新型DNA稳定溶液及制备方法与流程

本发明涉及一种新型DNA稳定溶液，属于生物技术领域。

背景技术：

DNA是染色体的重要组成充分，是真核生物的遗传基本物质，含有物种个体的遗传信息，可用于构建基因组文库、分离所需的基因和检测相关的分子标记等。由于DNA所含的遗传信息量大，并且容易获取，具有极其稳定的化学性质，是目前种质资源和遗传资源收集和保存的主要内容之一。

DNA分子的序列结构具有三个重要特性：(1)不同个体序列不一样；(2)终生不变；(3)同一人体各不同部位细胞中的DNA序列相同。因此DNA分子本身具备档案的特性，即具有长期稳定性、信息属性、个体特异性和可以备查的属性。

实际上，在疾病基因组学、药物基因组学、群体遗传学和进化等研究领域，DNA是最可靠的证据和研究过程的基本材料，被广泛应用。同时生命科学研究者日益认识到保存DNA对于今后系统生物医学的发展的重要性，各国纷纷开始保存DNA。

DNA是由许多脱氧核苷酸残基按一定顺序彼此用3’，5’-磷酸二酯键相连构成的长链，形成链的作用力是磷酸二酯键，易被酸水解；另外，大多数DNA含有两条这样的长链，两条链间以氢键相连接，氢键在酸性环境内易开键，也会造成DNA的降解。

为了维持DNA结构的完整性，避免DNA大规模断裂和降解，DNA最佳保存方法是干粉-80℃或者液氮低温保存，但要制成干粉则需要大量的DNA，取材困难，在实际DNA样本资源收集中不具有操作性。而用无水乙醇保存DNA，虽然可以事先分装保存，但也存在反复冻融问题。而固相DNA保存技术是最近提出的新概念，适用于永久保存，并且这种方法的保存基质是否影响DNA后续实验、保存具体效果，目前无这方面的任何数据，尚有待时间考验。并且对于保存期间需要多次使用的样本，需要重新提取DNA，操作复杂，并且容易导致DNA断裂，将导致一些对DNA质量要求高的检测实验无法进行。

现有的许多DNA保存的方法是溶解在TE缓冲液或者双蒸水中，在-20℃或-80℃下长期保存，这两种保存方法随着时间的推移，DNA会有降解。

现有技术中，中国专利申请CN 102559654A公开了一种DNA保存溶剂，该DNA保存溶剂的组分包括：甘油、TE缓冲液、1-羧基-N，N，N-三甲基乙内酯，其中，甘油的终体积为25％～80％，TE缓冲液的终浓度为1×TE～5×TE，1-羧基-N，N，N-三甲基乙内酯的终浓度为1～6mol/L。这种DNA保存溶液，组分较多，溶液配置复杂，成本较高。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，而提供一种转染融合度高，成分简单，DNA结构保持稳定，不易降解的新型DNA稳定溶液。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：该新型DNA稳定溶液，其特征在于，由以下成分配比组成：

磷酸钾 0.1M，

葡萄糖 10mM，

乙二胺四乙酸二钠 10mM，

其溶剂为水。

本发明所述DNA保存温度为-20℃或-80℃。

一所述新型DNA稳定溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将磷酸钾、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠按比例加入水中，并混合均匀。

本发明的优点为：溶解在这种新型溶液中的血液基因组、质粒DNA以及植物基因组，在-20℃或-80℃下保存三年不降解。但是同样的DNA溶解在TE缓冲液中会部分降解，本发明可以很好的使DNA保持稳定，解决了被降解的弊端。具体优点为：

1、磷酸钾用于缓冲系统符合细胞内环境的生理范围(pKa＝7.2)，可以保持DNA的稳定；

2、葡萄糖可以增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解；

3、乙二胺四乙酸二钠又叫做EDTA-2Na，是化学中一种良好的配合剂，它有六个配位原子，形成的配合物叫做鳌合物，在本体系中它与DNA水解酶的激活因子(Mg²⁺)结合，从而阻止DNA分子的降解。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是对比实验1的琼脂糖凝胶检测图。

图2是对比实验2的琼脂糖凝胶检测图。

图3是对比实验3的琼脂糖凝胶检测图。

图4是对比实验4的琼脂糖凝胶检测图。

具体实施方式

下面结合附图并通过实施例对本发明作进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。

实施例1。

本实施例的新型DNA稳定溶液由以下成分配比组成：

磷酸钾 0.1M，

葡萄糖 10mM，

乙二胺四乙酸二钠 10mM，

其溶剂为水。

本处的0.1M指的是1升溶液含0.1摩尔溶质，10mM指的是1升溶液含10毫摩尔溶质。

DNA保存温度为-20℃或-80℃。

参见图1，比较实验1：

将本实施例中的新型DNA稳定溶液与TE溶液分别在-20℃下保存DNA一年后的对比。

1％琼脂糖凝胶上样5ul如下表

序号1-3为-20℃TE溶液保存DNA一年。

序号4-6为-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年。

通过比较实验1可看出，-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年后和-20℃TE溶液保存DNA一年后，前者的浓度明显高于后者，-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年后，基本无降解。

参见图2，比较实验2：

将本实施例中的新型DNA稳定溶液与TE溶液分别在-20℃下保存DNA两年后的对比。

1％琼脂糖凝胶上样5ul如下表

序号1-3为-20℃TE溶液保存DNA两年。

序号4-6为-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA两年。

通过比较实验2可看出，-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA两年后和-20℃TE溶液保存DNA两年后，前者的浓度明显高于后者，-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA两年后，基本无降解。

参见图3，比较实验3：

将本实施例中的新型DNA稳定溶液与TE溶液在-80℃下分别保存DNA三年后的对比。

1％琼脂糖凝胶上样5ul

序号1-3为-80℃TE溶液保存DNA三年。

序号4-6为-280℃新型DNA稳定溶液保存DNA三年。

通过比较实验3可看出，-80℃新型DNA稳定溶液保存DNA三年后和-80℃TE溶液保存DNA三年后，前者的浓度明显高于后者，-80℃新型DNA稳定溶液保存DNA三年后，基本无降解。

参见图4，比较实验4：

序号1-2为-80℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年。

序号3-4为-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年。

序号5-6为-20℃TE溶液保存一年。

通过比较实验4可看出，-80℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年后相比-20℃新型DNA稳定溶液保存DNA一年后，前者的核酸浓度稍高，在-80℃下，DNA更稳定，但是差别也不大。而-20℃TE溶液保存一年，则浓度明显降低，发生了降解。

通过上述比较实验，本发明的新型DNA稳定溶液，配比简单，制作方便，DNA在该溶液中保存，使其更加稳定，不易降解。

本实施例中比较实验的表格中，OD260指的是核酸的吸光度，用于反应溶液中核酸的浓度。260/280代表核酸的吸光度与蛋白质的吸光度的比值，即核酸纯度，用于估算核酸的纯度。260/230代表核酸的吸光度与样品中纯在的污染物的比值，即去盐程度。

实施例2。

本实施例的新型DNA稳定溶液的制备方法，包括以下步骤：将磷酸钾、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠按比例加入水中，并混合均匀。

本说明书中所描述的以上内容仅仅是对本发明所作的举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明说明书的内容或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。