一种从太白花中提取松萝酸的方法与流程

本发明属于天然药物化学领域，涉及天然产物的提取、分离纯化方法，尤其涉及一种从太白花中提取松萝酸的方法。
背景技术：
：秦岭山脉横贯我国东西，是我国南北地理气候的分界线和长江水系、黄河水系两大河流的分水岭，形成了种类繁多、蕴量极为丰富的植物资源库，是全球陆生生物多样性最丰富的地区之一，也是我国重要的药用植物资源库和中药材产区。具有“草药王国”和“亚洲天然植物园“之称的太白山为秦岭主峰，海拔3767.2m，生长着许多疗效独特的药用植物，资源十分丰富，享有“太白无闲草，遍地都是宝”的盛誉。太白花为石蕊科植物石蕊的枝状体，拉丁植物动物矿物名：Cladoniastellaris(Opiz)PouzaretVez-da[C.alpestris(L.)Rebenh.]，该植物可药用，在太白山中分布很多，具有平肝明目，止血调经的功效；主风阳上扰；头晕目眩；偏头痛；目疾；鼻衄；月经不周；白带。研究表明，太白花的主要化学成分为黑荼渍素(atranorin)，松萝酸(usnicacid)，珠光酸(perlatolic)，2-羟基-4-甲氧基-6-正戊基苯甲酸(2,4-dihydroxy-6-n-pentylbenzoicacid)。松萝酸作为太白花中存在的活性单体，其英文名称为：Usninicacid；分子式：C18H16O7；化学名为：1,3(2H,9bH)-Dmenzofurandione，2，6-diacetyl-7，9-dihydroxy-8，9b-dimethyl；分子量为：344.1，物理化学性质：松萝酸具有旋旋光性，在地衣中发现有(+)-及(-)-两种形式。松萝酸易溶于氯仿，难溶于甲醇，在地衣显色反应中，松萝酸与KOH反应显黄色；与KOH和NaCl混合液反应显深黄色；松萝酸在丙酮溶液中是黄色斜方棱柱结晶，在氯仿乙醇混合液或者苯溶液中呈针形。松萝酸的衍生物钠盐为淡黄色丝针晶，略溶于水；松萝酸的衍生物通常以松萝酸钠存在，是脂肪酸和氢氧化钠反应的产物。现有技术公开了松萝酸及其衍生物具有较好的抗菌生物活性，其抗菌谱主要为革兰阳性细菌及结核杆菌。有研究表明，在试管中，松萝酸对肺炎球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、结核杆菌有很强的抑菌作用，抑菌浓度为1-5μg/ml，50μg/ml可完全抑制细菌的生长；对金黄色葡萄球菌的抑制作用比对上述细菌稍弱，但强于对革兰阴性细菌的作用。因此，松萝酸可代替抗生素被开发成抗菌药物。另外，松萝酸钠外涂对实验性大鼠皮肤损伤有加速修复作用，故可用于治疗外伤、溃疡，烧伤等方面，甚至在某些方面，松萝酸钠的生理活性比松萝酸强(木全章，丁靖凯.地衣化学成分的研究，抗菌物质——松萝酸[J].云南植物研究，1975，(2):51-56.)。松萝酸的左、右旋体的抗菌作用无大的差别，在食品中可作防腐剂应用，也可作为牙膏和化妆品的添加剂。松萝酸还具有植物生长抑制剂活性，可使植物子叶组织中叶绿素及类胡萝卜素的含量下降，这种性质或许将来可为除草剂利用(王丽，阿地里江·阿不都拉，孙华.松萝酸研究进展[J].生物技术通讯，2005，16(4):472-473.)。目前，松萝酸的制备主要有有机溶剂回流提取、渗漉法、超声波或微波提取后，再经过重结晶或硅胶柱层析纯化的方式，获得松萝酸单体。主要的工艺流程为：用乙醇，水等不同溶剂将长松萝回流提取，所得的浸膏相继用几种不同的有机溶剂依次溶解并除杂，之后用单一溶剂或混合溶剂结晶，进而用单一溶剂或混合溶剂反复重结晶，得到松萝酸精品。其提取周期长，成本高，更为主要的是松萝酸极不易溶于冷水和热水，也极其不易溶于冷乙醇或是热乙醇，因此从植物长松萝中提取松萝酸的得率极其低，同时也对生药资源造成极大得浪费，很难进行大规模产业化生产。这一传统的生产工艺在生产实践中存在诸多难以克服的但是又在生产过程中不得不遇到的问题：一是所得浸膏粘度都比较大，有机溶剂比较难渗透进入浸膏液体中而影响除杂效果，也比较容易乳化现象；二是在提取过程中要使用多种不同的有机溶剂，不仅工艺过程冗长，提高了生产成本，而且带来很大的安全隐患，多次使用不同的有机溶剂，容易形成溶剂的交叉混合，导致溶剂的再生利用难度增加溶剂损失率高；三是工人劳动强度大，增加人力成本，由于在生产过程中过度的生产步骤，原料利用率降低，不利于扩大生产规模，产品的纯度难以保证，影响了产品的产量。因此，对现有的生产工艺进行改进和完善是极其有必要和现实意义的，而且也是一个紧迫的问题。中国专利CN101050208A公开了一种松萝酸生产工艺，该工艺是在干燥长松萝中加入体积3～5倍的乙酸乙酯溶剂于提取渗漉罐中，60℃～80℃循环加热提取，浓缩，冷冻结晶，过滤，重结晶，得90％～95％的纯品松萝酸，再经过氯仿溶解除去不溶于氯仿的杂质，氯仿结晶便得到98％以上的精品松萝酸。然而，该方法耗时太长，需要进行两次长时间重结晶，在重结晶过程中需要低温冷冻数小时，能耗高，并且需要使用氯仿除杂后才能获得纯度较高的产品，生产成本较高。而且，高纯度的松萝酸要用氯仿重结晶才能得到，但氯仿属于有毒溶剂，有麻醉性，有致癌可能性，不适合规模化生产。技术实现要素：鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于通过大量试验研究，提供一种大量制备松萝酸纯品的工艺，采用该工艺从太白花中提取分离、纯化松萝酸，具有提取成本低、产品纯度高和适于批量生产的优点。为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种从太白花中提取松萝酸的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：(1)回流提取：将干燥的太白花粉碎成末，加入乙酸乙酯，70～80℃回流提取2～3次，过滤，合并滤液，浓缩得干浸膏；(2)重结晶：将干浸膏用70～80℃的乙酸乙酯溶解，冷却至20～28℃可快速(<1h)析出纯度为90％晶体，分离松萝酸粗晶，再按照相同的条件使用乙酸乙酯重结晶，得纯度大于98％的松萝酸晶体。优选地，如上所述从太白花中提取松萝酸的方法，其中步骤(1)中每次回流提取时乙酸乙酯的用量为太白花的3～6倍。优选地，如上所述从太白花中提取松萝酸的方法，其中步骤(1)中回流提取的温度为75～77℃。优选地，如上所述从太白花中提取松萝酸的方法，其中步骤(2)中冷却析晶的温度为23～25℃。优选地，如上所述从太白花中提取松萝酸的方法，其中步骤(2)中乙酸乙酯结晶时料液比为＝1g：16～20mL。需要说明的是，本发明提取分离方法中所采用的太白花原料选自太白花地衣全体。与现有技术相比，本发明涉及的松萝酸制备工艺具有如下优点和显著的进步：(1)使用溶剂种类少，无需特殊设备，制备周期短，制备量大，适于大批量生产。本发明经乙酸乙酯回流提取后，干浸膏用乙酸乙酯加热溶解冷却至室温后快速(<1h)析出纯度为90％的松萝酸晶体，并用乙酸乙酯经过1次重结晶，就可以获得纯度很高(大于98％)的松萝酸晶体。同时制取工艺简单，效率高，无需特殊设备，降低了成本，仅使用了一种有机溶剂，避免了有机溶剂使用种类多导致的交叉混合问题，便于进行大规模工业化生产。(2)提取分离的产品收率高，纯度大。本发明在保证高收率(87％以上)的同时提高了产品的纯度，制备的松萝酸纯品纯度大于98％，有利于开发成高质量的药物。一般来说，用有机溶剂提取1次只能获得纯度80％左右的松萝酸，要获得纯度为95％左右的松萝酸需要提取3～4次、甚至更多次重结晶，但是要想获得纯度不低于98％的松萝酸，需要使用制备液相经过1～2次的分离。而本发明仅仅采用乙酸乙酯回流提取，干浸膏用乙酸乙酯加热溶解冷却快速(<1h)析出纯度为90％松萝酸晶体，并用乙酸乙酯经过1次重结晶，就可以获得纯度大于98％的松萝酸晶体，具有明显的进步性。附图说明图1为松萝酸的标准曲线图；图2为松萝酸标准品与本发明实施例1制备的纯品的HPLC图；图3为实施例1制备的干浸膏HPLC图；图4为松萝酸标准品与本发明实施例1制备的纯品的TLC图；图5为松萝酸标准品与本发明实施例2制备的纯品的TLC图。具体实施方式下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。另外，实施例中未注明具体技术操作步骤或条件者，均按照本领域内的一般文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1太白花中松萝酸的提取分离(1)回流提取：将晒干的太白花粉碎成末，称取100g，加入乙酸乙酯，77℃回流提取3.5h；共重复提取3次，每次加入600mL乙酸乙酯，合并3次滤液，浓缩得干浸膏4.8205g(见图3)。(2)重结晶：将干浸膏用44mL乙酸乙酯加热(70～80℃)溶解，冷却至25℃后迅速(<1h)析出纯度为90％松萝酸粗晶1.5710g，再使用55mL乙酸乙酯重结晶(温度70～80℃)，快速(<1h)析出黄色针状松萝酸晶体1.2760g，纯度为大于98％，并用TLC检测为松萝酸(见图4)，收率为88.0％。(3)制作松萝酸标准曲线：准确称取5份松萝酸标准品，质量分别为0.5mg，1mg，2mg，4mg，8mg，在这5份标品分别加入10mL丙酮充分溶解，得到浓度0.5mg/10mL，1mg/10mL，2mg/10mL，4mg/10mL，8mg/10mL的松萝酸标准品溶液，使用高效液相色谱仪测定不同浓度溶液的峰面积(见表1)，最终以松萝酸标准品溶液浓度为横坐标，以所测定的峰面积为纵坐标制作松萝酸的标准曲线(见图1)。(4)含量及纯度测定：利用标准曲线计算步骤(2)重结晶所得松萝酸晶体的纯度为98.63％(见图2)(干浸膏用乙酸乙酯加热溶解冷却至25℃迅速(<1h)析出纯度为90％的松萝酸晶体，并用乙酸乙酯经过1次重结晶，就可以获得纯度很高的松萝酸晶体)，太白花植物中所含的松萝酸含量为1.45％。表1：松萝酸标准曲线数据浓度mg/10mL00.51248峰面积/A0105522520340064119396811512715884248实施例2：太白花中松萝酸的提取分离(1)回流提取：将晒干的太白花粉碎成末，称取10kg，加入乙酸乙酯，77℃回流提取3.5h；共重复提取3次，每次加入40L乙酸乙酯，合并3次滤液，浓缩得干浸膏481.6g。(2)重结晶：将干浸膏用4L乙酸乙酯加热(70～80℃)溶解，冷却至25℃迅速(<1h)析出纯度为90％的松萝酸粗晶155.8g，再使用4.5L乙酸乙酯重结晶(70～80℃)，得黄色针状松萝酸晶体126.5g，并用TLC检测为松萝酸(见图5)，收率为87.2％，纯度为98.15％。对比例1：丙酮回流提取重结晶将晒干的太白花粉碎成末，称取100g，加入丙酮，60℃回流提取3.5h；共重复提取3次，每次加入600mL丙酮，合并3次滤液，浓缩得干浸膏3.8812g。将干浸膏用44mL丙酮加热(60℃)溶解，冷却到室温(25℃)，72小时后得松萝酸粗晶1.1649g，再使用丙酮50mL加热(60℃)溶解后重结晶，72小时后得黄色针状松萝酸晶体1.0273g，经检测纯度为87.27％。对比例2：石油醚回流提取重结晶将晒干的太白花粉碎成末，称取100g，加入石油醚，70℃回流提取3.5h；共重复提取3次，每次加入600mL石油醚，合并3次滤液，浓缩得干浸膏4.8186g。将干浸膏用55mL石油醚加热(70℃)溶解，冷却到室温(25℃)，12小时后得松萝酸粗晶1.2047g，再使用55mL石油醚加热(70℃)重结晶，12小时后得黄色针状松萝酸晶体0.9758g，经检测纯度为92.51％。对比例3：氯仿回流提取重结晶将晒干的太白花粉碎成末，称取100g，加入氯仿，60℃回流提取3.5h；共重复提取3次，每次加入600mL氯仿，合并3次滤液，浓缩得干浸膏4.8099g。将干浸膏用44mL氯仿加热(60℃)溶解，冷却到室温(25℃)，18小时后得松萝酸粗晶1.5665g，再使用60mL氯仿重结晶，18小时后得黄色针状松萝酸晶体1.1748g，经检测纯度为93.60％。当前第1页1 2 3