1.一种区别clade2.3.2.1和clade2.3.4H5AIV的PCR-RFLP方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)从检测样品中提取clade2.3.2.1和clade2.3.4H5AIV核酸RNA;
2)用引物P1和P2同时对clade2.3.2.1和clade2.3.4H5AIV核酸RNA进行RT-PCR扩增,得到相应的HA基因片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,大小为603bp;
3)取RT-PCR扩增产物,经Dra Ⅰ酶切后进行RFLP分析。
2.根据权利要求1所述的区别clade2.3.2.1和clade2.3.4H5AIV的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述步骤2)的扩增引物的序列为:
上游引物P1:5’-ATGCAAACAACTCGACAG-3’,
下游引物P2:5’-ATCTCTGGTTTAGTGTTGATGT-3’。
3.根据权利要求1所述的区别clade2.3.2.1和clade2.3.4H5AIV的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述步骤3)中,DraⅠ酶切位点位于clade2.3.2.1分支的H5亚型流感病毒血凝素基因HA的扩增产物的131-136位,clade2.3.2.1分支的H5亚型流感病毒血凝素基因HA的扩增产物可被切成2段,大小分别为133bp和470bp;而clade2.3.4分支的H5亚型流感病毒血凝素基因HA的扩增片段中没有Dra Ⅰ酶切位点,被酶切后经琼脂糖凝胶电泳检测片段大小不变,仍为603bp。