a、82b、82c、84、85、86、96、97、98、99、105、112、113、114、115、116、117、120、127、128、129、130、133、134、135、136、156、163、164、165、167、168、169、176、177、179、180、182、183、195、196、197、199、200、203、205、213、215、216、218、220、222和232。

14.权利要求1至13的任一项的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白通过重链中的工程改造的半胱氨酸被PEG化，其中所述工程改造的半胱氨酸的位置选自，按照Kabat编号系统编号的位置82b、116、163、182和216。

15.权利要求1至14的任一项的重组融合蛋白，其中用一个或两个PEG分子PEG化所述重组融合蛋白。

16.权利要求15的重组融合蛋白，其中所述PEG分子在5000至80000Da的范围内。

17.权利要求1至16的任一项的重组融合蛋白，其中重链中的V_H1为来自重链的可变结构域或来自轻链的可变结构域。

18.权利要求1至17的任一项的重组融合蛋白，其中重链中的V_H2为来自重链的可变结构域或来自轻链的可变结构域。

19.权利要求1至18的任一项的重组融合蛋白，其中轻链中的V_L1为来自轻链或重链的可变结构域。

20.权利要求1至19的任一项的重组融合蛋白，其中轻链中的V_L2为来自轻链或重链的可变结构域。

21.权利要求1至16的任一项的重组融合蛋白，其中V_H2为来自重链的可变结构域并且V_L2为来自轻链的可变结构域。

22.权利要求1至21的任一项的重组融合蛋白，其中第二可变结构域对通过两个半胱氨酸残基之间的二硫键连接，一个半胱氨酸残基在V_H2中并且一个半胱氨酸残基在V_L2中，其中所述两个半胱氨酸残基的位置选自VH37和VL95、VH44和VL100、VH44和VL105、VH45和VL87、VH100和VL50、VH100b和VL49、VH98和VL46、VH101和VL46、VH105和VL43以及VH106和VL57。

23.权利要求21或权利要求23的重组融合蛋白，其中V_H2的半胱氨酸在位置44上并且V_L2的半胱氨酸在位置100上。

24.权利要求1至23的任一项的重组融合蛋白，其中所述两个可变结构域对各自为同源对。

25.权利要求1至24的任一项的重组融合蛋白，其中所述两个可变结构域对各自为协同结合抗原的互补VH/VL对。

26.权利要求1至25的任一项的重组融合蛋白，其中CH1和CL结构域来源于IgG1。

27.权利要求1至26的任一项的重组融合蛋白，其是二聚化的。

28.权利要求27的任一项的重组融合蛋白，其通过溶剂可及的半胱氨酸二聚化。

29.权利要求27或28的重组融合蛋白，其通过二硫键直接二聚化。

30.权利要求27的重组融合蛋白，其通过化学接头二聚化。

31.权利要求30的重组融合蛋白，其通过PEG接头二聚化。

32.权利要求27的重组融合蛋白，其通过肽接头二聚化。

33.权利要求1至32的任一项的重组融合蛋白，其为双特异性的或单特异性的。