用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基。前增菌液体培养基包括蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、蔗糖、丙酮酸钠、氯化镁和水。通过大量的食源性致病菌验证该培养基修复效果，结果表明生长效果和生理生化指标修复效果较现有的BPW、EE、TSB等前增菌培养基均具有较大程度的提高，能克服克罗诺菌在食品检验检疫过程中出现漏检缺陷，提高克罗诺菌的检出率，且能有效抑制沙门氏菌等非目标菌的生长繁殖。本发明适用于各类食品中克罗诺菌的快速修复，对预防和控制由食源性克罗诺菌感染导致食源性疾病的发生与传播具有重要意义。
【专利说明】用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基
【技术领域】
[0001]本发明属于食品微生物检验【技术领域】，具体涉及一种克罗诺菌冷热损伤修复前增菌液体培养基。
【背景技术】
[0002]克罗诺菌iCronobacter),是一种重要食源性致病菌，属肠杆菌科的革兰氏阴性杆菌，能导致新生婴幼儿脑膜炎、致死性结肠炎和菌血症等，流行病数据调查表明婴幼儿配方奶粉是其感染的主要传播媒介。
[0003]食品加工过程中，经过高热、低冷、干燥、杀菌等加工工艺单元，易导致克罗诺菌损伤。因此，食品微生物检验过程中，现有的前增菌培养基对损伤细菌修复效果不好或者含有选择性抑制剂而导致损伤细菌无法生长或者生理生化反应发生很大变化，造成食品中克罗诺菌检验出现假阴性结果，导致被克罗诺菌污染的食品进入消费市场，而这些损伤细菌一旦通过食物进入人体，在合适条件下可以复活，进而引起克罗诺菌感染食源性疾病的流行暴发。
【发明内容】
[0004]为了防止食品检验检疫过程中出现克罗诺菌漏检，提高食品中克罗诺菌的检出率，避免损伤克罗诺菌通过食物进入人体导致食源性疾病的暴发，本发明提供一种用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基。
`[0005]用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:
蛋白胨12~15g、磷酸二氢钾1.5~3.5g、十二水磷酸氢二钠8~10g、氯化钠5g、鹿糖100~120g、丙酮酸钠0.8~1.2g、氯化镁0.8~1.2g、水1000ml。
[0006]所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:
蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、鹿糖120g、丙酮酸钠1.0g，氯化镁 1.0g,7jC 1000ml。
[0007]所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:
蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、鹿糖100g、丙酮酸钠
0.8g、氯化镁 0.8g、水 1000ml。
[0008]所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:
蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、鹿糖110g、丙酮酸钠
1.2g、氯化镁 1.2g、水 1000ml。
[0009]本发明配方中各成份的作用说明如下:
1.在缓冲蛋白胨水(BPW)中加入蔗糖的作用在于:蔗糖能抑制培养克罗诺菌时样品中杂菌的生长和繁殖。研究表明克罗诺菌可以利用蔗糖作为碳源，而很多肠道致病菌无法利用蔗糖作为碳源；2.本发明使用的丙酮酸钠是三羧酸循环的中间代谢物丙酮酸的钠盐，可以为损伤细菌提供能量，有效弥补环境损伤过程中糖酵解过程中酶的失活，进而导致的糖代谢障碍。另外，在细菌受冷热损伤过程中，易导致重要金属离子如Mg2+流出细胞，导致相关酶失活，进而抑制重要生理生化与代谢过程如DNA复制等，加入氯化镁(MgCl2)是为了克服镁离子(Mg2+)的流失导致克罗诺菌的生长障碍。
[0010]本发明与现有BPW、肠杆菌增菌肉汤(EE)及胰蛋白胨肉汤(TS) B培养基相比较具有以下方面的优点:
1.生长修复效果好
用克罗诺菌标准菌株人工污染奶粉(无菌奶粉)，在高温(58°C，5min)和低温(_18°C，IOh)损伤处理人工污染样品，取IOml人工污染样品接种至BPW、EE、TSB和本发明培养基37°C培养8h中，通过梯度稀释记录不同培养基的菌落总数，结果发现本发明培养基菌落生长数量显著高于其他培养基，表明该培养基的增菌效果好，修复效率高；相同接种量的情况下，37°C培养8h，菌落数量较BPW、TSB和EE增菌液增加10~100倍；
2.生化指标变化小
用克罗诺菌标准菌株(ATCC28544和ATCC51329)和分离菌株(11株奶粉分离株)人工污染奶粉(无菌奶粉)，在低温损伤处理人工污染样品，取IOml人工污染样品接种至BPW、EE、TSB和本发明培养基中，37 °C培养8h中，用无菌接种环挑取不同前增菌菌悬液接种到营养琼脂培养基中，采用AP1-20e生化试剂条检测菌株生理生化指标变化，实验结果发现其他前增菌培养基修复克罗诺菌生化指标变化较大，而本发明培养基修复后，克罗诺菌的生化反应指标变化小，较BPW、EE和TSB培养基生化指标变化率降低10%以上；
3.具有较好的选择性
该培养基具有较好地抑制样品中杂菌生长，将克罗诺菌和沙门氏菌制备混合菌悬液，然后分别进行热和冷处理 ，加入到本发明培养基中，过夜摇床培养。取不同稀释度的混合菌液涂布培养于含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-α-葡萄糖苷的营养琼脂平板上,培养8h，观察菌落生长，发现95%以上菌落为蓝绿色克罗诺菌的菌落。
【具体实施方式】
[0011]下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。
[0012]实施例1
用于克罗诺菌(frmo如cter)冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H20) 9.0g、氯化钠5g、鹿糖 120g、丙酮酸钠 1.0g，氯化镁 1.0g,7jC 1000ml ；
接种过夜克罗诺菌菌悬液1.0PL到缓冲蛋白胨水(BPW)、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤(TSB)中，37°C 120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数，结果显示该修复培养基较BPW增加50倍，较EE和TSB增加10倍。
[0013]实施例2
用于克罗诺菌(frmo如cter)冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H20) 9.0g、氯化钠5g、鹿糖100g、丙酮酸钠0.8g、氯化镁0.8g、水1000ml ；接种过夜克罗诺菌菌悬液1.ομL到缓冲蛋白胨水(BPW)、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤(TSB)中，37°C 120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数(三个重复)，结果显示该修复培养基较BPW增加45倍，较EE和TSB增加10倍。
[0014]实施例3
用于克罗诺菌(frmo如cter)冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H20)9g、氯化钠5g、鹿糖110g、丙酮酸钠1.2g、氯化镁1.2g、水1000ml ；
接种过夜克罗诺菌菌悬液1.0PL到缓冲蛋白胨水(BPW)、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤(TSB)中，37°C 120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数，结果显示该修复培养基较BPW增加65倍，较EE和TSB增加10倍。
[0015]实施例4
用于克罗诺菌(frmo如cter)冷热损伤修复的前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H20)9g、氯化钠5g、鹿糖110g、丙酮酸钠1.2g、氯化镁1.2g、水1000rnl ；
接种克罗诺菌和沙门氏菌的菌悬液各1.ΟμL至缓冲蛋白胨水(BPW)、肠杆菌增菌肉汤(EE)、胰蛋白胨肉汤(TSB)中，37°C 120rpm摇床培养8h，取出培养基，将培养基做十倍稀释测定菌落总数，涂布于克洛诺菌固体显色培养基表面，37°C恒温培养18h，结果显示培养基表面95%的菌落均为蓝绿色的克罗诺菌菌落。表明该培养基对部分杂菌还有较好的抑制作用。`
【权利要求】
1.用于克罗诺菌冷热损伤修复的前增菌液体培养基，其特征在于:所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨12~15g、磷酸二氢钾1.5~3.5g、十二水磷酸氢二钠8~10g、氯化钠5g、蔗糖100~120g、丙酮酸钠0.8~1.2g、氯化镁0.8~1.2g、水1000ml。
2.根据权利要求1所述的前增菌液体培养基，其特征在于:所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖120g、丙酮酸钠 1.0g，氯化镁 1.0g,7jC 1000ml。
3.根据权利要求1所述的前增菌液体培养基，其特征在于:所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖100g、丙酮酸钠0.8g、氯化镁0.8g、水1000ml。
4.根据权利要求1所述的前增菌液体培养基，其特征在于:所述前增菌液体培养基由下列重量的物质组成:蛋白胨15g、磷酸二氢钾1.5g、十二水磷酸氢二钠9g、氯化钠5g、蔗糖110g、丙酮酸钠1. 2g、氯化镁1.2g、水1000ml。
【文档编号】C12R1/01GK103865849SQ201410080751
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月7日 优先权日:2014年3月7日
【发明者】叶应旺, 李辉, 凌娜, 韩永佳 申请人:合肥工业大学