一种BHK21悬浮细胞高密度流加培养方法及其在口蹄疫病毒增殖中的应用与流程

技术特征：

1.一种适用于BHK-21细胞流加培养的浓缩培养液，其特征在于由以下含量的各原料物质组成：

2.如权利要求1所述的浓缩培养液，其特征在于由以下含量的各原料物质组成：

3.权利要求1或2所述的浓缩培养液在BHK-21细胞培养中的应用。

4.一种BHK-21悬浮细胞高密度流加培养方法，其特征在于利用生物反应器进行流加培养，所用培养基为调整后的ZN-MEM基础培养基，在细胞培养过程中，补加权利要求1或2所述的培养液，继续培养，收获细胞；

所述的调整后的ZN-MEM基础培养基包括氨基酸部分，平衡盐部分，维生素部分、其他添加物、血清以及蒸馏水，pH值7.0～7.2，其中，血清添加浓度为1％(v/v)，其他各原料物质在培养基中的终浓度为：

①氨基酸部分，包括：

②平衡盐部分，包括：

③维生素部分，包括：

④其它添加物，包括：

优选的，其他各原料物质在培养基中的终浓度为：

①氨基酸部分，包括：

②平衡盐部分，包括：

③维生素部分，包括：

④其它添加物，包括：

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于以初始接种密度0.4～0.5×10⁶个/ml向调整后的ZN-MEM基础培养基中接种复苏后的BHK-21细胞，培养参数：温度为36.5～37.0℃，pH值为6.8～7.0，DO值为60.0％～80.0％，搅拌转速为100～120r/min；在细胞培养至24-36h，细胞生长密度达到1.5×10⁶个/ml以上时，开始补加权利要求1或2所述的培养液，补加体积为原培养基体积的3％；培养至48h-60h，再补加原培养基体积2％的权利要求1或2所述的培养液；培养至72h，收获细胞；优选的，在细胞培养至24h，细胞生长密度达到1.5×10⁶个/ml以上时，开始补加权利要求1或2所述的培养液，补加体积为原培养基体积的3％；培养至48h，再补加原培养基体积2％的权利要求1或2所述的培养液；培养至72h，收获细胞。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于补加培养液后的培养参数为：温度37.0～37.5℃、pH值为6.95～7.20、DO值为50.0％～80.0％、搅拌转速为60～100r/min、渗透压值为260～320mOsm/L，优选的，培养参数为：温度37.0、pH值为6.95、DO值为80.0％、搅拌转速为100r/min、渗透压值为320mOsm/L。

7.按照权利要求4-7任一项所述的方法制备得到的BHK-21细胞，相对于普通BHK-21细胞，该BHK-21细胞对口蹄疫病毒的感染性增加。

8.权利要求7所述的BHK-21细胞在口蹄疫病毒增殖中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述的病毒增殖包括向权利要求7所述的BHK-21细胞接种病毒，设定控制参数为：温度36.5～37.0℃，pH值7.4～7.6，DO值为50.0％～70.0％，搅拌转速为50～70r/min，进行病毒增殖培养，优选的，设定控制参数为：温度37.0℃，pH值7.6、DO为50.0％、搅拌为70r/min，进行病毒增殖培养。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于所述的口蹄疫病毒为FMD/O/MYA98/BY/2010、FMD/Re-A WH/09和FMD/Asia1 JSL/06毒株。