一种海洋原甲藻的检测方法与流程

文档序号:11145228阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种LAMP引物组,其特征在于,所述的引物组包含有:

F3,序列为GCTCAAATGCAATTGGAGTA、

B3,序列为TCCTATTGGATACACTACGAAT、

FIP,序列为TGCCAAGAAGTGTAGTACTACGAATCAGTATGGGAAGCTATTAGCAA、

BIP,序列为GGTTAGGTAGGGAATACGAGTACATACAGGTGCAGAGAAAGC、

LF,序列为GATATGTTCCTCCATTGTATAGCCA、

LB,序列为GCTTCCGTCTAGGCATGCGT。

2.如权利要求1所述的引物组,其特征在于,所述的FIP的序列为TGCCAAGAAGTGTAGTACTACGAATCAGTATGGGAAGCTATTAGCAA。

3.如权利要求1所述的引物组,其特征在于,所述的BIP的序列为GGTTAGGTAGGGAATACGAGTACATACAGGTGCAGAGAAAGC。

4.如权利要求1或2所述的引物组,其特征在于,所述的FIP的5′端用生物素标记。

5.如权利要求1或3所述的引物组,其特征在于,所述的LF的5′端用FITC标记。

6.权利要求1所述的引物组在检测海洋原甲藻中的应用。

7.一种检测海洋原甲藻的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包含有权利要求1-5任一项所述的引物组。

8.一种检测有害藻类海洋原甲藻的方法,其特征在于,所述的方法包括如下步骤

1)配制LAMP反应体系:

各引物的终浓度为:内引物PM-FIP和PM-BIP各1.6μmol/L,外引物PM-F3和PM-B3各0.2μmol/L,环引物PM-LF和PM-LB各0.8μmol/L;缓冲液组成及浓度为:Tris-HCl(pH 8.8)20mmol/L、KCl 10mmol/L,MgSO4 8mmol/L,(NH4)2SO4 10mmol/L,0.1%的Tween20,Betaine 0.8mol/L,dNTPs 1.4mmol/L;8U Bst DNA聚合酶和2μL样品DNA模板,加双蒸水使反应体系总体积为25μL;

2)LAMP反应体系扩增:将上述反应体系进行核酸扩增反应,扩增反应所需温度为61℃-65℃,扩增反应所需时间为30min-60min;

3)LFD检测:取8μL核酸扩增产物将产物加入到100μL Buffer中混匀,然后将LFD试纸条垂直浸入混合溶液中显色检测,通过试纸条判断扩增结果。

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