用于黄瓜‘粤青1号’杂交种子纯度鉴定的引物及方法与流程

文档序号:12249795阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于黄瓜‘粤青1号’杂交种子纯度鉴定的SSR引物,其特征在于,所述SSR引物可以在黄瓜‘粤青1号’杂交种子中扩增出189 bp的母本特异标记,226 bp的父本特异标记。

2.根据权利要求1所述的SSR引物,其特征在于,所述母本特异标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,父本特异标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1或2所述的SSR引物,其特征在于,所述SSR引物的核苷酸序列如下所示:

85F: 5’-TCACACCTGCATTTTTCATCA-3’(SEQ ID NO .1);

85R: 5’-GAGGCGTTCTCAACATACCC-3’(SEQ ID NO.2)。

4.黄瓜‘粤青1号’杂交种子纯度的鉴定方法,包括如下步骤:

(1)提取黄瓜幼苗基因组DNA;

(2)以黄瓜基因组DNA为模板,使用权利要求1-3任一项所述的SSR引物进行PCR扩增;

(3)对扩增的产物进行凝胶电泳;

(4)对电泳结果进行分析,只有同时具有母本和父本特异性条带的单株才为真正的杂交种,缺少其中的任意一条带记为假杂种,计算种子纯度,其中,SSR引物产生189 bp的母本特异标记, 226 bp的父本特异标记。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,PCR扩增的20μl反应体系为:基因组DNA 5ng,10×buffer(+Mg2+)2μl,dNTP 0.2mmol·L-1,SSR引物0.25 mmol·L-1,Taq 酶0.2U。

6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,PCR扩增的程序为:94℃预变性5min后,94℃变性40s,55℃退火40s,72℃延伸1min,30个循环后,72℃保持7min,然后置于4℃保存待检测。

7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述凝胶电泳为8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

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