本发明涉及一种具有末端羧基的聚乙二醇的生产方法。
背景技术：
近年来，已经积极地进行将例如激素这样的介质或者例如抗体或者酶这样的生理学活性物质用作药物的制药的发展。当这些物质给药到体内时，由于其经历网状内皮系统的吞噬作用和肾脏中的排泄并从身体排出，所以血液中的滞留性低并且无法获得充分的药效。因此，已经通过用诸如糖类或者聚乙二醇(peg)这样的水溶性聚合体以修饰药物，而试图改善血液中药物滞留性。已知的是，用聚乙二醇修饰在维持药物的稳定性的同时降低了药物的免疫原性和抗原性。为了增加药物的均匀性(特别是，为了抑制血液中药物滞留性、免疫原性、药效等的变化)需要使用多分散性(重均分子量(mw)/数均分子量(mn))小的peg修饰剂。至今，peg化的干扰素以及例如peg化的hrgcsf这样的peg化的制剂进入市场并且peg化技术的实用性变得明确。
为了用聚乙二醇修饰例如蛋白质或者酶这样的生理学活性物质，需要将聚乙二醇的末端羟基转化为反应性的官能团。在反应性的官能团的转化中，未反应羟基的残留导致高分子量peg杂质、具有不同键的peg化的制剂等副产物。因此，优选的是从羟基向反应性的官能团的转化率高。
其在将聚乙二醇的末端羟基转化为末端羧基时具有特别高的实用性。例如，具有末端羧基的聚乙二醇能够通过使用例如，n-羟基丁二酰亚胺和二环己基碳二亚胺的缩合剂而转化为作为活性酯的琥珀酰亚胺酯。由于在接近生理条件下琥珀酰亚胺酯与伯胺反应以形成稳定的酰胺，所以琥珀酰亚胺酯最常用于蛋白质修饰的酰化剂。在琥珀酰亚胺酯中，琥珀酰亚胺丙酸酯和琥珀酰亚胺丁酸酯在展现与蛋白质的氨基或者生理学活性物质适当的反应性的同时，在水溶液中相对稳定，使得琥珀酰亚胺丙酸酯和琥珀酰亚胺丁酸酯对于生理学活性物质的修饰是特别有用的。
关于聚乙二醇的末端羟基向末端羧基的转化，之前已经进行了若干报道。例如，在专利文献1中(特别是，在其权利要求1中)，描述了一种羧酸的生产方法，其包括使由式q(oh)x+y表示的多元醇与由式ch(r’)＝c(r”)-coor”表示的羧酸反应，并且随后水解获得的产物(式中的定义与专利文献1中描述的定义相同)。
此外，在专利文献2(特别地，其权利要求1)，描述了一种具有羧基的水溶性非肽类聚合体的生产方法，其包括使具有至少一个羟基的水溶性非肽类聚合体与叔烷基丙烯酸酯反应以形成聚合体的酯，并随后用强酸处理聚合体的酯。
然而，在专利文献1和2中描述的生产方法中，存在羟基向羧基的转化率小于85％并且不够高的问题。具体地，在文件1的实例中，转化率为31.9至84.7％，并且在文件2的实例中，转化率为69.1％至73.8％。在要求药物等级的纯度的情况下，需要通过离子交换或者反相hplc从作为未反应物质的具有末端羟基的聚合体分离出作为产物的具有末端羧基的聚合体。此外，专利文献1和2中描述的生产方法具有反应需要长时间的问题。
在专利文献3(特别是，其权利要求19)中，描述了一种水溶性聚合体的羧酸的生产方法，其包括：(a)使具有醇盐离子或者硫醇盐离子中的至少一者的水溶性聚合体链段与具有适当离去基团的原酸酯反应以形成水溶性聚合体的原酸酯的步骤；以及(b)使在步骤(a)中形成的水溶性聚合体的原酸酯经历至少一个水解步骤以获得对应的水溶性聚合体的羧酸的步骤。然而，在专利文献3中描述的生产方法中，存在使用昂贵的试剂例如三甲基4-溴原丁酸酯的问题。此外，存在合成在专利文献3中描述的生产方法中使用的原酸酯需要多阶段的步骤的问题。
此外，作为形成末端羧基的方法，例证了末端羟基的氧化(即，醇的氧化)。作为通过氧化醇的羧酸的生产方法，已知使用强酸或者重金属化合物(例如，铬化合物)的方法。然而，在已知为典型的醇的氧化方法的琼斯氧化中，使用剧毒的铬化合物。因此，在为了去除铬化合物而通过琼斯氧化生产用于药物的化合物的情况下，存在需要高精度的纯化的问题。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：美国专利5,523,479
专利文献2：pct国际申请公开no.jp-t-2007-538111的日文翻译
专利文献3：pct国际申请公开no.jp-t-2005-538226的日文翻译
技术实现要素：
本发明要解决的问题
作为对于药物修饰有用的具有末端羧基的聚乙二醇的生产的研究结果，发明人发现当通过使用强氧化剂而氧化具有末端羟基的聚乙二醇时，发生聚乙二醇链由于氧化而分解从而增大其多分散性的问题。
已经鉴于上述情况做出了本发明，并且本发明的目的是提供一种具有末端羧基的聚乙二醇的生产方法，其中，不使用例如，三甲基4-溴原丁酸酯的昂贵试剂或者剧毒的重金属化合物，并且能够抑制多分散性增大。
解决问题的手段
作为为了实现上述目的深入研究的结果，发明人发现：通过不使用具有末端羟基的聚乙二醇而使用具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇作为起始材料，并且在调整至特定ph的水中用过一硫酸钾氧化具有末端甲酰基的聚乙二醇，抑制了聚乙二醇链的氧化降解，并且末端甲酰基能够有效地转化为末端羧基。基于该发现的本发明如下。
[1]一种具有末端羧基的聚乙二醇的生产方法，包括在5℃至40℃下在水中用过一硫酸钾氧化由式(i)表示的聚乙二醇以生产由式(ii)表示的聚乙二醇，其中，所述水的ph通过选自由碳酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐和醋酸盐所组成的组中的至少一者而被调整为6至8：
ch3o(ch2ch2o)n(ch2)m-cho(i)
(在式中，n为10至1,100的数，并且m为2或3)；
ch3o(ch2ch2o)n(ch2)m-cooh(ii)
(在式中，n和m有与上述限定相同的含义)。
[2]如[1]所述的生产方法，其中，所述过一硫酸钾的量相对于一摩尔的由式(i)表示的聚乙二醇为1.5至4摩尔。
发明效果
根据本发明，能够在抑制多分散性增大的同时以高羧化率生产具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇。如此获得的聚乙二醇能够预期用于药物的修饰而不需要特别的纯化步骤，例如，离子交换或者反相hplc。本文中，羧化率是指通过从甲酰基到羧基的氧化反应所获得的反应产物中包含的由式(ii)表示的聚乙二醇的比例，并且通过在hplc分析获得的色谱图中根据各个峰的面积值而计算主峰的面积百分率，以获得羧化率。
具体实施方式
本发明的特征中的一个特征是由具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇生产具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇。此处，具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇和具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇分别指在主链的一端具有甲氧基的聚乙二醇以及在主链的另一端具有甲酰基或者羧基的聚乙二醇。
本发明的特征中的一个特征是通过氧化由式(i)表示的聚乙二醇(以下，可以简称为“聚乙二醇(i)”)而生产由式(ii)表示的聚乙二醇(以下，可以简称为“聚乙二醇(ii)”)。
ch3o(ch2ch2o)n(ch2)m-cho(i)
(在式中，n为10至1,100的数，并且m为2或3。)
ch3o(ch2ch2o)n(ch2)m-cooh(ii)
(在式中，n和m有与上述限定相同的含义。)
本发明中使用的聚乙二醇(i)的重均分子量(mw)优选为395至53,240，并且更优选为1,780至36,300。
n为10至1,100的数，并且优选为45至750的数。m为2或3，并且优选为2。相比于其中m为3的聚乙二醇(ii)，其中m为2的聚乙二醇(ii)具有与蛋白质的氨基或者生理学活性物质适当的反应性。当其中m为1的聚乙二醇(ii)转化为例如琥珀酰亚胺这样的活性酯时，酯具有高反应性，容易被水解并且导致处理困难。另一方面，其中m为4以上的聚乙二醇(ii)具有与蛋白质或者生理学活性物质的反应性减弱的可能。
本发明中使用的聚乙二醇(i)是可商购的和能够从例如nofcorp.购买。
本发明的特征中的一个特征是在水中用过一硫酸钾而氧化聚乙二醇(i)。通过使用过一硫酸钾，能够抑制聚乙二醇链的氧化降解，从而抑制获得的聚乙二醇(ii)的多分散性的增大。从反应性和经济的角度，相对于一摩尔聚乙二醇(i)，过一硫酸钾的用量优选为1.5摩尔以上，更优选为1.5至4摩尔，进一步更优选为1.5至2摩尔。
作为过一硫酸钾的来源，优选使用过一硫酸钾、硫酸氢钾和硫酸钾的复盐(例如，2khso5·khso4·k2so4)。能够从tokyochemicalindustryco.,ltd.获得复盐。
从氧化的反应率和抑制聚乙二醇链的氧化降解的角度，氧化温度(即，包含聚乙二醇(i)、过一硫酸钾和水的反应溶液的温度)为5至40℃，优选为5至25℃。氧化的反应时间优选为1至24小时，并且更优选为1至5小时。
本发明的特征在于在水中进行上述氧化。当在有机溶剂，例如，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)中进行氧化时，存在可能发生聚乙二醇链的氧化降解的可能性。
从加速氧化和抑制副反应(例如，醇醛缩合)的角度，水的ph为6至8，优选为7至8。
本发明的特征中的一个特征是通过选自由碳酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐和醋酸盐所组成的组中的至少一者而调整水的ph。不特别限定碳酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐和醋酸盐，只要其能将反应溶液的ph调整至6至8(优选为7至8)即可。碳酸盐包括，例如，碳酸氢钠和碳酸氢钾。磷酸盐包括，例如，磷酸氢钠和磷酸氢钾。柠檬酸盐包括，例如，柠檬酸三钠和柠檬酸三钾。醋酸盐包括，例如，醋酸钠和醋酸钾。其中，优选碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸氢钠和磷酸氢钾。
聚乙二醇(i)、过一硫酸钾和碳酸盐等可以同时或者分别地添加至水中。在它们分别添加的情况下，添加的顺序也不特别限定并且优选的是聚乙二醇(i)溶解在水中以获得聚乙二醇(i)的溶液，并且随后向其添加过一硫酸钾和碳酸盐等。
优选的是根据下面描述的方法向聚乙二醇(i)的溶液添加过一硫酸钾和碳酸盐等。首先，过一硫酸钾溶解在水中以获得过一硫酸钾的溶液。然后，向获得的溶液添加固体碳酸盐等或者添加通过将碳酸盐等溶解在水中而制备的碳酸盐等的溶液，而获得过一硫酸钾和碳酸盐等的溶液。随后，获得的溶液添加至聚乙二醇(i)的溶液。
此外，在过一硫酸钾的复盐与碳酸盐混合的情况下，存在复盐中包括的酸式盐与碳酸盐反应使得快速生成二氧化碳的可能性。因此，在使用过一硫酸钾的复盐和碳酸盐的情况下，期望向预先制备的复盐的溶液逐滴添加碳酸盐的溶液。
在同时向水添加聚乙二醇(i)、过一硫酸钾和碳酸盐的情况下，水的量优选为聚乙二醇(i)的0.5重量倍以上，更优选为5至20重量倍。
在向水分别添加聚乙二醇(i)、过一硫酸钾和碳酸盐等的情况下，用于溶解过一硫酸钾的水的量优选为聚乙二醇(i)的量的0.2重量倍以上，更优选为2至10重量倍，用于溶解碳酸盐等的水的量优选为聚乙二醇(i)的量的0.2重量倍以上，更优选为2至10重量倍，并且用于溶解聚乙二醇(i)的水的量优选为聚乙二醇(i)的量的0.1重量倍以上，更优选为2至10重量倍。
在过一硫酸钾和碳酸盐等的水溶液添加至聚乙二醇(i)的水溶液的情况下，添加温度(即，各个溶液的温度)优选为5至40℃，并且更优选为5至25℃。
为了抑制过一硫酸钾的分解，可以使用螯合剂。在使用螯合剂的情况下，螯合剂的量相对于1摩尔过一硫酸钾优选为3×10-2至7×10-2摩尔。作为螯合剂，使用氨羧酸螯合剂，例如，乙二胺四乙酸、羟乙基乙二胺三乙酸、二乙三胺五乙酸、三乙三胺六乙酸或者次氮基三乙酸。在使用螯合剂的情况下，优选的是螯合剂添加至过一硫酸钾的溶液。
在氧化完成之后，优选地利用例如抗坏血酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸氢纳或者亚硫酸钠这样的还原剂淬灭未反应的过一硫酸钾。然后，能够通过使用萃取剂，例如，氯仿或者二氯甲烷提取聚乙二醇(ii)。由于过一硫酸钾和碳酸盐等通过萃取留存在水中，所以仅聚乙二醇(ii)能够被选择性地提取。在聚乙二醇(ii)难以在萃取中移行至有机层中的情况下，在用还原剂淬灭过一硫酸钾之后，通过使用酸，例如，磷酸或者盐酸而将反应溶液的ph调整至2至4，并且随后可以进行萃取。
萃取温度优选为5至40℃，并且更优选为5至25℃。当温度低于5℃时，反应溶液中的盐倾向于沉淀。当温度超过40℃时，由于用作于萃取剂的氯仿或者二氯甲烷汽化，所以从安全的角度这不是优选的。
通过萃取获得的有机层在大约40℃浓缩，获得的浓缩物溶解于乙酸乙酯，并且向获得的乙酸乙酯溶液添加己烷以沉淀聚乙二醇(ii)，随后进行过滤和干燥，从而获得聚乙二醇(ii)。为了在萃取时从水层除去混合的水，可以在浓缩之前或者之后进行脱水操作。此外，可以用吸附剂等纯化获得的聚乙二醇(ii)。
根据上述的本发明的生产方法，在抑制多分散性增大的同时以高羧化率获得高纯度聚乙二醇(ii)。如此获得的聚乙二醇(ii)能够有效地修饰药物，从而能够预期增大药物的均一性。
通过本发明的生产方法获得的聚乙二醇(ii)的多分散性优选为1.08以下。能够通过在下列实例描述的条件下的gpc分析计算多分散性。
本发明的生产方法的羧化率优选为85％以上，并且更优选为90％以上。能够通过在下列实例描述的条件下的hplc分析计算羧化率。特别地，在通过hplc分析获得的色谱图上，当峰分离时，将峰在峰之间的最小值处分割，或者当峰重叠时，将峰在峰之间的拐点处分割，并且根据获得的各个峰的面积值而计算主峰的面积百分率，由此能够确定羧化率。
实例
将参考实例更具体地描述本发明。此外，除非另有说明，否则下文的“％”指“重量％”。
通过使用液相色谱法(gpc和hplc)计算实例1至2和比较例1至3中获得的聚乙二醇的多分散性和羧化率。作为液相色谱法的系统，使用waterscorp.生产的alliance。
gpc和hplc的分析条件如下所示。
gpc分析
检测器：示差折光仪
柱：ultrahydrogel500和ultrahydrogel250(waterscorp.)
移动相：醋酸钠缓冲剂(溶剂：水，ph：5.2)
流速：0.5ml/分钟
样本量：5mg/ml，20μl
柱温：30℃
hplc分析
检测器：示差折光仪
柱：阴离子交换柱es-502n(asahipak)
移动相：蚁酸铵缓冲剂(溶剂：水，ph：8.0)
流速：1.0ml/分钟
注射量：10mg/ml，20μl
柱温：30℃
[实例1]
碳酸氢钠(0.27g)溶解于离子交换水(4.0g)中以获得碳酸氢钠水溶液。接着，在离子交换水(6.0g)中搅拌过一硫酸钾、硫酸氢钾和硫酸钾的复盐(0.25g，复盐中过一硫酸钾含量＝45％，相对于1摩尔具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇的过一硫酸钾的量＝1.8摩尔，tokyochemicalindustryco.,ltd.生产)和乙二胺四乙酸(5.5mg，1.9×10-5摩尔，kantochemicalco.,inc.生产)。向获得的混悬液逐滴添加碳酸氢钠水溶液以溶解乙二胺四乙酸，从而获得过一硫酸钾水溶液。然后，在离子交换水(10g)中溶解具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇(2.0g，4.0×10-4摩尔，重均分子量＝约5,000，在式(i)中，n＝约113，m＝2，nofcorp.生产的sunbrightme-050al)，在氮气气氛和20至25℃的温度下向获得的溶液逐滴添加过一硫酸钾水溶液以制备ph7的反应溶液。在氮气气氛和23℃的温度下搅拌获得的反应溶液2小时。然后，向反应溶液添加30％的抗坏血酸钠水溶液(0.32g)，在23℃搅拌溶液30分钟，并且向该溶液添加85％的磷酸水溶液(0.26g)以将反应溶液的ph调整至3。然后，用氯仿(20g)从反应溶液萃取产物。在40℃下浓缩获得的萃取相(氯仿溶液)，并且向获得的浓缩物添加乙酸乙酯(10g)。向获得的乙酸乙酯溶液添加硫酸镁(0.2g)，在35℃下搅拌混合物30分钟，并且随后使用衬垫有5a滤纸的桐山漏斗进行抽吸过滤。向获得的过滤物添加己烷(10g)以沉淀产物。使用5a滤纸对沉淀物进行抽吸过滤，并且将沉淀物在真空中干燥以获得具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇(1.6g)。
获得的聚乙二醇中重均分子量5,000的聚乙二醇的含量＝99.4％
获得的聚乙二醇的多分散性＝1.05
羧化率＝95摩尔％
[实例2]
碳酸氢钠(0.14g)溶解于离子交换水(2.0g)中以获得碳酸氢钠水溶液。接着，在离子交换水(3.0g)中搅拌过一硫酸钾、硫酸氢钾和硫酸钾的复盐(18mg，复盐中过一硫酸钾含量＝45％，相对于1摩尔具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇的过一硫酸钾的量＝1.6摩尔，tokyochemicalindustryco.,ltd.生产)和乙二胺四乙酸(0.4mg，1.3×10-6摩尔，kantochemicalco.,inc.生产)。向获得的混悬液逐滴添加碳酸氢钠水溶液以溶解乙二胺四乙酸，从而获得过一硫酸钾水溶液。然后，在离子交换水(5.0g)中溶解具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇(1.0g，3.3×10-5摩尔，重均分子量＝约30,000，在式(i)中，n＝约680，m＝2，nofcorp.生产的sunbrightme-300al)，在氮气气氛和20至25℃的温度下向获得的溶液逐滴添加过一硫酸钾水溶液以制备ph8的反应溶液。在氮气气氛和23℃的温度下搅拌获得的反应溶液2小时。然后，向反应溶液添加30％的抗坏血酸钠水溶液(20mg)，在21℃搅拌溶液30分钟，并且向该溶液添加85％的磷酸水溶液(0.19g)以将反应溶液的ph调整至3。然后，用氯仿(10g)从反应溶液萃取产物。在40℃下浓缩获得的萃取相(氯仿溶液)，并且向获得的浓缩物添加乙酸乙酯(5.0g)。向获得的乙酸乙酯溶液添加硫酸镁(0.1g)，在35℃下搅拌混合物30分钟，并且随后使用衬垫有5a滤纸的桐山漏斗进行抽吸过滤。向获得的过滤物添加己烷(7.0g)以沉淀产物。使用5a滤纸对沉淀物进行抽吸过滤，并且将沉淀物在真空中干燥以获得具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇(0.79g)。
获得的聚乙二醇中重均分子量30,000的聚乙二醇的含量＝98.4％
获得的聚乙二醇的多分散性＝1.06
羧化率＝91摩尔％
[比较例1]
在甲苯(16g)中溶解具有末端羟基的甲氧基聚乙二醇(10g，2.0×10-3摩尔，重均分子量＝约5,000，nofcorp.生产的sunbright)和溴化四丁铵(0.68g)，并且获得的溶液在115℃下进行共沸脱水以除去包含水的甲苯(11g)。将去除甲苯后的溶液冷却至55至60℃，随后添加氢氧化钾(0.17g)和丙烯酸叔丁酯(2.0g)，并且在氮气气氛和60℃的温度下搅拌混合物6小时。接着，浓缩获得的反应溶液。在二氯甲烷(150g)中溶解获得的浓缩物并且用水(30g)洗涤溶液两次。然后，向二氯甲烷溶液添加硫酸镁(4.0g)，在35℃下搅拌混合物30分钟，随后使用衬垫有5a滤纸的桐山漏斗进行抽吸过滤，并且浓缩过滤物。然后，在二氯甲烷/三氟乙酸溶液(体积比1:1)(60ml)中溶解获得的浓缩物，并且在35℃下搅拌获得的溶液一小时。用二氯甲烷(265g)稀释搅拌之后的溶液并且用水(200g)洗涤。然后，向二氯甲烷溶液添加硫酸镁(1.0g)，在35℃下搅拌混合物30分钟，随后使用衬垫有5a滤纸的桐山漏斗进行抽吸过滤，并且浓缩过滤物。在乙酸乙酯(150g)中溶解获得的浓缩物并且向获得的溶液添加己烷(75g)以沉淀产物。使用5a滤纸对沉淀物进行抽吸过滤，将沉淀物再次溶解于乙酸乙酯(150g)，并且添加己烷(75g)以沉淀产物。使用5a滤纸对沉淀物进行抽吸过滤，并且将沉淀物在真空中干燥以获得具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇(6.9g)。
获得的聚乙二醇中重均分子量5,000的聚乙二醇的含量＝93.3％
获得的聚乙二醇的多分散性＝1.09
羧化率＝78摩尔％
[比较例2]
在n,n-二甲基甲酰胺(dmf，2.8g)中溶解具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇(1.0g，4.0×10-4摩尔，重均分子量＝约5,000，在式(i)中，n＝约113，m＝2，nofcorp.生产的sunbrightme-050al)，向获得的dmf溶液添加过一硫酸钾、硫酸氢钾和硫酸钾的复盐(0.12g，复盐中过一硫酸钾含量＝45％，相对于1摩尔具有端末甲酰基的甲氧基聚乙二醇的过一硫酸钾的量＝1.8摩尔，tokyochemicalindustryco.,ltd.生产)，并且在氮气气氛和25℃的温度下搅拌混合物3小时。使用衬垫有5a滤纸的桐山漏斗对获得的反应溶液进行抽吸过滤。用乙酸乙酯(110g)稀释获得的过滤物并且添加己烷(120g)以沉淀产物。使用5a滤纸对沉淀物进行抽吸过滤，并且将沉淀物在真空中干燥以获得具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇(0.55g)。
获得的聚乙二醇中重均分子量5,000的聚乙二醇的含量＝98.1％
获得的聚乙二醇的多分散性＝1.09
羧化率＝94摩尔％
[比较例3]
在离子交换水(7.5g)中溶解具有末端甲酰基的甲氧基聚乙二醇(5.0g，1.0×10-3摩尔，nofcorp.生产的sunbrightme-050al)，向获得的水溶液添加30％的过氧化氢水溶液(0.23g)，并且在氮气气氛和100℃的温度下搅拌混合物4小时。然后，向反应溶液添加30％的抗坏血酸钠水溶液(1.3g)，在26℃搅拌溶液30分钟以上，并且随后添加85％的磷酸水溶液(0.23g)以将反应溶液的ph调整至3。然后，用氯仿(50g)从反应溶液萃取产物。在40℃下浓缩获得的萃取相(氯仿溶液)，并且向获得的浓缩物添加乙酸乙酯(25g)。向获得的乙酸乙酯溶液添加硫酸镁(0.5g)，在35℃下搅拌混合物15分钟，并且随后使用衬垫有5a滤纸的桐山漏斗进行抽吸过滤。向获得的过滤物添加己烷(25g)以沉淀产物。使用5a滤纸对沉淀物进行抽吸过滤并且在真空中干燥以获得具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇(3.9g)。
获得的聚乙二醇中重均分子量5,000的聚乙二醇的含量＝不可测量
获得的聚乙二醇的多分散性＝1.35
羧化率＝38摩尔％
实例1至2和比较例1至3中获得的聚乙二醇的多分散性和羧化率如下表1所示。此外，根据以下示出的标准评价多分散性和转化率。评价结果也在下表1中示出。
·多分散性
○(良好)：1.08以下
×(不良)：高于1.08
·羧化率
○(良好)：85摩尔％以上
×(不良)：小于85摩尔％
表1
在满足本发明的要求的实例1和2中，能够生产羧化率良好且多分散性小的具有末端羧基的甲氧基聚乙二醇。另一方面，在与专利文献2描述的生产方法对应的比较例1中，获得羧化率低且多分散性大的聚乙二醇。此外，在dmf中进行氧化的比较例2中，获得多分散性大的聚乙二醇。另外，在过氧化氢水溶液用作氧化剂的比较例3中，获得羧化率低且多分散性大的聚乙二醇。
虽然已经参考其具体实施例详细地描述了本发明，但对本领域技术人员显而易见的是，能够在不背离本发明的精神和范围的情况下，对本发明进行各种变化或修改。
本申请基于2015年11月20日提交的日本专利申请(日本专利申请no.2015-227812)，并且该申请全文作为参考并入本申请。另外，本文引用的所有文献全部并入。