一种刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备方法与流程

文档序号:12092308阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)将孵化的幼虫冰浴30 min;并在4℃环境下8000rpm离心10 min沉淀幼虫;

(2)用洗涤液重悬沉淀,并在4℃5000 rpm离心10 min,重复2次;

(3)加入蛋白提取液,并加入l‰体积的1 mol/L DDT和蛋白酶抑制剂置于冰上,100 w超声破碎;

(4)装入1.5 mL离心管,冰上放置10 min,期间取出剧烈震荡2至3次,于4℃,14000 rpm离心10 min,弃去沉淀,上清转移至新管;

(5)将上清置于37℃水浴10 min,可见液体出现雾化混浊或分层,再室温或者37℃12000 rpm离心5 min,液体分为两层;

(6)小心吸去上次水相,取下层,加入500 冰冷灭菌水,混匀后冰浴5 min,再置于37℃水浴10min;

(7)室温环境下以12000rpm离心5 min,最终得到的下层即为膜蛋白提取物;

(8)初次免疫,将提取的刺激隐核虫幼虫膜蛋白与等量的弗氏完全佐剂混匀,充分震荡乳化,采用腹腔注射方法,每只Balb/c小鼠注射0.2 mL(约含100弘g抗原);

(9)2周后进行二次免疫,将提取的刺激隐核虫幼虫膜蛋白与等量的弗氏不完全佐剂混匀,乳化,每只小鼠注射0.2 mL(约含100/lg抗原);

(10)第三次免疫安排在杂交融合前4 d,用0.2 mL的刺激隐核虫幼虫膜蛋白(约含200 ug)进行免疫,不加佐剂;

(11)在三免后第4d,对受免疫Balb/c小鼠和阴性鼠摘眼球采血,制备血清后即得抗体。

2.如权利要求1所述一种刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述差声波破碎的方式为每次工作时间10s,间隔15S,做60个循环。

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