一种SO32‑/HSO3‑检测试剂及其合成方法和应用与流程

技术特征：

1.一种SO₃^2-检测试剂，特征在于，其是(Z)-3-氯-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氢-色烯-3-基)丙烯醛，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种SO₃^2-检测试剂的合成方法，其特征在于，步骤为：

1)在冰浴下，往等体积的DMF溶液中缓慢滴加三氯氧磷，搅拌半小时，加入溶解在DMF中的摩尔量为三氯氧磷十分之一的3-(二乙胺基)苯酚，80℃回流5h；反应完成后，把反应液倒入三倍体积的冰水中，并用Na₂CO₃水溶液调节pH至中性，棕色固体析出，抽滤，水洗，最后用乙醇重结晶得到4-(二乙胺基)-2-间羟基苯甲醛；

2)将4-(二乙胺基)-2-间羟基苯甲醛和乙酰乙酸乙酯按摩尔比1：1.5混合，在含有少量哌啶的乙醇中回流10小时，浓缩、冷却后减压蒸馏得到黄色固体即为3-乙酰基-7-(二乙胺基)-2氢-色烯-2-酮；

3)在冰浴下，将等体积的三氯氧磷缓慢滴加到DMF溶液中，搅拌半小时，当溶液颜色变成橘红色，加入等体积的3-乙酰基-7-(二乙胺基)-2氢-色烯-2-酮的DMF溶液，继续搅拌3h，然后将该体系在80℃回流6h；冷却到室温后将体系倒入两倍体积的冰水中，并用Na₂CO₃水溶液调节pH至中性，抽滤，有砖红色固体析出，然后以二氯甲烷作为洗脱剂柱层析分离得到最终产物，即得到SO₃^2-检测试剂(Z)-3-氯-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氢-色烯-3-基)丙烯醛。

3.一种检测SO₃^2-的方法，其特征在于，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM的(Z)-3-氯-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氢-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液；

(2)、将1000μL pH 7.4的HEPES缓冲溶液、1000μL DMSO溶液和5μL(Z)-3-氯-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氢-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，486nm的荧光强度逐渐增强；

(3)、将1000μL pH 7.4的HEPES缓冲溶液、1000μL DMSO溶液和5μL(Z)-3-氯-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氢-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液加到另外七个荧光比色皿中，分别再加入体积为0.5、1、1.5、2、4、6、8μL的SO₃^2-溶液，在荧光分光光度仪上测定486nm对应的荧光强度F为493、792、1061、1327、2355、3250、4338，以SO₃^2-浓度为横坐标，以荧光强度F为纵坐标绘制图，得到SO₃^2-浓度的工作曲线；线性回归方程为：F＝509.94c+257.86，c的单位为μM；

(4)、将1000μL pH 7.4的HEPES缓冲溶液、1000μL DMSO溶液和5μL(Z)-3-氯-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氢-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取VμL待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样＝2000μL×c×10^-6/VμL,即可求得SO₃^2-的浓度。

4.如权利要求3所述检测SO₃^2-的方法，其特征在于，所述的SO₃^2-用HSO₃^-代替。