一种以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法与流程

文档序号:12056312阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:包括下列步骤:

(1)睾丸支持细胞的分离培养:

1)取出生后4-6天的动物睾丸,将其放入预热温度为37℃的生理盐水中冲洗,再在含有双抗的PBS中清除多余脂肪并剥离白膜,将剥离好的睾丸转入DMEM/F12吹打混匀离心去上清;

2)加入适量的透明质酸酶和胶原酶IV消化2分钟,加入适量的DMEM/F12吹打混匀离心去上清;

3)加入适量的胰酶和DNase酶消化2分钟,加入体积相当于胰酶和DNase酶体积的之和的含10%FBS 的DMEM/F12培养液,终止消化,将细胞悬液先后通过80目、200目、300目的细胞筛,离心,弃上清,向沉淀中加入含10%FBS 的DMEM/F12培养液2ml混匀制成细胞悬液,将2ml细胞悬液全部加入底层铺有明胶的培养皿中培养;

4)培养1小时后,弃去培养液,贴壁细胞即为睾丸支持细胞,继续培养,传代后,备用;

(2)支持细胞滋养层的制备:支持细胞分离培养2天后,细胞单层形成,加入丝裂霉素C处理2小时,制备成睾丸支持细胞滋养层;

(3)从成熟雄性动物的附睾中获取精子,加入以睾丸支持细胞为滋养层的培养体系中,将精子与支持细胞共培养。

2.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的1)中,选取的是刚出生后4-6天的动物的睾丸。

3.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的2)中,加入的透明质酸酶的体积为1ml-3ml。

4.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的2)中,加入的胶原酶IV的体积为1ml-3ml。

5.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的2)中,加入的透明质酸酶和胶原酶IV体积相同。

6.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的2)中,加入的DMEM/F12的体积相当于透明质酸酶与胶原酶IV的体积的总和。

7.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的3)中,加入的胰酶的体积为1ml-3ml。

8.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的3)中,加入的DNase酶的体积为1ml-3ml。

9.根据权利要求1所述的以睾丸支持细胞为滋养层提高精子活力的方法,其特征在于:步骤(1)的3)中,加入的胰酶和DNase酶体积相同。

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