用于细菌采样的压印法的制作方法

本发明涉及一种细菌采样的方法，具体涉及一种用于细菌采样的压印法。

背景技术：

物体表面、医务人员手上的细菌数及评价方法是国家按照《医院消毒卫生标准》的常规检测方法，根据国家标准要求，各级各类医院的所有临床一线科室每月都需要采样一次，并且每个科室的工作人员都需要进行采样检测，采样点多、频率高、采样过程复杂、影响采样结果因素较多。

根据医务人员手卫生规范的要求，消毒后后被检者五指并拢，用浸有含相应中和液的无菌洗脱液浸湿的棉拭子，在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子，无特殊情况实验需要涂擦两只手面积为60cm²；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10mL含相应中和剂的无菌洗脱液试管里，及时送检。

该过程工作量大，不利于提高医务人员参与的积极性，间接降低了对手部卫生及环境卫生的监管。同时程序繁琐复杂不能够保证每一步都是无菌操作，容易引起采样结果不准确。

技术实现要素：

根据以上现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种用于细菌采样的压印法，能够用于医院手消毒效果的评价，还能应用于物体表面细菌采样，采样快速，结果更准确。

本发明所述的用于细菌采样的压印法，首先，配制中和液，然后将中和液与营养琼脂混合，灭菌，得混合液；将混合液倒入培养碟中，冷却后采用压印法进行细菌采样，培养，计数菌落数。

中和液与营养琼脂的混合液冷却后形成培养基。

所述的中和液采用如下方法配制：将大豆卵磷脂、吐温80、蛋白胨、氯化钠、硫代硫酸钠和甘氨酸加入到水中，然后加入pH调节剂调节pH至7.2-7.4，得中和液。

所述的中和液中，各组分占水的质量的百分比分别为：

大豆卵磷脂0.2-0.4％，吐温80 0.3-1％，蛋白胨0.8-1.2％，氯化钠0.5-0.85％，硫代硫酸钠0.1-0.2％，甘氨酸0.3-0.4％。

所述的pH调节剂为氢氧化钠、盐酸或柠檬酸的一种。配制中和液时，将大豆卵磷脂、吐温80、蛋白胨、氯化钠、硫代硫酸钠和甘氨酸加入到水中后，根据不同的配方，采用的pH调节剂不同，根据测定的pH值，大于7.4时，采用柠檬酸或稀盐酸作为pH调节剂，小于7.2时，采用氢氧化钠作为pH调节剂。

所述的中和液与营养琼脂混合的体积比为1：4-5。

所述的混合液倒入培养碟时的温度为40-45℃。

所述的混合液倒入培养碟中的高度高于培养碟底盒边缘的最高点1-2mm。培养碟底盒边缘的最高点为底盒上的圆环形平台。

所述的灭菌为置于高压蒸汽灭菌器中进行灭菌，在121℃下灭菌半小时，高温下同时可以使得营养琼脂溶解均匀。

所述的采用压印法进行细菌采样的方法为：将培养碟中的培养基表面直接压贴在手掌根部至指根10-20秒。

所述的培养为在35-37℃恒温箱中培养24-48h，所述的计数方法为：菌落数(CFU/cm²)＝培养碟上菌落数/培养碟内底盘面积(cm²)。

关于培养时间的确定，培养时间为24-48h，首次培养时，应于24h、30h、36h、42h、48h分别进行计数，选取菌落数不变的时间点作为培养时间。

所述的培养碟包括盒盖和底盒，底盒的周边外沿设有圆环形平台，圆环形平台的内侧设锁扣，底盒的内底盘上设弧形凸起，弧形凸起的上方设网格线。

所述的网格线为凸起线。

圆环形平台的设置，方便培养碟打开。中和液与营养琼脂冷却后形成培养基，锁扣的设置能够加强培养基与底盒之间的牢固程度，保证培养碟在拿起时，培养基不至于脱落出来。底盒的内底盘上设弧形凸起，弧形凸起的上方设网格线，所述的网格线为凸起线。网格线的设置能够方便细菌的计数，结果的分析可按照菌落数除以底盒内底盘的面积，也可直接读取每个小格里的菌落数。网格线为凸起线能够方便培养基的附着，在混合液倒入培养碟中时，培养液液面高于圆环形平台时不至于溢出，从而使混合液倒入培养碟中的高度高于培养碟底盒上圆环形平台1-2mm，保证培养基能够充分接触到手部或环境表面。

盒盖为倒U形，边缘的高度高于圆环形平台的高度，避免细菌采样完毕盖上盒盖时盒盖的内表面与培养基接触，影响细菌计数。

盒盖采用透明材质制备，可以随时观察培养碟内的情况，可以在封闭的情况下对细菌进行计数，保证分析结果更准确。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明所述方法，方便简单快捷，可有效提高工作效率，不仅可以用于医院手消毒效果的评价，还能应用于物体表面细菌采样，具有很高的推广价值。

2、采用本发明培养碟采样时，能够保证培养基充分接触到手部或环境表面，培养计数过程封闭进行，无污染发生，分析结果更准确。

附图说明

图1是本发明中培养碟的结构示意图；

图2是本发明中培养碟的底盒的结构示意图；

图中：1、盒盖；2、底盒；3、圆环形平台；4、网格线；5、锁扣；6、弧形凸起。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的实施例做进一步描述。

如图1所示，所述的培养碟包括盒盖1和底盒2，底盒2的周边外沿设有圆环形平台3，圆环形平台3的内侧设锁扣5，底盒2的内底盘上设弧形凸起6，弧形凸起6的上方设网格线4。

所述的网格线4为凸起线。盒盖采用透明材质制备。

实施例1

所述的用于手部细菌采样的压印法，包括如下步骤：

(1)配制中和液，将大豆卵磷脂、吐温80、蛋白胨、氯化钠、硫代硫酸钠和甘氨酸加入到水中，然后加入氢氧化钠溶液调节pH至7.3，得中和液。

中和液中，各组分占水的质量的百分比分别为：大豆卵磷脂0.3％，吐温80 0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，硫代硫酸钠0.1％，甘氨酸0.3％。

(2)将中和液与溶解的营养琼脂混合均匀后，置于高压蒸汽灭菌器进行灭菌，得混合液。

(3)将混合液冷至42℃后，倒入培养碟中，冷却待用，冷却后的混合液成为培养基。

(4)将培养碟上的培养基表面直接压贴在手掌根部至指根15秒后，培养24h，根据培养碟上的网格计数。

混合液倒入培养碟中的量高于圆环形平台1mm。

中和液与溶解的营养琼脂的体积比为1：4。

实施例2

所述的用于物体表面细菌采样的压印法，包括如下步骤：

(1)配制中和液，将大豆卵磷脂、吐温80、蛋白胨、氯化钠、硫代硫酸钠和甘氨酸加入到水中，然后加入稀盐酸溶液调节pH至7.2，得中和液。

中和液中，各组分占水的质量的百分比分别为：大豆卵磷脂0.2％，吐温80 0.4％，蛋白胨0.8％，氯化钠0.6％，硫代硫酸钠0.15％，甘氨酸0.4％。

(2)将中和液与溶解的营养琼脂混合均匀后，置于高压蒸汽灭菌器进行灭菌，得混合液。

(3)将混合液冷至45℃后，倒入培养碟中，冷却待用，冷却后的混合液成为培养基。

(4)检测时将培养碟的表面压贴在被检物体上20秒，培养48h，根据培养碟上的网格计数。

混合液倒入培养碟中的量高于圆环形平台2mm。

中和液与溶解的营养琼脂的体积比为1：5。