II型抗CD20抗体用于器官移植中的制作方法

本申请要求2015年6月29日提交的美国临时申请序列号62/186303的优先权，其全部内容通过引用并入本文作为参考。以ascii文本文件提交序列表以下以ascii文本文件提交的内容通过整体引用并入本文：序列表的计算机可读形式(crf)(文件名：146392032340seqlist.txt，记录日期：2016年6月22日，大小：36kb)。本公开涉及器官移植(例如肾移植)领域。具体而言，本文提供了通过在移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体来治疗需要移植的个体的方法。背景肾移植是终末期肾病(esrd)患者的治疗选择。与esrd患者长期透析相比，移植接受者平均享受显著改善的生活质量，生存期延长，且总体费用降低。然而，移植接受者中针对源自移植物的外来抗原(例如hla抗原)的同种异体抗体(alloantibodies)可以导致立即和灾难性的移植排斥，这是同种异体移植(allotransplantation)成功的主要障碍。因此，移植社团已经严格采用交叉配型的程序来将可获得的移植物分配给有希望的接受者。评估候选者移植失败风险的一种常见实践操作是确定群体反应性抗体(panelreactiveantibodies,pra)水平或候选者血清与之反应并诱导细胞杀伤的供体淋巴细胞池的百分比。pra超过20％的患者可以被视为超敏移植候选者，且他们代表美国等候名单上所有肾移植候选者的约20％-30％。超敏患者的移植率仅为不敏感患者的四分之一。先前的器官移植、输血和妊娠都可以产生预先存在的同种异体抗体，增加移植候选者的pra和等待时间，并降低移植后移植物存活的机会。在等待其他实体器官移植的患者中，超敏化也是一个普遍问题。在服务不足的患者群体中存在明显未得到满足的医疗需求。已经研究了多种脱敏方案以优化超敏肾移植患者中相容供体的可用性，包括低剂量和高剂量静脉内免疫球蛋白(ivig)、血浆交换(plex)和b细胞消耗剂(例如利妥昔单抗)(vo,a.a.和jordan,s.c.,clinicalandexperimentalimmunology178(2014):48-51)。这些方法旨在抑制同种异体抗体和同种异体特异性(allospecific)b细胞，由此降低pra以允许有更高的机会与可用移植物匹配，并降低移植后抗体介导的排斥(amr)的发生率。仍然需要有效且安全的药剂来使具有高pra的移植患者脱敏并降低移植后移植排斥的风险。本文所公开的所有参考文献、出版物和专利申请均通过引用整体并入本文作为参考。发明简述在一些方面，本文提供了用于治疗需要器官移植的个体的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了在需要器官移植的个体中预防器官排斥的方法，所述方法包括在器官移植之前、同时和/或之后向所述个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在接受器官移植的个体中预防器官排斥的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中延长个体存活的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中延长移植物存活的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中改善移植物功能的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中降低同种异体抗体水平的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中减少群体反应性抗体(pra)水平的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中增加移植可能性的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中增加交叉配型相容性的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在其他方面，本文提供了用于在需要器官移植的个体中减少移植排斥的可能性的方法，其包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在可以与任何上述实施方案组合的一些实施方案中，器官移植是肾移植。在一些实施方案中，该方法降低个体中同种异体抗体的水平。在一些实施方案中，该方法降低个体中的群体反应性抗体(pra)的水平。在一些实施方案中，该方法增加移植的可能性。在一些实施方案中，所述方法在施用ii型抗cd20抗体后约12个月内增加移植的可能性。在一些实施方案中，该方法减少了个体接受合适的移植物(例如肾移植物)的等待时间。在一些实施方案中，个体接受交叉配型相容的移植物(例如，肾移植物)，其中所述交叉配型相容的移植物在个体没有接受ii型抗cd20抗体的情况下本来会是交叉配型不相容的。在一些实施方案中，降低同种异体抗体的水平包括降低器官移植后个体中供体特异性抗体的水平。在一些实施方案中，降低同种异体抗体的水平降低了器官移植后移植排斥的风险。在一些实施方案中，移植排斥是由细胞免疫应答、体液免疫应答或这两者引起的急性排斥。在一些实施方案中，移植排斥是抗体介导的排斥(amr)。在一些实施方案中，该方法延长移植物存活。在一些实施方案中，该方法改善移植物功能。在一些实施方案中，该方法延长个体的总体存活。在一些实施方案中，静脉内施用抗cd20抗体。在一些实施方案中，在器官移植之前向个体施用约900mg至约1100mg的ii型抗cd20抗体的剂量。在一些实施方案中，ii型抗cd20抗体的剂量是约1000mg。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在器官移植之前向个体施用约900mg至约1100mg之间的第二剂ii型抗cd20抗体，其中所述第二剂ii型抗cd20抗体是在第一剂ii型抗cd20抗体之后约10天至约18天之间或约1周至约3周之间施用。在一些实施方案中，第二剂ii型抗cd20抗体是约1000mg。在一些实施方案中，在第一剂ii型抗cd20抗体后约14天或约2周施用第二剂ii型抗cd20抗体。在一些实施方案中，个体在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约6周至约52周之间接受器官移植。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在器官移植之前向个体施用约900mg至约1100mg之间的第三剂ii型抗cd20抗体，其中第三剂ii型抗cd20抗体是在第一剂ii型抗cd20抗体后约154天至约182天之间或约22周至约26周之间施用。在一些实施方案中，第三剂ii型抗cd20抗体是约1000mg。在一些实施方案中，在第一剂ii型抗cd20抗体后约168天或约24周施用第三剂ii型抗cd20抗体。在一些实施方案中，个体在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约28周至约52周之间接受器官移植。在一些实施方案中，在器官移植之前向个体施用约1000mg的第一剂ii型抗cd20抗体；个体在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约6周至约52周之间接受器官移植；将约1000mg的ii型抗cd20抗体的剂量与器官移植同时施用给个体，其中与器官移植同时施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植的48小时内施用；并且在器官移植后将约1000mg的ii型抗cd20抗体的剂量施用给个体，其中在器官移植后施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植后约168天或约24周施用。在一些实施方案中，在器官移植之前向个体施用约1000mg的第一剂ii型抗cd20抗体；在第一剂ii型抗cd20抗体后约14天或约2周向个体施用约1000mg的第二剂ii型抗cd20抗体；个体在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约6周至约52周之间接受器官移植；将约1000mg的ii型抗cd20抗体的剂量与器官移植同时施用给个体，其中与器官移植同时施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植的48小时内施用；并且在器官移植后将约1000mg的ii型抗cd20抗体的剂量施用给个体，其中在器官移植后施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植后约168天或约24周施用。在一些实施方案中，在器官移植前向个体施用约1000mg的第一剂ii型抗cd20抗体；在第一剂ii型抗cd20抗体后约14天或约2周向个体施用约1000mg的第二剂ii型抗cd20抗体；在第一剂ii型抗cd20抗体后约168天或约24周向个体施用约1000mg的第三剂ii型抗cd20抗体；个体在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约28周至约52周之间接受器官移植；将约1000mg的ii型抗cd20抗体的剂量与器官移植同时施用给个体，其中与器官移植同时施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植的48小时内施用；并且在器官移植后将约1000mg的ii型抗cd20抗体的剂量施用给个体，其中在器官移植后施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植后约168天或约24周施用。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在器官移植之前向个体施用静脉内免疫球蛋白(ivig)的剂量。在一些实施方案中，ivig的剂量是高剂量。在一些实施方案中，ivig的剂量是约2g/kg。在一些实施方案中，在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约14天至约28天之间或约2周至约4周之间向个体施用该ivig剂量。在一些实施方案中，在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约21天或约3周，将该ivig的剂量施用给个体。在一些实施方案中，所述方法还包括在器官移植之前向个体施用第二剂静脉内免疫球蛋白(ivig)。在一些实施方案中，第二剂ivig是高剂量。在一些实施方案中，第二剂ivig是约2g/kg。在一些实施方案中，在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约35天至约49天之间或约5周至约7周之间向个体施用第二剂ivig。在一些实施方案中，在施用第一剂ii型抗cd20抗体后约42天或约6周，将第二剂ivig施用给个体。在一些实施方案中，与器官移植同时向个体施用约900mg至约1100mg之间的ii型抗cd20抗体的剂量，其中与器官移植同时施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在器官移植的48小时内施用。在一些实施方案中，与器官移植同时施用给个体的ii型抗cd20抗体的该剂量为约1000mg。在一些实施方案中，在器官移植后向个体施用约900mg至约1100mg的ii型抗cd20抗体的剂量。在一些实施方案中，器官移植后施用给个体的ii型抗cd20抗体的该剂量为约1000mg。在一些实施方案中，器官移植后施用给个体的ii型抗cd20抗体的该剂量是在器官移植后约154天至约182天之间或约22周至约26周之间施用。在一些实施方案中，器官移植后施用给个体的ii型抗cd20抗体的该剂量是在器官移植后约168天或约24周施用。在一些实施方案中，ii型抗cd20抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，ii型抗cd20抗体包含含有seqidno：1的hvr-h1序列，seqidno：2的hvr-h2序列和seqidno：3的hvr-h3序列的重链，和/或含有seqidno：4的hvr-l1序列，seqidno：5的hvr-l2序列和seqidno：6的hvr-l3序列的轻链。在一些实施方案中，ii型抗cd20抗体包含含有seqidno：7的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，ii型抗cd20抗体包含含有seqidno：8的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，ii型抗cd20抗体是非岩藻糖基化的。在一些实施方案中，抗cd20抗体是奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)。在一些实施方案中，受试者在第一剂ii型抗cd20抗体之前具有至少约20％的群体反应性抗体(pra)。在一些实施方案中，个体患有终末期肾病。在一些实施方案中，个体经历了一次或多次的先前器官移植、输血和怀孕。应当理解，本文所述的各种实施方案的一个、一些或全部属性可以组合以形成本发明的其它实施方案。本发明的这些和其它方面对于本领域技术人员将变得显而易见。通过下面的详细描述进一步描述本发明的这些和其它实施方案。附图简述图1描述了研究在超敏肾移植患者中，静脉内奥滨尤妥珠单抗加高剂量静脉内免疫球蛋白(ivig)的ib期临床研究的示例性研究设计。在实施例1中描述了研究设计。发明详述在一个方面，本文提供了用于治疗需要器官移植(例如肾移植)的个体的方法，所述方法包括在器官移植之前、同时和/或之后向个体施用有效量的ii型抗cd20抗体。在一些实施方案中，所述方法降低个体中同种异体抗体的水平，例如个体中群体反应性抗体(pra)的水平。在一些实施方案中，可以在器官移植之前向个体施用约900mg至约1100mg之间的一剂或多剂ii型抗cd20抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括在器官移植之前向个体施用一剂或多剂静脉内免疫球蛋白(ivig)。在一些实施方案中，约900mg至约1100mg之间的ii型抗cd20抗体的剂量与器官移植同时施用给个体。在一些实施方案中，可以在器官移植后向个体施用约900mg至约1100mg之间的一剂或多剂ii型抗cd20抗体。i.一般技术本文所描述或参考的技术和程序通常被本领域技术人员充分理解并使用常规方法通常采用，例如广泛利用的方法描述于sambrook等人，molecularcloning：alaboratorymanual第3版(2001)coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，n.y.；currentprotocolsinmolecularbiology(f.m.ausubel等人编(2003))；系列书籍methodsinenzymology(academicpress，inc.)：pcr2：apracticalapproach(m.j.macpherson，b.d.hames和g.r.taylor编(1995))，harlow和lane编(1988)antibodies，alaboratorymanual，andanimalcellculture(r.i.freshney编(1987))；oligonucleotidesynthesis(m.j.gait编，1984)；methodsinmolecularbiology，humanapress；cellbiology：alaboratorynotebook(j.e.cellis编1998)academicpress；animalcellculture(r.i.freshney)编，1987)；introductiontocellandtissueculture(j.p.mather和p.e.roberts，1998)plenumpress；cellandtissueculture：laboratoryprocedures(a.doyle，j.b.griffiths，andd.g.newell编，1993-8)j.wileyandsons；handbookofexperimentalimmunology(d.m.weir和c.c.blackwell编)；genetransfervectorsformammaliancells(j.m.miller和m.p.calos编，1987)；pcr：thepolymerasechainreaction，(mullis等人编，1994)；currentprotocolsinimmunology(j.e.coligan等人编，1991)；shortprotocolsinmolecularbiology(wileyandsons，1999)；immunobiology(c.a.janeway和p.travers，1997)；antibodies(p.finch，1997)；antibodies：apracticalapproach(d.catty编，irlpress，1988-1989)；monoclonalantibodies：apracticalapproach(p.shepherd和c.dean编，oxforduniversitypress，2000)；usingantibodies：alaboratorymanual(e.harlow和d.lane(coldspringharborlaboratorypress，1999)；theantibodies(m.zanetti和j.d.capra编，harwoodacademicpublishers，1995)；和cancer：principlesandpracticeofoncology(v.t.devita等人编，j.b.lippincottcompany，1993)。ii.定义如本文所用，术语“移植物”是指源自供体的用于移植到接受者中的生物材料。移植物包括如此多种多样的材料，例如分离的细胞如胰岛细胞和神经来源的细胞(例如，施万细胞等)，组织如新生儿羊膜，骨髓，造血前体细胞，和器官如皮肤、心脏、肝脏、脾脏、胰、甲状腺叶、肺、肾、管状器官(例如，肠、血管或食道)等。管状器官可以用来代替食道、血管或胆管的受损部位。皮肤移植物不仅可用于灼伤，还可用作受损伤肠的敷料(dressing)或用来封闭某些缺陷，如膈疝。移植物可以来自任何哺乳动物来源，包括人，无论是来自尸体还是活体捐献者。移植物可以是例如肾脏或心脏的实体器官。在通常的器官移植中，移植物的供体和移植物的宿主(即，接受者)优选地在移植之前是交叉配型上相容的。如本文所用，术语“供体”是指移植物来源的死亡或活的哺乳动物物种。优选地，供体是人。一般来说，人捐献者可以包括体检正常的志愿者血液相关的捐献者和属于相同的主要abo血型。本发明中考虑的人供体还可以包括但不限于与接受者在遗传上不相似的供体，以及在治疗之前与接受者交叉配型不相容的、但是在治疗后或部分治疗后与接受者交叉配型上相容的供体。术语“移植”及其词性变形形式是指将移植物移植入宿主(即，接受者)，不管移植物是否是同基因的(syngeneic)(其中供体和接受者在遗传上是相同的)，同种异体基因的(allogeneic)(其中供体和接受者的遗传起源不同，但属于同一物种)，异种基因的(xenogeneic)(其中供体和接受者来自不同的物种)。因此，在通常的情况下，宿主是人，且移植物是来源于相同或不同遗传起源的人的同种移植物(isograft)。在另一种情况下，移植物来源的物种不同于接受移植的物种，例如移植到人接受者宿主中的狒狒心脏，并包括来自种系发生广泛分离的物种，例如猪心脏瓣膜，或移植入人宿主的动物β胰岛细胞或神经元细胞。术语“同种异体抗体”是指由一个个体产生的与同一物种的另一个个体的同种异体抗原反应的抗体。“同种异体抗原(alloantigen)”是在相同物种的不同个体中在相同基因座处编码的以等位形式存在的抗原。由于外源物质和宿主中高度多态性基因的产物之间的差异，可以由同种异体抗原触发免疫应答。同种异体抗原的主要来源是来自人白细胞抗原(hla)分子，也称为主要组织相容性复合体(mhc)分子。术语“交叉配型”是指确定器官移植中供体和预期的接受者之间的相容性的测试，如通过例如接受者血清对供体细胞的反应性所显示。阳性交叉配型表示供体与预期的接受者之间不相容，且阴性交叉配型表示供体与预期的接受者之间相容。示例性交叉配型测试可以包括但不限于供体特异性流式细胞术交叉配型、补体依赖的细胞毒性交叉配型和t细胞补体依赖的细胞毒性群体反应性抗体测定法。关于交叉配型和示例性交叉配型测试的更详细描述，参见例如mulley，w.r.和kanellis，j.,(2011)nephrology16：125-33。术语“抗体”包括单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白fc区的全长抗体)、具有多表位特异性的抗体组合物、多特异性抗体(例如，双特异性抗体、双抗体(diabodies)和单链分子，以及抗体片段(例如，fab、f(ab’)2和fv)。除非另外(如，当用在术语“静脉内免疫球蛋白(ivig)”中时)指出，否则术语“免疫球蛋白”(ig)与“抗体”在本文中可互换使用。基本的4链抗体单元是异四聚体糖蛋白，其由两条相同的轻链(l)和两条相同的重链(h)组成。igm抗体由5个基本的异四聚体单元连同额外的被称为j链的多肽组成，并包含10个抗原结合位点，而iga抗体包含2-5个基本的4链单元，其可聚合形成与j链组合的多价装配物。在igg的情况中，4链单元通常是约150000道尔顿。每个l链通过一个共价二硫键连接到h链，而两个h链取决于h链的同种型通过一个或多个二硫键彼此相连。每个h链和l链还具有规律间隔的链内二硫键。每条h链在n-末端具有可变结构域(vη)，接着是对于每条α和γ链为三个恒定结构域(ch)和对于μ和ε同种型为4个ch结构域。每条l链在n-末端具有可变结构域(vl)，随后为在其另一端的恒定结构域。vl与vh对准，并且cl与重链(ch1)的第一个恒定结构域对准。认为特定氨基酸残基形成轻链可变结构域和重链可变结构域之间的界面。vh和vl的配对一起形成单个抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和特性，参见，例如，basicandclinicalimmunology，第8版，danielp.sties，abbai.terr和tristramg.parsolw(编)，appleton&lange，norwalk，ct，1994，第71页和chapter6。基于其恒定结构域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的l链可归入给两个完全不同的类型(称为κ和λ)之一。取决于其重链(ch)的恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类或同种型。有五类免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm，分别具有称为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于ch序列和功能中相对小的差异，γ和α类进一步分为亚类，例如，人表达下列亚类：igg1、igg2a、igg2b、igg3、igg4、iga1和iga2。抗体的“可变区”或“可变结构域”指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可以分别称为“vh”和“vl”。这些结构域一般是抗体的最易变化的部分(相对于同一类的其它抗体而言)并包含抗原结合位点。术语“可变的”是指这样的事实，该可变结构域的某些区段在抗体间序列中广泛地不同。该v结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均匀分布于可变区的整个跨度。相反，其集中在轻链可变结构域和重链可变结构域中都有的三个称为高变区(hvr)的区段内。可变结构域中更加高度保守的部分称作构架区(fr)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个fr区，大多采取β-折叠构型，通过3个hvr连接，其形成环状连接，并且在某些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的hvr通过fr区保持紧密接近在一起，并与来自另一条链的hvr一起促进抗体的抗原结合位点的形成(参见kabat等人，sequencesofimmunologicalinterest，第5版，nationalinstituteofhealth，bethesda，md(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，例如抗体在抗体依赖性的细胞毒性中的参与。如本文所用的术语“单克隆抗体”指获自基本上同质性抗体群的抗体，即包含在该群体中的各个抗体除了可以少量存在的可能天然发生的突变和/或翻译后修饰(例如异构化、酰胺化)之外是相同的。单克隆抗体针对单个抗原位点是高度特异性的。与多克隆抗体制剂(通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体)相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性，单克隆抗体的优点还在于它们通过杂交瘤培养合成，未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”表明该抗体的特征为从抗体的基本上同质的群中获得，并且不应被解释为需要通过任何特定方法生产该抗体。例如，本发明待使用的单克隆抗体可通过多种技术制成，包括例如杂交瘤方法(例如，kohler和milstein.，nature，256：495-97(1975)；hongo等人，hybridoma，14(3)：253-260(1995)，harlow等人，antibodies：alaboratorymanual，(coldspringharborlaboratorypress，第二版.1988)；hammerling等人，在：monoclonalantibodiesandt-cellhybridomas563-681(elsevier，n.y.，1981)中)，重组dna方法(参见，例如美国专利号4,816,567)，噬菌体展示技术(参见，例如clackson等人，nature，352：624-628(1991)；marks等人，j.mol.biol.222：581-597(1992)；sidhu等人，j.mol.biol.338(2)：299-310(2004)；lee等人，j.mol.biol.340(5)：1073-1093(2004)；fcllouse，proc.natl.acad.sci.usa101(34)：12467-12472(2004)；和lee等人，j.immunol.methods284(1-2)：119-132(2004))，和用于在动物中生产具有编码人免疫球蛋白序列的部分或全部人免疫球蛋白基因座或基因的人或人样抗体的技术(参见，例如wo1998/24893；wo1996/34096；wo1996/33735；wo1991/10741；jakobovits等人，proc.natl.acad.sci.usa90：2551(1993)；jakobovits等人，nature362：255-258(1993)；bruggemann等人，yearinimmunol.7：33(1993)；美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016；marks等人，bio/technology10：779-783(1992)；lonberg等人，nature368：856-859(1994)；morrison，nature368：812-813(1994)；fishwild等人，naturebiotechnol14：845-851(1996)；neuberger，naturebiotechnol.14：826(1996)；和lonberg和huszar，intern.rev.immunol.13：65-93(1995))。术语“裸抗体”是指不与细胞毒性部分或放射性标记缀合的抗体。术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”可互换使用，是指与抗体片段相反，处于其基本上完整形式的抗体。具体地，全抗体包含具有重链和轻链(包括fc区)的那些抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可以具有一个或多个效应子功能。“抗体片段”包括完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包括fab、fab’、f(ab’)2和fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；zapata等人，proteineng.8(10)：1057-1062[1995]))；单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“fab”片段，和残余的“fc”片段，该名称反映了易于结晶的能力。fab片段由完整的l链以及h链的可变区结构域(vh)，和一条重链的第一个恒定结构域(ch1)组成。每个fab片段相对于抗原结合是单价的，即，它具有单个抗原结合位点。抗体的胃蛋白酶处理产生一个单一的大的f(ab’)2片段，其粗略地相当于两个通过二硫键相连的具有不同的抗原结合活性的fab片段，且仍能够交联抗原。fab’片段与fab片段不同之处在于在ch1结构域的羧基末端具有一些额外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。fab’-sh是本文对于fab’的指定，其中所述恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基携带游离硫醇基。f(ab’)2抗体片段最初作为成对的fab’片段产生，在它们之间有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条h链的羧基末端部分。抗体的效应子功能是通过fc区中的序列决定的，所述区域也被在某些类型的细胞上发现的fc受体(fcr)识别。“fv”是最小抗体片段，其含有完整的抗原识别和结合位点。此片段由紧密、非共价结合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠散发出六个高变环(3个环来自h链和3个环来自l链)，其贡献氨基酸残基用于抗原结合，并赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即使是单个可变结构域(或仅包含三个对抗原特异的hvr的一半fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管以比完整结合位点更低的亲和力。“单链fv”也简称为“sfv”或“scfv”，是包含连接成单个多肽链的vh和vl抗体结构域的抗体片段。优选地，所述sfv多肽进一步包含在vh和vl结构域之间的多肽接头，其使得sfv能够形成抗原结合所需的结构。对于sfv的综述，参见pluckthun于thepharmacologyofmonoclonalantibodies，vol.113，rosenburg和moore编，springer-verlag，newyork，pp.269-315(1994)中。本发明的抗体的“功能性片段”包含完整抗体的一部分，一般包括完整抗体的抗原结合区或可变区或抗体的fc区，其保留或具有修饰的fcr结合能力。抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“双抗体”是指小的抗体片段，其通过如下制备：构建sfv片段(见上一段)，其具有在vh和vl结构域之间的短接头(约5-10个残基)，使得实现v结构域的链间而非链内配对，由此产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”的sfv片段的异源二聚体，其中两个抗体的vh和vl结构域存在于不同的多肽链上。双抗体更详细地描述于例如ep404,097；wo93/11161；hollinger等人，proc.natl.acad.sci.usa90：6444-6448(1993)。本文的单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中一部分重链和/或轻链与衍生自特定物种或属于特定抗体类型或亚类的抗体中相应序列相同或同源，而一条或多条链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类型或亚类的抗体、以及这些抗体的片段中相应序列相同或同源，只要它们展示所希望的生物活性(美国专利号4,816,567；和morrison等人，proc.natl.acad.sci.usa81：6851-6855)(1984))。本文所关注的嵌合抗体包含抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过例如用目的抗原免疫猕猴所产生的抗体。如本文所用，“人源化抗体”用作“嵌合抗体”的子集。非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式是包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是这样的人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者抗体的hvr(定义见下文)的残基被来自非人物种的hvr(供体抗体)的残基取代，所述非人物种例如小鼠、大鼠、兔或具有所期望的特异性、亲和力和/或能力的非人灵长类动物。在一些情况下，人免疫球蛋白的构架(“fr”)残基被相应的非人残基取代。此外，人源化抗体可包含在接受者抗体或供体抗体中未发现的残基。可以作出这些修饰以进一步改进抗体的性能，如结合亲和力。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个，并且通常两个可变结构域，其中所有的或基本上所有的高变环对应于非人免疫球蛋白序列的那些高变环，并且所有或基本上所有的fr区是人免疫球蛋白序列的那些fr区，尽管fr区可以包括一个或多个个别的fr残基的取代，所述取代提高抗体的性能，如结合亲和力、异构化、免疫原性等。fr中的这些氨基酸取代的数目在h链中通常不超过6个，并在l链中不超过3个。人源化抗体任选地还将包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。进一步的细节，参见例如，jones等人，nature321：522-525(1986)；riechmann等人，nature332：323-329(1988)；和presta，curr.op.struct.biol.2：593-596(1992)。还参见，例如vaswani和hamilton，ann.allergy，asthma&immunol.1：105-115(1998)；harris，biochem.soc.transactions23：1035-1038(1995)；hurle和gross，curr.op.biotech.5：428-433(1994)；和美国专利号6,982,321和7,087,409。“人抗体”是指具有相应于由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体和/或已使用如本文所公开的任何用于制备人抗体的技术制造的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术，包括噬菌体展示文库来制备。hoogenboom和winter，j.mol.biol，227：381(1991)；marks等人，j.mol.biol，222：581(1991)。还可以用于人单克隆抗体制备的方法描述于cole等人，monoclonalantibodiesandcancertherapy，alanr.liss，p.77(1985)；boerner等人，j.immunol，147(i)：86-95(1991)。还参见vandijk和vandewinkel，curr.opin.pharmacol，5：368-74(2001)。人抗体可以通过向转基因动物施用抗原来制备，所述转基因动物已被修饰以产生此种抗体来应答抗原攻击，但其内源基因座已被失效，例如，免疫的异种小鼠(关于xenomousetm技术参见例如美国专利号6,075,181和6,150,584)。关于经人b细胞杂交瘤技术生成的人抗体还参见，例如li等人，proc.natl.acad.sci.usa，103：3557-3562(2006)。本文中使用时，术语“高变区”、“hvr”或“hv”指抗体可变结构域的区域，其序列高度可变和/或形成结构确定的环。通常，抗体包含6个hvr：3个在vh(h1、h2、h3)中，并且3个在vl(l1、l2、l3)中。在天然抗体中，h3和l3展示这6个hvr的最大多样性，并且尤其h3被认为在赋予抗体精细的特异性方面发挥独特的作用。参见，例如xu等人，immunity13：37-45(2000)；johnson和wu，在methodsinmolecularbiology248：1-25中(lo编humanpress，totowa，nj，2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在的骆驼科抗体在缺乏轻链的情况下是有功能的且稳定的。参见，例如hamers-casterman等人，nature363：446-448(1993)；sheriff等人，naturestruct.biol.3：733-736(1996)。本文使用和涵盖了许多hvr描述。kabat互补决定区(cdr)是基于序列变异性，并且是最常用的(kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版。publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md.(1991))。chothia改为指结构环的位置(chothia和lesk，j.mol.biol.196：901-917(1987))。abmhvr代表kabathvr与chothia结构环之间的折衷，并被oxfordmolecular的abm抗体建模软件所使用。“接触”hvr是基于可获得的复合物晶体结构的分析。这些hvr中每一个的残基在下面注明。hvr可以包括如下的“延伸的hvr”：vl中的24-36或24-34(l1)、46-56或50-56(l2)和89-97或89-96(l3)和vh中的26-35(h1)、50-65或49-65(h2)和93-102、94-102或95-102(h3)。对于这些定义的每个，可变结构域残基是按照上文kabat等编号。表述“如kabat中的可变结构域残基编号”或“如kabat中的氨基酸位置编号”及其变体是指上文kabat等中抗体编译的用于重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含对应可变结构域的fr或hvr缩短或插入的更少的或额外的氨基酸。例如，重链可变结构域可以在h2的残基52后包括单个氨基酸插入(根据kabat，残基52a)和在重链fr残基82之后包括插入的多个残基(例如，根据kabat，残基82a、82b和82c等)。对于给定的抗体，残基的kabat编号可以通过在抗体序列的同源性区域与“标准”kabat编号序列的比对来确定。“构架”或“fr”残基是如本文中所定义的hvr残基之外的那些可变结构域残基。“人共有构架”或“接受者人构架”是代表在人免疫球蛋白vl或vh构架序列的选择中最经常发生的氨基酸残基的构架。通常，人免疫球蛋白vl或vh序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md(1991)中的亚组。实例包括，对于vl，亚组可以是如上文kabat等的亚组κi、κii、κiii或κiv。此外，对于vh，亚组可以是如上文kabat等的亚组i、亚组ii或亚组iii。备选地，人共有构架可以衍生自上述，其中特定残基，例如当通过将供体构架序列与各种人构架序列的集合进行比对，基于其对供体构架的同源性选择人构架残基时。“衍生自”人免疫球蛋白构架或人共有构架的接受者人构架可以包括其相同的氨基酸序列，或其可以包含预先存在的氨基酸序列的变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数目是10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，6个或更少，5个或更少，4个或更少，3个或更少，或2个或更少。“vh亚组iii共有构架”包含从kabat等人，上文的可变重亚组iii中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，vh亚组iii共有构架氨基酸序列包含以下每个序列的至少一部分或全部：evqlvesggglvqpggslrlscaas(hc-fr1)(seqidno:35),wvrqapgkglewv(hc-fr2),(seqidno:36),rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(hc-fr3,seqidno:37),wgqgtlvtvsa(hc-fr4),(seqidno:38)。“vlκi共有构架”包含从kabat等人，上文的可变轻κ亚组i中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，vh亚组i共有构架氨基酸序列包含以下序列中的每一个的至少一部分或全部：diqmtqspsslsasvgdrvtitc(lc-fr1)(seqidno:39),wyqqkpgkapklliy(lc-fr2)(seqidno:40),gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(lc-fr3)(seqidno:41),fgqgtkveikr(lc-fr4)(seqidno:42)。在例如fc区的指定位置的“氨基酸修饰”是指指定残基的取代或缺失，或指定残基相邻的至少一个氨基酸残基的插入。与指定残基“相邻”的插入是指在其一到两个残基内的插入。插入可以在指定残基的n-末端或c-末端。本文优选的氨基酸修饰是取代。“亲和力成熟的”抗体是在其一个或多个hvr中具有一个或多个改变的抗体，所述改变造成该抗体与不具有这些一个或多个改变的亲本抗体相比对抗原的亲和力改进。在一个实施方案中，亲和力成熟的抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知的程序产生。例如，marks等人，bio/technology10：779-783(1992)描述了通过vh和vl结构域改组的亲和力成熟。hvr和/或构架残基的随机诱变描述于，例如barbas等人，procnat.acad.sci.usa91：3809-3813(1994)；schier等人，gene169：147-155(1995)；yelton等人，j.immunol.155：1994-2004(1995)；jackson等人，j.immunol.154(7)：3310-9(1995)；和hawkins等人，j.mol.biol.226：889-896(1992)。如本文所用，术语“特异性结合”或“对于……是特异性的”是指可测量的和可重现的相互作用，例如靶和抗体之间的结合，其在分子包括生物分子的异源群体存在的情况下决定靶的存在。例如，特异性结合至靶(其可以是表位)的抗体是比其结合其它靶具有更大的亲和力(affinity)，亲合力(avidity)，更容易和/或具有更长的持续时间结合此靶的抗体。在一个实施方案中，抗体结合不相关靶的程度小于抗体与靶的结合的约10％，例如，如通过放射免疫测定(ria)所测量的。在某些实施方案中，特异性结合靶的抗体具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm或≤0.1nm的解离常数(kd)。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白上的表位，所述表位在来自不同物种的蛋白之间是保守的。在另一个实施方案中，特异性结合可以包括但不需要排他性结合。术语“fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的c-末端区，包括天然序列fc区和变体fc区。虽然免疫球蛋白重链的fc区的边界可能发生变化，但是人igg重链fc区通常定义为从位置cys226的氨基酸残基，或从pro230，向其羧基末端的延伸。fc区的c-末端赖氨酸(根据eu编号系统的残基447)可以被移除，例如，在抗体生产或纯化过程中，或通过重组改造编码所述抗体重链的核酸。因此，完整抗体的组合物可包含去除了所有k447残基的抗体群，没有去除k447残基的抗体群，和具有有和无k447残基的抗体的混合物的抗体群。用于本发明的抗体的合适的天然序列fc区包括人iggl、igg2(igg2a、igg2b)、igg3和igg4。“fc受体”或“fcr”描述结合抗体fc区的受体。优选的fcr是天然序列人fcr。此外，优选的fcr是这样的fcr，其结合igg抗体(是γ受体)，并包括fcγri、fcγrii和fcγriii亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的备选剪接形式，fcγrii受体包括fcγriia(“活化受体”)和fcγriib(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，其区别主要在于其胞质结构域。活化受体fcγriia在其胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)。抑制受体fcγriib在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ι′hμ)。(参见annu.rev.immunol.15：203-234(1997)。fcr的综述见于ravetch和kinet，annu.rev.immunol.9：457-92(1991)；capel等人，immunomethods4：25-34(1994)；和dehaas等，j.lab.clin.med.126：330-41(1995)。其它fcr，包括那些将来要鉴定的fcr在本文中被术语“fcr”涵盖。术语“fc受体”或“fcr”还包括新生儿受体fcrn，其负责将母体igg转移给胎儿。guyer等人，j.immunol.117：587(1976)和kim等人，j.immunol.24：249(1994)。测量与fcrn结合的方法是已知的(参见，例如ghetie和ward，immunol.today18：(12)：592-8(1997)；ghetie等人，naturebiotechnology15(7)：637-40(1997)；hinton等人，j.biol.chem.279(8)：6213-6(2004)；wo2004/92219(hinton等人)。可以测定体内与fcrn的结合和人fcrn高亲和力结合多肽的血清半寿期，例如，在转基因小鼠或表达人fcrn的转染的人细胞系中，或在对其施用具有变体fc区多肽的灵长类中。wo2004/42072(presta)描述了提高或降低了对fcr结合的抗体变体。还参见，例如shields等人，j.biol.chem.9(2)：6591-6604(2001)。如本文所用短语“基本上减少”或“基本上不同”表示两个数值(通常一个与分子相关，并且另一个与参照/比较分子相关)之间的足够高的差异程度，使得本领域技术人员会认为这两个值之间的差异在通过所述值(例如，kd值)测量的生物学特征的背景下具有统计学显著性。作为该值对于参照/比较分子的函数，所述两个值之间的差异是，例如，大于约10％，大于约20％，大于约30％，大于约40％，和/或大于约50％。如本文所用短语“基本上相似”或“基本相同”表示两个数值(例如一个与本发明的抗体相关，并且另一个与参照/比较抗体相关)之间的足够高的相似程度，使得本领域技术人员会认为这两个值之间的差异在通过所述值(例如，kd值)测量的生物学特征的背景下具有很小的或不具有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较子值的函数，所述两个值之间的差异，例如，小于约50％，小于约40％，小于约30％，小于约20％，和/或小于约10％。如本文所用“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，其在所采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理学上可接受的载体是ph缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂如edta；糖醇如甘露醇或山梨醇；成盐平衡离子，例如钠；和/或非离子表面活性剂，例如tweentm、聚乙二醇(peg)和pluronicstm。“包装插页”指通常包括在药物的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类药物应用的适应征、用法、剂量、施用、禁忌症、与该包装产品联合的其它药物和/或警告等的信息。“个体”或“受试者”或“患者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如奶牛、绵羊、猫、狗和马)，灵长类动物(例如人和非人灵长类动物如猴)，兔子和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，个体或受试者或患者是人。“有效量”至少是实现特定疾病或病症的可测量改善或预防需要的最小浓度。本文中的有效量可以随例如患者的疾病状态、年龄、性别、和重量，和抗体引发个体中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。为了预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，例如消除或降低风险，减轻严重性，或者延缓疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。为了治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，例如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的对象的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(例如经由靶向)，延缓疾病的进展，和/或延长存活。在治疗等待器官移植的致敏个体的情况下，有效量的药物可以在降低个体中同种异体抗体和/或pra的水平上有效和/或在一定程度上降低个体中同种异体抗体和/或pra的水平。在治疗正接受器官移植的个体(例如致敏个体)的情况下，有效量的药物可以在减轻与器官移植有关的一种或多种症状或病症(例如移植排斥)上有效和/或在一定程度上减轻与器官移植有关的一种或多种症状或病症(例如移植排斥)。可以在一次或多次施用中施用有效量。出于本发明的目的，药物、化合物、或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性治疗的量。如在临床背景中理解的，药物、化合物、或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物、化合物、或药物组合物一起实现。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现期望的结果或者实现了期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。本文所用的“cd20”是指人b淋巴细胞抗原cd20(也称为cd20，b淋巴细胞表面抗原b1，leu-16，bp35，bm5和lf5；该序列的特征在于swissprot数据库登录号p11836)是具有约35kd的分子量的疏水性跨膜蛋白，其位于前b和成熟b淋巴细胞上。(valentine，ma等人，j.biol.chem.264(19)(198911282-11287；tedder，tf等人，proc.natl.acad.sci.usa85(1988)208-12；stamenkovic，i.等人，j.exp.med.167(1988)1975-80；einfcld，da等人，emboj.7(1988)711-7；tedder，tf等人，j.immunol.142(1989)2560-8)。相应的人类基因是跨膜4结构域，亚家族a，成员1，也称为ms4a1。该基因编码跨膜4a基因家族的成员。该新生蛋白家族的特征是具有共同的结构特征和相似的内含子/外显子剪接边界，并在造血细胞和非淋巴组织之间显示独特的表达模式。该基因编码在b细胞发育和分化成浆细胞中发挥作用的b淋巴细胞表面分子。这个家族成员在一群家庭成员中被定位到11q12。该基因的选择性剪接导致两个转录物变体，其编码相同的蛋白质。术语“cd20”和“cd20抗原”在本文中可互换使用，并且包括由细胞天然表达或在用cd20基因转染的细胞上表达的人cd20的任何变体、同种型和物种同源物。将本发明的抗体与cd20抗原结合通过灭活cd20来介导杀死表达cd20的细胞(例如肿瘤细胞)。表达cd20的细胞的杀死可以通过一种或多种以下机制发生：细胞死亡/凋亡诱导、adcc和cdc。本领域公认的cd20的同义词包括b淋巴细胞抗原cd20、b淋巴细胞表面抗原b1、leu-16、bp35、bm5和lf5。根据本发明的术语“抗cd20抗体”是特异性结合cd20抗原的抗体。取决于抗cd20抗体对cd20抗原的结合性质和生物学活性，可以根据cragg，ms等人，blood103(2004)2738-2743；和cragg，m.s.等人，blood101(2003)1045-1052，区分两种类型的抗cd20抗体(i型和ii型抗cd20抗体)，参见下表1。表1.i型和ii型抗cd20抗体的性质i型抗cd20抗体ii型抗cd20抗体i型cd20表位ii型cd20表位将cd20定位在脂质筏(lipidrafts)不将cd20定位在脂质筏增加的cdc(如果是igg1同种型)减少的cdc(如果是igg1同种型)adcc活性(如果是igg1同种型)adcc活性(如果是igg1同种型)完全结合能力降低的结合能力同型聚集更强的同型聚集在交联时诱导凋亡不用交联的强细胞死亡诱导ii型抗cd20抗体的实例包括例如人源化b-ly1抗体igg1(wo2005/044859中公开的嵌合人源化igg1抗体)、11b8igg1(如wo2004/035607中所公开)和at80igg1。通常igg1同种型的ii型抗cd20抗体显示出特征性的cdc性质。与igg1同种型的i型抗体相比，ii型抗cd20抗体具有降低的cdc(如果是igg1同种型)。i型抗cd20抗体的实例包括例如利妥昔单抗、hi47igg3(ecacc，杂交瘤)、2c6igg1(如wo2005/103081中所公开)、2f2igg1(wo2004/035607和wo2005/103081中所公开)和2h7igg1(如wo2004/056312中所公开)。根据本发明的无岩藻糖化的抗cd20抗体优选为ii型抗cd20抗体，更优选wo2005/044859和wo2007/031875中描述的无岩藻糖化的人源化b-ly1抗体。“利妥昔单抗”抗体(参考抗体；i型抗cd20抗体的实例)是基因改造的针对人cd20抗原的嵌合的含人γ1鼠恒定结构域的单克隆抗体。然而，该抗体不是糖改造的，不是无岩藻糖化的，因此具有至少85％的岩藻糖的量。此嵌合抗体含有γ1人恒定结构域，并且于1998年4月17日出版并转让给idec制药公司(idecpharmaceuticalscorporation)的us5,736,137(andersen,k.c.等人)中以名称“c2b8”鉴定。利妥昔单抗被批准用于治疗患有复发的或难治性低度或滤泡性cd20阳性的b细胞非霍奇金淋巴瘤的患者。体外作用机制研究已经显示利妥昔单抗显示出人补体依赖的细胞毒性(cdc)(reff,m.ε.等人，blood83(2)(1994)435-445)。另外，其在测定抗体依赖的细胞毒性(adcc)的测定中显示出活性。本文所用的术语“ga101抗体”是指结合人cd20的以下抗体中的任一种：(1)抗体，包括：包含seqidno:1的氨基酸序列的hvr-h1，包含seqidno:2的氨基酸序列的hvr-h2，包含seqidno:3的氨基酸序列的hvr-h3，包含seqidno:4的氨基酸序列的hvr-l1，包含seqidno:5的氨基酸序列hvr-l2，和包含seqidno:6的氨基酸序列的hvr-l3；(2)包含seqidno:7的氨基酸序列的vh结构域和包含seqidno:8的氨基酸序列的vl结构域的抗体，(3)包含seqidno:9的氨基酸序列和seqidno:10的氨基酸序列的抗体；(4)称为奥滨尤妥珠单抗的抗体，或(5)包含与seqidno:9的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列并且包含与seqidno:10的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的抗体。在一个实施方案中，ga101抗体是igg1同种型抗体。在一些实施方案中，抗cd20抗体是人源化b-ly1抗体。术语“人源化b-ly1抗体”是指如wo2005/044859和wo2007/031875中公开的人源化b-ly1抗体，其从鼠单克隆抗cd20抗体b-ly1(鼠重链的可变区(vh)：seqidno:11；鼠轻链的可变区(vl)：seqidno:12-参见poppema，s.和visser，l.，biotestbulletin3(1987)131-139)通过与来自igg1的人恒定结构域的嵌合和随后的人源化(参见wo2005/044859和wo2007/031875)而获得。这些“人源化b-ly1抗体”详细公开在wo2005/044859和wo2007/031875中。鼠单克隆抗cd20抗体b-ly1重链可变区(vh)(seqidno:11)鼠单克隆抗cd20抗体b-ly1轻链可变区(vl)(seqidno:12)在一个实施方案中，“人源化b-ly1抗体”具有选自seqidno:7、8和13-33的重链可变区(vh)(特别是对应于wo2005/044859和wo2007/031875的b-hh2至b-hh9和b-hl8至b-hl17)。在一个具体实施方案中，这种可变结构域选自seqidno:14、15、7、19、25、27、29(对应于wo2005/044859和wo2007/031875的b-hh2、bhh-3、b-hh6、b-hh8、b-hl8、b-hl11和b-hl13)。在一个具体实施方案中，“人源化b-ly1抗体”具有seqidno:8的轻链可变区(vl)(对应于wo2005/044859和wo2007/031875的b-kv1)。在一个具体实施方案中，“人源化b-ly1抗体”具有seqidno:7的重链可变区(vh)(对应于wo2005/044859和wo2007/031875的b-hh6)和seqidno:8的轻链可变区(vl)(对应于wo2005/044859和wo2007/031875的b-kv1)。此外，在一个实施方案中，人源化b-ly1抗体是igg1抗体。根据本发明，此类无岩藻糖化人源化b-ly1抗体是根据wo2005/044859、wo2004/065540、wo2007/031875、umana，p.等人，naturebiotechnol.17(1999)176-180和wo99/154342中描述的方法在fc区被糖基化改造(ge)。在一个实施方案中，无岩藻糖化糖改造的人源化b-ly1是b-hh6-b-kv1ge。在一个实施方案中，抗cd20抗体是奥滨尤妥珠单抗(推荐的inn，whodruginformation，vol.26，no.4，2012，p.453)。如本文所用，奥滨尤妥珠单抗是ga101或ro5072759的同义词。这替代了所有以前的版本(例如vol.25，no.1，2011，p.75-76)，并且以前称为阿替他布(afutuzumab)(推荐的inn，whodruginformation，vol.23，no.2，2009，p.176；vol.22，no.2，2008，p.124)。在一些实施方案中，人源化b-ly1抗体是这样的抗体或其抗原结合片段，其包括：包含seqidno:9的氨基酸序列的重链和包含seqidno:10的氨基酸序列的轻链或它们的抗原结合片段。在一些实施方案中，人源化b-ly1抗体包括：seqidno:9的包含三个重链cdr的重链可变区和seqidno:10的包含三个轻链cdr的轻链可变区。重链(seqidno:9)轻链(seqidno:10)在一些实施方案中，人源化b-ly1抗体是无岩藻糖化糖改造的人源化b-ly1。这种糖改造的人源化b-ly1抗体在fc区中具有改变的糖基化模式，优选具有降低的岩藻糖残基水平。优选地，岩藻糖的量为asn297处寡糖总量的60％或更少(在一个实施方案中，岩藻糖的量在40％至60％之间，在另一个实施方案中，岩藻糖的量为50％或更少，在又一个实施方案中，岩藻糖的量为30％或更少)。此外，fc区的寡糖优选是二分的(bisected)。这些糖改造的人源化b-ly1抗体具有增加的adcc。“抗cd20抗体的与raji细胞(atcc编号：ccl-86)上cd20的结合能力与利妥昔单抗的结合能力的比值”通过直接免疫荧光测定法(测定平均荧光强度(mfi))，如实施例2中所述，使用与cy5缀合的所述抗cd20抗体和与cy5缀合的利妥昔单抗在facsarray(bectondickinson)中测定与raji细胞(atcc编号：ccl-86)的结合，并且计算如下：与raji细胞(atcc编号：ccl-86)上cd20的结合能力的比值＝mfi是平均荧光强度。本文所用的“cy5-标记比”是指每分子抗体的cy5-标记分子数。典型地，所述ii型抗cd20抗体具有的所述第二抗cd20抗体与raji细胞(atcc编号：ccl-86)上cd20的结合力与利妥昔单抗相比较的比值为0.3至0.6，在一个实施方案中为0.35至0.55，在另一个实施方案中为0.4至0.5。在一个实施方案中，所述ii型抗cd20抗体(例如ga101抗体)具有增加的抗体依赖的细胞毒性(adcc)。“具有增加的抗体依赖的细胞毒性(adcc)的抗体”是指如在此所定义的该术语一样，具有根据本领域普通技术人员已知的任何适当的方法测定的增加的adcc的抗体。一种公认的体外adcc测定如下：1)该测定使用已知表达由抗体的抗原结合区域识别的靶抗原的靶细胞；2)该测定使用从随机选择的健康供体的血液中分离的人外周血单个核细胞(pbmc)作为效应子细胞；3)该测定根据以下方案进行：i)pbmc使用标准密度离心程序分离，并以5×106个细胞/ml悬浮在rpmi细胞培养基中；ii)靶细胞通过标准的组织培养方法生长，从指数生长期收获，活力大于90％，在rpmi细胞培养基中洗涤，用100微居里的51cr标记，用细胞培养基洗涤两次，并且以105细胞/ml的密度重新悬浮在细胞培养基中；iii)将100微升上述最终靶细胞悬浮液转移到96孔微量滴定板的每个孔中；iv)将抗体在细胞培养基中从4000ng/ml连续稀释至0.04ng/ml，将50μl所得抗体溶液加入到96孔微量滴定板中的靶细胞中，将覆盖上面整个浓度范围内的各个抗体浓度一式三份测试；v)对于最大释放(mr)对照，含有标记的靶细胞的板中的另外3个孔接受50微升的2％(vn)非离子型去污剂(nonidet，sigma，st.louis)的水溶液代替抗体溶液(上述点iv)；vi)对于自发释放(sr)对照，含有标记的靶细胞的板中的另外3个孔接受50微升的rpmi细胞培养基代替抗体溶液(上面的点iv)；vii)然后将96孔微量滴定板以50×g离心1分钟，并在4℃温育1小时；viii)将50微升的pbmc悬浮液(上述点i)加入到每个孔中以产生25：1的效应细胞：靶细胞比例，并将板放置在37℃，5％co2气氛的培养箱中4小时；ix)收获每个孔的无细胞上清液，并使用γ计数器定量实验释放的放射性(er)；x)根据式(er-mr)/(mr-sr)×100计算每抗体浓度的特异性裂解百分比，其中er是针对该抗体浓度定量的平均放射性(参见上述点ix)，mr是mr对照(见上文点v)定量的平均放射性(见上述点ix)，sr是sr对照(见上述点iv)定量的平均放射性(见上述点ix)；4)“增加的adcc”被定义为在上述测试的抗体浓度范围内观察到的特异性裂解的最大百分比的增加和/或在上面测试的抗体浓度范围内观察到实现特异性裂解的最大百分比的一半所需的抗体浓度的降低。在一个实施方案中，adcc的增加是采用上面测定法测定，相对于使用本领域专业技术人员公知的相同的标准生产方法、纯化方法、配制和保存方法，由相同类型宿主细胞产生的,由相同抗体介导的adcc，但比较抗体(缺少增加的adcc)不由被改造以过度表达gntiii和/或被改造以具有从岩藻糖基转移酶8(fut8)基因表达降低(例如，包括为fut8敲除的改造)的宿主细胞产生的。所述“增加的adcc”可以通过例如所述抗体的突变和/或糖改造来获得。在一个实施方案中，将抗体糖改造以具有连接到由glcnac二分的抗体的fc区的双分支寡糖，例如在wo2003/011878(jean-mairet等人)；美国专利号6，602，684(umana等人)；us2005/0123546(umana等人)，umana，p.等人，naturebiotechnol.17(1999)176-180)中。在另一个实施方案中，通过在蛋白质岩藻糖基化缺陷的宿主细胞(例如，lec13cho细胞)或具有α-1,6-岩藻糖基转移酶基因(fut8)缺失或fut基因表达被敲减的细胞中表达抗体，抗体被糖改造以缺乏在结合到fc区上的碳水化合物上的岩藻糖(参见例如yamane-ohnuki等人biotech.bioeng.87：614(2004)；kanda，y.等人，biotechnol.bioeng.，94(4)：680-688(2006)；和wo2003/085107)。在另一个实施方案中，抗体序列已经在其fc区被改造以增强adcc(例如，在一个实施方案中，这样的改造抗体变体包括fc区域，其具有在fc区的位置298、333和/或334的一个或多个氨基酸取代(残基的eu编号)。术语“补体依赖的细胞毒性(cdc)”是指在补体存在下，根据本发明的抗体对人肿瘤靶细胞的裂解。可以通过在补体存在下用根据本发明的抗cd20抗体处理cd20表达细胞的制备物来测定cdc。如果4小时后抗体以100nm的浓度诱导20％或更多肿瘤细胞的裂解(细胞死亡)，则发现cdc。在一个实施方案中，用51cr或eu标记的肿瘤细胞进行测定并测量释放的51cr或eu。对照包括肿瘤靶细胞与补体但不含抗体的温育。术语“表达cd20”抗原旨在表示cd20抗原在细胞，例如t细胞或b细胞中的显著水平的表达。在一个实施方案中，用根据本发明的方法治疗的患者在b细胞上表达显著水平的cd20。可以通过本领域已知的标准测定来测定b细胞上的cd20表达，例如，使用免疫组织化学(ihc)检测、facs或通过相应mrna的基于pcr的检测来测量cd20抗原表达。如本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指代，除非另有明确规定。因此，例如，提到“一个分子”任选地包括两个或更多个这样的分子的组合等。本文所用的术语“约”是指本领域技术人员熟知的相应值的通常误差范围。这里引用“约”一数值或参数包括(和描述)针对该数值或参数本身的实施方案。应当理解，本文描述的本发明的方面和实施方案包括“包含”，“组成”和“基本上由......组成”方面和实施方案。iii.方法在一个方面，本文提供了用于治疗需要器官移植(例如肾移植)的个体的方法，所述方法包括在所述移植之前、同时和/或之后施与个体有效量的ii型抗cd20抗体。在一些实施方案中，所述方法在个体中，例如在接受了、正在接受或将要接受器官移植(例如肾移植)的个体中提供预防器官排斥。在一些实施方案中，所述方法延长存活(例如，宿主和/或移植物存活)。在一些实施方案中，所述方法降低个体中同种异体抗体的水平。在一些实施方案中，所述方法减少个体的群体反应性抗体(pra)。在一些实施方案中，所述方法增加移植的可能性。在一些实施方案中，所述方法降低移植后移植排斥的风险。在一些实施方案中，所述方法减少个体接受合适肾移植物的等待时间。在一些实施方案中，所述方法允许个体接受交叉配型相容的肾移植物，所述个体在不接受ii型抗cd20抗体的情况下本来可能是交叉配型不相容的。在一些实施方案中，所述方法延长移植物存活。在一些实施方案中，该方法改善移植物功能。在一些实施方案中，所述方法降低移植排斥的可能性。在一些实施方案中，个体在治疗之前具有至少20％的pra。在一些实施方案中，个体患有终末期肾病。在一些实施方案中，个体已经经历先前的同种异体抗原暴露事件，例如先前的器官移植、输血、先前的妊娠或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述方法包括向个体施用至少第一剂量(包括例如仅第一剂量，和在第一剂量之后约10天至约18天之间的第二剂量)的抗cd20抗体，接着是任选的补充剂量的抗cd20抗体，其中补充剂量直到抗cd20抗体第一剂量后约23周至约25周才提供。在一些实施方案中，个体在第一剂抗cd20抗体之后约6周至约52周之间接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，所述方法还包括在个体接受器官移植(例如肾移植)时向个体施用第一额外剂量的抗cd20抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括在个体接受器官移植(例如肾移植)后约23周至约25周之间向个体施用第二额外剂量的抗cd20抗体。在一些实施方案中，抗cd20抗体的每个剂量(包括第一剂量、第二剂量、补充剂量、第一额外剂量和第二额外剂量)是抗cd20抗体在约1800mg至约2200mg之间。如下所述，在一些实施方案中，抗体包含：包含seqidno:1的hvr-h1序列，seqidno:2的hvr-h2序列和seqidno:3的hvr-h3序列的重链和包含seqidno:4的hvr-l1序列，seqidno:5的hvr-l2序列和seqidno:6的hvr-l3序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含：包含seqidno:7的氨基酸序列的vh结构域和包含seqidno:8的氨基酸序列的vl结构域。在一些实施方案中，抗体包含seqidno:9的氨基酸序列和seqidno:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含这样的抗体，其包括与seqidno:9的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，并且其包括与seqidno:10的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。抗cd20抗体本公开的某些方面涉及抗cd20抗体，例如用于降低同种异体抗体的水平的方法中。在一些实施方案中，抗cd20抗体是ii型抗体。在一些实施方案中，抗cd20抗体是人或人源化的。在一些实施方案中，抗cd20抗体是无岩藻糖基化的。在一些实施方案中，抗cd20抗体是ga101抗体。ii型抗cd20抗体的实例包括例如，人源化b-ly1抗体igg1(如wo2005/044859中公开的嵌合人源化igg1抗体)，11b8igg1(如wo2004/035607所公开)和at80igg1。通常igg1同种型的ii型抗cd20抗体显示出特征性的cdc性质。与igg1同种型的i型抗体相比，ii型抗cd20抗体具有降低的cdc(如果igg1同种型)。i型抗cd20抗体的实例包括例如，利妥昔单抗，hi47igg3(ecacc，杂交瘤)，2c6igg1(如wo2005/103081所公开)，2f2igg1(如wo2004/035607和wo2005/103081所公开)和2h7igg1(如wo2004/056312所公开)。在一些实施方案中，抗cd20抗体是本文所述的ga101抗体。在一些实施方案中，抗cd20是结合人cd20的以下抗体中的任一种：(1)抗体，包括：包括gyafsy(seqidno：1)的氨基酸序列的hvr-h1，包括fpgdgdtd(seqidno：2)的氨基酸序列的hvr-h2，包括nvfdgywlvy(seqidno：3)的氨基酸序列的hvr-h3，包括rssksllhsngityly(seqidno：4)的氨基酸序列的hvr-l1，包括qmsnlvs(seqidno：5)的氨基酸序列的hvr-l2和包括aqnlelpyt(seqidno：6)的氨基酸序列的hvr-l3；(2)抗体，包括：包含seqidno：7的氨基酸序列的vh结构域和包含seqidno：8的氨基酸序列的vl结构域，(3)包含seqidno：9的氨基酸序列和seqidno：10的氨基酸序列的抗体；(4)称为奥滨尤妥珠单抗的抗体，或(5)抗体，包含与seqidno：9的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，并且其包含与seqidno：10的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，ga101抗体是igg1同种型抗体。在一些实施方案中，抗cd20抗体包含：包含seqidno：7的氨基酸序列的重链可变区(vh)和包含seqidno：8的氨基酸序列的轻链可变区(vl)。qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgyafsyswinwvrqapgqglewmgrifpgdgdtdyngkfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycarnvfdgywlvywgqgtlvtvss(seqidno：7)divmtqtplslpvtpgepasiscrssksllhsngitylywylqkpgqspqlliyqmsnlvsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycaqnlelpytfgggtkveikrtv(seqidno：8).在一些实施方案中，抗cd20抗体包含：包含seqidno：9的氨基酸序列的重链和包含seqidno：10的氨基酸序列的轻链。qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgyafsyswinwvrqapgqglewmgrifpgdgdtdyngkfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycarnvfdgywlvywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seqidno：9)divmtqtplslpvtpgepasiscrssksllhsngitylywylqkpgqspqlliyqmsnlvsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycaqnlelpytfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno：10)______________________________________________在一些实施方案中，抗cd20抗体是人源化b-ly1抗体。在一些实施方案中，人源化b-ly1抗体包含：包含seqidno：9的三个重链cdr的重链可变区和包含seqidno：10的三个轻链cdr的轻链可变区。在一些实施方案中，人源化b-ly1抗体包含：包含seqidno：9的序列的重链和包含seqidno：10的序列的轻链。在一些实施方案中，抗cd20抗体包含与下表2中列出的多肽序列至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。表2.多肽序列在一些实施方案中，抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是无岩藻糖化糖改造抗体。这样的糖改造抗体在fc区具有改变的糖基化模式，优选具有降低的岩藻糖残基水平。优选地，岩藻糖的量为asn297处寡糖总量的60％或更少(在一个实施方案中，岩藻糖的量在40％至60％之间，在另一个实施方案中，岩藻糖的量为50％或更少，在又一个实施方案中，岩藻糖的量为30％或更少)。此外，fc区的寡糖优选地是二分的。这些糖改造的人源化抗cd20(例如，b-ly1)抗体具有增加的adcc。寡糖组分可以显著影响与治疗性糖蛋白功效相关的性质，包括物理稳定性、对蛋白酶攻击的抗性、与免疫系统的相互作用、药物代谢动力学和特异性生物学活性。这些性质不仅取决于寡糖的存在与否，而且还取决于寡糖的特定结构。可以对寡糖结构与糖蛋白功能之间进行一些概括。例如，某些寡糖结构通过与特定碳水化合物结合蛋白的相互作用而介导糖蛋白从血液流快速清除，而其他寡糖结构可以被抗体结合并触发不期望的免疫反应。(jenkins，n.等人，naturebiotechnol.14(1996)975-81)。哺乳动物细胞是生产治疗性糖蛋白的优选宿主，因为它们具有以对人类应用最相容形式来糖基化蛋白的能力。(cumming，d.a.等人，glycobiology1(1991)115-30；jenkins，n.等人，naturebiotechnol.14(1996)975-81)。细菌很罕见地糖基化蛋白质，并且类似其他类型的常见宿主如酵母、丝状真菌、昆虫和植物细胞，产生与从血流中快速清除、不期望的免疫相互作用相关，且在一些特定情况下，降低生物活性的糖基化模式。在哺乳动物细胞中，在过去二十年中是最常用的是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。除了给出合适的糖基化模式之外，这些细胞允许不断地产生遗传稳定的、高产的克隆细胞系。它们可以使用无血清培养基在简单生物反应器中培养至高密度，并允许开发安全可重复的生物过程。其他常用的动物细胞包括幼仓鼠肾(bhk)细胞、nso-和sp2/0-小鼠骨髓瘤细胞。近来，也测试了自转基因动物的生产。(jenkins,n.等人，naturebiotechnol.14(1996)975-981)。所有抗体在重链恒定区中在保守位置含有碳水化合物结构，每个同种型具有一组独特的n-连接碳水化合物结构，其可变地影响蛋白质组装、分泌或功能活性。(wright，a.和morrison，s.l.，trendsbiotech.15(1997)26-32)。所连接的n-连接的碳水化合物的结构取决于加工程度而显著变化，并且可以包括高甘露糖、多分支以及双分支的复合寡糖。(wright，a.和morrison，s.l.，trendsbiotech.15(1997)26-32)。通常，在特定糖基化位点处连接的核心寡糖结构存在不均一的加工，使得甚至单克隆抗体以多种糖形存在。同样，已经表明抗体糖基化的主要差异发生在细胞系之间，并且甚至在不同培养条件下生长的给定细胞系中也观察到较小的差异。(lifcly，m.r.等人，glycobiology5(8)(1995)813-22)。获得大幅度增加的效力，同时保持简单的生产工艺并潜在地避免明显的不良副作用的一种方式是如umanap.等人，naturebiotechnol.17(1999)176-180和us6,602,684中所述，通过改造其寡糖成分来增强单克隆抗体的天然的、细胞介导的效应子功能。igg1型抗体是癌症免疫治疗中最常用的抗体，其是在每个ch2结构域中在asn297处具有保守的n-连接糖基化位点的糖蛋白。连接到asn297上的两个复合的双分支寡糖被掩埋在ch2结构域之间，与多肽骨架形成广泛的接触，并且它们的存在对于抗体介导效应子功能如抗体依赖的细胞毒性(adcc)是必需的(lifcly，mr等人，glycobiology5(1995)813-822；jeffcris，r.等人，immunol.rev.163(1998)59-76；wright，a.和morrison，sl，trendsbiotechnol.15(1997)26-32)。先前已经表明，β(1,4)-n-乙酰葡糖胺基转移酶i11(“gntii17y”)(是催化二分寡糖形成的糖基转移酶)在中国仓鼠卵巢(cho)细胞中的过度表达显著增加由工程化改造的cho细胞产生的抗成神经细胞瘤嵌合单克隆抗体(chce7)的体外adcc活性(参见umana，p.等人，naturebiotechnol.17(1999)176-180；和wo99/154342，其全部内容通过整体引用引入本文)。抗体chce7属于具有高肿瘤亲和性和特异性的一大类非缀合的单克隆抗体，但在缺乏gntiii酶的标准工业细胞系中生产时效力太低而不能用于临床(umana，p等人，naturebiotechnol.17(1999)176-180)。该研究首先显示通过改造生产抗体的细胞来表达gntiii可以获得adcc活性的大幅增加，其也可以导致恒定区(fc)相关的二分的寡糖(包括二分的无岩藻糖化寡糖)的比例增加，高于天然存在的抗体中发现的水平。在一些实施方案中，抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)包含人fc区(例如人igg1fc区)。在一些实施方案中，fc区包括已经修饰的n-连接的寡糖。在一些实施方案中，与具有未修饰的n-连接寡糖的抗体相比，fc区的n-连接寡糖具有降低的岩藻糖残基。在一些实施方案中，二分的寡糖是二分的复合寡糖。在一些实施方案中，n-连接的寡糖已经被修饰为具有增加的二分无岩藻糖化寡糖。在一些实施方案中，二分的无岩藻糖化寡糖是杂交型。在一些实施方案中，二分的无岩藻糖化寡糖是复合型。关于更详细的描述，参见例如wo2003/011878(jean-mairet等人)；美国专利号6,602,684(umana等人)；us2005/0123546(umana等人)；和美国专利8,883,980(umana等人)。在一些实施方案中，抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是多特异性抗体或双特异性抗体。抗体制备根据任何上述实施方案的抗体(例如，本公开的ii型抗cd20抗体)可以单独或组合地并入如以下1-7节所述的任何特征：1.抗体亲和力在某些实施方案中，本文提供的抗体具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm或≤0.001nm的解离常数(kd)(例如，10-8m或更小，例如10-8m至10-13m，例如10-9m至10-13m)。在一个实施方案中，通过放射性标记的抗原结合测定(ria)测量kd。在一个实施方案中，使用目标抗体的fab形式及其抗原进行ria。例如，fab对抗原的溶液结合亲和力通过在滴定系列的未标记抗原存在下用最小浓度的(125i)标记的抗原平衡fab，然后用抗fab抗体包被的平板捕获结合的抗原而测量(参见例如chen等人，j.mol.biol.293：865-881(1999))。为了建立测定条件，将多孔板(thermoscientific)用在50mm碳酸钠(ph9.6)中的5μg/ml的捕获抗fab抗体(cappellabs)包被过夜，随后用在pbs中的2％(w/v)牛血清白蛋白在室温(约23℃)下封闭2至5小时。在非吸附板(nunc#269620)中，将100pm或26pm[125i]-抗原与目标fab的系列稀释液混合(例如，与抗-vegf抗体，fab-12的评估一致，presta等人，cancerres.57：4593-4599(1997))。然后将目标fab温育过夜；然而，温育可以持续较长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移到捕获板中，以在室温温育(例如1小时)。然后除去溶液，并用pbs中的0.1％聚山梨醇酯20(tween-20)将板洗涤8次。当板干燥时，加入150μl/孔的闪烁剂(microscint-20tm；packard)，并将板在topcounttmγ计数器(packard)上计数10分钟。选择给出小于或等于最大结合的20％的每种fab的浓度用于竞争性结合测定。根据另一个实施方案，使用表面等离子体共振测定法测量kd。例如，使用-2000或biacore-3000(biacore，inc.，piscataway，nj)的测定，在25℃使用固定的抗原cm5芯片以约10个应答单位(ru)进行。在一个实施方案中，根据供应商的说明书，用n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)活化羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(cm5，biacore，inc.)。在注射前以5μl/分钟的流速用10mm乙酸钠(ph4.8)将抗原稀释至5μg/ml(～0.2μm)，以获得约10个应答单位(ru)的偶联蛋白。注射抗原后，注射1m乙醇胺以封闭未反应的基团。为了动力学测量，在25℃以约25μl/分钟的流速注入在含0.05％聚山梨醇酯20(tween-20tm)表面活性剂的pbs(pbst)中的两倍连续稀释的fab(0.78nμ至500nμ)。使用简单一对一朗格缪尔(langmuir)结合模型(evaluationsoftwareversion3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(kd)以koff/kon比计算。参见例如chen等人，j.mol.biol.293：865-881(1999)。如果通过上述表面等离子体共振测定的结合速率超过106m-1s-1，则可以通过使用荧光猝灭技术测量结合速率，其正如在分光计例如配备了断流装置的分光光度计(stop-flowequippedspectrophometer)(avivinstruments)或8000系列slm-amincotm分光光度计(thermospectronic)中用揽拌比色杯(stirredcuvette)测量的，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量pbs，ph7.2中的20nm抗-抗原抗体(fab形式)在25℃的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。2.抗体片段在某些实施方案中，本文提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于fab、fab'、fab'-sh、f(ab’)2、fv和scfv片段，以及下述其它片段。有关某些抗体片段的综述，参见hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)。关于scfv片段的综述，参见例如pluckthün，thepharmacologyofmonoclonalantibodies，113，rosenburg和moore编，(springer-verlag，newyork)，pp.269-315(1994)；另参见wo93/16185；和美国专利号5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半寿期的fab和f(ab’)2片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。参见例如ep404,097；wo1993/01161；hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)；和hollinger等人，proc.natl.acad.sci.usa90：6444-6448(1993)。habson等人，nat.med.9：129-134(2003)中也描述了三抗体和四抗体。单结构域抗体是包括抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(domantis，inc.，waltham，ma；参见例如美国专利号6,248,516b1)。可以通过各种技术制备抗体片段，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及如本文所述的通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)生产。3.嵌合的和人源化抗体在某些实施方案中，本文提供的抗体是嵌合抗体。例如，在美国专利号4,816,567；和morrison等人,proc.natl.acad.sci.usa,81:6851-6855(1984))中描述了某些嵌合抗体。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔、或非人灵长动物，例如猴的可变区)和人恒定区。在另外的实例中，嵌合抗体是“类别交换的”抗体，其中类别或亚类已经从亲本抗体的类别或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化的抗体。通常，非人抗体经人源化以降低对人的免疫原性，同时保持亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化的抗体包含一个或多个可变结构域，其中hvr，例如，cdr(或其部分)源自非人抗体，并且fr(或其部分)源自人抗体序列。人源化的抗体任选地也包含至少一部分人恒定区。在一些实施方案中，人源化的抗体中的一些fr残基被来自非人抗体(例如，hvr残基源自的抗体)的对应的残基取代，例如，以恢复或提高抗体特异性或亲和力。人源化的抗体和制备其的方法在例如，almagro和fransson,front.biosci.13:1619-1633(2008)中综述，并在例如，riechmann等人,nature332:323-329(1988)；queen等人,proc.nat’lacad.sci.usa86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；kashmiri等人,methods36:25-34(2005)(描述了特异性决定区域(sdr)的移植)；padlan,mol.immunol.28:489-498(1991)(描述了“表面重修”)；dall’acqua等人,methods36:43-60(2005)(描述了“fr改组”)；和osbourn等人,methods36:61-68(2005)和klimka等人,br.j.cancer,83:252-260(2000)(描述了fr改组的“导向选择”方法)中进一步描述。可用于人源化的人构架区包括但不限于：使用“最适”方法选择的构架区(参见,例如，sims等人j.immunol.151:2296(1993))；源自特别亚组的轻链或重链可变区的人抗体的共有序列的构架区(参见，例如，carter等人proc.natl.acad.sci.usa,89:4285(1992)；和presta等人j.immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变的)构架区或人种系构架区(参见，例如，almagro和fransson,front.biosci.13:1619-1633(2008))；和源自筛选fr文库的构架区(参见，例如，baca等人,j.biol.chem.272:10678-10684(1997)和rosok等人,j.biol.chem.271:22611-22618(1996))。4.人抗体在某些实施方案中，本文提供的抗体是人抗体。可以使用本领域已知的多种技术生产人抗体。在vandijk和vandewinkel,curr.opin.pharmacol.5:368-74(2001)和lonberg,curr.opin.immunol.20:450-459(2008)中大体地描述了人抗体。可以通过对转基因动物施用免疫原制备人抗体，所述转基因动物已被修饰以应答抗原攻击而生产完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有人免疫球蛋白基因座的全部或一部分，其取代了内源性疫球蛋白基因座，或存在于染色体外或随机整合到动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被失活。获取来自转基因动物的人抗体的方法的综述参见lonberg,nat.biotech.23:1117-1125(2005)。也参见，例如，描述了xenomousetm技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述了技术的美国专利号5,770,429；描述了k-m技术的美国专利号7,041,870，和描述了技术的美国专利申请公开号us2007/0061900)。来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区可例如通过与不同的人恒定区组合进一步修饰。也可以通过基于杂交瘤的技术生产人抗体。已经描述了用于生产人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂骨髓瘤细胞系(参见，例如，kozborj.immunol.,133:3001(1984)；brodeur等人,monoclonalantibodyproductiontechniquesandapplications,pp.51-63(marceldekker,inc.,newyork,1987)；和boerner等人,j.immunol.,147:86(1991))。经由人b细胞杂交瘤技术生成的人抗体也在li等人,proc.natl.acad.sci.usa,103:3557-3562(2006)中描述。额外的方法包括，例如，在美国专利号7,189,826(描述了从杂交瘤细胞系生产单克隆人igm抗体)和ni,xiandaimianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)中描述的那些。人杂交瘤技术(trioma技术)也在vollmers和brandlein,histologyandhistopathology,20(3):927-937(2005)以及vollmers和brandlein,methodsandfindingsinexperimentalandclinicalpharmacology,27(3):185-91(2005)中描述。也可以通过分离选自源自人的噬菌体展示文库的fv克隆可变结构域序列生成人抗体。此类可变结构域序列然后可以与期望的人恒定结构域组合。下文描述了从抗体文库选择人抗体的技术。5.源自文库的抗体可通过筛选组合文库的具有期望的一种或多种活性的抗体分离本发明的抗体。例如，本领域已知用于生成噬菌体展示文库和筛选此类文库的具有期望的结合特征的抗体的多种方法。此类方法在例如hoogenboom等人，methodsinmolecularbiology178:1-37(o’brien等人编辑，humanpress,totowa,nj,2001)中综述并在，例如，mccafferty等人,nature348:552-554；clackson等人,nature352:624-628(1991)；marks等人,j.mol.biol.222:581-597(1992)；marks和bradbury,methodsinmolecularbiology248:161-175(lo,编辑,humanpress,totowa,nj,2003)；sidhu等人,j.mol.biol.338(2):299-310(2004)；lee等人,j.mol.biol.340(5):1073-1093(2004)；fellouse,proc.natl.acad.sci.usa101(34):12467-12472(2004)；和lee等人,j.immunol.methods284(1-2):119-132(2004)中进一步描述。在某些噬菌体展示方法中，vh和vl基因的库通过聚合酶链式反应(pcr)分别克隆并在噬菌体文库中随机重组，其然后可以筛选抗原结合噬菌体，如winter等人,ann.rev.immunol.,12:433-455(1994)中所述。噬菌体通常展示抗体片段，作为单链抗体fv(scfv)片段或作为fab片段展示。来自经免疫的来源的文库提供了对免疫原高亲和力的抗体而不需要构建杂交瘤。备选地，可以克隆初始库(例如，从人)以对广泛范围的非自身以及自身抗原提供单个来源的抗体而没有任何免疫，如griffiths等人,emboj,12:725-734(1993)所述。最后，也可以通过克隆来自干细胞的未重排的v基因区段，并使用含有随机序列的pcr引物以编码高度可变的cdr3区并且实现体外重排，合成地制备初始文库，如hoogenboom和winter,j.mol.biol.,227:381-388(1992)所述。描述人抗体噬菌体文库的专利公开包括，例如：美国专利号5,750,373，和美国专利公开号2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。从人抗体文库分离的抗体或抗体片段在本文被认为是人抗体或人抗体片段。6.多特异性抗体在某些实施方案中，本文提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是具有对于至少两个不同位点的结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一是对于cd20而另一种是对于任何其他抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可结合cd20的两种不同表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位至表达cd20的细胞。双特异性抗体可以作为全长抗体或抗体片段制备。用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于重组共表达具有不同特异性的两条免疫球蛋白重链-轻链对(参见，milstein和cuello,nature305:537(1983))、wo93/08829，和traunecker等人,emboj.10:3655(1991)),和“结入扣(knob-in-hole)”改造(参见，例如，美国专利号5,731,168)。也可以通过改造静电转向效应以制备抗体fc异二聚体分子(wo2009/089004a1)；交联两个或多个抗体或片段(参见，例如，美国专利号4,676,980,和brennan等人,science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链生产双特异性抗体(参见，例如，kostelny等人,j.immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用用于制备双特异性抗体片段的“双抗体”技术(参见，例如，hollinger等人,proc.natl.acad.sci.usa,90:6444-6448(1993))；和使用单链fv(sfv)二聚体(参见，例如gruber等人,j.immunol.,152:5368(1994))；和例如，如tutt等人j.immunol.147:60(1991)中所述制备三特异性抗体，来制备多特异性抗体。本文也包括具有三种或更多种功能性抗原结合位点的经工程化改造的抗体，包括“章鱼抗体”(参见，例如us2006/0025576a1)。本文的抗体或片段也包括“双作用fab”或“daf”，其包含结合cd20以及另一种不同抗原的抗原结合位点(参见例如，us2008/0069820)。7.抗体变体在某些实施方案中，考虑了本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，提高抗体的结合亲和力和/或其他生物学性质可以是所希望的。可以通过将适当的修饰引入编码抗体的核苷酸序列，或者通过肽合成制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括，例如，在抗体的氨基酸序列内缺失，和/或插入和/或取代残基。可以使得缺失、插入和取代的任意组合达到最终的构建体中，前提是最终构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。a)取代、插入和缺失变体在某些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。取代诱变的目标位点包括hvr和fr。在表3中标题“优选的取代”下显示保守取代。在表a中标题“示例性取代”下提供更实质的改变，并如参考氨基酸侧链类别在下文进一步描述的。可以将氨基酸取代引入到目标抗体中并筛选产物的期望的活性，例如，保留的/提高的抗原结合，降低的免疫原性，或提高的adcc或cdc。表3.优选的取代原始残基示例性取代优选的取代ala(a)val；leu；ilevalarg(r)lys；gln；asnlysasn(n)gln；his；asp,lys；argglnasp(d)glu；asnglucys(c)ser；alasergln(q)asn；gluasnglu(e)asp；glnaspgly(g)alaalahis(h)asn；gln；lys；argargile(i)leu；val；met；ala；phe；正亮氨酸leuleu(l)正亮氨酸；ile；val；met；ala；pheilelys(k)arg；gln；asnargmet(m)leu；phe；ileleuphe(f)trp；leu；val；ile；ala；tyrtyrpro(p)alaalaser(s)thrthrthr(t)val；sersertrp(w)tyr；phetyrtyr(y)trp；phe；thr；serpheval(v)ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸leu可以根据共同的侧链性质将氨基酸分组：(1)疏水的：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性亲水的：cys、ser、thr、asn、gln；(3)酸性的：asp、glu；(4)碱性的：his、lys、arg；(5)影响链取向的残基：gly、pro；(6)芳香族：trp、tyr、phe。非保守取代将使得这些类别中之一的成员与另一类别交换。一类取代变体涉及取代亲本抗体(例如人源化的或人抗体)的一个或多个超变区残基。一般而言，选择用于进一步研究的(一种或多种)获得的变体将在某些生物学性质(例如增加的亲和力、降低的免疫原性)中相对于亲本抗体具有修饰(例如提高)和/或具有亲本抗体的基本保留的某些生物学性质。示例性的取代变体是亲和力成熟的抗体，其可以方便地生成，例如，使用例如那些本文描述的基于噬菌体展示的亲和力成熟技术。简而言之，突变一个或多个hvr残基并且在噬菌体上展示变体抗体并就特别的生物学活性(例如结合亲和力)进行筛选。可以在hvr中制造变异(例如，取代)，例如，以提高抗体亲和力。此类变异可以在hvr“热点”，即由在体细胞成熟过程中以高频率经历突变的密码子所编码的残基(参见，例如，chowdhury，methodsmol.biol.207:179-196(2008))，和/或接触抗原的残基处进行，测试获得的变体vh或vl的结合亲和力。通过构建并从第二文库重新选择的亲和力成熟已经在例如hoogenboom等人methodsinmolecularbiology178:1-37(o’brien等人编，humanpress，totowa，nj，(2001).)中描述。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法中的任何一种(例如，易错pcr、链改组、或寡核苷酸定向诱变)将多样性引入到选择用于成熟的可变基因中。然后产生第二文库。然后筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。引入多样性的另一种方法涉及hvr定向方法，其中随机化若干hvr残基(例如，一次4-6个残基)。可以特异性地鉴定抗原结合中涉及的hvr残基，例如使用丙氨酸扫描诱变或建模。特别地通常靶向cdr-h3和cdr-l3。在某些实施方案中，取代、插入或缺失可以在一个或多个hvr内发生，只要此类变异不实质性地降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在hvr中制备不实质性地降低结合亲和力的保守改变(例如，如本文提供的保守取代)。此类改变可以例如在hvr中接触残基的抗原之外。在以上提供的变体vh和vl序列的某些实施方案中，每个hvr或未改变，或含有不多于一个、两个或三个氨基酸取代。鉴定可被靶向用于诱变的抗体的残基或区域的可用的方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如cunningham和wells(1989)science，244:1081-1085所述。在此方法中，鉴定残基或靶残基的组(例如，带电的残基例如arg、asp、his、lys和glu)并使用中性或带负电的氨基酸(例如丙氨酸或多聚丙氨酸)将其取代以测定是否影响抗体与抗原的相互作用。可以在表现出对于初始取代功能性敏感的氨基酸位置处引入其他取代。备选地或额外地，抗原抗体复合物的晶体结构鉴定抗体和抗原之间的接触点。可以作为取代候选对象靶向或消除此类接触残基和相邻残基。可以筛选变体以测定其是否含有期望的性质。氨基酸序列插入片段包括长度范围从一个残基至含有100个或更多残基的多肽的氨基或羧基末端融合物，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入片段。末端插入片段的实例包括具有n末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的n或c末端与酶(例如adept)或增加抗体的血清半寿期的多肽的融合。b)糖基化变体在某些实施方案中，本文提供的抗体被改变以增加或降低抗体被糖基化的程度。对抗体添加或缺失糖基化位点可以通过改变氨基酸序列从而使得产生或移除一个或多个糖基化位点而方便地实现。当抗体包含fc区时，可以改变附着于其的糖类。由哺乳动物细胞生产的天然抗体通常包含分支的、二分支的寡糖，所述寡糖一般通过n连接附着于fc区的ch2结构域的asn297。参见，例如，wright等人tibtech15:26-32(1997)。寡糖可包括多种糖类，例如甘露糖、n-乙酰基葡糖胺(glcnac)、半乳糖、和唾液酸，以及附着于二分支寡糖结构的“茎干”中的glcnac的岩藻糖。在一些实施方案中，可以制造本发明的抗体中寡糖的修饰以创造具有某些提高的性质的抗体变体。在一个实施方案中，提供的抗体变体具有缺少(直接或间接)附着于fc区的岩藻糖的糖类结构。例如，此类抗体中岩藻糖的量可以为从1％至80％，从1％至65％，从5％至65％或从20％至40％。通过计算糖链内asn297处的岩藻糖的平均量相对于附着于asn297(例如，复合、杂合和高甘露糖结构)的全部糖基结构的总和测定岩藻糖的量，如通过maldi-tof质谱法测量，如，例如wo2008/077546中所述。asn297指位于fc区中约297位(fc区残基的eu编号)的天冬酰胺残基；然而，asn297也可位于297位的约±3个氨基酸上游或下游，即位置294和300之间，这是由于抗体中微小的序列变异。此类岩藻糖化变体可具有提高的adcc功能。参见，例如，美国专利公开号us2003/0157108(presta,l.)；us2004/0093621(kyowahakkokogyoco.,ltd)。涉及“去岩藻糖化的”或“岩藻糖缺陷的”抗体变体的公开的实例包括：us2003/0157108；wo2000/61739；wo2001/29246；us2003/0115614；us2002/0164328；us2004/0093621；us2004/0132140；us2004/0110704；us2004/0110282；us2004/0109865；wo2003/085119；wo2003/084570；wo2005/035586；wo2005/035778；wo2005/053742；wo2002/031140；okazaki等人，j.mol.biol.336:1239-1249(2004)；yamane-ohnuki等人，biotech.bioeng.87:614(2004)。能够生产去岩藻糖化的抗体的细胞系的实例包括蛋白质岩藻糖化缺陷的lec13cho细胞(ripka等人arch.biochem.biophys.249:533-545(1986)；us专利申请号us2003/0157108a1，presta,l；和wo2004/056312a1，adams等人，特别在实施例11中)，和敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖转移酶基因fut8敲除的cho细胞(参见，例如，yamane-ohnuki等人，biotech.bioeng.87:614(2004)；kanda,y.等人，biotechnol.bioeng.，94(4):680-688(2006)；和wo2003/085107)。提供的抗体变体还具有二分的寡糖，例如，其中附着于抗体fc区的二分支寡糖被glcnac二分。此类抗体变体可具有降低的岩藻糖化和/或提高的adcc功能。此类抗体变体的实例描述于例如wo2003/011878(jean-mairet等人)；美国专利号6,602,684(umana等人)；和us2005/0123546(umana等人)中。也提供了在附着于fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可具有提高的cdc功能。此类抗体变体描述于例如wo1997/30087(patel等人)；wo1998/58964(raju,s.)；和wo1999/22764(raju,s.)中。c)fc区变体在某些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸修饰引入到本文提供的抗体的fc区中，从而生成fc区变体。fc区变体可以包含人fc区序列(例如，人igg1、igg2、igg3或igg4fc区)，所述序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如取代)。在某些实施方案中，本发明考虑了具有一些但并非全部效应子功能的抗体变体，这使得其是这样的应用的理想的候选者，所述应用中抗体的体内半寿期是重要的然而某些效应子功能(例如补体和adcc)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定法以确认cdc和/或adcc活性的降低/耗尽。例如，可以进行fc受体(fcr)结合测定法以确保抗体缺少fcγr结合(因此可能缺少adcc活性)，但保留fcrn结合能力。介导adcc的主要细胞－nk细胞仅表达fcγriii，然而单核细胞表达fcγri、fcγrii和fcγriii。造血细胞上的fcr表达在ravetch和kinet,annu.rev.immunol.9:457-492(1991)的464页上的表3中总结。用于评估目的分子的adcc活性的体外测定法的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362(参见，例如hellstrom,i.等人，proc.nat’lacad.sci.usa83:7059-7063(1986))和hellstrom,i等人，proc.nat’lacad.sci.usa82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见bruggemann,m.等人，j.exp.med.166:1351-1361(1987))中。备选地，可以采用非放射性测定法(参见，例如，流式细胞术的actitm非放射性细胞毒性测定法(celltechnology,inc.mountainview,ca；和cytotox非放射性细胞毒性测定法(promega,madison,wi)。用于此类测定法的有用的效应子细胞包括外周血单个核细胞(pbmc)和天然杀伤(nk)细胞。备选地或额外地，目的分子的adcc活性可以在体内评估，例如在动物模型中，例如clynes等人proc.nat’lacad.sci.usa95:652-656(1998)中公开的。也可以进行c1q结合测定法以确认抗体不能结合c1q并因此缺少cdc活性。参见，例如，wo2006/029879和wo2005/100402中的c1q和c3c结合elisa。为了评估补体激活，可以进行cdc测定法(参见，例如，gazzano-santoro等人，j.immunol.methods202:163(1996)；cragg,m.s.等人，blood101:1045-1052(2003)；和cragg,m.s.和m.j.glennie,blood103:2738-2743(2004))。fcrn结合和体内清除/半寿期测定也可以使用本领域已知的方法进行(参见，例如，petkova,s.b.等人，int’l.immunol.18(12):1759-1769(2006))。具有降低的效应子功能的抗体包含在fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个具有取代的那些抗体(美国专利号6,737,056)。此类fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或多个处具有取代的fc突变体，包括具有残基265和297取代为丙氨酸的所谓的“dana”fc突变体(美国专利号7,332,581)。描述了具有提高的或减弱的与fcr结合的某些抗体变体。(参见，例如，美国专利号6,737,056；wo2004/056312和shields等人，j.biol.chem.9(2):6591-6604(2001)。)在某些实施方案中，抗体变体包含具有提高adcc的一个或多个氨基酸取代的fc区，例如fc区的位置298、333和/或334处(残基的eu编号)的取代。在一些实施方案中，在fc区进行改变，其导致改变的(即提高的或减弱的)c1q结合和/或补体依赖的细胞毒性(cdc)，例如，如美国专利号6,194,551、wo99/51642和idusogie等人j.immunol.164:4178-4184(2000)中所述。具有增加的半寿期和提高的与新生儿fc受体(fcrn)结合的抗体在us2005/0014934a1(hinton等人)中描述，所述新生儿fc受体负责母体igg转移至胎儿(guyer等人，j.immunol.117:587(1976)和kim等人，j.immunol.24:249(1994))。那些抗体包含其中具有提高fc区与fcrn的结合的一个或多个取代的fc区。此类fc变体包括在fc区残基：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中的一个或多个处具有取代的那些，例如fc区残基434的取代(美国专利号7,371,826)。关于fc区变体的其他实例也参见duncan&winter,nature322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；和wo94/29351。d)半胱氨酸工程化的抗体变体在某些实施方案中，产生半胱氨酸改造的抗体是理想的，例如，“thiomab”，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在特别的实施方案中，被取代的残基存在于抗体的易接近的位点处。通过用半胱氨酸取代那些残基，从而将反应性硫醇基团放置于抗体的可接近位点处并可用于缀合抗体至其他部分，例如药物部分或接头药物部分，以产生免疫缀合物，如本文另外所述。在某些实施方案中，以下残基中的任何一个或多个可被半胱氨酸取代：轻链的v205(kabat编号)；重链的a118(eu编号)；和重链fc区的s400(eu编号)。可以如，例如美国专利号7,521,541中所述地生成半胱氨酸改造的抗体。e)抗体衍生物在某些实施方案中，还可进一步修饰本文提供的抗体以含有本领域已知的并且容易获得的额外的非蛋白质部分。适合于抗体的衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(peg)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三烷、乙烯/顺丁烯二酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烷化多元醇(例如丙三醇)、聚乙烯醇，及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性可在生产中具有优势。聚合物可具有任意分子量，并且可为分支的或无分支的。附着于抗体的聚合物的数目可不同，并且如果附着多于一个聚合物，它们可以是相同或不同的分子。一般而言，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可以基于如下考虑确定，包括但不限于，待改善的抗体的特别的性质或功能，抗体衍生物是否将在定义的条件下用于疗法中，等。在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射选择性地加热的非蛋白质部分的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质部分是碳纳米管(kam等人,proc.natl.acad.sci.usa102:11600-11605(2005))。辐射可以具有任何波长，并且包括但不限于，这样的波长，所述波长不伤害普通细胞，但将非蛋白质部分加热至杀死抗体-非蛋白质部分临近的细胞的温度。a.重组方法和组合物可以使用重组方法和组合物制备抗体，例如美国专利号4816567中所述。在一个实施方案中，提供了编码本文所述抗cd20抗体的分离的核酸。这样的核酸可以编码抗体的包括vl的氨基酸序列和/或包括vh的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在另一个实施方案中，提供了一种或多种包含该核酸的载体(例如，表达载体)。在另一个实施方案中，提供了包括这种核酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中，宿主细胞包括(例如，已经被转化)：(1)载体，其包括编码包括抗体的vl的氨基酸序列和包括抗体的vh的氨基酸序列的核酸，或(2)包括编码包括抗体vl的氨基酸序列的核酸的第一载体和包括编码包括抗体vh的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核生物，例如中国仓鼠卵巢(cho)细胞或淋巴细胞(例如y0，ns0，sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了制备抗cd20抗体的方法，其中所述方法包括在适于表达所述抗体的条件下，培养如上所提供的包括编码抗体的核酸的宿主细胞，并任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。为重组产生抗cd20抗体，将编码抗体(例如，如上所述)的核酸分离并插入一种或多种载体以便进一步克隆和/或在宿主细胞中表达。可以使用常规方法(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)，轻易地分离这种核酸并测序。克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中生产抗体，尤其当不需要糖基化和fc效应子功能时。对于细菌中表达抗体片段和多肽，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见charlton，methodsinmolecularbiology,vol.248(b.k.c.lo编，humanapress，totowa，nj，2003)，pp.245-254，其描述在大肠杆菌中表达抗体片段)。在表达后，可以将抗体从细菌细胞糊状物分离于可溶性级分中并且可以进一步纯化抗体。除原核生物之外，真核微生物如丝状真菌或酵母是编码抗体的载体的合适克隆宿主或表达宿主，包括其糖基化途径已经"人源化"的真菌和酵母菌株，导致产生具有部分或完全人类糖基化模式的抗体。参见gerngross,nat.biotech.22:1409-1414(2004)，和li等人，nat.biotech.24:210-215(2006)。表达糖基化抗体的合适宿主细胞还源自多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定了可以与昆虫细胞一起使用，尤其用于转染草地贪夜蛾(spodopterafrugiperda)细胞的众多杆状病毒毒株。也可以利用植物细胞培养物作为宿主。参见例如美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了在转基因植物中产生抗体的plantibodiestm技术)。也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适应于悬浮培育的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他例子是由sv40转化的猴肾cvl系(cos-7)；人胚肾系(如graham等人，j.genvirol.36:59(1977)中所述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(bhk)；小鼠支持细胞(如在例如mather,biol.reprod.23:243-251(1980)中所述的tm4细胞)；猴肾细胞(cvl)；非洲绿猴肾细胞(vero-76)；人宫颈癌细胞(hela)；犬肾细胞(mdck；水牛鼠肝脏细胞(brl3a)；人肺细胞(w138)；人肝脏细胞(hepg2)；小鼠乳腺瘤细胞(mmt060562)；tri细胞，如在例如mather等人，annalsn.y.acad.sci.383:44-68(1982)中所述；mrc5细胞和fs4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(cho)细胞，包括dhfr-cho细胞(urlaub等人，proc.natl.acad.sci.usa77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系如y0、ns0和sp2/0。关于适于产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，见例如yazaki和wu，methodsinmolecularbiology，vol.248(b.k.c.lo编，humanapress，totowa，nj)，pp.255-268(2003)。b.测定法本文提供的抗cd20抗体可以通过本领域已知的各种测定法来鉴定、筛选或表征其物理/化学性质和/或生物活性。1.结合测定法和其他测定法在一个方面，测试本发明的抗体的抗原结合活性，例如通过已知方法例如elisa、western印迹等。可以使用本领域已知的方法测定cd20结合，并公开示例性方法于此。在一个实施方案中，使用放射免疫测定来测量结合。下面提供示例性放射免疫测定法。cd20抗体被碘化，并制备含有固定浓度的碘化抗体和降低浓度的连续稀释的未标记cd20抗体的竞争反应混合物。将表达cd20的细胞(例如，用人cd20稳定转染的bt474细胞)加入到反应混合物中。温育后，洗涤细胞以从与细胞结合的cd20抗体中分离游离的碘化cd20抗体。测定结合的碘化cd20抗体的水平，例如通过计数与细胞相关的放射性和使用标准方法测定的结合亲和力。在另一个实施方案中，使用流式细胞术评估cd20抗体与表面表达的cd20结合的能力(例如，在b细胞亚群上)。获得外周白细胞(例如，来自人、食蟹猴、大鼠或小鼠)，并用血清封闭细胞。标记的cd20抗体以连续稀释加入，并且还染色t细胞以鉴定t细胞亚群(使用本领域已知的方法)。在样品温育和洗涤后，使用流式细胞术分选细胞，并使用本领域熟知的方法分析数据。在另一个实施方案中，可以使用表面等离子体共振分析cd20结合。示例性的表面等离子体共振方法在实施例中举例说明。在另一方面，竞争测定可用于鉴定与本文公开的任何抗cd20抗体竞争结合cd20的抗体。在某些实施方案中，这种竞争性抗体结合与本文公开的任何抗cd20抗体结合的相同表位(例如，线性或构象表位)。morris(1996)“epitopemappingprotocols”，在methodsinmolecularbiologyvol.66(humanapress，totowa，nj)中提供了用于作图抗体结合的表位的详细的示例性方法。在实施例中例示了竞争测定法。在示例性竞争测定法中，将固定的cd20在包括结合cd20的第一标记抗体(例如利妥昔单抗，ga101抗体等)的溶液中温育，并且测试其第二未标记的抗体与第一抗体竞争结合cd20的能力。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定的cd20在包括第一标记抗体而不是第二未标记抗体的溶液中温育。在允许第一抗体与cd20结合的条件下温育后，除去过量未结合的抗体，并测量与固定的cd20相关的标志物的量。如果在测试样品中相对于对照样品与固定化cd20结合的标志物的量显著降低，则表明第二抗体与第一抗体竞争结合cd20。参见harlow和lane(1988)antibodies：alaboratorymanualch.14(coldspringharborlaboratory，coldspringharbor，ny)。活性测定法本公开的抗cd20抗体(例如ii型抗体)可以通过本领域已知的一种或多种活性测定来鉴定和/或表征。例如，如本文所述，可以使用补体依赖的细胞毒性(cdc)和/或抗体依赖的细胞毒性(adcc)。应当理解，任何上述测定可以使用本发明的免疫缀合物代替抗cd20抗体或补加抗cd20抗体来进行。应当理解，可以使用抗cd20抗体和另外的治疗剂来进行上述测定中的任一种。2.免疫缀合物本发明还提供包含与一种或多种细胞毒性剂，例如化学治疗剂或药物，生长抑制剂，毒素(例如蛋白质毒素，细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素，或其片段)或放射性同位素缀合的本文的抗cd20抗体的免疫缀合物。在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(adc)，其中抗体与一种或多种药物缀合，包括但不限于美坦生类化合物(参见美国专利号5,208,020、5,416,064和欧洲专利ep0425235b1)；澳瑞他汀，如单甲基澳瑞他汀药物部分de和df(mmae和mmaf)(参见美国专利号5,635,483和5,780,588和7,498,298)；多拉司他汀、加利车霉素或其衍生物(参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296；hinman等人，cancerres.53：3336-3342(1993)；和lode等人，cancerres.58：2925-2928(1998))；蒽环类抗生素如柔红霉素或多柔比星(参见kratz等人，currentmed.chem.13：477-523(2006)；jeffrey等人，bioorganic&med.chem.letters16：358-362(2006)；torgov等人，bioconj.chem.16：717-721(2005)；nagy等人，proc.natl.acad.sci.usa97：829-834(2000)；dubowchik等人，bioorg.&med.chem.letters12：1529-1532(2002)；king等人，j.med.chem.45：4336-4343(2002)；和美国专利号6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地辛；紫杉烷类，如多西他赛、紫杉醇、拉罗他赛、替西他赛和奥他赛；单端孢霉烯和cc1065。在另一个实施方案中，免疫缀合物包括与酶活性毒素或其片段缀合的本文所述的抗体，其包括但不限于白喉a链，白喉毒素的非结合活性片段，外毒素a链(来自绿脓假单胞菌(pseudomonasaeruginosa))，蓖麻毒素a链，相思豆毒素a链，蒴莲根毒素a链，α-帚曲霉素(sarcin)，油桐(aleuritesfordii)蛋白，香石竹毒蛋白(dianthinprotein)、美洲商陆(phytolacaamericana)蛋白(pap1、papii和pap-s)、苦瓜(momordicacharantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制剂、多花白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。在另一个实施方案中，免疫缀合物包括与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的本文所述的抗体。各种放射性同位素可用于生产放射性缀合物。实例包括at211、i131、i125、y90、re186、re188、sm153、bi212、p32、pb212和lu的放射性同位素。当使用放射性缀合物进行检测时，可以包括用于闪烁照相研究的放射性原子，例如tc99m或i123，或用于核磁共振(nmr)成像(也称为磁共振成像，mri)的自旋标记，同样例如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。抗体和细胞毒性剂的缀合物可以使用各种双功能蛋白偶联剂制备，该双功能蛋白偶联剂例如n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)、琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(smcc)、亚氨基硫烷(it)、亚氨酸酯的双官能衍生物(例如盐酸己二亚胺酸二甲酯)、活性酯类(例如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛类(例如戊二醛)、双叠氮化合物(例如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(例如双(对-重氮苯甲酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2,6-二异氰酸酯)、和双活性氟化合物成分(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，可如vitetta,e.s.等人，science238(1987)1098-1104中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苯甲基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(mx-dtpa)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。参见wo94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头、肽酶敏感接头、光不稳定接头、二甲基接头或含二硫化物接头(chari，r.v.等人，cancerresearch52(1992)127-131，us5,208,020)。本文中的免疫缀合物或adc明确地考虑但不限于用交联剂试剂制备的这种缀合物，该交联剂试剂包括但不限于bmps、emcs、gmbs、hbvs、lc-smcc、mbs、mpbh、sbap、sia、siab、smcc、smpb、smph、磺基-mems、磺基-gmbs、磺基-mums、磺基-mbs、磺基-siab、磺基-smcc和磺基-smpb和svsb(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，其是可商购的(例如，来自piercebiotechnology，inc.，rockford，il，usa)。治疗需要器官移植的个体的方法本公开的某些方面涉及用于治疗需要器官移植(例如肾移植)的个体的方法。如本文所用，“治疗”或“治疗着”疾病或病症是指通过医学治疗或其他治疗来治疗疾病或病症，包括治疗性治疗和预防性或防止性措施(例如增加有利治疗结果例如移植物存活、移植物功能的可能性、或降低不利结果例如对治疗的不利反应的可能性，或者减少疾病发生，其中所述疾病降低有利治疗(例如移植)的可能性)。本文所指的“疾病或病症”包括与疾病或病症有关的病理状况和症状，以及干扰或限制个体获得疾病或病症的治疗选择性的问题或状况，例如致敏、超敏化、高pra水平和/或存在有预先存在的同种异体抗体，这对等待器官移植(如肾移植)的个体限制了移植物的可获得性。需要治疗的患者包括那些已经患有疾病或病症的患者，以及那些待预防疾病或病症的患者。治疗疾病或病症可以抑制与疾病或病症有关的免疫介导的事件，改善疾病或病症的症状，降低疾病或病症的严重程度，改变疾病或病症进展的过程，和/或改善或治愈基础疾病或病症。例如，等待器官移植的个体的成功治疗包括但不限于降低同种异体抗体的水平，减少群体反应性抗体(pra)，使个体具有更多的交叉配型相容的供体，增加个体接受移植物的可能性或概率，缩短个体对移植物的预期等待期，使个体脱敏，降低移植相关症状或病症(如下文所述的免疫介导事件)的风险，或它们的任何组合。例如，接受器官移植的个体的成功治疗包括但不限于长期保护和维持移植的器官或组织，其包含控制、逆转、减轻、延迟或预防一种或多种症状或与器官移植相关的不想有的疾病，如免疫介导的事件，包括但不限于供体特异性同种异体抗体(dsa)的产生、抗体介导的排斥(amr)、超急性移植排斥、慢性移植排斥、移植物失效和移植物丧失，如通过症状或病症的功能或组织学征兆所测量的。能够控制疾病或病症(例如移植排斥)的治疗可以包括当在观察到疾病或病症的功能性或组织学征兆(例如移植排斥)后启始时减缓疾病进程的进展的治疗。此外，能够逆转疾病或病症(例如移植排斥)的治疗可以包括当在疾病或病症的功能性或组织学征兆(例如移植排斥)出现后启始时，逆转疾病过程并使功能性和组织学发现更接近于回到正常。能够使疾病或病症(例如移植排斥)“延迟进展”的治疗可以包括推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定和/或延迟疾病或病症(例如移植排斥)的发展。这种延迟可以是不同的时间长度，取决于疾病的病史和/或正在治疗的个体。对本领域技术人员来说显而易见的是，足够的或显著的延迟实际上可以包括预防，由此个体(例如有发展疾病或病症风险的个体)不会发生疾病或病症。本发明考虑的器官移植包括但不限于骨髓、肾、心脏、肝、神经元组织、肺、胰腺等的合适移植物的移植。在一些实施方案中，个体需要肾移植。在一些实施方案中，个体患有慢性肾病。在一些实施方案中，个体患有美国国家肾脏基金会(nationalkidneyfoundationoftheunitedstates)的指南所指定的慢性肾病的阶段1、2、3a、3b、4或5中的任一阶段。在一些实施方案中，个体具有任一约大于90ml/分钟，约60-90ml/分钟，约45-60ml/分钟，约30-40ml/分钟，约15-29ml/分钟，和小于15ml/分钟的gfr水平。在一些实施方案中，个体患有阶段5慢性肾病或终末期肾衰竭。在一些实施方案中，个体患有终末期肾病(esrd)，这是当肾脏不再能够以日常生活所需的水平工作时发生的病症。在一些实施方案中，个体具有小于15ml/分钟的肾小球滤过率(gfr)。在一些实施方案中，esrd由糖尿病、高血压、对肾脏的损伤或创伤、慢性肾病(例如v期慢性肾病)、严重失血或其他损害肾功能的病症引起。在一些实施方案中，个体透析了约1个月，3个月，6个月，12个月，2年，3年，4年，5年或更长时间的任何一段时间。在一些实施方案中，需要器官移植(例如肾移植)的个体正在等待器官移植。在一些实施方案中，个体正在等待来自活体供体的移植器官。在一些实施方案中，个体正在等待来自死亡供体的移植器官。在一些实施方案中，个体已经在器官分配程序(例如unos)的等待名单上等待了任一至少约6个月，9个月，1年，2年，3年，5年或更长时间、或者有足够的时间收到了至少一个死亡的捐献者提供的因阳性交叉配型而禁止移植的移植物。在一些实施方案中，需要器官移植(例如肾移植)的个体具有任一至少约5％，10％，15％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更大的pra(例如cpra)。在一些实施方案中，需要器官移植的个体(例如肾脏移植)具有任一约5％至约99％，约2％至约50％，约50％至约99％，约5％至约20％，约20％至约30％，约30％至约40％，约40％至约50％，约50％至约80％，约20％至约80％或约40％至约70％的pra。在一些实施方案中，个体被致敏。在一些实施方案中，个体超敏化(例如，具有超过约20％或超过约30％的pra)。在一些实施方案中，本文提供了用于通过向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)来降低具有pra(例如cpra)至少20％(例如至少30％)的个体中同种异体抗体水平的方法。在一些实施方案中，个体已经经历了使个体暴露于外源同种异体抗原的先前的暴露事件。在一些实施方案中，个体已经经历了先前的器官移植、输血、先前的怀孕或它们的任何组合。在一些实施方案中，在个体接受抗cd20抗体治疗之前，个体已经经历了任一约5年，4年，3年，2年，1年或更短时间的暴露事件。在一些实施方案中，个体已经经历了多于一个(例如2、3、4、5、6个或更多个)暴露事件。在一些实施方案中，本公开的方法包括例如在移植之前向个体施用第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，该方法还包括例如在移植前向个体施用第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，所述方法还包括例如在移植之前向个体施用第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。可使用本文所述的任何抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)和/或此类抗体的剂量，例如ga101抗体，如奥滨尤妥珠单抗。在一些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约7天至约21天之间施用。在一些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后的任一约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，约19，约20或约21天施用。在一些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后小于任一约以下天数施用：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或21天。在一些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后大于任一约以下天数施用：7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20天。也就是说，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂之后一些天施用的天数上限是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或21天和独立选择的下限是7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20天，其中下限小于上限。在一些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约1周至约3周之间施用。在某些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂ii型抗cd20抗体之后约2周施用。在一些实施方案中，所述方法还包括例如在移植之前向个体施用第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约154天至约182天施用。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后的任一约154、约155、约156、约157、约158、约159、约160、约161、约162、约163、约164、约165、约166、约167、约168、约169、约170、约171、约172、约173、约174、约175、约176、约177、约178、约179、约180、约181、或约182天施用。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后小于任一约以下天数施用：155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、或182天。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后大于任一约以下天数施用：154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、或181天。也就是说，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂之后一些天施用的天数上限是155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、或182天和独立选择的下限是154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、或181天，其中下限小于上限。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约22周至约26周之间施用。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后任一约22、约23、约24、约25、或约26周施用。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后小于任一约以下周数施用：26、25、24、或23周。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后大于任一约以下周数施用：22、23、24、或25周。也就是说，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂之后一些周施用的周数上限是26、25、24、或23周和独立选择的下限是22、23、24、或25周，其中下限小于上限。在某些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约24周施用。在一些实施方案中，如果在第一剂和/或第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后个体的pra没有降低至小于任一约2％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、或50％的pra值，则施用第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，如果在第一剂和/或第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后个体的pra降低至小于任一约2％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、或50％的pra值，则不施用第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约20周至约28周之间(例如约23周和约25周、或约24周)，如果个体具有至少任一约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多的pra，则施用第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，如果在第一剂和/或第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后，个体具有高风险(例如任一约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更高可能性)抑制物排斥(例如抗体介导的排斥)，则施用第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体和/或第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后，个体接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后任一约6周、8周、10周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、28周、30周、32周、34周、36周、38周、40周、42周、44周、46周、48周、50周、或52周，个体接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后小于任一约以下周数：52、50、48、46、44、42、40、38、36、34、32、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、或8周，个体接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后大于任一约以下周数：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、或50周，个体接受器官移植(例如肾移植)。也就是说，个体可以接受器官移植(例如肾移植)是如下的上限范围的任一周数：52、50、48、46、44、42、40、38、36、34、32、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、或8周且独立选择的下限是2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、或50周，其中下限小于上限。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约6周至约52周之间，个体接受器官移植(例如肾移植)。在某些实施方案中，例如，如果个体接受第三剂ii型抗cd20抗体，则个体在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约28周至约52周之间接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，在最近一次剂量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后至少约4周(包括4周)，个体接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，在移植(例如肾移植)之前，将抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量施用给个体。如本文所用，在移植“之前”可以指在移植之前至少一周、至少二周、至少三周、或至少4周的任一时间。在一些实施方案中，与移植(例如肾移植)同时，将抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量施用给个体。如本文所用，“同时”移植可以指在移植的2天或48小时内的任何时间，并且不限于移植过程的确切时间。例如，在一些实施方案中，与移植同时施用给个体的ii型抗cd20抗体的剂量是在移植的6小时内，12小时内，18小时内，24小时内，30小时内，36小时内，42小时内或48小时内施用给个体。在一些实施方案中，抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量是在移植(例如肾移植)后施用给个体。如本文所用，在移植“之后”可以指移植后至少一周、至少二周、至少三周、或至少4周的任何时间。在一些实施方案中，在移植后(例如肾移植)将抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量施用给个体。在一些实施方案中，该方法进一步包括例如在移植后施用给个体抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后约154天至约182天之间，施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后任一约154、约155、约156、约157、约158、约159、约160、约161、约162、约163、约164、约165、约166、约167、约168、约169、约170、约171、约172、约173、约174、约175、约176、约177、约178、约179、约180、约181、或约182天施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后小于任一约以下的天数:155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、或182天，施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后大于任一约以下的天数：154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、或181天，施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。也就是说，抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量在移植后一些天施用的天数上限是：155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、或182天和独立选择的下限是154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、或181天，其中下限小于上限。在一些实施方案中，在移植后(例如肾移植)将抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量施用给个体。在一些实施方案中，该方法进一步包括例如在移植后，施用给个体抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后约22周和约26周之间施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后任一约22、约23、约24、约25、或约26周施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后小于任一约以下的周数：26、25、24、或23周，施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。在一些实施方案中，在移植后大于任一约以下的周数：22、23、24、或25周，施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。也就是说，抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量在移植后一些周施用的周数上限是：26、25、24、或23周和独立选择的下限是22、23、24、或25周，其中下限小于上限。在某些实施方案中，在移植后约24周施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的剂量。本文中所述的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的任一或所有施用中抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的量可以取决于例如，器官移植的类型、所用抗cd20抗体的类型、是否使用了第二种药物和使用了何种类型的第二种药物、以及给药的方法和频率。在一些实施方案中，一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)可以含有约任一800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1050mg或1200mg抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)可以含有约任一以下范围的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)，其中所述范围具有以下任一上限：850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1050mg或1200mg，和独立选择的以下任一下限：800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、或1150mg，且其中下限小于上限。在一些实施方案中，第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是在约900mg和约1100mg之间(例如，约1000mg)的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，第二剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是在约900mg和约1100mg之间(例如，约1000mg)的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，第三剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是在约900mg和约1100mg之间(例如，约1000mg)的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，与移植同时施用的一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是在约900mg和约1100mg之间(例如，约1000mg)的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，移植后施用的一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)是在约900mg和约1100mg之间(例如，约1000mg)的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本公开的ii型抗cd20抗体静脉内(例如通过iv输注)施用。在其他实施方案中，皮下施用本公开的ii型抗cd20抗体。本文所述的任何给药规则和方案可以应用于下述用于治疗需要器官移植(例如肾移植)的个体的任何方法、组合物和用于制备药物。尽管抗cd20抗体可以是本文所述的任何方法中施用给个体的唯一药物，但是在一些实施方案中，该方法还包括向个体施用第二药物，其中抗cd20抗体是第一药物。在一些实施方案中，第一药物和第二药物同时作为单一组合物或以单独的组合物(包括经由相同或不同的给药途径)施用给个体。在一些实施方案中，第一药物和第二药物顺序地施用给个体。在一些实施方案中，第二药物在抗cd20抗体给药之前(例如，任一至少约6小时，12小时，1天，2天，3天，7天或更长时间之前)施用给个体。在一些实施方案中，在施用抗cd20抗体之后(例如，任一至少约6小时，12小时，1天，2天，3天，7天或更长时间之后)，将第二药物施用给个体。在一些实施方案中，所述方法还包括例如在移植(例如肾移植)之前向个体施用静脉内免疫球蛋白(ivig)的剂量。本领域已知ivig是以多种制剂形式存在的下述治疗性制备物，其可以静脉内施用，所述治疗性制备物是从一千个或更多个献血者的血浆库获得的正常多特异性igg。ivig方案已被用作hla-致敏的移植接受者中的免疫调节剂(参见例如美国专利号6,171,585)。高剂量ivig可以指以高剂量(例如约2g/kg)施用的ivig。在一些实施方案中，每月施用高剂量ivig。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约14天和约28天之间施用ivig的剂量(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后任一约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、或约28天施用ivig的剂量(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后小于约任一以下天数：28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、或15天施用ivig的剂量(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后大于约任一以下天数：14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、或27天施用ivig的剂量(例如高剂量)。也就是说，在第一剂后的上限天数28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、或15天和独立选择的下限14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、或27天施用ivig的剂量(例如高剂量)，其中下限小于上限。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约21天施用ivig的剂量(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约2周和约4周之间施用ivig的剂量(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约2周、约3周、或约4周施用ivig的剂量(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后施用第二剂ivig(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后任一约35、约36、约37、约38、约39、约40、约41、约42、约43、约44、约45、约46、约47、约48、或约49天施用第二剂ivig(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后小于约任一以下天数：49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、或36天施用第二剂ivig(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后大于约任一以下天数：35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、或48天施用第二剂ivig(例如高剂量)。也就是说，在第一剂后的上限天数49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、或36天和独立选择的下限35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、或48天施用第二剂ivig(例如高剂量)，其中下限小于上限。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约42天施用第二剂ivig(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约5周和约7周之间施用第二剂ivig(例如高剂量)。在一些实施方案中，在第一剂抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之后约5周、约6周、或约7周施用第二剂ivig(例如高剂量)。在一些实施方案中，除了可以由本领域技术人员基于特定类型的器官移植和接受器官移植的个体的特定病症选择标准护理疗法之外，还可以将抗cd20治疗施用给个体。可根据本领域已知的那些来选择标准护理疗法的剂量、给药途径和时间安排。例如，用于肾脏移植的示例性标准护理疗法包括但不限于移植后立即使用的生物诱导剂，例如阿仑珠单抗和/或其他免疫抑制或免疫调节抗体；标准免疫抑制剂例如霉酚酸吗啉乙酯(例如以两个分开的剂量以1200mg/m2天给药)、他克莫司(例如，0.2-0.3mg/kg，每日两次)、泼尼松(如负荷剂量和逐渐减小)及其及它们的组合；和感染预防剂，如更昔洛韦、缬更昔洛韦、制霉菌素、甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲唑、其他病毒、真菌和细菌预防剂，以及它们的组合。如本文所用，“免疫抑制剂”是指抑制或掩蔽移植有移植物的宿主的免疫系统的药剂。这将包括例如抑制细胞因子产生、下调或抑制自身抗原表达或掩盖mhc抗原的物质。本公开所考虑的示例性免疫抑制剂包括但不限于2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见美国专利号4,665,077)，硫唑嘌呤(或者，如果对硫唑嘌呤存在不良反应，则使用环磷酰胺)；溴隐亭；戊二醛(其掩蔽mhc抗原，如美国专利4,120,649所述)；针对mhc抗原和mhc片段的抗独特型抗体；环孢菌素a；类固醇例如糖皮质激素，例如泼尼松、甲基强的松龙、地塞米松；细胞因子或细胞因子受体拮抗剂，包括抗干扰素-γ，-β或-α抗体；抗肿瘤坏死因子-α抗体；抗肿瘤坏死因子-β抗体；抗白细胞介素-2抗体和抗il-2受体抗体；抗l3t4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；pan-t抗体，优选抗cd3或抗cd4/cd4a抗体；含有lfa-3结合结构域的可溶性肽(1990年7月26日公开的wo90/08187)链激酶；tgf-β；链道酶(streptodomase)；来自宿主的rna或dna；fk506；rs-61443；脱氧精胍菌素；靶向亲免素的药物(例如他克莫司，西罗莫司，雷帕霉素及其类似物，环孢菌素等)；mtor活性位点抑制剂；t细胞受体(美国专利5,114,721)；t细胞受体片段(offner等人，science251：430-432(1991)；wo90/11294；和wo91/01133)；和t细胞受体抗体(ep340,109)，如t10b9。这些药剂与抗cd20抗体同时或在不同的时间施用，并且以与本领域中所述相同或更少的剂量使用。在本发明的一个方面，本文提供了用于降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中同种异体抗体水平的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，个体中同种异体抗体的水平降低了任一约5％，10％，15％，20％，25％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多。此处所用的“减少”或“减少了”包括相对于治疗前同一个体的水平或值的降低，以及相对于未经治疗的一组类似个体的平均或中位水平或值的降低。如本文所用，“类似个体(comparableindividuals)”可指具有类似疾病或病症(包括严重性，持续时间，遗传倾向，pra，症状和/或护理方案标准等)，和任选地相似的人口统计因素(例如年龄，性别，种族等)的个体。这种减少可以是指暂时减少、在特定时间点(例如在治疗后不久，在交叉配型时或在接受器官移植之前)测量的减少、或在延长的时间期间持续减少(例如任一约1个月，2个月，3个月，4个月，5个月，6个月，7个月，8个月，9个月，10个月，12个月，18个月，2年，3年，5年或以上)。在一些实施方案中，本文提供了在器官移植(例如肾移植)之前降低个体中同种异体抗体水平的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了在需要器官移植(例如肾移植)的个体中提供同种异体抗体水平持续降低的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了防止需要器官移植(例如肾移植)的个体中同种异体抗体水平反弹的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，反弹是在某个时间期间内(例如任一约1个月，2个月，3个月，4个月，5个月，6个月，7个月，8个月，9个月，10个月，12个月或更长时间)在个体中同种异体抗体水平增加至治疗之前同种异体抗体初始水平的任一约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％。在一些实施方案中，本文考虑的同种异体抗体的水平包括所有同种异体抗体的量、同种异体抗体的特定类别的量(例如针对特定类别的同种异体抗原的同种异体抗体、特定免疫球蛋白同种型的同种异体抗体、免疫球蛋白同种型等等)、或个体中代表性物种或代表性同种异体抗体物种库的同种异体抗体量。抗体(例如，同种异体抗体或同种异体抗体亚型)的水平也可以称为抗体的“效价”。可以使用本领域已知的任何方法测量同种异体抗体的水平，所述方法包括但不限于流式细胞术、免疫测定法、补体依赖的细胞毒性(cdc)测定法和其他的标准交叉配型技术。在一些实施方案中，使用新鲜取得的血清样品来测量同种异体抗体的水平。其他合适的样品，如体液，淋巴活组织检查，脾活组织检查等也可用于测量同种异体抗体的水平。在一些实施方案中，同种异体抗体是抗hla(包括抗hlai类和抗hlaii类)同种异体抗体。在一些实施方案中，同种异体抗体对以下抗原是特异性的，所述抗原包含a，b，bw4，bw6和dr，hla-cw，drw51，drw52，drw53或dq抗原。在一些实施方案中，同种异体抗体具有igg和/或igm同种型。在一些实施方案中，同种异体抗体包含群体反应性抗体或针对在本领域已知的标准群体反应性抗体(pra)检测中使用的供体细胞池(例如供体b和/或t淋巴细胞)具有反应性的同种异体抗体。在一些实施方案中，同种异体抗体是预先存在的同种异体抗体，例如由于个体先前暴露于外源同种异体抗原而产生的同种异体抗体。将个体暴露于外源同种异体抗原的示例性暴露事件可以包括但不限于之前的器官或组织移植、输血、妊娠及其任何组合。暴露事件可以是最近发生的事件、或者发生在过去的事件(例如早于1年以前)、单一事件或重复事件。在一些实施方案中，所述方法将个体中预先存在的同种异体抗体的水平降低至未(例如通过之前的暴露事件)致敏的个体中发现的正常水平。在一些实施方案中，所述方法将预先存在的同种异体抗体的水平降低至未(例如通过之前的暴露事件)致敏的个体中发现的水平的任一约10、8、6、5、4、3、2、1.5或1倍。在一些实施方案中，本文提供了减少需要器官移植(例如肾移植)的个体的中群体反应性抗体(也称为“pra”)(包括群体反应性抗体的水平或如下所述的pra值)的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，与治疗前的并且在类似测试条件下测量的pra(例如cpra)相比，个体的pra(例如cpra)被降低了任一约5％，10％，15％，20％，25％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多。术语“pra”或“群体反应性抗体”是指个体血清与供体淋巴细胞池反应并诱导细胞杀伤的供体淋巴细胞池百分数的量度。pra可以表示为介于0％和99％之间的百分数，其可以代表被测试个体将通过预先存在的同种异体抗体(例如针对hla抗原的同种异体抗体)与供体群体反应的预期比例。x％的pra可以表明该个体预期与x％的供体是交叉配型不相容的。pra值通常用于移植分配系统，例如用于器官共享的联合网络(unos)，以优先为移植器官的需求清单上的个体分配可获得的移植器官。与具有较低pra的个体比较，预期具有较高pra的个体在等待列表上在被提供合适的器官之前会等待较长的时间期间。pra的测定值可以取决于pra测试的灵敏度，以及池中供体抗原的选择。如本文所使用的，pra也可以指pra的变化形式，例如计算的pra(cpra)。例如，unos于2009年推出的cpra是基于不可接受的hla抗原(或个体预先存在的同种异体抗体识别的hla抗原)的频率以及从2003年到2005年美国约12,000个肾捐献者中hla抗原的频率计算的，代表表达一种或多种不可接受的hla抗原的实际器官供体的百分数。具有高pra的个体(例如任一至少约20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或更多)可以认为是“致敏的”或“超敏的”。除了遗传易感性(例如具有低频率的hla等位基因或血清型)之外，个体还可能通过暴露于可能导致产生同种异体抗体的外来人抗原而变得敏感。将个体暴露于外来人抗原的示例性暴露事件包括但不限于先前的移植、输血、妊娠及它们的任何组合。“致敏的”个体可能具有高的pra，和/或可能已经历过之前的一个或多个(包括1、2、3、4、5、6个或更多个)暴露事件。在一些实施方案中，pra的降低使得能够使用来自潜在的交叉配型相容供体的移植物进行随后的成功器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，在接受者接受抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)之前，交叉配型相容的供体本来可能是与所述接受者是交叉配型不相容的。在一些实施方案中，本文提供了通过向有前景的器官移植(例如肾移植)接受者施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)而将交叉配型不相容的供体转化成交叉配型相容的供体的方法。在一些实施方案中，本文提供了用于使等待器官移植(例如肾移植)的致敏个体(例如超敏化个体)脱敏的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，在所述治疗之后脱敏的个体能够自最初的交叉配型不相容的供体接受器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，本文提供了减少等待器官移植(例如肾移植)的个体的等待时间的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，与一组类似个体(例如与治疗前个体具有相似的pra)等待相同器官移植的平均或中位等待时间相比，个体的等待时间减少了任一约1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、36个月、48个月、60个月或更长时间。在一些实施方案中，个体的等待时间减少了一组类似个体(例如与治疗前个体具有相似的pra)等待相同器官移植的平均或中位等待时间的任一约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更长时间。在一些实施方案中，该方法减少了个体对活体器官供体的移植器官的等待时间。在一些实施方案中，该方法减少了个体对已死亡的器官供体的移植器官的等待时间。在一些实施方案中，本文提供了增加个体接受合适器官移植(例如肾移植)的可能性的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，接受合适器官移植的可能性增加任一约5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多。在一些实施方案中，所述方法在施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后任一约1个月，2个月，3个月，4个月，5个月，6个月，7个月，8个月，9个月，10个月，12个月或更长时间内增加接受合适器官移植的可能性。在一些实施方案中，所述方法在施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后任一约6个月至12个月内、6个月至10个月内、6个月至9个月内、4个月至8个月内、和5个月至7个月内增加接受合适器官移植的可能性。在一些实施方案中，所述方法在施用抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)后36周内或9个月内增加接受合适器官移植的可能性。在一些实施方案中，该方法增加个体从活器官供体接受移植器官的可能性。在一些实施方案中，该方法增加了个体从已故器官供体接受移植器官的可能性。在一些实施方案中，本文提供了降低器官移植(例如肾移植)后个体(例如致敏个体)中移植排斥风险的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。移植排斥反应可以是急性的(例如任一约在1周，2周，4周，6周，8周，12周，16周，24周，36周内或更长时间内发生移植排斥反应)或慢性的(例如任一约3个月，0.5年，1年，1.5年，2年，2.5年，3年，3.5年，4年，4.5年，5年，6年，10年或更长时间发生移植排斥反应)，其由同种异体抗体(例如dsa))或t细胞介导、由体液或细胞免疫应答介导。移植排斥包括但不限于超急性排斥、急性抗体介导的排斥和慢性供体特异性抗体排斥。可以通过在某个时间段(例如任一约1周、2周、4周、8周、12周、24周、36周、52周、1个月、2个月、3个月、0.5年、1年、1.5年、2年、2.5年、3年、3.5年、4年、4.5年、5年、6年、10年、或长时间内)所有移植排斥发生的发生率或特定类型的移植排斥发生的发生率来确定移植排斥的风险。移植排斥发生可以包括任何程度或水平的症状性发生，以及对移植物具有组织学损伤迹象或免疫反应的无症状事件。在一些实施方案中，相对于没有抗cd20抗体治疗的一组类似个体中典型的移植排斥风险(例如平均或中位风险)而言，移植排斥的风险降低了任一约5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多。在一些实施方案中，在约1年或12个月内评估移植排斥的风险。在一些实施方案中，移植排斥是细胞免疫应答、体液免疫应答或这两者介导的急性(例如器官移植后约12周内)排斥。在一些实施方案中，移植排斥是抗体介导的排斥(amr)，包括急性(例如器官移植后约24周内)amr和慢性(例如器官移植后约52周内)amr。在一些实施方案中，本文提供了在已经经历器官移植的个体中预防移植排斥的方法，包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了在已经经历器官移植的个体中治疗移植排斥的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了在器官移植(例如肾移植)之后预防个体对使用常规免疫抑制剂治疗的耐药性发展的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了在已经经历器官移植的个体中改善移植物(例如同种异体移植物)耐受性的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，所述方法通过减少供体特异性抗体(dsa)来降低移植排斥的风险。dsa包含可特异性识别供体细胞(例如移植物中的细胞)的抗hla抗体。在一些实施方案中，dsa是预先存在的同种异体抗体。在一些实施方案中，dsa是在器官移植后个体应答于移植物从头产生的。在一些实施方案中，dsa导致对移植物的细胞毒性免疫应答。在一些实施方案中，dsa的存在增加了移植排斥的风险。在一些实施方案中，在器官移植(例如肾移植)后的任一约12周，24周，36周，48周，52周或更长时间测量dsa。在一些实施方案中，在器官移植(例如肾移植)之前或之时测量dsa。在一些实施方案中，本文提供了在需要器官移植(例如肾移植)的个体中减少dsa的方法，包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了在需要器官移植(例如肾移植)的个体中维持低水平dsa的方法，包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。低水平的dsa是指在具有低pra的个体(例如任一小于30％，20％，5％或更小pra的个体)中通常检测到的dsa水平，或足够低水平的dsa以至于dsa不会导致通过功能或组织学征兆或症状测量的dsa对移植器官的不利免疫应答。在一些实施方案中，本文提供了用于在经历器官移植(例如肾移植)的个体中提供同种异体抗体(例如dsa)水平持续降低的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，用抗cd20抗体继续治疗稳定等待器官移植或肾移植后的个体的同种异体抗体(例如dsa)的水平。在一些实施方案中，本文提供预防或抑制经历器官移植(例如肾移植)的个体中从头dsa的产生的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了抑制个体中的同种免疫(alloimmunity)的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了诱导个体对同种异体抗原的耐受性的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了抑制同种异体移植物接受者中同种异体抗体产生的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了预防需要器官移植(例如肾移植)的个体中的移植物丧失的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，本文提供了降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中移植物丧失风险的方法，包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，移植物丧失由移植排斥如抗体介导的排斥引起。在一些实施方案中，移植物丧失由慢性移植排斥(例如由供体特异性抗体介导)引起。在一些实施方案中，相对于没有抗cd20抗体治疗的一组类似个体中典型的移植物丧失风险(例如平均或中位风险)而言，移植物丧失风险降低了任一约5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多。在一些实施方案中，在器官移植(例如肾移植)后任一约12周，24周，36周，52周，2年，3年，5年或更长时间内测定移植物丧失的风险。在一些实施方案中，本文提供了延长需要器官移植(例如肾移植)的个体中的移植物存活的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。在一些实施方案中，与经历过类似器官移植的一组类似个体中移植物存活的平均或中位时间相比，移植物存活延长任一约3个月，6个月，9个月，12个月，18个月，24个月，36个月，48个月，60个月或更长时间。在一些实施方案中，与经历过类似器官移植的一组类似个体中移植物存活的平均或中位时间相比，移植物存活延长了任一约10％，20％，30％，50％，75％，100％，200％，500％或更多。在一些实施方案中，本文提供了改善个体中移植物功能的方法，其包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)。使用本领域已知的标准测定法和检查检测方法来测量移植物功能。例如，肾移植功能可以通过测量个体的血清肌酸酐值来测量。在一些实施方案中，移植物功能在器官移植(例如肾移植)之后任一约4周，12周，24周，36周，52周，2年，3年，5年或更多的任何长时间内测量移植物功能。在一些实施方案中，相对于在相似条件下测量的已经历类似器官移植的一组类似个体的平均或中位值移植物功能而言，移植物功能改善了任一约5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多。在一些实施方案中，与经历过类似器官移植的一组类似个体比较，正常或可接受的移植物功能(例如任一约30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多的相应健康器官功能)在个体中维持较长的时间段(例如任一约10％，20％，30％，50％，75％，100％，200％，500％或更长)。在一些实施方案中，本文提供了改善需要器官移植(例如肾移植)的个体的生活质量的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)，其中所述抗cd20抗体的施用使得所述个体能够接受合适的器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，本文提供了降低需要器官移植(例如肾移植)的个体的长期医疗成本的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)，其中所述抗cd20抗体的施用使得所述个体能够接受合适的器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，本文提供了延长需要器官移植(例如肾移植)的个体的总体存活的方法，所述方法包括向个体施用有效量的抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)，其中所述抗cd20抗体的施用使得所述个体能够接受合适的器官移植(例如肾移植)。在一些实施方案中，与没有抗cd20治疗和/或没有器官移植的一组类似个体的平均或中位总体存活相比，个体的总体存活延长了任一约3个月，6个月，9个月，12个月，18个月，24个月，3年，4年，6年，10年或更长时间。本发明进一步提供了用于治疗需要器官移植(例如肾移植)的个体的本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物。在一些实施方案中，本文提供的是如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物，用于在需要器官移植(例如肾移植)的个体中降低同种异体抗体(例如dsa)的水平。在一些实施方案中，本文提供的是如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物，用于在需要器官移植(例如肾移植)的个体中降低pra。在一些实施方案中，本文提供的是如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物，用于在需要器官移植(如肾移植)的个体中降低移植排斥(例如amr)风险。在一些实施方案中，本文提供的是如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物，用于延长需要器官移植(例如肾移植)的个体中的移植物存活。在一些实施方案中，个体需要肾移植。在一些实施方案中，个体被致敏。在一些实施方案中，个体具有至少20％(例如至少30％)的pra。在一些实施方案中，个体患有终末期肾病。本发明进一步提供的是本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物在制备用于治疗需要器官移植(如肾移植)的个体的药物中的用途。在一些实施方案中，本文提供了如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物在制备用于降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中同种异体抗体(例如dsa)水平的药物中的用途。在一些实施方案中，本文提供了如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物在制造用于减少需要器官移植(如肾移植)的个体中pra的药物中的用途。在一些实施方案中，本文提供了本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物在制备用于降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中移植排斥(例如amr)风险的药物中的用途。在一些实施方案中，本文提供了如本文所述的任一抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)或其组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在需要器官移植(例如肾移植)的个体中延长移植物存活。在一些实施方案中，个体需要肾移植。在一些实施方案中，个体被致敏。在一些实施方案中，个体具有至少约20％(例如至少约30％)的pra。在一些实施方案中，个体患有终末期肾病。iv.制造物或试剂盒在本发明的另一个方面，提供了一种制造物或试剂盒，所述制造物或试剂盒含有上文描述的用于在需要器官移植(例如肾移植)的个体中进行治疗的物质。该制造物或试剂盒包括容器和或在该容器上或与之结合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶、小药瓶、注射器、静脉内输液袋等。容器可以从多种材料如玻璃或塑料形成。该容器容纳了本身或与另一种组合物组合时有效治疗、预防和/或诊断病症的组合物并且可以具有无菌接入口(例如该容器可以是静脉内输液袋或是具有皮下注射针头可穿透的瓶塞的小药瓶)。在组合物中的至少一种活性物质是本发明的抗体(例如，本公开的抗cd20抗体，如ii型抗cd20抗体)。标签或包装插页说明该组合物用于治疗选择的病状。另外，制造物或试剂盒可以包含(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包含其他细胞毒性剂或治疗药。在本发明的这个实施方案中制造物还可以包含指示组合物可以用来治疗特定病状的包装插页。备选地或额外地，该制造物或试剂盒可以还包含第二(或第三)容器，其包含可药用缓冲剂，如抑菌注射用水(bwfi)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。它可以还包括从商业和用户观点看受欢迎的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。在一些实施方案中，本文提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的药物和任选的可药用载体，以及任选地包含用于施用所述药物以降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中同种异体抗体(例如dsa)水平的说明书的包装插页。在一些实施方案中，本文提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的药物和任选的可药用载体，以及任选地包含用于施用所述药物以降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中pra的说明书的包装插页。在一些实施方案中，本文提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的药物和任选的可药用载体，以及任选地包含用于施用所述药物以降低需要器官移植(例如肾移植)的个体中移植排斥风险(例如amr)的说明书的包装插页。在一些实施方案中，本文提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有抗cd20抗体(例如ii型抗cd20抗体)的药物和任选的可药用载体，以及任选地包含用于施用所述药物以延长需要器官移植(例如肾移植)的个体中移植物存活的说明书的包装插页。在一些实施方案中，试剂盒还包含第二药物(例如高剂量ivig)和任选的可药用载体，以及任选地包含施用所述第二药物用于治疗需要器官移植(例如肾移植)的个体的说明书的包装插页。应当理解，代替抗cd20抗体或除抗cd20抗体之外，上述任何制造物可以包括本发明的免疫缀合物。本说明书被认为足以使本领域技术人员能够实施本发明。除了本文所示和所述之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员将从前述描述中变得显而易见，并且落在所附权利要求的范围内。出于所有目的，本文引用的所有出版物、专利和专利申请的全部内容通过引用并入本文。实施例通过参考以下实施例可以进一步理解本发明，这些实施例是作为说明提供的而不是限制性的。实施例1：在患有终末期肾病和超敏化等待肾移植的患者中与高剂量ivig施用的静脉内奥滨尤妥珠单抗的ib期临床研究研究设计作为移植候选者的并且具有cpra≥50％的超敏反应证据的esrd成年人，以1000mg静脉内输注施用奥滨尤妥珠单抗的单次和重复剂量的ib期开放标签研究。患者可入选接受一次(组群1)或者接受两次或更多次(组群2)奥滨尤妥珠单抗输注的两个组群。为了降低irr的风险，两个组群在每次输注奥滨尤妥珠单抗之前接受标准的预处理，使用抗组胺药、抗发热药和80mg甲基强的松龙。研究设计在图1中示出。研究中有两个组群的个体接受脱敏治疗。组群1(1000mg单剂量奥滨尤妥珠单抗)包括在第1天接受奥滨尤妥珠单抗输注，接着在第22和43天接受高剂量ivig(2g/kg)的5位患者。如果没有严重的输注相关反应(irr)；所述irr定义为在奥滨尤妥珠单抗治疗24小时内发生的不良事件的通用术语标准(commonterminologycriteriaforadverseevents)[ctcae]4级或更高的输液反应)或重大的意外安全事件，一旦组群1中的5号患者完成了他或她输注奥滨尤妥珠单抗并在给药后监测4周，则可以允许进行组群2。组群2(1000mg奥滨尤妥珠单抗×2)包括20名在第1和15天接受奥滨尤妥珠单抗1000mg输注，然后在第22和43天接受高剂量ivig(2g/kg)的患者。如果考察者认为在这个时候观察到的hla同种异体抗体的减少不显著地足以潜在地进展到肾移植，具有低风险的抗体介导的排斥，那么在第24周时可以在组群2中施与额外的1000mg奥滨尤妥珠单抗输注。建议在进行第24周给药之前咨询本研究医学监测者。包括入组群1或组群2后被发现有资格移植并接受相容肾脏供应的患者接受两次额外的1000mg奥滨尤妥珠单抗输注。一次输注发生在移植时(仅当在移植日期之前≥4周时，在脱敏阶段期间施用了先前的奥滨尤妥珠单抗输注)。移植的头48小时内奥滨尤妥珠单抗输注的确切时间由主要考察者的最佳医学判断决定。在移植后第24周施用第二额外的输注1000mg奥滨尤妥珠单抗。研究的主要终点评估脱敏阶段的第24周时奥滨尤妥珠单抗/ivig诱导方案的安全性和耐受性。为了进一步表征随后移植患者群体中的安全性和耐受性，可以在移植后第28周时对安全性数据进行回顾。所有患者在最后一次奥滨尤妥珠单抗输注后监测最少12个月。如下面更详细描述的，研究中的患者具有esrd，并且在18-65岁之间，具有致敏事件的历史并且记录的cpra≥50％。排除怀孕或哺乳期的患者、或有活动性或慢性感染、或有明显的病毒感染史、有恶性病史(除了适当治疗的宫颈原位癌、非黑素瘤皮肤癌或i期子宫癌之外)、严重贫血、血小板减少或白细胞减少、肝炎或重大心肺疾病的迹象的患者，以及将在之前4周内接受过活疫苗的人排除在外。所选择的人群旨在代表大多数正在等待移植的致敏患者，从而能够做出关于安全性以及奥滨尤妥珠单抗对cpra水平的影响的决定，这允许决策进入提议的iii期研究。曾接受过之前的移植的有限数量的患者(n≤6)可以参加本研究。纳入研究的标准包括：(a)有致敏事件史(如输血、妊娠或先前的移植)的esrd；(b)器官共享的联合网络(unos)列出了在过去一年中，至少有一次死亡捐献者肾脏的匹配运行；(c)cpra在筛查时记录≥50％。cpra计算基于来自本地移植团队的输入，并且特别地包含了位点生成的数据(例如hla特异性同种异体抗体评估)；(d)筛选时年龄为18-65岁；(e)对具有生育潜力的妇女：同意保持禁欲(克制异性性行为)，或在治疗期间使用两种适当的避孕方法，包括至少一种失败率低于1％的方法；在最后一剂研究药物后至少18个月。如果一个女性在经历了初次月经后，且没有达到绝经后的状态(连续≥12个月的闭经，除了绝经以外没有其他确定的原因引起闭经)，并且没有经过手术绝育(去除卵巢和/或子宫)，则认为该女性是有生育潜力的。每年失败率<1％的示例性避孕方法包括双侧输卵管结扎术、男性绝育、荷尔蒙植入、建立的正确使用联合口服或注射荷尔蒙避孕药、以及某些宫内节育器。应该根据临床研究的持续时间以及患者的优选和通常的生活方式来评估性禁欲的可靠性。定期禁欲(例如日历、排卵、症状体温避孕(symptothermal)或排卵后避孕的方法)和撤回是不可接受的避孕方法。阻隔避孕法(barriermethod)必须总是补充使用杀精子剂；和(f)对于男性：同意保持禁欲(克制异性性行为)或使用避孕措施和同意不捐献精子，如下所述：(i)对于怀有生育能力的女性伴侣或怀孕的女性伴侣，男性在治疗期间必须保持禁欲或使用安全套，且在最后一剂研究药物后至少12个月如此。应该根据临床研究的持续时间以及患者的优选和通常的生活方式来评估性禁欲的可靠性。定期禁欲(例如日历、排卵、症状体温避孕或排卵后避孕的方法)和撤回是不可接受的避孕方法；和(ii)在治疗期间和最后一剂研究药物后至少12个月，男性必须避免捐献精子。主要排除标准包括：(a)从最近的大手术的不完全恢复，或基线前自大手术<12周；除肾移植之外，在基线24周内计划手术。允许使用微创手术(minimalinvasiveprocedures)(如瘘管去凝和permacath放置)(b)怀孕或哺乳；(c)在第一次奥滨尤妥珠单抗输注之前测量的阳性血清hcg；(d)原发性或继发性免疫缺陷(病史或目前活跃)，包括已知的hiv感染史；(e)乙型肝炎表面抗原(hbsag)或核心抗体(hbcab)的血清阳性或丙型肝炎血清阳性；(f)通过下列筛查试验之一确诊的活动性或潜伏性结核(tb)病史：(i)阳性结核菌素(纯化蛋白衍生物[ppd])皮肤试验；或(ii)阳性tbgold测试。具有卡介苗(bcg)疫苗接种记录历史的受试者必须具有阴性quantiferon测试结果和阴性胸放射照片以符合当选条件；(g)在随机分组的3个月内(给药第1天)拍摄胸放射照片(x线，前后方和侧方)的活动性结核的怀疑；(h)任何种类的已知活性感染(不包括指甲床的真菌感染)，或在基线4周内需要住院治疗或使用静脉内抗感染药治疗的任何重大事件，或基线之前2周内结束口服抗感染药；(i)基线前24周内深部空间/组织感染史(如筋膜炎、脓肿、骨髓炎)；(j)严重复发或慢性感染史；(k)目前活跃的酗酒或药物滥用；或者酗酒或药物滥用史；(l)接受过多于一次器官移植的患者。先前接受单次肾移植的患者(总共多达6名患者)可以被允许进入研究并且可以被纳入两个组群中的任一组群；(m)同步器官移植的候选者(例如肾胰，肾-肝)；(n)在筛查访问的1个月内接受任何减毒活疫苗；(o)筛查实验室结果异常，包括：wbc<3.0×103/ml；血小板计数<100×103/ml；hgb<7.0g/dl；ast/sgot或alt/sgpt>5×正常上限(uln)；(p)有主要心血管或肺部疾病病史的患者(如筛查前6个月内的心肌梗死；纽约心脏协会[nyha]iii/iv级心力衰竭；未被控制的心绞痛、心律失常和缺血性ecg迹象或主动传导异常)；(q)在随机分组的12周内或5个半寿期内使用考察的药物，以较大者为准；(r)在过去12个月内使用抗cd20疗法；(s)ivig或奥滨尤妥珠单抗已知的禁忌症；(t)癌症的历史，包括实体瘤，血液恶性肿瘤和原位癌(已经治疗或切除并已解决的皮肤的基底细胞癌除外)；(u)对单克隆抗体或奥滨尤妥珠单抗输注成分严重过敏或过敏反应史；和(v)esrd腹膜透析患者。剂量和非考察的医药产品本研究的测试产品是奥滨尤妥珠单抗，且组群1于第1天和组群2于第1天和第15天通过iv输注1000mg的剂量施用。可以在组群2患者中于第169天施用额外的任选1000mg输注。被发现符合移植条件并且接受相容的肾脏供应的患者(仅当在移植日期前≥4周时，在脱敏阶段期间施用之前的奥滨尤妥珠单抗输注)在移植时和移植后第24周时接受2次额外的1000mg奥滨尤妥珠单抗输注。在每次输注奥滨尤妥珠单抗之前，患者在输注期开始前30-60分钟应接受80mg静脉内甲基强的松龙、口服对乙酰氨基酚(650-1000mg)和口服苯海拉明(50mg；或等效剂量的抗组胺药)。除了奥滨尤妥珠单抗外，所有患者还均在第22和43天接受高剂量ivig(2g/kg)。患者对基础疾病继续进行标准的中心导向治疗(例如抗高血压药物，降胆固醇药物，骨质疏松症治疗)和操作如血液透析。在研究过程中，患者可以被允许接受考察者在移植前后的esrd及其并发症的管理方面的任何医学上认为必要的治疗。对于在研究过程中移植的患者，移植导向疗法可以包括标准的免疫抑制方案，例如霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolatemofetil)(例如，以两个分开剂量施用给个体1200mg/m2/天)、他克莫司(tacrolimus)(例如0.2-0.3mg/kg，每天分两次施用给个体)和泼尼松负荷剂量，并按照中心方案减小。负责考察者可以根据判断使用诱导方案，包括淋巴细胞消耗方案(如阿仑单抗(alemtuzumab))。伴随疗法和临床实践伴随疗法包括患者从研究药物开始前30天到研究完成/中断访视之间使用的任何药物(例如，处方药，非处方药，草药或顺势疗法补救剂(homeopathicremedies)，营养补充剂)。所有这些药物应报告给考察者并记录。可以允许患者参加研究，并继续进行标准的中心导向治疗(例如抗高血压药物，降胆固醇药物，骨质疏松症治疗)和操作如血液透析。在研究过程中，患者可以被允许接受考察者在移植前后的esrd及其并发症的管理方面的任何医学上认为必要的治疗。所有剂量的ivig在血液透析期之前即刻或期间输注。如果患者被认为是匹配供体移植的适当候选者，则移植导向治疗可以包括标准的免疫抑制方案，例如1200mg/m2/天的霉酚酸吗啉乙酯，分两次给药，他克莫司以0.2-0.3mg/kg，每日两次，泼尼松负荷剂量，并按照中心方案减小。包括淋巴细胞消耗方案在内的诱导方案可由负责考察者根据适当的判断使用。在移植时，大约64％的肾移植患者接受了t细胞消耗剂(optn/srtr2012年度数据报告)。而且，认识到致敏患者在移植后处于较高的急性移植排斥风险，并且中心在用利妥昔单抗脱敏后使用淋巴细胞消耗剂(例如阿仑单抗)(vo,a.a.等人(2008)n.engl.j.med.359：242-251；vo,a.a.等人(2014)transplantation98：312-319)。由于上述原因，似乎难以推荐在目前研究中的可能达到移植的患者不使用t细胞消耗剂。鉴于移植后感染性并发症的可能性，参与指导的中心被要求严格执行针对细菌、病毒和真菌感染的局部感染预防方案。研究目标和结果测量本研究的主要目的是评估单用和重复静脉内(iv)剂量的奥滨尤妥珠单抗在等待移植的终末期肾病(esrd)成人患者中的安全性和耐受性，以及通过升高的计算群体反应性抗体(cpra)测量的超敏证据。此外，安全性和耐受性可以在随后的移植患者中进行评估。对于每个剂量组群，可以给出对于安全性、cpra、药物代谢动力学(pk)和随着时间推移的其他结果测量的描述性统计。本研究的次要目的是表征单剂量和重复剂量奥滨尤妥珠单抗的pk和药物动力学(pd)谱。下文进一步描述了pk谱的表征，且pd谱主要基于外周血中的cd19+b细胞和人白细胞抗原(hla)同种异体抗体。这项研究的安全性目标如下：(a)基于以下终点评估奥滨尤妥珠单抗在具有esrd的等待移植的超敏患者中的安全性：(i)严重和非严重不良事件的性质、频率和严重程度；(ii)通过定期体检、生命体征、血液学和化学实验室测试、尿液分析、ecg、不良事件的发生率和严重程度，对实验室检查值、生命体征和其他安全性生物标志物的影响；(iii)另外，可以检查以下内容：循环b细胞、t细胞和自然杀伤(nk)细胞；血清免疫球蛋白(总ig，igg，igm和iga)；怀孕；和腮腺炎、风疹、水痘、破伤风、流感和肺炎链球菌的抗体滴度；(b)通过评估严重和非严重不良事件的性质、频率和严重程度以及监测白血细胞计数、ig计数和抗体滴度来评估接受肾移植和额外免疫抑制治疗的患者中奥滨尤妥珠单抗的安全性；和(c)通过测量抗药物抗体并评估它们与其他结果测量的关系来表征奥滨尤妥珠单抗的免疫原性潜力。本研究的药物代谢动力学(pk)目标如下：(a)通过使用奥滨尤妥珠单抗的剂量浓度－时间数据的非线性混合效应建模(用软件nonmem)来表征奥滨尤妥珠单抗在esrd群体中的药物代谢动力学。pk曲线数据可用于进一步开发pk模型，包括主要协变量(例如，性别，种族/种族特点，体重，基线处的生化和血液学参数，基础疾病程度)对主要参数(例如，清除)的影响。个体暴露量度的推导，例如auc0-τ、最大血清浓度(cmax)可以取决于用于该分析的最终pk模型。此分析的结果可以单独报告。可以总结血清奥滨尤妥珠单抗(平均值，最小值，最大值，标准偏差，几何平均值)并在本研究中报告。(b)为了鉴定和描述奥滨尤妥珠单抗和伴随药物(包括静脉内免疫球蛋白(ivig))以及移植时使用的潜在的其他药物之间的潜在pk相互作用。可以进行考察性图解分析以评估用奥滨尤妥珠单抗治疗的患者中严重不良事件的发生和安全实验室参数的异常是否可归因于奥滨尤妥珠单抗暴露。而且，可以进行考察性图解分析以评估响应变异性(例如药物学响应，包括pd和/或考察性临床测量)是否可归因于奥滨尤妥珠单抗暴露的变异性。暴露与安全性参数之间的相关观察关系可以进一步用不同的方法表征，如逻辑回归分析和间接响应模型；和(c)如果合适的话，也可以进行额外的pk分析。本研究的药物动力学(pd)和生物标志物目标如下：(a)表征在用奥滨尤妥珠单抗治疗后外周血中cd19+b细胞和其它免疫细胞的变化，通过在第1、22、169、365、532天、在移植时、和在移植后第169、365和532天时评估循环cd19+b细胞的水平进行所述表征；和(b)描述奥滨尤妥珠单抗对以下方面的影响：使用sabluminex测定法对用奥滨尤妥珠单抗治疗之前和之后收集的样品的hla同种异体抗体指标；免疫状态的考察性生物标志物，包括但不限于在用奥滨尤妥珠单抗治疗之前和之后收集的血清中测量的b细胞活化因子(baff)水平；和来自肾活组织检查的探索性生物标志物和淋巴结组织病理学(用于移植活组织检查和随后活组织检查中b细胞的存在和消耗)。本研究的考察性临床目标如下：(a)评估通过单一抗原珠luminex平台测量的对同种异体抗体状态以及指示在多个时间点奥滨尤妥珠单抗和高剂量ivig后的同种致敏(allosensitization)的其它指标的影响；和(b)评估奥滨尤妥珠单抗对临床功效如移植率的影响。本研究的考察性结果测量包括：在研究期间接受移植的患者比例；以及肾功能的移植前和移植后测量，例如血清肌酸酐和估计的肾小球滤过率。本研究的结束定义为最后输注奥滨尤妥珠单抗后12个月。研究的总长度，即从第一个患者的筛选到研究结束，预计是大约30个月。实验室的生物标志物和其他生物样品收集血液样品以评估奥滨尤妥珠单抗在血清中的药物代谢动力学。来自奥滨尤妥珠单抗血清浓度的pk参数可通过以下计算：(a)最大血清浓度：(i)在整个研究期间(cmax)；(ii)在研究药物的第一过程后(cmax1)；(iii)在研究药物的第二过程后(cmax2)；(b)浓度-时间曲线下面积(auc)；(c)系统清除；(d)稳态条件下的分配体积(vss)；和(e)血清浓度-时间曲线末端部分的半寿期(t1/2)。可以通过群体pk分析确定具有血清浓度数据的所有患者的pk参数。可以针对所有具有血清浓度数据的患者计算pk参数，但不顺应给药和/或采样安排的患者或者其样品可能已受到ada干扰的患者(其不包括数据包含)除外；这些患者可以被排除在本分析之外。pk分析可包括考察性分析以确定影响奥滨尤妥珠单抗在该患者群体中药物代谢动力学的基线协变量。可以检查的基线协变量包括人口统计学、其他患者特征(例如疾病严重程度和体重)和选定的实验室测量。为了评估ivig的伴随治疗是否影响奥滨尤妥珠单抗pk，可以使用群体pk建模来比较第一次治疗输注后的奥滨尤妥珠单抗pk与组群2中第24周奥滨尤妥珠单抗输注。pk数据可以使用描述性统计来总结，包括平均值、标准偏差、几何平均值、变异系数、中位数和范围。来自血液样本的考察性pd标志物和肾活组织检查和淋巴结中的炎症/浸润的考察性生物标志物测量可以通过组群随时间的图形和描述总结；这些标志物可以包括但不限于外周cd19+b细胞计数、b细胞亚群、hla特异性同种异体抗体和组织b细胞。确定资格的具体实验室评估如下：(a)血液学：血红蛋白，wbc(绝对值和差值)和定量血小板计数；(b)生物化学：肌酸酐，淀粉酶，脂肪酶，ast，alt；(c)尿液分析(非无尿患者)：蛋白质，肌酸酐，显微镜检查和尿液试纸检查(本地读取)；(d)妊娠试验：血清hcg；(e)乙型肝炎：hbsag和hbcab；(f)丙型肝炎：丙型肝炎血清学；(g)奥滨尤妥珠单抗pk和抗药物抗体(ada)；和(h)支持cpra计算的hla特异性同种异体抗体评估。这些评估是在当地进行的。也收集血清样本以在中央实验室进行处理。下面描述可根据评估的研究时间表评估的全部实验室评估：(a)血液学：包括血红蛋白，血细胞比容，红细胞，mcv，mch，wbc(绝对值和差值)和定量血小板计数。如果需要进行测试以评估溶血性贫血，则可以在当地进行；(b)血液化学：ast/sgot，alt/sgpt，碱性磷酸酶，总蛋白，白蛋白，胆固醇，总胆红素，bun，尿酸，肌酸酐，随机葡萄糖，乳酸脱氢酶，钾，钠，氯化物，钙，镁和磷。在筛选和不定期访问中，淀粉酶和脂肪酶也可以包括在内；(c)尿分析(非无尿患者)：尿蛋白，肌酐；(d)流式细胞术：b细胞(包括cd19，cd27，cd38，igd)，t细胞(cd3，4，8)和nk细胞(cd16，cd56)；(e)hla特异性同种异体抗体评估：在luminex平台上的使用单一抗原珠的固相分析；(f)定量免疫球蛋白：包括igg、igm和iga同种型的总ig水平；(g)抗体滴度：可以根据评估时间表来测量对普通抗原(腮腺炎，风疹，水痘，破伤风，流感和肺炎链球菌)的抗体滴度。该信息用于评估奥滨尤妥珠单抗对细菌和病毒抗原的特异性体液免疫的作用；(h)妊娠试验：所有可能生育的妇女定期进行妊娠试验。这些测试可以在非无尿患者的尿液中进行，或者在无尿时于血清中进行。必须在筛查时、在每次研究药物输注前和在研究结束/提前终止时进行血清妊娠试验。除非妊娠检查结果为阴性，否则不得输注。在所有其他时间点，可以基于月经史和怀孕风险进行尿妊娠试验。如果尿妊娠试验结果为阳性，则在给药之前需要随后的阴性血清试验；和(i)以下样品也可以发送给发起人或指定人员进行分析：b细胞和其他自身免疫疾病/炎性标志物的血清，其可以包括但不限于baff。输注奥滨尤妥珠单抗在第1天(两个组群)、第15天(组群2)和作为第169天(组群2)的任选输注中通过iv输注以1000mg的绝对(平)剂量进行输注。移植的患者接受围移植输注(peri-transplantationinfusion)(第1-2天)和在移植后第169天的另一次输注。将奥滨尤妥珠单抗施用于临床环境(住院或门诊)的患者，在那里可获得立即全面的紧急复苏设施，且患者应始终在考察者的密切监督下。奥滨尤妥珠单抗不是作为静脉推注或快速浓注(bolus)给药的。第一次输注结束后，iv线保持在位2小时以上，以便能够根据需要施用静脉内药物。如果2小时后没有不良事件发生，可以移除iv线。对于随后的输注，通过静脉输入线的通路应在输注结束后保持在位至少30分钟，且如果30分钟后没有不良事件发生，则可以去除iv输入通路。在研究药物输注前30-60分钟，受试者应该口服对乙酰氨基酚(650-1000mg)和苯海拉明(50mg或等效剂量的类似药物)进行预防性治疗。每次开始输注奥滨尤妥珠单抗前30-60分钟施用给个体甲基强的松龙80mgiv。输注率在下表4中描述。表4奥滨尤妥珠单抗输注速率。输注相关反应的管理可以如下表5所述进行。表5.输注相关反应的管理注：这些建议不涉及威胁生命的事件，包括过敏反应，所有适当的标准措施(包括全面的复苏药物和设备)必须可获得，并应按临床指示使用.a参考国家癌症研究所不良事件常见术语标准4.0版(nationalcancerinstitutecommonterminologycriteriaforadverseevents,version4.0)，对症状进行分级。本表不涉及免疫球蛋白e介导的变态反应的管理。b支持性处理：如果在过去的4小时内没有接受过对乙酰氨基酚/扑热息痛和抗组胺药如苯海拉明，则应施用给个体所述药物。可能需要静脉内生理盐水。对于支气管痉挛、荨麻疹或呼吸困难，患者可能需要抗组胺药、氧气、皮质类固醇(例如，100mg的iv强的松龙或等效物)和/或支气管扩张剂。对于低血压，患者可能需要血管升压药。c再次开始后输注速率升高：症状完全消除后，输注可恢复至中断前的50％。在没有输注相关症状的情况下，可以每30分钟以50mg/小时的增量增加输注速率至最大400mg/小时。除了奥滨尤妥珠单抗外，所有患者还均在第22和43天接受施用的高剂量ivig(2g/kg)。评估通过利妥昔单抗和ivig进行b细胞消耗的脱敏作用的先前研究通常在首次输注ivig之后施用所述单克隆抗体(vo,a.a.等人，n.engl.j.med.359(2008):242-252)。在这项提议的研究中，第一次ivig输注可以在输注奥滨尤妥珠单抗之后发生。该顺序可以使得在第1天后的前3周能够生成奥滨尤妥珠单抗单一疗法的数据。它也可以减轻先前ivig输注对奥滨尤妥珠单抗药物代谢动力学(经由fcrn饱和)的潜在混淆作用的理论担忧(hansen,r.j.和balthasar,j.p.(2002)thromb.haemost.88:898-899)和/或药物动力学(通过fcγ受体饱和和干扰adcc)(nagelkerke,s.q.和kuijpers,t.w.(2015)front.immunol.5:674)。由于输注的体积大，ivig输注发生在血液透析过程之前即刻或期间。在每次输注奥滨尤妥珠单抗之前，可在输注前30-60分钟施与80mgiv甲基强的松龙，650-1000mg口服对乙酰氨基酚和50mg口服苯海拉明(或其他抗组胺药)。本文引用的所有专利、专利申请、文件和文章通过引用整体并入本文。当前第1页12