肠胃外注射用稳定溶液的制作方法

肠胃外注射用稳定溶液的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种肠胃外注射用稳定溶液。具体地，本发明提供肠胃外注射用胰高血糖素的稳定制剂以及使用这类胰高血糖素制剂治疗低血糖症，尤其是紧急情况下严重的低血糖症的方法。
【专利说明】
肠胃外注射用稳定溶液
[0001] 本申请是2012年3月9日提交的发明名称为"肠胃外注射用肽药物的稳定制剂"的 中国申请第201280012645.6号的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及药物制剂，更具体地涉及具有改进稳定性的肽的药物制剂，以及使用 这类药物制剂治疗各种疾病、病症和病况的方法。
【背景技术】
[0003] 糖尿病在现代社会中是严重的健康问题。胰岛素对于I型和II型糖尿病都是关键 的治疗剂。过去二十年的研究证实通过使用胰岛素对葡萄糖的严格代谢控制不仅降低了发 生率，而且延迟患有1型和2型糖尿病的人的并发症的发展。不幸地，实现严格葡萄糖控制所 需要的密集的胰岛素治疗还与发展的低血糖症或"低血糖"显著增加的风险有关。
[0004] 低血糖症的症状在患者之间有很大不同，但是一般包括震颤、心悸、易激惹、焦虑、 神经质、饥饿、心动过速、头痛和苍白。一旦血糖恢复到正常水平，症状一般就会消退。如果 低血糖症没有逆转，血糖的进一步降低会导致中枢神经系统中与神经低糖症状，例如难以 集中精神、口齿不清、视力模糊、体温降低、行为改变以及如果未治疗导致的失去知觉、癫痫 和可能死亡相关的葡萄糖的消耗。
[0005] 通常，低血糖症可以如以下定义为较轻的至中等的低血糖症或严重的低血糖症：
[0006] 较轻的至中等的低血糖症:不管症状的严重程度患者可以自我治疗的发作，或者 其中血糖水平低于70mg/dL(3.9毫摩尔/升)任何无症状的血糖测量。
[0007] 严重的低血糖症:操作上定义为患者不能自我治疗而需要外部帮助的低血糖症的 发作。一般地，神经低糖症状和认知损伤在血糖水平大约为50mg/dL(2.8毫摩尔/升）时开 始。
[0008] 较轻至中等的低血糖症的大部分发作可以通过摄取快速作用的糖类例如葡萄糖 片或食物(果汁、软饮料或甜的零食)相对容易地自我治疗。按照定义，严重的低血糖症不能 自我治疗，从而需要外部介入。如果患者可以吞咽并且是合作的，那么适合使用凝胶剂或产 品例如蜂蜜或果冻放置到面颊内部。如果患者不能吞咽，那么使用皮下或肌内注射的胰高 血糖素来治疗严重的低血糖症。
[0009] 胰高血糖素是天然存在的29个氨基酸长并由胰腺的a细胞分泌的肽激素。胰高血 糖素的主要功能是通过糖原分解和糖原异生两者维持葡萄糖产生，主要由肝介导。胰高血 糖素是主要的胰岛素反调节激素，并用作糖尿病的患者的严重低血糖症的一线治疗剂。 [0010]已经进行了许多尝试以开创用于治疗紧急情况下的严重低血糖症的胰高血糖素 救护药物。当前，在美国目前可用的有两种胰高血糖素试剂盒，由Eli Lilly(GlUcag〇n Emergency Kit)和Novo Nordisk(01ue.aGen?HypoKit)制造。两种产品都将冷冻干燥的 胰高血糖素的小瓶与预装满水稀释液的注射器组合。冷冻干燥的胰高血糖素必须采用在紧 急情况下难以使用的复杂步骤来重构。这些产品还提供大体积注射，这是因为胰高血糖素 难溶于水。最近，已经进行尝试以改进胰高血糖素在水溶液中的稳定性，以开创更稳定的胰 高血糖素类似物和/或改进经粉末注射的胰高血糖素的递送。
[0011] 尽管已经取得了一些进展，但是仍然需要用于治疗紧急情况下的严重低血糖症的 更加用户友好的胰高血糖素救护药物。这种胰高血糖素救护药物会需要由糖尿病患者和/ 或其照顾者连续携带，从而会需要在非冷冻温度(25-30°C)下是长时间（>2年)稳定的。理想 地，其还会需要对于普通人群易于施用，并且在施用于低血糖症患者之前不需要过多的处 理/重构。胰高血糖素救护药物还会需要在一定温度范围内，包括从〇°C至30°C的温度范围 内可以使用。

【发明内容】

[0012] 为了解决这样的需求和其他问题，本发明提供一种稳定的胰高血糖素救护制剂以 及使用该稳定的胰高血糖素制剂来治疗严重的低血糖症的方法。有利地，在本发明的制剂 中胰高血糖素是稳定化的，使得能够长期存储和/或长时间递送。同样地，本发明的胰高血 糖素制剂在非冷冻温度下长时间稳定，易于施用而不需要重构，以及在一定温度范围内，包 括从0 °C至30 °C的温度范围内可以使用。
[0013] 重要地，本发明的配制技术可以普遍适用于如胰高血糖素一样在水环境中具有差 的或有限的稳定性和溶解度的许多其他的肽的递送。实际上，目前清楚的是利用非质子极 性溶剂，例如DMS0、匪P、乙酸乙酯或其混合物将肽配制成高浓度的非水溶液对于这类重要 的肽疗法是有价值的递送平台。此外，本发明的配制技术可以普遍适用于在同一溶液中两 种或更多种肽的递送。
[0014] 因此，在一个方面，本发明提供一种肠胃外注射用稳定制剂，所述制剂包含：（a)肽 或其盐，其中所述肽已经被干燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中干燥的肽具有约等于肽在 非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆;和(b)非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于5%，并 且其中当干燥的肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的肽保持约等于肽在非挥发性缓冲剂 中的pH的pH记忆。
[0015] 在另一个方面，本发明提供一种肠胃外注射用稳定制剂，所述制剂包含：（a)第一 肽或其盐，其中所述第一肽已经在第一非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的第一肽 具有约等于所述第一肽在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一pH记忆；（b)第二肽或其盐，其 中所述第二肽已经在第二非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的第二肽具有约等于第 二肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆;和(c)非质子极性溶剂;其中制剂的水分 含量小于5%，其中当干燥的第一肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的第一肽保持约等于 第一肽在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一 pH记忆，并且其中当干燥的第二肽在非质子极 性溶剂中重构时，干燥的第二肽保持约等于第二肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH 记忆。
[0016] 在另一个方面，本发明提供一种肠胃外注射用稳定制剂，所述制剂包含:肽或其盐 (例如其盐酸盐或乙酸盐）；和非质子极性溶剂，其中制剂的水分含量小于5%。
[0017] 本文所描述的稳定制剂对在水环境中具有有限的或差的稳定性或溶解度的任何 肽的肠胃外注射有用。因此，在一些实施方案中，肽(第一肽和第二肽的每一种)或其盐选自 胰高血糖素、普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、LHRH激动剂、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌 毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素(cholecystikinin)、芋螺毒素、胃抑制肽、胰岛素样生 长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动 剂、艾塞那肽、其类似物以及其混合物。在一个优选的实施方案中，肽是胰高血糖素或胰高 血糖素类似物或胰高血糖素肽模拟物。在另一个实施方案中，肽是甲状旁腺素。在又一实施 方案中，肽是亮丙瑞林。在再一实施方案中，肽是格拉默。在又一实施方案中，第一肽是普兰 林肽，第二肽是胰岛素。在再一实施方案中，第一肽是胰高血糖素，第二肽是艾塞那肽。 [0018]肽(或在制剂包含两种或更多种肽的实施方案中的每种肽）与非挥发性缓冲剂混 合并干燥成干燥的肽粉。合适的非挥发性缓冲剂包括但不限于甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓 冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物。在一个优选的实施方案中，非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲 剂。在另一个优选的实施方案中，非挥发性缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲剂的混 合物。在其中制剂包含两种或更多种肽的一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非 挥发性缓冲剂相同。在其中制剂包含两种或更多种肽的一些实施方案中，第一非挥发性缓 冲剂和第二非挥发性缓冲剂不同。
[0019] 在本发明的一些制剂中，肽与非挥发性缓冲剂和稳定化赋形剂混合，然后干燥成 干燥的肽粉。合适的稳定化赋形剂包括但不限于糖、淀粉及其混合物。在一些实施方案中， 糖是海藻糖。在一些实施方案中，淀粉是羟乙基淀粉(HES)。在一些实施方案中，稳定化赋形 剂以约1 % (w/v)到约60% (w/v)、从约1 % (w/v)到约50% (w/v)、从约1 % (w/v)到约40% (w/ ￥)、从约1%(￥八）到约30%(￥八）、从约1%(￥八）到约20%(￥八）、从约5%(￥八）到约60% (w/v)、从约5% (w/v)到约50% (w/v)、从约5% (w/v)到约40% (w/v)、从约5% (w/v)到约 30% (w/v)、从约5% (w/v)到约20% (w/v)、从约 10% (w/v)到约60% (w/v)、从约 10% (w/v) 到约50%(￥八）、从约10%(￥八)到约40%(￥八）、从约10%(￥八)到约30%(￥八）、从约10% (w/v)到约20 % (w/v)的量存在于制剂中。在其中制剂包含两种肽的一些实施方案中，第一 非挥发性缓冲剂中的第一肽和第二非挥发性缓冲剂中的第二肽都进一步包含稳定化赋形 剂，第一非挥发性缓冲剂中的第一肽的稳定化赋形剂和第二非挥发性缓冲剂中的第二肽的 稳定化赋形剂相同。在其中制剂包含两种肽的其他实施方案中，第一非挥发性缓冲剂中的 第一肽和第二非挥发性缓冲剂中的第二肽都进一步包含稳定化赋形剂，第一非挥发性缓冲 剂中的第一肽的稳定化赋形剂和第二非挥发性缓冲剂中的第二肽的稳定化赋形剂不同。
[0020] -旦一种或更多种肽和非挥发性缓冲剂或者肽、非挥发性缓冲剂和稳定化赋形剂 干燥成粉末，干燥的肽粉在非质子极性溶剂中溶解或重构。非质子极性溶剂的实例包括但 不限于以下溶剂：二甲基亚砜（DMS0)、二甲基甲酰胺（DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮 (NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸丙二醇酯及其混合物。二甲基亚砜(DMS0)、N-甲基吡咯烷 酮(NMP)、乙酸乙酯及DMS0、NMP和乙酸乙酯中一种或更多种的混合物是尤其优选的非质子 极性溶剂。在一个优选的实施方案中，非质子极性溶剂是DMS0。在另一个优选的实施方案 中，非质子极性溶剂是DMS0和NMP的混合物。在又一优选的实施方案中，非质子极性溶剂是 DMS0和乙酸乙酯的混合物。
[0021] 在一些实施方案中，一种或更多种肽在非质子极性溶剂(例如二甲基亚砜(DMS0)、 二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸丙二醇酯 或其混合物)的混合物和降低制剂的凝固点的共溶剂中重构。在一些实施方案中，共溶剂使 制剂的凝固点降低至少约5°C、至少约10°C、至少约15°C或至少约20°C。在一些实施方案中， 共溶剂使制剂的凝固点降低到约3 °C、约2°C、约1°C或约0 °c或更低。在一些实施方案中，共 溶剂是极性质子溶剂。在优选的实施方案中，共溶剂选自乙醇、丙二醇(PG)、甘油及其混合 物。在一些实施方案中，共溶剂以约10% (w/v)到约50% (w/v)、从约10% (w/v)到约40% (w/ v)、从约 10% (w/v)到约30% (w/v)、从约 10% (w/v)到约25% (w/v)、从约 15% (w/v)到约 50% (w/v)、从约 15% (w/v)到约40% (w/v)、从约 15% (w/v)到约30% (w/v)、从约 15% (w/v) 到约25% (w/v)的量存在于制剂中。
[0022] 重要地，本发明的制剂具有非常少的残留水分，因此这类制剂中的肽长时间保持 稳定。在优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量小于约4%、优选小于约3%、优选小于 约2%，甚至更优选小于约1 %、优选小于约0.5%、优选小于约0.25%、优选小于约0.2%、优 选小于约0.15%或优选小于约0.1 %。在其他优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量为 从约0.01 %到约4%、优选从约0.01 %到约3 %、优选从约0.01 %到约2 %、优选从约0.01 % 到约1 %、优选从约0.1 %到约4%、优选从约0.1 %到约3%、优选从约0.1 %到约2%、优选从 约0.1 %到约1 %、优选从约0.25%到约4%、优选从约0.25%到约3%、优选从约0.25%到约 2%、优选从约0.25%到约1 %或优选从约0.5%到约1 %。
[0023] 当肽与非挥发性缓冲剂混合时，非挥发性缓冲剂选择为使得肽在水环境中具有最 大稳定性、最大溶解度和最小降解的pH。一旦被干燥，肽就会具有最大稳定性、最大溶解度 和最小降解的pH记忆，并且当在非质子极性溶剂中溶解或重构时会保留该pH记忆。同样地， 在优选实施方案中，制剂中的肽会具有约2.0到约3.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶 解度和最小降解。在其他实施方案中，制剂中的肽会具有约3.0到约5.0的pH记忆以确保最 大稳定性、最大溶解度和最小降解。在其他实施方案中，制剂中的肽会具有约4.0到约5.0的 pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在又一其他实施方案中，肽会具有约 4.0到约6.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在又一其他实施方案中， 肽会具有约6.0到约8.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在其中制剂 包含两种肽的一些实施方案中，第一肽具有约4.0到约6.0的pH记忆以确保最大稳定性、最 大溶解度和最小降解，第二肽具有约1.5到约2.5或约6.0到约8.0的pH记忆以确保最大稳定 性、最大溶解度和最小降解。在其中制剂包含两种肽的一些实施方案中，第一肽具有约3.0 到约5.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解，第二肽具有约1.5到约2.5或 约6.0到约8.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在其中制剂包含两种 肽的其他实施方案中，第一肽具有约2.0到约3.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度 和最小降解，第二肽具有约4.0到约5.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降 解。如何确定用于获得具有最大稳定性、最大溶解度和最小降解的肽的最佳pH对本领域技 术人员会是显而易见的。
[0024] 可以在本发明的稳定制剂中配制任何合适剂量的一种或更多种肽。通常地，肽(或 在包含两种或更多种肽的实施方案中的每种肽）以约〇.5mg/mL到约100mg/mL的量存在于制 剂中。在一些实施方案中，肽以约10mg/mL到约60mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案 中，肽以约20mg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在再一其他实施方案中，肽以约5mg/mL 到约15mg/mL的量存在于制剂中。在又一其他实施方案中，肽以约0.5mg/mL到约2mg/mL的量 存在于制剂中。在又一其他实施方案中，肽以约lmg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。此 外，肽的剂量可以根据所用的肽以及待治疗的疾病、病况或病症改变对技术人员会是显而 易见的。
[0025] 在一些实施方案中，本发明的制剂还包含抗氧化剂。在其他实施方案中，制剂还包 含螯合剂。在再一其他实施方案中，本发明的制剂还包含防腐剂。
[0026] 在另一个方面，本发明提供一种用于治疗可以通过对对象施用对治疗、减轻或预 防疾病、病症或病况有效量的如本文所描述的稳定肽制剂来治疗、减轻或预防的疾病、病症 或病况的方法。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是低血糖症。在其中疾病、病症或病况 是低血糖症的一些实施方案中，方法包括施用对治疗低血糖症有效量的本发明的稳定胰高 血糖素制剂。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是糖尿病。在其中疾病、病症或病况是糖 尿病的一些实施方案中，方法包括施用对治疗糖尿病有效量的本发明的稳定的胰岛素和普 兰林肽制剂。
[0027] 在又一方面，本发明提供一种用于制备肠胃外注射用稳定制剂的方法，所述方法 包括:将肽和非挥发性缓冲剂干燥成干燥的肽粉;利用非质子极性溶剂重构干燥的肽粉，从 而制备稳定制剂，其中稳定制剂的水分含量小于5%。在一些实施方案中，干燥的肽粉具有 约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆，当干燥的肽粉在非质子极性溶剂中重构时， 干燥的肽粉保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆。
[0028] 在再一方面，本发明提供用于治疗疾病、病症或病况的试剂盒，所述试剂盒包括： 包含一种或更多种肽或其盐的稳定制剂，其中所述肽已经在非挥发性缓冲剂中干燥，并且 其中干燥的肽具有约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆;和非质子极性溶剂;其中 制剂的水分含量小于5%，并且其中当干燥的肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的肽保持 约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆;和用于对对象施用稳定制剂的注射器。
[0029] 在一些实施方案中，试剂盒用于治疗低血糖症，稳定制剂包含如本文所描述的胰 高血糖素制剂。在一些实施方案中，试剂盒用于治疗糖尿病，稳定制剂包含如本文所描述的 胰岛素和普兰林肽制剂。在一些实施方案中，注射器是笔注射装置、自动注射器装置或栗中 的一些。在一些实施方案中，注射器预装满稳定制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括说 明书，其中所述说明书指导稳定制剂的施用以治疗有此需要的对象。
[0030] 根据以下详细说明和所附权利要求，本发明的其他目的、特征和优点对本领域技 术人员会是显而易见的。
【附图说明】
[0031] 图1示出了注射溶解于DMS0或NMP的冷冻干燥的胰高血糖素-甘氨酸-海藻糖后的 血浆胰高血糖素水平。
[0032]图2示出了注射溶解于DMS0或NMP的冷冻干燥的胰高血糖素-甘氨酸-海藻糖后的 血糖水平。
【具体实施方式】
[0033] I ?引言
[0034]肽可以通过许多不同的机理降解，包括脱酰胺基、氧化、水解、二硫互换和外消旋。 此外，水作为塑化剂，其有利于蛋白质分子的解折叠和不可逆的分子聚集。因此，为了提供 在环境或生理温度下随时间稳定的肽制剂，通常需要非水的或基本上非水的肽制剂。
[0035]将含水肽制剂浓缩成干粉制剂是一种增加药物肽制剂稳定性的方法。例如，肽制 剂可以使用各种技术被干燥，包括喷雾干燥、冻干或冷冻干燥和脱水。通过这样的技术获得 的干粉肽制剂显示出显著增加的在环境或甚至生理温度下随时间的稳定性。
[0036]本发明部分地基于稳定的肽制剂(例如稳定的胰高血糖素救护制剂)可以通过首 先将非挥发性缓冲剂中的一种或更多种肽(例如胰高血糖素肽)冷冻干燥成干燥的肽粉而 容易地制备这一出人意料的发现。干燥的肽具有在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH 的限定的"pH记忆"。一旦被干燥，产生的肽粉，例如冷冻干燥的胰高血糖素就溶解于非质子 极性溶剂中，从而形成稳定制剂，其中制剂的水分含量小于5%、优选小于4%、小于3%、小 于2%、小于1%、小于0.5%、小于0.25%、小于0.15%或小于0.1%。当干燥的肽在非质子极 性溶剂中重构时，其保持其限定的pH记忆，即当在非质子极性溶剂中重构时，肽的pH约等于 在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH。有利地，一旦制得，制剂(例如胰高血糖素制剂） 是长时间稳定的，准备好使用而不需重构，并且在一定的温度范围内可以使用。
[0037] 重要地，本发明的配制技术可以普遍适用于如胰高血糖素一样在水环境中具有差 的或有限的稳定性和溶解度的许多其他的肽的递送。实际上，目前清楚的是利用非质子极 性溶剂(例如DMS0、NMP、乙酸乙酯或其混合物)将肽配制成高浓度的非水溶液对于这类重要 的治疗剂-治疗肽是有非常有价值的递送平台。本文所描述的稳定制剂有利地提高肽药物 的均匀递送，并且提供额外的贮藏稳定性以防止与降解途径相关的聚集、氧化和水解。
[0038] 在某些优选的实施方案中，本文所描述的稳定制剂以稳定形式长时间保存肽药 物，例如在足以提供希望的制剂贮藏寿命而在使用前没有不可接受程度的治疗剂降解的时 间段内保存肽药物。希望的可注射制剂的性质是它们是非水的且对于肽来说是非反应性 的。在这类实施方案中，可以直接在注射装置本身中存储可注射制剂。
[0039] 本发明的稳定的可注射制剂包含必需的递送剂量的治疗肽(例如药物治疗所需的 剂量)并优选为小体积。例如，在一些实施方案中，包含治疗剂量的肽(例如胰高血糖素）的 可注射制剂的体积为至少约1.0微升(是装填设备的功能的下限），更优选从约10毫升到约 250微升。在某些优选的实施方案中，治疗剂量的肽以小体积递送通过在根据本发明的用于 注射的合适的非质子极性溶剂中浓缩稳定形式的治疗肽(例如胰高血糖素)的剂量来完成。
[0040] 此外，本发明的稳定制剂适合于不需要在注射前稀释地施用。许多目前可用的治 疗肽和疫苗产品以固体颗粒的形式生产以提高在货架上时的稳定性。这些制剂在注射前在 无菌水中、磷酸缓冲溶液或等渗盐水中稀释。比较而言，在本发明的某些优选的实施方案 中，治疗肽使用医药产业通常采用的颗粒制备加工技术(例如喷雾干燥、冻干等)进行浓缩 以制备用于注射的制剂。在优选的实施方案中，治疗剂量的肽药物通过将首先已经与非挥 发性缓冲剂(和任选的额外的组分，例如稳定化赋形剂)一起冷冻干燥的肽分散于具有非常 少残留水分含量的干粉来获得。一旦制得，干燥的肽粉就溶解于非质子极性溶剂，例如 DMS0、NMP、乙酸乙酯或这些溶剂的混合物。因此，根据本发明的目标，本发明的小体积、稳定 的制剂被注射、灌输或者施用到动物(例如人类患者）中，而不用如大部分重构产品所需要 的在注射前首先稀释制剂。同样地，在优选的实施方案中，本发明的小体积制剂是可施用 的，而不用首先进行稀释或重构或冷却。
[0041 ] II ?定义
[0042] 对于本公开，以下术语具有以下意思：
[0043] 术语"治疗剂"包含肽化合物连同其可药用盐。有用的盐是本领域技术人员已知 的，包括与无机酸、有机酸、无机碱或有机碱的盐。本发明中有用的治疗剂是无论单独或与 其他药物赋形剂或惰性成分组合，对人类或动物施用后起希望的、有益的并且通常药理学 效果的那些肽化合物。
[0044] 术语"肽"、"多肽"和/或"肽化合物"是指通过酰胺(C0NH)键结合在一起的最多约 80个氨基酸残基的聚合物。本文公开的任何肽化合物的类似物、衍生物、激动剂、拮抗剂和 可药用盐包括在这些术语内。该术语还包括具有D-氨基酸、D-或L-构型的改性的、衍生化的 或非天然存在的氨基酸和/或肽模拟物单元作为其结构的一部分的肽和/或肽化合物。
[0045] 术语"可药用载体"表示可药用溶剂、助悬剂或用于递送本发明的肽化合物到哺乳 动物例如动物或人类的载剂。在一个目前优选的实施方案中，可药用载体是非质子极性溶 剂。
[0046] 术语"非质子极性溶剂"表示不含有酸性氢并且不作为氢键供体的极性溶剂。非质 子极性溶剂的实例包括但不限于二甲基亚砜(DMS0)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲 基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)和碳酸丙二醇酯。术语非质子极性溶剂还包含两种 或更多种非质子极性溶剂的混合物，例如二甲基亚砜(DMS0)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙 酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)和碳酸丙二醇酯中的两种或更多种的混合 物。
[0047]术语"可药用"成分、赋形剂或组分是与合理的收益/风险比相称的适合对人类和/ 或动物使用而没有过度不利的副作用（例如毒性、刺激性和过敏反应）的成分、赋形剂或组 分。
[0048]术语"化学稳定性"表示关于治疗剂，形成可接受百分比的通过化学途径，例如氧 化或水解所产生的降解产物。具体地，如果在预期的产品储存温度(例如室温)下储存一年， 或者产品在30°C/60%相对湿度下储存一年，或者产品在40°C/75%相对湿度下储存一个 月，优选三个月后形成不超过约20%的分解产物，那么认为制剂是化学稳定的。在一些实施 方案中，化学稳定的制剂具有在预期的产品储存温度下长时间储存后所形成的小于20%、 小于15%、小于10%、小于5%、小于4%、小于3%、小于2%或小于1 %的分解产物。
[0049]术语"物理稳定性"表示关于治疗剂，形成可接受百分比的聚集体(例如二聚体、三 聚体和更大形式）。具体地，如果在预期的产品储存温度(例如室温)下储存一年，或者产品 在30 °C/60 %相对湿度下储存一年，或者产品在40 °C/75 %相对湿度下储存一个月，优选三 个月后形成不超过约15%的聚集体，那么认为制剂是物理稳定的。在一些实施方案中，物理 稳定的制剂具有在预期的产品储存温度下长时间储存后所形成的小于20%、小于15%、小 于10%、小于5%、小于4%、小于3%、小于2%或小于1 %的聚集体。
[0050]术语"稳定制剂"表示在室温下储存两个月后剩下至少约65 %的化学和物理稳定 的治疗剂。特别优选的制剂是其中在这些储存条件下剩下至少约80%、85 %、90 %、91 %、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的化学和物理稳定的治疗剂的那些。尤其优 选的稳定制剂是在消毒照射(例如Y射线、0射线或电子束)后不表现出降解的那些。
[0051]词组"基本上由...组成"在本文使用以排除会明显改变词组所指的稳定制剂的基 本性质的任何要素。
[0052]术语"生物利用度"对于本发明限定为从制剂吸收治疗剂，例如肽化合物的程度。
[0053] 术语"系统的"表示关于治疗剂，例如肽化合物对对象的递送或施用，治疗剂在对 象的血浆中以生物显著的水平可检测的。
[0054] 术语"控制释放"对于本发明限定为治疗剂在约一小时或更长，优选12小时或更长 的时间内以使得血液(例如血浆)浓度保持在治疗范围内，但是在中毒浓度以下的速度释 放。
[0055] 术语"肠胃外注射"是指治疗剂，例如肽化合物通过在动物，例如人类的一层或更 多层皮肤或粘膜下或者穿过动物，例如人类的一层或更多层皮肤或粘膜的注射的施用。标 准的肠胃外注射在动物，例如人类患者的皮肤内、皮下或肌肉内的区域中进行。在一些实施 方案中，以深的位置作为目标用于如本文所描述的治疗剂的注射。
[0056] 术语"治疗"是指延迟术语所适用的疾病或病症或者这种疾病或病症的一种或更 多种症状的发作，阻止或者逆转术语所适用的疾病或病症或者这种疾病或病症的一种或更 多种症状的发展，或者减轻或预防术语所适用的疾病或病症或者这种疾病或病症的一种或 更多种症状。
[0057] 术语"患者"、"对象"或"个体"可交换地指哺乳动物，例如人类或非人类哺乳动物， 例如灵长类、狗、猫、牛、羊、猪、马、小鼠、大鼠、仓鼠、兔或豚鼠。
[0058] III.稳定的肽制剂
[0059]在一个方面，本发明提供一种肠胃外注射用稳定制剂。有利地，一旦制得，制剂就 是长时间稳定的，准备好使用而不需重构，并且在一定的温度范围内可以使用。此外，本发 明的稳定制剂对在水环境中具有有限的或差的稳定性或溶解度的任何肽的肠胃外注射有 用。在一些实施方案中，本发明的制剂例如通过防止或减少肽的聚集体的形成来增加制剂 的肽的物理稳定性。
[0060] 在一些实施方案中，制剂包含：（a)肽或其盐，其中所述肽已经被干燥在非挥发性 缓冲剂中，并且其中干燥的肽具有约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆;和(b)非质 子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于5%，并且其中当干燥的肽在非质子极性溶剂中重构 时，干燥的肽保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆。
[0061] 在一些实施方案中，制剂包含：（a)第一肽或其盐，其中所述第一肽已经在第一非 挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的第一肽具有约等于所述第一肽在第一非挥发性缓 冲剂中的pH的第一pH记忆；（b)第二肽或其盐，其中所述第二肽已经在第二非挥发性缓冲剂 中被干燥，并且其中干燥的第二肽具有约等于第二肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二 pH记忆;和(c)非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于5%，其中当干燥的第一肽在非质 子极性溶剂中重构时，干燥的第一肽保持约等于第一肽在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第 一 pH记忆，并且其中当干燥的第二肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的第二肽保持约等 于第二肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆。
[0062]在一些实施方案中，制剂基本上由以下组分组成：（a)肽或其盐，其中所述肽已经 被干燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中干燥的肽具有约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的 pH记忆;和(b)非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于5%，并且其中当干燥的肽在非质 子极性溶剂中重构时，干燥的肽保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆。
[0063] A?肽
[0064]本发明的稳定制剂包含一种、两种、三种、四种或更多种肽或其盐、类似物和/或混 合物。适合于在本发明的制剂中使用的肽（以及其盐)包括但不限于胰高血糖素、普兰林肽、 胰岛素、亮丙瑞林、黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌 毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗 微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那肽、其类似物以及其 混合物。在一些实施方案中，肽是盐酸盐或乙酸盐。
[0065]在一个优选的实施方案中，肽是胰高血糖素或胰高血糖素类似物或肽模拟物或其 盐(例如醋酸胰高血糖素）。在另一个实施方案中，肽是甲状旁腺素。在又一实施方案中，肽 是亮丙瑞林。在再一实施方案中，肽是格拉默。在其他实施方案中，肽是糊精或糊精模拟物 (例如普兰林肽）。在再一其他实施方案中，肽是胰岛素或胰岛素类似物(例如Lispro)。在一 些实施方案中，胰岛素或胰岛素类似物制剂是低锌的或无锌的制剂。
[0066] 在一些实施方案中，制剂包含两种肽，其中第一肽是糊精或糊精模拟物，第二肽是 胰岛素或胰岛素类似物。在一些实施方案中，第一肽是普兰林肽，第二肽是胰岛素。在一些 实施方案中，第一肽是普兰林肽，第二肽是低锌的胰岛素制剂或无锌的胰岛素制剂。
[0067] 在一些实施方案中，制剂包含两种肽，其中第一肽是胰高血糖素，第二肽是胰高血 糖素样肽-l(GLP-l)或GLP-1类似物或激动剂(例如艾塞那肽）。在一些实施方案中，第一肽 是膜尚血糖素，第二肽是GLP-1。在一些实施方案中，第一肽是膜尚血糖素，第二肽是艾塞那 肽。
[0068] 任何合适剂量的肽都可以利用本发明的制剂进行施用。当然，所施用的剂量根据 已知因素改变，例如具体肽、盐或其组合的药效动力学特性，对象的年龄、健康或体重，症状 的本性和程度，治疗剂和患者的代谢特性，同期治疗的种类，治疗的频率，或希望的效果。通 常地，肽(或其中稳定制剂包含两种或更多种肽的每种肽）以约〇.5mg/mL到约100mg/mL(例 如约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、 95或100mg/mL)的量存在于制剂中。
[0069] 在一些实施方案中，肽以约0.5mg/mL到约60mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施 方案中，肽以约10mg/mL至I」约50mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案中，肽以约20mg/ mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在再一其他实施方案中，肽以约5mg/mL到约15mg/mL的 量存在于所述制剂中。在又一其他实施方案中，肽以约〇.5mg/mL到约2mg/mL的量存在于制 剂中。此外，肽的剂量可以根据所用的肽以及待治疗的疾病、病况或病症改变对技术人员会 是显而易见的。
[0070] 在优选的实施方案中，肽与非挥发性缓冲剂和任选的稳定化赋形剂混合，然后干 燥成干燥的肽粉。在稳定制剂包含两种或更多种肽的实施方案中，每种肽分别与非挥发性 缓冲剂和任选的稳定化赋形剂混合，然后干燥成干燥的肽粉。因为肽对在具有天冬酰胺残 基键处水解和蛋氨酸的氧化敏感，所以本发明的制剂中非挥发性缓冲剂的使用有益地影响 化学稳定性。如以下进一步的细节中所描述的，当在非质子极性溶剂中pH是不相关的时，在 非质子极性溶剂中肽的电荷分布会影响其稳定性。在非质子极性溶剂中肽的电荷分布会是 先前在其中干燥肽的水溶液的pH的函数，即在非质子极性溶剂中溶解或重构后有"pH记 忆"。为了获得溶解于非质子极性溶剂中的肽的希望的电荷分布，肽在具有在非质子极性溶 剂中产生最佳稳定性、最佳溶解度和最小降解的pH的缓冲水溶液中被干燥。
[0071] 同样地，在本文所描述的制剂中有用的非挥发性缓冲剂是对确立最大稳定性、最 大溶解度和最小降解的pH有帮助的那些以及对从干燥的肽粉中除去残留水分或含水量有 帮助的那些。非挥发性缓冲剂包括不会以与在干燥/冻干时的水相似的方式挥发掉的那些 缓冲剂。合适的非挥发性缓冲剂包括例如甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及 其混合物。在一些实施方案中，非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂或柠檬酸盐缓冲剂。在一些 实施方案中，非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂。在一些实施方案中，非挥发性缓冲剂是甘氨 酸缓冲剂和柠檬酸盐缓冲剂的混合物。在一些实施方案中，非挥发性缓冲剂是柠檬酸盐缓 冲剂和磷酸盐缓冲剂的混合物。
[0072] B.稳定化赋形剂
[0073] 在某些优选的实施方案中，本文所描述的制剂可以进一步稳定化以确保其中并入 的肽的稳定性。在一些实施方案中，可注射制剂的稳定性通过在干燥肽之前将一种或更多 种稳定剂或稳定化赋形剂包含到制剂内来增强。在其他的实施方案中，可注射制剂的稳定 性通过在非质子极性溶剂中利用稳定剂或稳定化赋形剂重构干燥的肽来增强。
[0074] 在一些实施方案中，稳定化赋形剂是冷冻保护剂。如以下实施例章节所示，冷冻保 护剂，例如海藻糖的加入保护本发明的肽制剂以防与冷冻-解冻循环相关的不稳定性。此 外，本文已经示出冷冻保护剂海藻糖的加入还促进冷冻的肽制剂的增强的解冻。该增强的 解冻性质是出人意料地有利的，特别是在紧急医疗的情况下，例如严重的低血糖症发作，其 中本发明的肽制剂是冷冻的并需要迅速施用。因此，在本发明的另一个方面中，稳定制剂具 有改进的冷冻-解冻稳定性、提高的解冻速率和/或改善的解冻形态。
[0075] 在一些实施方案中，稳定化赋形剂选自糖、淀粉、糖醇及其混合物。用于稳定化赋 形剂的合适的糖的实例包括但不限于海藻糖、葡萄糖、蔗糖等。用于稳定化赋形剂的合适的 淀粉的实例包括但不限于羟乙基淀粉(ffiS)。用于稳定化赋形剂的合适的糖醇的实例包括 但不限于甘露醇和山梨醇。在一些实施方案中，至少一种稳定化赋形剂(例如糖、淀粉、糖醇 或其混合物)能够增强肽在冷冻-解冻过程中的稳定性，提高制剂的解冻速率或改善制剂的 解冻形态。
[0076] 在一些实施方案中，稳定化赋形剂以约1% (w/v)到约60%(w/v)、从约1% (w/v)到 约50% (w/v)、从约 1 % (w/v)到约40% (w/v)、从约 1 % (w/v)到约30% (w/v)、从约 1 % (w/v) 到约20% (w/v)、从约5% (w/v)到约60% (w/v)、从约5% (w/v)到约50% (w/v)、从约5% (w/ ￥)到约40%(￥八）、从约5%(￥八)到约30%(￥八）、从约5%(￥八)到约20%(￥八）、从约10% (w/v)到约60% (w/v)、从约 10% (w/v)到约50% (w/v)、从约 10% (w/v)到约40% (w/v)、从约 10% (w/v)到约30% (w/v)、从约10% (w/v)到约20% (w/v)的量存在于制剂中。在一些实施 方案中，稳定化赋形剂以约1 %、约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约 40%、约45%、约50%、约55%或约60% (w/v)的量存在于制剂中。
[0077] 在包含两种或更多种肽的制剂中，在一些实施方案中，每种肽在包含非挥发性缓 冲剂和稳定化赋形剂的混合物中被干燥。非挥发性缓冲剂和稳定化赋形剂的混合物对于每 种肽可以是相同的，或者用于干燥每种肽的非挥发性缓冲剂、稳定化赋形剂或非挥发性缓 冲剂和稳定化赋形剂两者可以是不同的。在其他实施方案中，一些但并非所有的肽可以在 包含非挥发性缓冲剂和稳定化赋形剂的混合物中被干燥，而其他的肽可以在不存在稳定化 赋形剂的非挥发性缓冲剂中被干燥。
[0078] 在一些实施方案中，制剂还包含额外的稳定剂，所述稳定剂包括例如抗氧化剂、螯 合剂和防腐剂。合适的抗氧化剂的实例包括但不限于抗坏血酸、半胱氨酸、蛋氨酸、单硫代 甘油、硫代硫酸钠、亚硫酸盐、BHT、BHA、抗坏血酸棕榈酸酯、没食子酸丙酯、N-乙酰基-L-半 胱氨酸(NAC)和维生素E。合适的螯合剂的实例包括但不限于EDTA、酒石酸及其盐、甘油和柠 檬酸及其盐。合适的防腐剂的实例包括但不限于苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙 酯及其混合物。
[0079] 在一些实施方案中，制剂还包含稳定化多元醇。这样的制剂和材料例如在美国专 利6,290,99和6,331，310号进行描述，所述专利的每一篇你内容通过引用并入本文。
[0080] C.干燥的肽的重构
[0081 ]在本发明的稳定制剂中，一旦肽和非挥发性缓冲剂(和任选的稳定化赋形剂)被干 燥成粉末，或者其中制剂包含两种或更多种肽，一旦每种肽和非挥发性缓冲剂(各自还任选 地包含稳定化赋形剂)被干燥成粉末，干燥的肽粉在非质子极性溶剂中溶解或重构。在一些 实施方案中，非质子极性溶剂选自二甲基亚砜(DMS0)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲 基吡咯烷酮(匪P)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸丙二醇酯及其混合物。在一些实施方案中，非 质子极性溶剂是二甲基亚砜（DMS0)、二甲基甲酰胺（DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮 (NMP)、二甲基乙酰胺（DMA)和碳酸丙二醇酯中的两种或更多种的混合物。二甲基亚砜 (DMS0)、二甲基甲酰胺(DMF)和乙酸乙酯是特别优选的非质子极性溶剂，其每一种都是生物 相容的溶剂。在一些实施方案中，非质子极性溶剂是二甲基亚砜(DMS0)。在其他实施方案 中，非质子极性溶剂是N-甲基吡咯烷酮(NMP)。在其他实施方案中，非质子极性溶剂是二甲 基亚砜(DMS0)和N-甲基吡咯烷酮(NMP)的混合物。在再一其他实施方案中，非质子极性溶剂 是二甲基亚砜(DMS0)和乙酸乙酯的混合物。在一些实施方案中，干燥的肽粉在"纯净的"，即 不含共溶剂的非质子极性溶剂中重构。在一些实施方案中，干燥的肽粉在包含非质子极性 溶剂但不含水作为共溶剂的溶液中重构。
[0082] 在一些实施方案中，本发明的制剂还包含降低制剂的凝固点的至少一种共溶剂。 共溶剂是极性质子溶剂。在某一实施方案中，共溶剂选自乙醇、丙二醇(PG)、甘油及其混合 物。在一些实施方案中，共溶剂是乙醇或丙二醇(PG)。共溶剂可以以约10% (w/v)到约50% (w/v)，例如约10%、约15%、约 20 %、约 25%、约 30%、约 35%、约 40%、约 45%或约 50% (w/ v)的量存在于制剂中。在一些实施方案中，共溶剂以从约10 % (w/v)到约50% (w/v)、从约 10% (w/v)到约40% (w/v)、从约 10% (w/v)到约30% (w/v)、从约 10% (w/v)到约25% (w/v)、 从约15%(￥八）到约50%(￥八）、从约15%(￥八）到约40%(￥八）、从约15%(￥八）到约30% (w/v)、从约15% (w/v)到约25 % (w/v)的量存在于制剂中。在一些实施方案中，与不包含共 溶剂的其他相同制剂相比，至少一种共溶剂使制剂的凝固点降低至少5°C、至少10°C、至少 15°C、至少20°C或更多的温度。在一些实施方案中，至少一种共溶剂使制剂的凝固点降低到 约3 °C、约2 °C、约1°C或约0 °C或更低。
[0083] D.水分含量
[0084] 本发明的制剂具有非常少的残留水分，因此这类制剂中的肽长时间保持稳定。在 一些实施方案中，本发明的稳定制剂具有小于5%的水分含量。在一些实施方案中，水分含 量小于4%、小于3%、小于2%、小于1 %、小于0.5%、小于0.4%、小于0.3%、小于0.25%、小 于0.2%、小于0.15%、小于0.1 %、小于0.075%、小于0.05%、小于0.025%或小于0.01 %。 在一些优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量从约0.01 %到约5%、从约0.01 %到约 4%、从约0.01 %到约3 %、从约0.01 %到约2 %、从约0.01 %到约1.5 %或从约0.01 %到约 1 %。在其他优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量从约0.1 %到约5%、从约0.1 %到约 4%、从约0.1 %到约3 %、从约0.1 %到约2 %、从约0.1 %到约1.5 %或从约0.1 %到约1 %。在 其他优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量从约〇. 25%到约5%、从约0.25%到约4%、 从约0.25 %到约3 %、从约0.25 %到约2 %或从约0.25 %到约1.5%。在再一其他优选的实施 方案中，制剂的水分含量从约〇. 5 %到约1 %。
[0085] E.pH 记忆
[0086] 肽的"pH记忆"是在缓冲水溶液中（例如在非挥发性缓冲剂中）干燥肽之后产生的 电荷分布(质子化状态）。在非常低水分或零水分的非水溶剂中肽的质子化状态、和由此产 生的溶解度和稳定性受到干燥前肽的水溶液的pH和所采用的干燥条件的影响。当肽在其中 酸性和碱性组分都是非挥发性的缓冲物质中被干燥时，干燥的肽的pH记忆会约等于肽在非 挥发性缓冲剂中的pH。参见例如Enzymatic Reactions in Organic Media，Koskinen， A.M.P?和Klibanov，A.M.，eds ?，Springer( 1996)。此外，在其中干燥肽的缓冲水溶液(例如 非挥发性缓冲剂)的pH可以优化以产生用于在干燥的肽之后在非质子极性溶剂中重构时导 致最佳肽稳定性、最大溶解度和最小降解的肽的pH记忆。因为非质子极性溶剂没有可交换 的质子，所以当干燥的肽重构到非质子极性溶剂中时，重构的制剂会保持最佳pH记忆的溶 解度和稳定性特性。
[0087] 对于包含两种、三种、四种或更多种肽的稳定制剂，干燥每种肽以使得其具有为了 最大溶解度、最大稳定性和最小降解而优化了的其自身的P H记忆。在制剂中存在两种或更 多种肽的实施方案中，第一肽的pH记忆范围可以与第二肽的pH记忆范围部分重叠(例如第 一肽的pH记忆可以从约4.0到约6.0，第二肽的pH记忆可以从约6.0到约8.0 )，或第一肽的pH 记忆范围可以不与第二肽的pH记忆范围重叠（例如第一肽的pH记忆可以从约4.0到约5.0， 第二肽的pH记忆可以从约6.0到约8.0)。
[0088] 肽的pH记忆可以以几种方式进行测量。在一个方法中，肽的pH记忆通过将干燥的 肽重构到非缓冲的水中并利用pH指示剂，例如pH试纸或校准的pH电极测量重构的肽的pH来 测量。或者，对于已经在非质子极性溶剂(例如DMS0)中重构的肽，肽的pH记忆可以通过向非 质子极性溶剂（例如DMS0)中加入至少20%的水并利用pH指示剂测量pH来确定。参见例如 Baughman和Kreevoy，"Determination of Acidity in 80%Dimethyl Sulfoxide-20% Water/'Journal of Physical Chemistry，78(4):421_23(1974)。非质子极性溶剂-水溶液 中的pH的测量可能需要小的校正（即根据上述的Baughman和Kreevoy不超过0 ? 2pH单位）。
[0089] 在一些实施方案中，当肽在非质子极性溶剂中重构时肽的pH记忆相对于在其中干 燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH的偏差在一个pH单位范围内的情况下，干燥的肽具有约等 于在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH(因此，例如对于在在其中干燥肽的非挥发性 缓冲剂中pH为3.0的肽，当肽在非质子极性溶剂中重构时，从2.0到4.0的肽的pH记忆会是在 一个pH单位内，从而干燥的肽的pH记忆会是约等于非挥发性缓冲剂中肽的pH)。在一些实施 方案中，当肽在非质子极性溶剂中重构时肽的pH记忆相对于在其中干燥肽的非挥发性缓冲 剂中肽的pH的偏差在半个pH单位范围内的情况下，干燥的肽具有约等于在其中干燥肽的非 挥发性缓冲剂中肽的pH(因此，例如对于在在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中pH为3.0的 肽，当肽在非质子极性溶剂中重构时，从2.5到3.5的肽的pH记忆会是在半个pH单位内，从而 干燥的肽的pH记忆会是约等于非挥发性缓冲剂中肽的pH)。
[0090] 在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约1.5到约2.5的pH记忆。在一些实施方案 中，稳定制剂的肽具有约2.0到约3.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约 2.0到约4.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约2.5到约4.0的pH记忆。在一 些实施方案中，稳定制剂的肽具有约2.5到约3.5的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的 肽具有约3.0到约5.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约3.0到约4.5的pH 记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约4.0到约5.0的pH记忆。在一些实施方案中， 稳定制剂的肽具有约4.0到约6.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约6.0到 约8.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约6.5到约8.0的pH记忆。在一些实 施方案中，稳定制剂的肽具有约6.5到约7.5的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具 有约6.5到约9.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约7.0到约9.0的pH记忆。 在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约7.5到约9.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制 剂的肽具有约8.0到约10.0的pH记忆。在一些实施方案中，稳定制剂的肽具有约8.5到约 10.0的pH记忆。在一些实施方案中，肽的pH记忆可以是约1.5、约2.0、约2.5、约3.0、约3.5、 约4.0、约4.5、约5.0、约5.5、约6.0、约6.5、约7.0、约7.5、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5 或约 10.0〇
[0091] F.示例性制剂
[0092]在一些具体的实施方案中，本发明提供一种稳定的膜尚血糖素制剂，所述膜尚血 糖素制剂包含:胰高血糖素肽或其盐(例如醋酸胰高血糖素），其中所述胰高血糖素已经在 选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的非挥发性缓冲剂中被干 燥，并且其中干燥的胰高血糖素具有从约2.0到约3.0的pH记忆;和选自二甲基亚砜(DMS0)、 乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)及其混合物的非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于 5%，并且其中当干燥的胰高血糖素在非质子极性溶剂中重构时，干燥的胰高血糖素保持约 2.0到约3.0的pH记忆。在一些实施方案中，胰高血糖素以从约0.5mg/mL到约10Omg/mL或从 约lmg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施方案中，制剂的水分含量小于约2%、 小于约1 %、小于约0.5%或小于约0.01 %。在一些实施方案中，制剂的水分含量从约0.01 % 到约3%。在一些实施方案中，制剂还包含选自糖（例如海藻糖）、淀粉（例如羟乙基淀粉 (HES))及其混合物的稳定化赋形剂。稳定化赋形剂可以以从约1 % (w/v)到约60% (w/v)的 量存在于制剂中。在一些实施方案中，制剂还包含降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所述共 溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。共溶剂可以以从约10 % (w/v)到约50% (w/v)的量 存在于制剂中。
[0093]在其他具体的实施方案中，本发明提供一种稳定的膜尚血糖素制剂，所述膜尚血 糖素制剂包含:胰高血糖素或其盐(或胰高血糖素类似物或肽模拟物）；和选自二甲基亚砜 (DMS0)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)及其混合物的非质子极性溶剂；其中制剂的水分含量小于 3 %。在优选的实施方案中，制剂的水分含量小于2 %、小于1 %、小于0.5 %或小于0.25 %。在 其他优选的实施方案中，水分含量从〇. 25 %到约3 %、优选从约0.25%到约2 %、更优选从约 0.25%到约1.5%、更优选从约0.25%到约1 %、更优选从约0.5%到约1 %。
[0094]在其他具体的实施方案中，稳定的胰高血糖素制剂还包含非挥发性缓冲剂和稳定 化赋形剂，所述稳定化赋形剂是糖、淀粉或糖醇。例如，在一些实施方案中，胰高血糖素制剂 还包含甘氨酸缓冲剂和甘露醇，或者柠檬酸盐缓冲剂和甘露醇，或者磷酸盐缓冲剂和甘露 醇。在一些实施方案中，胰高血糖素制剂还包含甘氨酸缓冲剂和海藻糖，或者柠檬酸盐缓冲 剂和海藻糖，或者磷酸盐缓冲剂和海藻糖。在这些实施方案中，非质子极性溶剂可以是 DMSO、NMP、乙酸乙酯或其混合物。例如，在一个优选的实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO， 非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂。在另一优选的实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO,非挥 发性缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂，稳定化赋形剂是甘露醇。在另外优选的实施方案中，非质子 极性溶剂是DMSO,非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂，稳定化赋形剂是海藻糖。在再一优选的 实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO,非挥发性缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂。在再一优选的实 施方案中，非质子极性溶剂是NMP，非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂。
[0095]在其他具体的实施方案中，本发明提供一种稳定制剂，所述稳定制剂包含:胰高血 糖素或其盐（例如醋酸胰高血糖素），其中所述胰高血糖素已经被干燥在非挥发性缓冲剂 中，并且其中干燥的胰高血糖素具有约等于胰高血糖素在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓 冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的非挥发性缓冲剂中的pH，其中干燥的胰高血糖素的pH记 忆从约2.0到约3.0;和选自二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯及其混合 物的非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于1%，并且其中当干燥的胰高血糖素在非质 子极性溶剂中重构时，干燥的胰高血糖素保持约等于胰高血糖素在非挥发性缓冲剂中的pH 的pH记忆。在一些实施方案中，胰高血糖素制剂还包含降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所 述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，胰高血糖素制剂还包含 选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。在一些实施方案中，胰高血糖素以从约lmg/mL到 约50mg/mL的量存在于制剂中。
[0096]在其他具体的实施方案中，本发明提供一种稳定的膜尚血糖素制剂，所述膜尚血 糖素制剂基本上由以下组分组成:胰高血糖素肽或其盐(例如醋酸胰高血糖素），其中所述 胰高血糖素已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的非挥 发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的胰高血糖素具有从约2.0到约3.0的pH记忆;和选自 二甲基亚砜(DMS0)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)及其混合物的非质子极性溶剂;其中 制剂的水分含量小于5%，并且其中当干燥的胰高血糖素在非质子极性溶剂中重构时，干燥 的胰高血糖素保持约2.0到约3.0的pH记忆。
[0097]在另外其他具体的实施方案中，本发明提供一种稳定的胰高血糖素制剂，所述胰 高血糖素制剂基本上由以下组分组成:胰高血糖素肽或其盐(例如醋酸胰高血糖素），其中 所述胰高血糖素已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的 非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的胰高血糖素具有从约2.0到约3.0的pH记忆；以 及非质子极性溶剂和降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所述非质子极性溶剂选自二甲基亚 砜(DMS0)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(匪P)及其混合物，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二 醇、甘油及其混合物。其中制剂的水分含量小于5%，并且其中当干燥的胰高血糖素在非质 子极性溶剂中重构时，干燥的胰高血糖素保持约2.0到约3.0的pH记忆。
[0098]在其他具体的实施方案中，本发明提供一种稳定的膜尚血糖素制剂，所述膜尚血 糖素制剂基本上由以下组分组成:胰高血糖素肽或其盐(例如醋酸胰高血糖素），其中所述 胰高血糖素已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的非挥 发性缓冲剂中被干燥，稳定化赋形剂选自糖类(例如海藻糖）、淀粉(例如羟乙基淀粉(HES)) 及其混合物，并且其中干燥的胰高血糖素具有从约2.0到约3.0的pH记忆;和选自二甲基亚 砜(DMSO)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(匪P)及其混合物的非质子极性溶剂；其中制剂的水 分含量小于5%，并且其中当干燥的胰高血糖素在非质子极性溶剂中重构时，干燥的胰高血 糖素保持约2.0到约3.0的pH记忆。
[0099]在另外其他具体的实施方案中，本发明提供一种稳定制剂，所述稳定制剂包含:胰 岛素，其中所述胰岛素已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合 物的第一非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的胰岛素具有约等于胰岛素在第一非挥 发性缓冲剂中的pH的第一pH记忆，其中第一pH记忆从约1.5到约2.5或从约6.0到约8.0;普 兰林肽，其中所述普兰林肽已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其 混合物的第二非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的普兰林肽具有约等于普兰林肽在 第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆，其中第二pH记忆从约3.0到约5.0或从约4.0到 约6.0;和选自二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯及其混合物的非质子极 性溶剂;其中制剂的水分含量小于1%，其中当干燥的胰岛素在所述非质子极性溶剂中重构 时，干燥的胰岛素保持约等于胰岛素在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一pH记忆，并且其 中当干燥的普兰林肽在所述非质子极性溶剂中重构时，干燥的普兰林肽保持约等于普兰林 肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆。在一些实施方案中，胰岛素和普兰林肽制 剂还包含降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合 物。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂中的胰岛素和第二非挥发性缓冲剂中的普兰 林肽中的一者或两者还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。在一些实施方案中， 第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂相同。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲 剂和第二非挥发性缓冲剂不同。在一些实施方案中，胰岛素和普兰林肽中的每一者都以从 约lmg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施方案中，第一pH记忆从约1.5到约 2.5。在一些实施方案中，第一pH记忆从约6.0到约8.0。在一些实施方案中，第二pH记忆从约 3.0到约5.0。在一些实施方案中，第二pH记忆从约4.0到约6.0。在一些实施方案中，第一pH 记忆从约1.5到约2.5，并且第二pH记忆从约3.0到约5.0。
[0100] IV.制备稳定的肽制剂的方法
[0101] 在又一方面，本发明提供一种用于制备肠胃外注射用稳定制剂的方法。在一些实 施方案中，方法包括:将肽和非挥发性缓冲剂干燥成干燥的肽粉;利用非质子极性溶剂重构 干燥的肽粉，从而制备稳定制剂，其中稳定制剂的水分含量小于5 %。在一些实施方案中，干 燥的肽粉具有约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆，当干燥的肽粉在非质子极性溶 剂中重构时，干燥的肽粉保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆。
[0102] 用于制备稳定制剂的方法可以用于配制在水环境中具有有限的或差的稳定性或 溶解度的任何肽。适合于在本发明的制剂中使用的肽(或其盐)包括但不限于胰高血糖素、 胰岛素、亮丙瑞林、黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂、普兰林肽、甲状旁腺素(PTH)、糊精、 肉毒杆菌毒素、芋螺毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生 长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那 肽及其类似物。在一个优选的实施方案中，肽是胰高血糖素或者胰高血糖素类似物或肽模 拟物。在另一个实施方案中，肽是甲状旁腺素。在又一实施方案中，肽是亮丙瑞林。在再一实 施方案中，肽是格拉默。
[0103] 在一些实施方案中，两种、三种、四种或更多种肽配制到稳定制剂中。在其中两种 或更多种肽配制到稳定制剂中的实施方案中，每种肽单独地用非挥发性缓冲剂干燥成干燥 的肽粉，每种干燥的肽粉具有约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆（即第一肽具有 约等于第一肽在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一 pH记忆，第二肽具有约等于第二肽在第 二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆）。两种或更多种干燥的肽粉利用非质子极性溶剂 重构，从而制得稳定制剂，其中所述稳定制剂的水分含量小于5%，并且当干燥的肽粉在非 质子极性溶剂中重构时，其中每种干燥的肽粉保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH 记忆(即当干燥的第一肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的第一肽保持第一 pH记忆，并且 当干燥的第二肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的第二肽保持第二pH记忆）。
[0104] 在用于制备稳定的肽制剂的方法中，合适的非挥发性缓冲剂包括例如甘氨酸缓冲 剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物。在一些实施方案中，非挥发性缓冲剂是甘 氨酸缓冲剂或柠檬酸盐缓冲剂。在一些实施方案中，非挥发性缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂和 磷酸盐缓冲剂的混合物。在一些实施方案中，肽与非挥发性缓冲剂和稳定化赋形剂（例如 糖、淀粉或其混合物)两者混合，然后干燥成干燥的肽粉。在其他实施方案中，将稳定化赋形 剂(例如糖、淀粉、糖醇或其混合物)添加到在非质子极性溶剂中重构的肽。在一些实施方案 中，稳定化赋形剂以从约1% (w/v)到约60%(w/v)，例如约1%、约5%、约10%、约15%、约 20 %、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%或约60% (w/v)的量存在于 制剂中。在一些实施方案中，稳定化赋形剂是海藻糖。在一些实施方案中，稳定化赋形剂是 HES。在一些实施方案中，稳定化赋形剂是海藻糖和HES的混合物。
[0105] 如上文所解释的，当肽与非挥发性缓冲剂混合时，非挥发性缓冲剂选择为使得肽 在水环境中具有最大稳定性/最小降解的pH。一旦被干燥，肽就会具有最大稳定性/最小降 解的pH记忆，并且当在非质子极性溶剂中溶解或重构时会保留该pH记忆。同样地，在一个实 施方案中，非挥发性缓冲剂的pH使得干燥的肽粉具有约2到约3的pH记忆。在另一个实施方 案中，非挥发性缓冲剂的pH使得干燥的肽粉具有约4到约6的pH记忆。在又一实施方案中，非 挥发性缓冲剂的pH使得干燥的肽粉具有约4到约5的pH记忆。在又一实施方案中，非挥发性 缓冲剂的pH使得干燥的肽粉具有约6到约8的pH记忆。
[0106] -旦肽和非挥发性缓冲剂(和任选的其他组分，例如在干燥前添加到肽和非挥发 性缓冲剂中的稳定化赋形剂)被干燥成粉末，干燥的肽粉在如本文所描述的非质子极性溶 剂(例如二甲基亚砜(DMS0)、N-甲基吡咯烷酮(匪P)、乙酸乙酯及其混合物）中溶解或重构。 在一些实施方案中，非质子极性溶剂是二甲基亚砜(DMS0)。在其他实施方案中，非质子极性 溶剂是N-甲基吡咯烷酮(NMP)。
[0107] 在一些实施方案中，重构干燥的肽粉的步骤包括利用包含非质子极性溶剂和降低 制剂的凝固点的共溶剂的混合物稀释或重构干燥的肽。在一些实施方案中，共溶剂选自乙 醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，共溶剂以从约10 % (w/v)到约50 % (w/v)， 例如约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%或约50% (w/v)的量 存在于制剂中。
[0108] 本发明的制剂具有非常少的残留水分，因此这类制剂中的肽长时间保持稳定。在 优选的实施方案中，通过本发明的方法制备的稳定制剂的水分含量小于4%、小于3%、小于 2%、小于1 %、小于0.5%、小于0.4%、小于0.3%、小于0.25%、小于0.2%、小于0.15%、小 于0.1 %、小于0.075%、小于0.05%、小于0.025%或小于0.01 %。
[0109]在前述方法中，肽化合物与非挥发性缓冲剂（以及任选的稳定化赋形剂)的干燥使 用喷雾干燥技术、冷冻干燥技术或冻干技术来实现。喷雾干燥技术对本领域技术人员是众 所周知的。喷雾干燥包括溶剂在从液滴挥发之后包含一种或更多种固体(例如治疗剂)的溶 液经由喷嘴转盘或其他装置雾化的步骤。生成的粉末的性质是包括初始溶质浓度、所产生 的液滴的尺寸分布和溶质移除速率的几个变量的函数。所产生的颗粒根据溶剂移除的速率 和条件可以包括由晶体和/或非晶固体组成的一次颗粒的聚集体。
[0110] 用于制备生物大分子，例如蛋白质、寡肽、高分子量的多糖和核酸的超细粉末的喷 雾干燥的方法例如在美国专利6,051，256号中进行描述。冷冻干燥程序在本领域中是众所 周知的，并且例如在美国专利4,608,764号和美国专利4,848,094号中进行描述。喷雾-冷冻 干燥的方法例如在美国专利5,208,998号中进行描述。其他喷雾干燥技术例如在美国专利 6,253,463、6,001，336、5,260,306号和？(：1'国际公开恥 91/16882和恥 96/09814号中进行 描述。
[0111] 冻干技术对本领域技术人员是众所周知的。冻干是产品在冷冻状态(真空条件下 的冰升华)和在真空条件下(通过微热干燥)进行的脱水技术。这些条件使产品稳定，最小化 氧化和其他降解过程。冷冻干燥的条件允许在低温下实施方法，因此可以保护热不稳定的 产品。冷冻干燥的步骤包括预处理、冷冻、一次干燥和二次干燥。预处理包括在冷冻之前处 理产品的任何方法。这可以包括浓缩产品、制剂修正（即加入组分以增加稳定性和/或改进 加工）、减少高蒸气压溶剂或增加表面积。预处理的方法包括:冷冻浓缩、溶液相浓缩和特别 地配制以保持产品外观或为反应性产品提供冻干保护，并且例如在美国专利6,199，297号 中进行描述。"标准的"冻干条件例如在美国专利5,031,336号和"Freeze Drying of Pharmaceuticals"（DeLuca，Patrick P?，J.Vac?Sci.Technol?，卷14，No?1，1977年一月/二 月）和"The Lyophilization of Pharmaceuticals:A Literature Review"（Williams， N.A?和G.P.Polli，Journal of Parenteral Science and Technology，卷38，No.2，1984年 三月/四月）中进行描述。
[0112] 在某些优选的实施方案中，冻干循环部分地在治疗剂制剂的玻璃化转变温度(Tg) 以上进行以导致团快塌陷，从而形成含有残留水分的致密结块。在其他实施方案中，冻干循 环在玻璃化转变温度以下实施，以避免为了获得颗粒的完全干燥而导致的塌陷。
[0113] V.治疗方法
[0114] 在另一个方面，本发明提供通过对对象施用对治疗、减轻或预防疾病、病症或病况 有效量的如本文所描述的稳定制剂来治疗疾病或病症的方法。在一些实施方案中，待利用 本发明的稳定制剂治疗的疾病、病症或病况是糖尿病病症。糖尿病病症的实例包括但不限 于1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、前驱糖尿病、高血糖症、低血糖症和代谢综合征。在 一些实施方案中，疾病、病症或病况是低血糖症。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是糖 尿病。
[0115] 在一些实施方案中，本发明的治疗方法包括通过对具有低血糖症的对象施用对治 疗低血糖症有效量的如本文所描述的稳定制剂来治疗低血糖症。在一些实施方案中，对对 象施用包含膜尚血糖素的稳定制剂。
[0116] 在一些实施方案中，本发明的治疗方法包括通过对糖尿病患者施用对治疗糖尿病 有效量的如本文所描述的稳定制剂来治疗糖尿病。在一些实施方案中，对对象施用包含胰 岛素的稳定制剂。在一些实施方案中，对对象施用包含普兰林肽的稳定制剂。在一些实施方 案中，对对象施用包含胰岛素和普兰林肽的稳定制剂。在一些实施方案中，对对象施用包含 艾塞那肽的稳定制剂。在一些实施方案中，对对象施用包含胰高血糖素和艾塞那肽的稳定 制剂。
[0117] 用于治疗疾病、病症、病况(例如糖尿病病症、例如低血糖症或糖尿病）的如本文所 描述的肽药物的施用剂量与本领域技术人员所实践的剂量和计划疗程一致。在本发明中所 使用的所有药物试剂的合适剂量的通用指南在前述的Goodman和Gi lman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，第 11版，2006和在Physicians ' Desk Reference(PDR)，例如在第65版（2011)或第66版（2012)，PDR Network，LLC中提供，其中每 一个都通过引用在此并入本文。用于治疗如本文所描述的疾病、病症或病况的肽药物的合 适剂量会根据几种因素，包括组合物的制剂、患者反应、病症的严重性、对象的体重和处方 医师的判断而变化。有效剂量的所述制剂递送医学上有效量的肽药物。剂量可以根据个体 患者的需要随着时间增加或减少。
[0118] 有效量或剂量的确定正是在本领域技术人员的能力范围内，尤其根据本文所提供 的详细公开。通常地，递送这些剂量的制剂可以含有一种、两种、三种、四种或更多种肽或肽 类似物(全体"肽"，除非明确地排除了肽类似物），其中每种肽以从约0.1mg/mL到最多肽在 制剂中的溶解极限的浓度存在。该浓度优选从约lmg/mL到约100mg/mL，例如约lmg/mL、约 5mg/mL、约 10mg/mL、约 15mg/mL、约 20mg/mL、约 25mg/mL、约 30mg/mL、约 35mg/mL、约 40mg/mL、 约 45mg/mL、约 50mg/mL、约 55mg/mL、约 60mg/mL、约65mg/mL、约 70mg/mL、约 7 5mg/mL、约 80mg/ mL、约 85mg/mL、约 90mg/mL、约 95mg/mL或约 1 OOmg/mL。
[0119] 本发明的制剂可以用于皮下、皮肤内或肌肉内的施用（例如通过注射或通过输 注）。在一些实施方案中，制剂是皮下施用的。
[0120] 本公开的制剂使用合适的装置通过输注或通过注射来施用。例如，本发明的制剂 可以放置到注射器、笔注射装置、自动注射器装置或栗装置内。在一些实施方案中，注射装 置是多剂量注射器栗装置或多剂量自动注射器装置。制剂以使得制剂在驱动注射装置，例 如自动注射器致动时能够容易地流出针头的方式在装置中呈现，以递送肽药物。合适的笔/ 自动注射器装置包括但不限于由Beeton-Dickenson、Swedish Healthcare Limited(SHL Group)、YpsoMed Ag等制造的那些笔/自动注射装置。合适的栗装置包括但不限于由Tandem Diabetes Care, Inc.、Delsys Pharmaceuticals等制造的那些栗装置。
[0121] 在一些实施方案中，提供准备好在小瓶、灌注器或预装满的注射器中施用的在本 发明的制剂。
[0122] 在另一个方面，本发明提供如本文所描述的稳定制剂用于配制用于治疗可以利用 制剂的肽治疗的任何疾病、病症或病况的药物的用途。在一些实施方案中，稳定制剂用于配 制治疗糖尿病病症，例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、前驱糖尿病、高血糖症、低血 糖症或代谢综合征的药物。
[0123] 在一些实施方案中，稳定制剂用于配制用于治疗低血糖症的药物。在一些实施方 案中，稳定制剂包含胰高血糖素或其盐(例如醋酸胰高血糖素）。在一些实施方案中，稳定制 剂包含胰高血糖素和艾塞那肽。
[0124] 在一些实施方案中，稳定制剂用于配制用于治疗糖尿病的药物。在一些实施方案 中，稳定制剂包含胰岛素。在一些实施方案中，稳定制剂包含艾塞那肽。在一些实施方案中， 稳定制剂包含普兰林肽。在一些实施方案中，稳定制剂包含胰岛素和普兰林肽。
[0125] VI.试剂盒
[0126] 在另一个方面，本发明提供用于治疗如本文所描述的疾病、病症或病况的试剂盒。 在一些实施方案中，试剂盒包括:包含一种、两种、三种、四种或更多种肽或其盐的稳定制 剂，其中所述肽已经被干燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中干燥的肽具有约等于肽在非挥 发性缓冲剂中的pH的pH记忆;和非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于5 %，并且其中 当干燥的肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的肽保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH 的pH记忆;和用于对对象施用稳定制剂的注射器。
[0127] 在一些实施方案中，试剂盒包括用于在治疗对象的低血糖症中使用的如本文所描 述的稳定的膜尚血糖素制剂。在一些实施方案中，试剂盒包括膜尚血糖素制剂，所述膜尚血 糖素制剂包含:胰高血糖素或其盐(例如醋酸胰高血糖素），其中所述胰高血糖素已经被干 燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中干燥的胰高血糖素具有约等于胰高血糖素在选自甘氨酸 缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的非挥发性缓冲剂中的pH，其中干燥的 胰高血糖素的pH记忆从约2.0到约3.0;和选自二甲基亚砜(DMS0)、N-甲基吡咯烷酮(匪P)、 乙酸乙酯及其混合物的非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于1%，并且其中当干燥的 胰高血糖素在非质子极性溶剂中重构时，干燥的胰高血糖素保持约等于胰高血糖素在非挥 发性缓冲剂中的pH的pH记忆。在一些实施方案中，胰高血糖素制剂还包含降低制剂的凝固 点的共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，胰高 血糖素制剂还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。在一些实施方案中，胰高血糖 素以从约lmg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。
[0128] 在一些实施方案中，试剂盒包含用于在治疗对象的糖尿病中使用的如本文所描述 的稳定的胰岛素和普兰林肽制剂。在一些实施方案中，试剂盒包括胰岛素和普兰林肽制剂， 所述胰岛素和普兰林肽制剂包含:胰岛素，其中所述胰岛素已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬 酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的第一非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干燥的 胰岛素具有约等于胰岛素在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一 pH记忆，其中第一 pH记忆从 约1.5到约2.5或从约6.0到约8.0;普兰林肽，其中所述普兰林肽已经在选自甘氨酸缓冲剂、 柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的第二非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中干 燥的普兰林肽具有约等于普兰林肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆，其中第二 pH记忆从约3.0到约5.0或从约4.0到约6.0;和选自二甲基亚砜(DMS0)、N-甲基吡咯烷酮 (NMP)、乙酸乙酯及其混合物的非质子极性溶剂;其中制剂的水分含量小于1%，其中当干燥 的胰岛素在非质子极性溶剂中重构时，干燥的胰岛素保持约等于胰岛素在第一非挥发性缓 冲剂中的pH的第一pH记忆，并且其中当干燥的普兰林肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥 的普兰林肽保持约等于普兰林肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆。在一些实施 方案中，胰岛素和普兰林肽制剂还包含降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所述共溶剂选自 乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂中的胰岛素和第 二非挥发性缓冲剂中的普兰林肽中的一者或两者还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化 赋形剂。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂相同。在一些实施 方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂不同。在一些实施方案中，胰岛素和普 兰林肽中的每一者都以从约lmg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施方案中，第 一pH记忆从约1.5到约2.5。在一些实施方案中，第一pH记忆从约6.0到约8.0。在一些实施方 案中，第二pH记忆从约3.0到约5.0。在一些实施方案中，第二pH记忆从约4.0到约6.0。在一 些实施方案中，第一pH记忆从约1.5到约2.5，并且第二pH记忆从约3.0到约5.0。
[0129] 在一些实施方案中，试剂盒包括作为笔注射装置、自动注射器装置或栗的一部分 的注射器。在一些实施方案中，注射器预装满稳定制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括 说明书，其中所述说明书指导稳定制剂的施用以治疗有此需要的对象(例如具有低血糖症 或糖尿病的患者）。
[0130] VII.实施例
[0131] 本发明会通过具体的实施例更加详细地描述。以下实施例是为了说明的目的提供 的，不打算以任何方式限制本发明。本领域技术人员会容易地识别出可以变化或改变而产 生基本相同结果的各种非关键性参数。
[0132] 实施例1:在冷冻干燥中使用的胰高血糖素溶液的制备
[0133] 制备各种溶液以包含浓度为10mg/mL的胰高血糖素。所述溶液包含5mM的甘氨酸、 柠檬酸盐或磷酸盐，通常提供确立pH为3的缓冲剂。溶液还以等于胰高血糖素的w/v量（1:1) 的量或以200% (2:1)胰高血糖素的量单独或组合地包含糖。所述糖是海藻糖、HES或环糊 精⑴-CD)。一些溶液还包含0.10%的吐温-20作为表面活性剂。各种制剂以如以下表1所描 述的量混合至基本均匀。
[0134] 表1.用于之后冻干的胰高血糖素混合物
[0135]
[0136] 为了制备混合物，胰高血糖素以lOmg/mL在各缓冲剂(磷酸盐、梓檬酸盐和/或甘氨 酸缓冲剂，5mM，pH 3.0)中溶解。然后溶液以l:l(v/v)的比例与各种溶质混合，所述各种溶 质使用相应的缓冲剂以希望浓度的两倍进行制备，以获得5mg/mL的最终胰高血糖素浓度和 最终希望的溶质浓度。然后溶液通过0.2wii的Mi 11 ipore PES膜进行过滤以除去不溶的物 质。样品制备在4°C的冷室内进行。胰高血糖素的浓度和纯度通过RP-HPLC和尺寸排阻 (SE)-HPLC 来确定。
[0137] 实施例2:通过冷冻干燥的干燥的胰高血糖素粉末的制备
[0138] 将上表1的制剂移液到3-mL的冻干瓶（13-mm ID)中。制剂在FTS Durastop冷冻干 燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干。样品在-40°C以2.5°C/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小 时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2°C/分钟的梯度升高到-5°C，并保持2h作为复性 步骤。然后，温度以1.5°C/分钟的梯度降低到30°C，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为 24h。温度以0.5°C/分钟的梯度逐渐升高到40°C，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空 下使用来自West Pharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干 燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于l%w/w。
[0139] 实施例3:在非质子极性溶剂中的胰高血糖素制剂的制备
[0140]选择由表1中溶液所制的干粉中的六种用于在极性、非质子溶剂中的制剂：
[0141] 1.缓冲剂(甘氨酸)+海藻糖(相对于胰高血糖素200%)(制剂#3)
[0142] 2.缓冲剂(甘氨酸)+HES(相对于胰高血糖素200%)(制剂#4)
[0143] 3.缓冲剂（甘氨酸)+海藻糖（相对于胰高血糖素100% )+HES(相对于胰高血糖素 100%)(制剂#5)
[0144] 4.缓冲剂(甘氨酸)+吐温-20(0.01 %w/v)+海藻糖(相对于胰高血糖素200%)(制 剂#19)
[0145] 5.缓冲剂(甘氨酸)+吐温-20(0.01%?八)+册3(相对于胰高血糖素200%)(制剂# 20)
[0146] 6.缓冲剂(甘氨酸)+吐温-20(0.01%?八)+海藻糖(相对于胰高血糖素100%)+册3 (相对于胰高血糖素100%)(制剂#21)
[0147] 实施例4:具有4-5的pH记忆的胰高血糖素溶液的制备
[0148] 制备溶液以包含浓度为10-20mg/mL的胰高血糖素。溶液包含确立4-5的pH的柠檬 酸盐缓冲剂。溶液还包含浓度为50-100mg/mL的糖醇，甘露醇。制剂混合至基本均匀，并通过 实施例2中所描述的干燥循环来冷冻干燥至残留水分小于0.5%w/w。将干粉溶解到DMS0中 到胰高血糖素浓度为10-20mg/mL，甘露醇浓度为50-10mg/mL。
[0149] 实施例5:具有低水分和低凝固点的PTH( 1-34)溶液的制备
[0150] 制备溶液以包含浓度为10-20mg/mL的PTH(l-34)。溶液包含确立4-5的pH的柠檬酸 盐缓冲剂。溶液还包含浓度为50mg/mL的糖醇，甘露醇。制剂混合至基本均匀，并通过实施例 2中所描述的干燥循环来冷冻干燥至残留水分小于0.5 % w/w。将干粉溶解到DMS0中到PTH (1-34)浓度为 10-20mg/mL，甘露醇浓度为 50-100mg/mL。
[0151 ]实施例6:在胰高血糖素施用后血液胰高血糖素水平和血糖水平的提高 [0152]在非质子极性溶剂中的基于溶于NMP或DMS0的胰高血糖素-甘氨酸-海藻糖粉末的 两种非水胰高血糖素制剂，在大鼠的药代动力学和药效动力学研究中进行试验，并与含水 制剂进行比较。大鼠都以l〇g胰高血糖素/大鼠的速率用药。非水胰高血糖素溶液以1〇此的 皮下注射给予，如同含水的对照溶液一样。所有试验的制剂证实血液胰高血糖素浓度的迅 速升高(参见图1)。
[0153] 对四个治疗组加上含水的对照分析药代动力学(PK)参数。对每一大鼠进行非房室 PK分析。C馱和T馱根据观测的数据进行计算。不用外推计算曲线下面积(AUC)估计。数据使 用五组AN0VA进行分析以在组之间比较PK参数。三组之间的C馱、T馱或AUC中没有观察到显 著的差异。匪P和D M S 0制剂相对于含水对照组的相对生物利用度全都接近10 0 % (分别为 76%和92%)。因此，基于这些大鼠PK研究的结果，非水制剂基本上生物等价于含水胰高血 糖素制剂。
[0154] 如从药代动力学结果预测的，非水胰高血糖素制剂产生基本上等价于相同剂量水 平的水重构的胰高血糖素制剂的药效动力学曲线(参见图2)。
[0155] 实施例7:与水溶液相比胰高血糖素在非质子极性溶剂中增强的溶解度
[0156] 胰高血糖素通过溶解在以下缓冲剂中的一种中以1. Omg/mL来制备：
[0157] 1.2禮柠檬酸4112.0(用浓盐酸滴定）（"〇2.0"）
[0158] 2.2禮柠檬酸4113.0(用浓盐酸滴定）（"〇3.0"）
[0159] 每种制剂以lmL的填充体积放置在无菌的2cc小瓶中。样品被冷冻干燥以降低残留 水分，以及在DMS0、NMP或50/50的DMS0/NMP共溶剂中被重构到各种标称浓度。重构浓度从1 到 30mg/mL。溶解度通过经由A63Q目测透明度、浊度以及通过RP-HPLC来测量。
[0160]如以下表2中所示，pH记忆为2.0和3.0的与柠檬酸盐缓冲剂一起冻干的胰高血糖 素可以容易地溶解到30mg/mL的浓度。相同制剂只能在较低的浓度可以完全溶解于H20。对 于3.0的pH记忆，在H 20中仅获得浓度为5mg/mL的完全重构。另外，溶解于H20的胰高血糖素仅 是亚稳定的，即其仅在数小时内保持可溶，然后开始胶化或以取决于pH和浓度的速率形成 原纤维，而溶解于非质子极性溶剂/共溶剂的胰高血糖素是无限期稳定的。
[0161 ]表2.在pH记忆为2.0和3.0时胰高血糖素的溶解度
[0163] 实施例8 :pH对胰高血糖素在非质子极性溶剂中溶解度的影响。
[0164] 当从pH记忆的角度看实施例8和表2中所示的数据时，显然在非质子极性溶剂中在 较低的pH记忆(例如pH 2.0)比在较高的pH可以获得更高的胰高血糖素溶解度。此外，尽管 表2中的复原表明基本100 %的标称浓度，但是A63Q测量显示出在纯NMP和DMS0/NMP共溶剂中 30mg/mL的pH记忆为3.0的胰高血糖素(C3.0)溶液的浊度增加，而具有2.0的pH记忆的C2.0 制剂基本上保持无浑浊。
[0165] 在另一个实例中，对于以2mg/mL与2mL甘氨酸或2mM柠檬酸盐缓冲剂一起溶解于 H20的醋酸胰高血糖素测量PH对胰高血糖素在非质子极性溶剂中的溶解度的影响，pH调节 到希望的值。样品被冷冻干燥并在DMSO、NMP或50/50的DMS0/WP共溶剂中被重构到各种标 称浓度。溶解度通过经由A 63Q目测透明度、浊度以及通过RP-HPLC来测量。
[0166] 发现来自冻干的"pH记忆"对胰高血糖素稳定性有主要的影响。对于"G2.5"（pH记 忆2.5)亲液物DMSO、DMS0/匪P和匪P，胰高血糖素在最高达30mg/mL重构下可溶解。对于 "G3.5"（pH记忆3.5)的亲液物观察到明显降低的溶解度。G3.5的亲液物全都是浑浊的，复原 是不完全的，甚至在1 〇mg/mL的标称重构浓度下也是如此。DMS0和DMS0/匪P共溶剂显示约 95%的复原率，而NMP仅显示出约60%的复原率。
[0167] 实施例9:缓冲剂种类对DMS0中胰高血糖素稳定性的影响
[0168] 醋酸胰高血糖素通过溶解在以下缓冲剂中的一种中以1.0mg/mL来制备：
[0169] 1.2mM L-甘氨酸，pH 3.0(用浓盐酸滴定）
[0170] 2.2mM柠檬酸，pH 3.0(用浓盐酸滴定）
[0171] 这些制剂被冻干并在5mg/mL胰高血糖素的标称浓度下在DMS0中被重构。制剂放置 在5°C、25°C和40°C的稳定性恒温箱中。胰高血糖素的纯度利用反相HPLC方法来确定。
[0172] 在一个月各种温度下的温育后，制剂在甘氨酸缓冲剂中的稳定性明显更好。下表3 示出了在40 °C下的温育的各种时期的RP-HPLC纯度。
[0173]表3.缓冲剂种类对DMS0中胰高血糖素稳定性的影响
[0175] 实施例10:水分对DMS0中胰高血糖素稳定性的影响
[0176] 醋酸胰高血糖素通过溶解在以下缓冲剂中的一种中以1.0mg/mL来制备：
[0177] 1.2mM L-甘氨酸，pH 3.0(用浓盐酸滴定）
[0178] 2.2mM L-甘氨酸，pH 3.0(用浓盐酸滴定）
[0179] 这些制剂被冻干并在5mg/mL胰高血糖素的标称浓度下在DMS0中被重构。将额外的 水分加入到第二制剂中。水分含量使用Karl Fisher法来测量。第一制剂的水分含量为 0.13% (w/w)，而第二制剂的水分含量为0.54% (w/w)。制剂放置在5°C、25°C和40°C的稳定 性恒温箱中。胰高血糖素的纯度利用反相HPLC方法来确定。
[0180] 在各种温度下温育一个月后，具有较少水分的制剂的稳定性明显更高。下表4示出 了在40°C下温育各种时期的RP-HPLC纯度。甚至在水分含量低于1%时，可以检测到明显的 稳定性差异。
[0181] 表4.残留水分对DMS0中胰高血糖素稳定性的影响
[0183] 实施例11 :DMS0溶液的凝固点降低
[0184] 使用PerkinElmer Instruments PYRIS Diamond差不扫描量热仪（"DSC"），为了筛 选，样品以8 °C每分钟冷却到-40 °C并加热到40 °C。
[0185] DMS0/NMP 混合物
[0186] 试验各种DMS0和NMP混合物，包括：
[0187] 1.90%DMS0+10%NMP
[0188] 2.80%DMS0+20%NMP
[0189] 3.70%DMS0+30%NMP
[0190] 4.60%DMS0+40%NMP
[0191] 5.50%DMS0+50%NMP
[0192] DSC扫描示出溶剂结晶的温度逐渐地从纯DMSO的~18°C降低到50 %NMP/50 %DMS0 混合物的-5.7°C。添加醋酸胰高血糖素、甘氨酸亲液物至5mg/mL的胰高血糖素浓度导致凝 固点再降低~1°C。
[0193] DMS0/乙酸乙酯混合物
[0194] 试验各种DMS0和乙酸乙酯混合物，包括：
[0195] 1.80%DMS0+20% 乙酸乙酯（Tc = 16°C)
[0196] 2.70%DMS0+30% 乙酸乙酯
[0197] 3.60%DMS0+40% 乙酸乙酯（Tc = 6.5°C)
[0198] 4.50%01^0+50%乙酸乙酯（!'。= 2.9。(：）
[0199] 5 ? 40 % DMS0+60 %乙酸乙酯（Tc =未观察到）
[0200] DSC扫描示出溶剂的结晶温度逐渐地从纯DMS0的~18°C降低到50 %NMP/50 %DMS0 混合物的2.9°C。对于40%DMS0/60%乙酸乙酯混合物没有观察到结晶峰。另外，这些制剂在 冷藏温度(4°C)下储存几天，并用眼观察凝固的迹象。在共溶剂中具有30%或更多乙酸乙酯 的所有制剂保持液态，没有凝固。这与DSC研究中所观察到的Tc有略微不同。
[0201] 含有醇共溶剂的DMS0溶液
[0202] 试验加入醇（乙醇、甘油或丙二醇)共溶剂的各种DMS0溶液，包括
[0203] 1.95%DMS0+5% 醇
[0204] 2.90%DMS0+10% 醇
[0205] 3.80%DMS0+20% 醇
[0206] 4.70%DMS0+30% 醇
[0207] 5.60%DMS0+40% 醇
[0208] 6.50%DMS0+50% 醇
[0209] 7.40%DMS0+60% 醇
[0210] 8.30%DMS0+70% 醇
[0211] 9.20%DMS0+80% 醇
[0212] 10.10%DMS0+90% 醇
[0213] 这些制剂在冷藏温度(4°C)下储存几天，并用眼观察凝固的迹象。含有20%或更多 醇共溶剂的所有制剂保持液态，没有凝固。DSC扫描显示20%醇共溶剂的凝固点对于乙醇、 甘油和丙二醇分别为2.3 °C、0.6 °C和3.3 °C。
[0214] 实施例12:胰高血糖素的冷冻-解冻稳定性
[0215] 醋酸胰高血糖素通过溶解于pH 3.0(用浓盐酸滴定）的2mM的L-甘氨酸以1.0mg/mL 来制备。胰高血糖素制剂被冻干并在5mg/mL胰高血糖素的标称浓度下在DMSO中被重构。将 溶液样品分开，并向一份溶液中加入海藻糖到5%的浓度。这些制剂等分到小瓶中并放置到 5°C的稳定性恒温箱中。在5°C，观察到这些溶液凝固。胰高血糖素溶液以各种时间间隔解 冻，浊度使用630nm处的吸光度确定。
[0216]下表5示出了胰高血糖素溶液在5°C下温育各种时期的浊度。没有海藻糖的溶液显 示出在温育各时间点的浊度增加。然而，包含海藻糖的溶液没有显示出浊度的增加。浊度测 量通过目测来确认。没有海藻糖的冷冻和温育的样品在观察时是浑浊的或不透明的。
[0217]表5.在5°C温育后胰高血糖素溶液的浊度
[0219] 出人意料地，在冷冻-解冻过程中，在肽的DMS0溶液中使用糖类添加剂，例如海藻 糖增强了肽的稳定性。
[0220] 实施例13:利用海藻糖增强解冻速率
[0221] 对于实施例13,如上所述醋酸胰高血糖素通过溶解于pH 3.0(用浓盐酸滴定）的 2mM的L-甘氨酸以1. Omg/mL来制备。在从5 °C的储存移出后，观察到包含海藻糖的胰高血糖 素溶液的样品在比没有海藻糖的溶液短的多的时间内完全解冻。观察到包含海藻糖的样品 在小于30秒内完全解冻，与没有海藻糖的胰高血糖素溶液不同，观察到没有海藻糖的胰高 血糖素溶液一般要在几分钟内才完全解冻。如果溶液是冷冻的并且必须迅速进行注射，那 么迅速解冻肽制剂的能力在紧急救护情形中是特别有利的。
[0222]实施例14:pH对胰岛素溶解度的影响
[0223] 胰岛素以10mg/mL与pH 2或pH 7的10mM的磷酸盐/柠檬酸盐-ImM的EDTA缓冲剂一 起溶解于H20。这些溶液使用保守循环冻干至干燥(>1%的残留水分），并在DMS0中重构到各 种标称浓度。溶解度通过经由A 63Q目测透明度和浊度来测量。
[0224] 在pH为2时，观察到胰岛素可溶解到至少100mg/mL的浓度。然而，在pH记忆为7时， 甚至在最低的试验浓度10mg/mL下，也利用增加的光散射(A63Q)作为浑池的或不透明的溶液 观察到胰岛素差的溶解度。观察到一些较低浓度例如10mg/mL的pH记忆为7的胰岛素溶液在 约24小时的时间内缓慢溶解成澄清的溶液。
[0225] 实施例15: pH对普兰林肽溶解度的影响
[0226] 醋酸普兰林肽以2mg/mL与pH 4的10mM柠檬酸盐缓冲剂或pH 7的10mM磷酸盐缓冲 剂一起溶解于H20。这些溶液使用保守循环冻干至干燥(>1%的残留水分），并在DMS0中重构 到各种标称浓度。溶解度通过经由A 63Q目测透明度和浊度来测量。
[0227] pH记忆为7的普兰林肽不以任何浓度可溶于DMS0。然而，低浓度的pH记忆为4的普 兰林肽可溶于DMS0。
[0228] 实施例16:在非质子极性溶剂中的肽的共制剂
[0229 ]共制剂的制备通过在水溶液中单独干燥单个化合物的制剂来制备，所述水溶液在 重构到非质子极性溶剂中时提供最佳溶解度/稳定性。溶液pH是影响肽溶解度的性质，当干 燥的肽重构到非质子极性溶剂中时，在使用非挥发性缓冲剂的情况下其会保持在其中干燥 肽的含水制剂的"pH记忆"。因为非质子极性溶剂没有可交换的质子，所以单个肽会保持最 佳pH记忆的溶解度和稳定性特性。
[0230] 目前的普兰林肽和胰岛素制剂在其缓冲体系中冲突，使混合制剂的相容性变得困 难。大部分胰岛素和胰岛素类似物具有5-6的等电点，从而在大约7的pH或在较低的大约2的 pH进行配制。普兰林肽具有>10.5的等电点，并在其最佳稳定的大约4的pH进行配制。普兰林 肽制剂和胰岛素制剂在不同的pH的相互作用和不同缓冲能力通常导致可溶的胰岛素组分 的沉淀或结晶胰岛素组分的溶解。利用普兰林肽以及短效和长效的胰岛素的制剂的体外研 究发现了当各种量的胰岛素与固定量的普兰林肽混合时胰岛素溶解度的明显变化。
[0231] 因此，本发明提供一种制剂，凭借所述制剂快速作用的胰岛素种类和糊精类似物 都是稳定的，并且可以由用于注射或配制的单个制剂同时施用。该制剂比现有技术更加近 似地模拟对膳食后血糖升高的天然生理反应。
[0232] 可以共配制的肽的实例包括但不限于：（1)胰岛素-糊精(pH记忆为约2.0或约7.0 的胰岛素，和pH记忆为约4.0的糊精或糊精类似物（例如普兰林肽））；和（2)胰高血糖素-GLP-1 (pH记忆为约3.0或更低的胰高血糖素，和pH记忆为约4.0-5.0的胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)或其类似物(例如艾塞那肽））。
[0233] 胰岛素和普兰林肽的共制剂如下进行制备:如上文实施例14所描述制备pH记忆2、 lOOmg/mL胰岛素的胰岛素制剂。如上文实施例15所描述制备pH记忆4、lmg/mL普兰林肽的普 兰林肽制剂。将5iU胰岛素制剂与95mL普兰林肽溶液混合。观察到所得的溶液是透明的，从 而制得各自pH记忆分别为2和4的胰岛素和普兰林肽的可溶的共制剂。
[0234] 应该理解以上描述意欲用作说明而不是限制性的。通过阅读以上描述许多实施方 案对本领域技术人员会是显而易见的。因此，本发明的范围不应该根据以上描述来确定，而 应该根据所附的权利要求连同该权利要求享有权利的等同方案的完整范围来确定。所有文 章和参考文献，包括专利申请、专利和PCT申请的公开通过引用并入本文用于所有目的。
【主权项】
1. 一种肠胃外注射用稳定溶液，包含： (a) 已经由非挥发性缓冲剂干燥的胰高血糖素肽或其盐;和 (b) 非质子极性溶剂，其中所述胰高血糖素肽或其盐以0 . lmg/mL到最高达所述胰高血 糖素或其盐溶解极限的量在所述非质子极性溶剂中重构和溶解； 其中所述溶液的水分含量小于5 %，并且其中所述胰高血糖素肽或其盐具有pH记忆。2. 根据权利要求1所述的稳定溶液，其中所述非挥发性缓冲剂选自甘氨酸缓冲剂、柠檬 酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂或其混合物。3. 根据权利要求2所述的稳定溶液，其中所述非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂。4. 根据权利要求2所述的稳定溶液，其中所述pH记忆约等于所述胰高血糖素或其盐在 所述非挥发性缓冲剂中的pH。5. 根据权利要求1所述的稳定溶液，其中所述胰高血糖素或其盐的pH记忆为2至3。6. 根据权利要求1所述的稳定溶液，其中所述非质子极性溶剂选自二甲基亚砜、N-甲基 吡咯烷酮、乙酸乙酯及其混合物。7. 根据权利要求6所述的稳定溶液，其中所述非质子极性溶剂是N-甲基吡咯烷酮。8. 根据权利要求6所述的稳定溶液，其中所述非质子极性溶剂是二甲基亚砜。9. 根据权利要求1所述的稳定溶液，还包含降低所述溶液的凝固点的共溶剂，其中所述 共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。10. 根据权利要求1所述的稳定溶液，还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。11. 根据权利要求1所述的稳定溶液，包含〇 . lmg/mL到30mg/mL的所述胰高血糖素或其 盐。12. 根据权利要求1所述的稳定溶液，其中所述非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂，所述 非质子极性溶剂是二甲基亚砜。13. 根据权利要求12所述的稳定溶液，其中混合物还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳 定化赋形剂。14. 根据权利要求13所述的稳定溶液，其中所述稳定化赋形剂是海藻糖。15. 根据权利要求1所述的稳定溶液，还包含第二肽或其盐。16. 根据权利要求15所述的稳定溶液，其中所述第二肽是胰高血糖素样肽-1。17. 根据权利要求1所述的稳定溶液，其中所述稳定溶液包括在注射器、笔注射装置、自 动注射器装置或栗装置内。18. 根据权利要求1所述的稳定溶液，其中所述胰高血糖素或其盐的pH记忆为1至4。
【文档编号】A61K9/08GK105853348SQ201610221799
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2012年3月9日
【发明人】史蒂文·普莱斯特斯基, 约翰·肯泽勒
【申请人】Xeris药物公司