聚乙二醇连接的glp－1化合物的制作方法

专利名称：：聚乙二醇连接的glp－1化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及共价连接有一个或多个聚乙二醇分子的GLP-1化合物或其衍生物，并涉及可用于治疗这样的疾病或病症的相关组合物和方法，其中所述疾病或病症可通过降低血糖、降低食物吸收、降低胃肠排空或者降低胃肠蠕动而受益。
背景技术：
：胰高血糖素样肽-1(GLP-1)引起多种生物学效应，例如刺激胰岛素的分泌、抑制胰高血糖素的分泌、抑制胃的排空、抑制胃的蠕动或者肠的蠕动、增强葡萄糖的利用和引起体重降低。GLP-1可以进一步阻止胰腺β-细胞退化，胰腺β-细胞退化作为非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的发展进程而出现。GLP-1的明显特征是其具有刺激胰岛素分泌而不出现低血糖症相关危险的能力，该种低血糖症相关危险在使用胰岛素治疗或者通过增加胰岛素表达的一些类型的经口治疗中可以见到。GLP-1(1-37)活性很差并且两种天然存在的截短肽即GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH2在体内被迅速清除并且体内的半衰期极短，该事实限制了涉及GLP-1肽的治疗有效性。已知内源产生的二肽酰肽酶IV(DPP-IV)通过移去N-末端组氨酸和丙氨酸残基而使循环中的GLP-1肽失活，并且这是GLP-1肽体内半衰期短的主要原因。已经采取了多种方法使得在保持生物学活性的同时延长GLP-1肽的消除半衰期或者降低肽从体内的清除率。美国专利号5,705,483教导了通过在肽的N-末端进行修饰使GLP-1肽类似物能够抵抗DPP-IV的降解。延长GLP-1肽半衰期的一个备选方法是衍生化作用，其中将能够阻止DPP-IV接近肽N-末端的大的酰基连接在GLP-1的多种氨基酸上(见1997年8月22日申请的题目为“GLP-1衍生物”的国际申请号PCT/DK97/00340，其要求1996年8月30日申请的丹麦临时申请号0931/96、1996年11月8日申请的丹麦临时申请号1259/96和1996年12月20日申请的丹麦临时申请号1470/96的权利)。特定的GLP-1类似物描述于2002年1月8日申请的美国专利申请系列号60/346474，以及2002年8月21日申请的美国专利申请系列号60/405,097，现在为2003年1月3日申请的国际申请号PCT/US03/058203，它们的题目均为“延长的胰高血糖素样肽-1类似物”并在文中全文引用作为参考。这些申请描述了GLP-1(7-37)OH的类似物，其中当将多种氨基酸添加到C-末端时可以得到与天然分子相比半衰期延长和清除率降低的GLP-1肽类似物。进而，具有增强潜能的GLP-1类似物描述于2001年8月23日申请的美国专利申请系列号60/314,573，现在为2002年8月14日申请的题目为“胰高血糖素样肽-1类似物”的国际申请号PCT/US02/21325(文中进行引用)。在包括胰岛素分泌细胞在内的一些细胞类型中exendin-4可以在体外(invitro)的GLP-1受体处起作用。[Goke等，J.Biol.Chem.，(1993)26819650-19655]。特定的PEG化(PEGylated)的exendin和exendin激动剂分子描述于国际申请号PCT/US00/11814(在文中进行全文引用)。在用多种方法使GLP-1化合物与天然GLP-1相比具有更长半衰期和更大潜能的同时，也采用了另外的方法，有必要单独使用该方法或与已知的方法联合使用以进一步降低GLP-1化合物的清除率和提高GLP-1化合物的半衰期，从而优化其能力使得其可以作为治疗剂，该治疗剂可以在较长时间阶段内以最少次数进行施用。将一个或多个分子的聚乙二醇共价连接到小的生物学活性肽诸如GLP-1或者exendin-4上会造成引入不利特性的危险，例如分子的不稳定性和生物活性降低，该种危险可以严重到使所述分子不适用于治疗。然而，本发明是基于这样的发现，即将一个或多个分子的PEG共价连接到GLP-1化合物的特定残基上会导致产生具有生物学活性的、与天然GLP-1或者Val8-GLP-1相比(或者是相对于本发明的经修饰exendin-4肽的天然exendin-4)半衰期延长和清除率降低的、PEG化GLP-1化合物。本发明的PEG化GLP-1化合物作为治疗剂与天然GLP-1相比具有更大的有效性且更加方便，因为PEG化GLP-1化合物保留了天然GLP-1的全部或者部分的生物学活性并且与天然GLP-1化合物或者Val8-GLP-1(7-37)OH相比又具有延长的半衰期和/或降低的清除率。GLP-1(7-37)的血清半衰期仅为3-5分钟。当皮下施用时GLP-1(7-36)酰胺可以作用大约50分钟的时间。甚至能够抵抗内源蛋白酶裂解的GLP-1类似物和衍生物也没有足够长的半衰期以避免在24小时的阶段内进行重复施用。本发明的PEG化GLP-1化合物具有超过24小时的半衰期，这允许PEG化GLP-1化合物较少施用的同时在延长的时间阶段内维持化合物的高血液水平。此类PEG化GLP-1化合物可以在治疗上使用以治疗患有包括但不限于糖尿病、肥胖症、胃和/或肠蠕动异常和胃和/或肠排空异常的疾病的受试者，具体优点是在24小时的阶段内需要的本发明PEG化GLP-1化合物的剂量较少，在对需要此种治疗的受试者的便利方面和受试者对剂量需求的顺从可能性方面均有提高。发明概述文中阐述的本发明提供了共价连接有一个或多个聚乙二醇(PEG)分子的GLP-1化合物或者它们的衍生物，其中每一个PEG连在肽的Cys或者Lys氨基酸上或者羧基末端上，这导致产生了消除半衰期至少为1小时、优选地至少为3、5、7、10、15、20小时并且最优选地至少为24小时的PEG化GLP-1化合物。本发明的PEG化GLP-1化合物优选地具有200ml/h/kg或者更少的清除率值，更加优选地是180、150、120、100、80、60ml/h/kg或者更小并且最优选地小于50、40或者20ml/h/kg。本发明的一个实施方案是包含如SEQIDNO1所示的GLP-1(7-37)OH氨基酸序列和在其选自Lys26、Lys34和Gly37的3个、2个或者1个残基处共价连接有PEG分子的PEG化GLP-1化合物7His-Ala-Glu-10Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-15Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-20Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-25Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-30Ala-Trp-Leu-Val-Lys-35Gly-Arg-37Gly(SEQIDNO1)本发明的另一个实施方案是包含如SEQIDNO2所示的GLP-1(7-36)NH2氨基酸序列和在其选自Lys26、Lys34和Arg36的3个、2个或者1个残基处共价连接有PEG分子的PEG化GLP-1化合物7His-Ala-Glu-10Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-15Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-20Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-25Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-30Ala-Trp-Leu-Val-Lys-35Gly-Arg(SEQIDNO2)本发明的另一个实施方案是包含式I(SEQIDNO3)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37式I(SEQIDNO3)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸(homohistidine)、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe、Trp、Tyr或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa18是Ser、Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr、Trp或者Phe；Xaa20是Leu、Phe、Tyr或者Trp；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu、Ile、Ala或者Cys；Xaa30是Ala、Glu或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Arg或者Cys；Xaa37是Gly、His、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。本发明的另一个实施方案是包含式II(SEQIDNO4)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37式II(SEQIDNO4)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val、Phe、Tyr、Trp或者Cys；Xaa18是Ser、Tyr、Trp、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr或者Phe；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Arg或者Cys；和Xaa37是Gly、Cys、NH2或者缺乏，并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。本发明的另一个实施方案是包含式III(SEQIDNO5)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47-Xaa48-Xaa49-Xaa50式III(SEQIDNO5)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe、Trp、Tyr或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa18是Ser、Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr、Trp或者Phe；Xaa20是Leu、Phe、Tyr或者Trp；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu、Ile、Ala或者Cys；Xaa30是Ala、Glu或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys、Asp、Arg、Glu或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly、Pro、Arg或者Cys；Xaa37是Gly、Pro、Ser或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala、Cys或者NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Gly、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Pro、Gly、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；Xaa48是Gly、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa49是Pro、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa50是Ser、His、Cys、Ser-NH2、His-NH2、Cys-NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是如果Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45、Xaa46、Xaa47、Xaa48或者Xaa49缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。本发明的另一个实施方案是包含式IV(SEQIDNO6)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47式IV(SEQIDNO6)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe、Trp、Tyr或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa18是Ser、Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr、Trp或者Phe；Xaa20是Leu、Phe、Tyr或者Trp；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu、Ile、Ala或者Cys；Xaa30是Ala、Glu或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys、Asp、Arg、Glu或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly、Pro、Arg或者Cys；Xaa37是Gly、Pro、Ser或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是如果Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45或者Xaa46缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。本发明的另一个实施方案是包含式V(SEQIDNO7)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Ser-Tyr-Lys-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47式V(SEQIDNO7)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys、Asp、Arg、Glu或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly、Pro、Arg或者Cys；Xaa37是Gly、Pro、Ser或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala或者Cys；Xaa43是Pro、Ala或者Cys；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是如果Xaa44、Xaa45、Xaa46或者Xaa47缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。本发明的另一个实施方案是包含式VI(SEQIDNO8)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Ser-Tyr-Lys-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47式VI(SEQIDNO8)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val或者Cys；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly或者Cys；Xaa37是Pro或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala或者Cys；Xaa43是Pro、Ala或者Cys；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是如果Xaa44、Xaa45、Xaa46或者Xaa47缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。本发明的另一个实施方案是包含式VII(SEQIDNO9)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47-Xaa48-Xaa49-Xaa50式VII(SEQIDNO9)其中Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val或者Cys；Xaa22是Gly或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly或者Cys；Xaa37是Pro或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Gly、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Pro、Gly、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；Xaa48是Gly、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa49是Pro、His、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa50是Ser、His、Cys、Ser-NH2、His-NH2、Cys-NH2或者缺乏；其中所述的GLP-1化合物包含1到7个的进一步取代并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，或者羧基末端氨基酸共价连接有PEG分子；并且条件是如果Xaa44、Xaa45、Xaa46或者Xaa47缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys；并且条件是如果Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45、Xaa46、Xaa47、Xaa48或者Xaa49缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏。包括GLP-1化合物的式I-VII的优选实施方案与GLP-1(7-37)OH或者GLP-1(7-36)NH2的不同不超过7个氨基酸、不超过6个氨基酸、不超过5个氨基酸、不超过4个氨基酸、不超过3个氨基酸。式I-VII的GLP-1化合物中第8位为缬氨酸或者甘氨酸并且在第22位为谷氨酸也是优选的。式I-VII的GLP-1化合物中第8位为缬氨酸或者甘氨酸并且在第30位为谷氨酸也是优选的。式I-VII的GLP-1化合物中第8位为缬氨酸或者甘氨酸并且在第37位为组氨酸或者半胱氨酸也是优选的。式I-VII的GLP-1化合物中具有2个或者1个或者0个半胱氨酸残基也是优选的。每个GLP-1化合物中具有一个PEG分子也是优选的。本发明的另一个实施方案是包含式VIII(SEQIDNO10)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45式VIII(SEQIDNO10)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸、Arg、Tyr、Ala或者Val；Xaa8是Gly、Ser、Ala或者Thr；Xaa9是Glu、Ala或者Asp；Xaa10是Gly、Ala或者Val；Xaa11是Thr、Cys或者Ala；Xaa12是Phe、Cys、Ala或者Tyr；Xaa13是Thr或者Ser；Xaa14是Ser、Ala或者Thr；Xaa15是Asp或者Glu；Xaa16是Leu、Cys、Ala、Ile、Val或者Met；Xaa17是Ser或者Ala；Xaa18是Lys或者Ala；Xaa19是Gln或者Ala；Xaa20是Met、Ala、Leu、Ile或者Val；Xaa21是Glu或者Ala；Xaa22是Glu、Cys或者Ala；Xaa23是Glu、Cys或者Ala；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Val、Cys或者Ala；Xaa26是Arg、Cys或者AlaXaa27是Leu、Cys或者Ala；Xaa28是Phe、Ala或者Tyr；Xaa29是Ile、Val、Leu、Gly或者Met；Xaa30是Glu、Cys、Ala或者Asp；Xaa31是Trp、Ala、Phe或者Tyr；Xaa32是Leu或者Ala；Xaa33是Lys或者Ala；Xaa34是Asn、Cys或者Ala；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly或者Cys；Xaa37是Pro或者CysXaa38是Ser、Cys、NH2或者缺乏；Xaa39是Ser、Cys、NH2或者缺乏；Xaa40是Gly、Cys、NH2或者缺乏；Xaa41是Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa42是Pro、Cys、NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa45是Ser、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子；并且条件是在分子中具有2个或1个Cys；进一步的条件是Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa18、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa22、Xaa23、Xaa24、Xaa26、Xaa27、Xaa30、Xaa31、Xaa32中不多于3个为Ala；并且进一步的条件是如果Xaa1是His、Arg或者Tyr则Xaa9、Xaa10和Xaa16中至少一个是Ala；并且进一步的条件是如果Xaa38、Xaa39、Xaa40、Xaa41、Xaa42、Xaa43或者Xaa44缺乏则下游的每一氨基酸缺乏。式VIII中第7、28、29、31和32位不能为半胱氨酸否则结果会造成不可接受的活性的丧失。本发明中使用的聚乙二醇聚合物(“PEG”)优选地具有分子量为500-100,000道尔顿，更加优选地为20,000-60,000道尔顿，最优选地为20,000-40,000道尔顿，可以为线性的或者分支的分子并且可以是本领域所述的聚乙二醇衍生物。本发明包含在需要此种刺激的受试者中刺激GLP-1受体的方法，所述的方法包括对于受试者施用此处所述的有效量的PEG化GLP-1化合物的步骤。本发明还包含在需要此种刺激的受试者中刺激GLP-1受体的方法，所述的方法包括对于受试者施用此处所述的有效量的具有SEQIDNO3-10所示序列的非PEG化GLP-1化合物的步骤，其条件是SEQIDNO3-10所示序列中的分子中具有2个或者1个Cys。需要GLP-1受体刺激的受试者包括患有非胰岛素依赖型糖尿病、应激诱导的高血糖症、肥胖症、包括例如过敏性结肠综合征(irritablebowelsyndrome)和功能性消化不良(functionaldyspepsia)在内的胃和/或肠蠕动或者排空疾病。发明详述胰高血糖素样肽1(GLP-1)是作为对食物摄取的反应由肠L-细胞分泌的37个氨基酸的肽。在本领域中已经描述了许多GLP-1类似物和衍生物。本发明描述了能够导致消除半衰期延长和/或清除率降低的GLP-1化合物的修饰。在肽的特定氨基酸位点掺入1个或者2个Cys残基而提供巯基，聚乙二醇(PEG)或者PEG衍生物可以共价连接至该巯基上从而导致产生PEG化GLP-1化合物。此外，本发明的GLP-1肽、类似物或者片段中的赖氨酸残基或者羧基末端可以与一个或多个分子的PEG或者PEG衍生物进行共价连接导致产生消除半衰期延长和/或者清除率降低的分子。GLP-1(7-37)OH具有SEQIDNO1的氨基酸序列7891011121314151617His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-1819202122232425262728Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Gly-Phe-293031323334353637Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly(SEQIDNO1)如文中所使用的术语“多肽”或者“肽”意思是指包含5个以上氨基酸残基的氨基酸序列的任何结构形式(例如一级、二级或者三级结构形式)，其可以或者不可以进行进一步的修饰(例如乙酰化、羧化、磷酸化、脂化或者酰化)。术语“天然”指与在自然界中发现的氨基酸序列具有相同氨基酸序列的多肽。术语“天然”意在包含所讨论多肽的等位基因变异体。文中使用的术语“氨基酸”具有其最广的含义，并且包括天然存在的氨基酸和包括氨基酸变体和衍生物在内的非天然存在氨基酸。考虑到这种广义的定义，本领域技术人员可以认识到此处所指的氨基酸包括例如天然存在的产生蛋白质的的L-氨基酸、D-氨基酸、诸如氨基酸变体和衍生物的化学修饰氨基酸、诸如正亮氨酸、β-丙氨酸、鸟氨酸等天然存在的非产生蛋白质的氨基酸和具有本领域已知的氨基酸特征性质的化学合成的化合物。非天然存在的氨基酸的例子包括α-甲基氨基酸(例如α-甲基丙氨酸)、D-氨基酸、组氨酸样氨基酸(例如2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸和α-甲基组氨酸)、在侧链中具有额外亚甲基的氨基酸(“高”氨基酸)以及在侧链中的羧酸官能团被磺酸基团取代的氨基酸(例如半胱氨酸)。然而，本发明的GLP-1化合物优选地只包含天然存在的氨基酸，除非文中提供了特别的说明。如文中所使用的术语“GLP-1化合物”包括天然的GLP-1、[GLP-1(7-37)OH或者GLP-1(7-36)NH2]、GLP-1类似物、GLP-1衍生物、GLP-1生物活性片段、延长的GLP-1或者延长的GLP-1肽的类似物或者片段(见，例如美国专利申请系列号60/346474和60/405,097)、如文中所述的在肽的具体位置包含一个或者两个Cys残基的exendin-4类似物和exendin-4衍生物。按照本领域的惯例，天然GLP-1(7-37)OH的氨基末端被指定为残基编号7并且羧基末端为编号37。在多肽中的其它氨基酸进行连续地编号，如SEQIDNO1所示。例如，在天然分子中第12位为苯丙氨酸并且第22位为甘氨酸。如文中所使用的“GLP-1片段”或者“GLP-1化合物片段”是从GLP-1化合物的N-末端和/或者C-末端截去一个或多个氨基酸后所得到的具有生物活性的多肽。用于描述GLP-1(7-37)OH的术语可以应用于GLP-1片段。例如GLP-1(9-36)OH意味着通过从N-末端截去两个氨基酸并且从C-末端截去一个氨基酸所得到的GLP-1片段。片段中的氨基酸与GLP-1(7-37)OH中的相应氨基酸表示成相同的编号。例如，如在GLP-1(7-37)OH中一样GLP-1(9-36)OH中的第9位的是N-末端谷氨酸、第12位为苯丙氨酸并且第22位是甘氨酸。GLP-1化合物包括GLP-1类似物和exendin-4类似物。清楚地说，包含在“GLP-1化合物”内的“exendin-4类似物”总是具有一个或者两个Cys残基。优选地，GLP-1类似物具有经过修饰的GLP-1(7-37)OH或者延长的GLP-1肽或其片段的氨基酸序列以致于在相应位置有1、2、3、4、5或者6个氨基酸不同于GLP-1(7-37)OH或者GLP-1(7-37)OH片段或者在相应位置有0、1、2、3、4、5或者6个氨基酸不同的延长GLP-1肽，该种延长的GLP-1肽描述于2002年8月1日申请的美国专利申请系列号60/346474和2002年8月21日申请的美国专利申请系列号60/405,097，题目均为“延长的胰高血糖素样肽-1类似物”。最优选的GLP-1类似物描述于文中的式I、II、III、IV、V、VI和VII。最优选的exendin-4类似物描述于文中的式VIII。当在本发明的GLP-1化合物中提到时，术语“PEG化”指通过共价连接一个或多个聚乙二醇分子或者其衍生物而进行化学修饰的GLP-1化合物。此外，可以预计术语“PEG”是指如本领域已知的聚乙二醇或其衍生物(见，例如美国专利号5,445,090；5,900,461；5,932,462；6,436,386；6,448,369；6,437,025；6,448,369；6,495,659；6,515,100和6,514,491)。在本发明的PEG化GLP-1化合物中，优选地是PEG(或其衍生物)共价连接到GLP-1化合物的一个或多个赖氨酸或者半胱氨酸残基上。最优选地是PEG共价连接到GLP-1化合物的一个或多个半胱氨酸残基上。对于本发明的PEG化的exendin-4类似物，PEG是连接到一个或者两个半胱氨酸残基上，该半胱氨酸残基是在式VIII中所确定的位点被引入到exendin-4或者exendin-4类似物中的。任选地，通过接头或者间隔物分子(见美国专利6,268,343中描述的示例性的间隔物分子)可以将PEG分子连接到GLP-1化合物上。在文中用于定义GLP-1化合物的术语中，标明了所替代的氨基酸和其位置，然后是亲本肽的名称。例如，Glu22-GLP-1(7-37)OH指GLP-1(7-37)OH中正常情况下为甘氨酸的第22位被谷氨酸替代的GLP-1化合物；Val8Glu22-GLP-1(7-37)OH(或者V8E22-GLP-1(7-37)OH)指GLP-1(7-37)OH中正常情况下为丙氨酸的第8位和为甘氨酸的第22位分别被缬氨酸和谷氨酸替代的GLP-1化合物。Val8-exendin4指exendin4中正常情况下为丝氨酸的第8位被缬氨酸替代的GLP-1化合物。本发明的GLP-1化合物优选地具有促胰岛素活性。“促胰岛素活性”指作为对升高的葡萄糖水平做出反应而刺激胰岛素分泌的活性，从而导致细胞摄取葡萄糖并降低血液葡萄糖水平。通过本领域已知的方法可以测定促胰岛素活性，该方法包括使用体内实验和测定GLP-1受体结合活性或者受体活化的体外测定法，例如分别描述于Gelfand等的EP619,322和美国专利号5,120,712中的采用胰岛细胞或者胰岛素瘤细胞的测定法。常规情况下通过测定胰岛素水平或者C-肽水平来测定人体内的促胰岛素活性。为了本发明的目的，使用体外GLP-1受体信号测定法来确定本发明的PEG化GLP-1化合物是否表现出体内的促胰岛素活性。促胰岛素活性是能够用于阐明PEG化GLP-1化合物具有生物学活性的一种活性。如文中所使用的“体外潜能”是在基于细胞的测定法中对肽活化GLP-1受体的能力的测定。体外潜能可以表示为“EC50”，其为在单一剂量反应实验中能够导致50％活性的化合物的有效浓度。为了本发明的目的，体外潜能可以通过采用稳定表达人GLP-1受体的HEK-293细胞的荧光测定法进行确定。这些HEK-293细胞稳定整合了具有cAMP反应元件(CRE)所驱动表达的β-内酰胺酶(BLAM)基因的载体。GLP-1化合物(或者激动剂)与受体的相互作用启动了能够导致cAMP反应元件激活和β-内酰胺酶随后表达的信号。当β-内酰胺酶CCF2/AM底物被β-内酰胺酶(PanVeraLLC)断裂后会释放出荧光，因而为了测量GLP-1激动剂的潜能可以将β-内酰胺酶CCF2/AM底物添加至已经暴露于特定量的GLP-1激动剂的细胞。测定法进一步描述于Zlokarnik等(1998)Science27984-88中。实施例4中所列出的化合物的EC50值是使用上面描述的BLAM测定法进行确定的。通过对Val8-GLP-1(7-37)OH或者作为对照的天然GLP-1进行测定并指定对照为100％的参考值来确定相对体外潜能。术语“血浆半衰期”指在血浆中循环的相关分子的一半被清除之前的时间。一个备选使用的术语是“消除半衰期”。在血浆半衰期或者消除半衰期的上下文中使用的术语“延长”或者“更长”是指在可比条件下进行确定的相对于参考分子(例如非PEG化形式的肽或者天然肽)而言PEG化GLP-1化合物的半衰期具有统计学意义上的增加。本发明的PEG化GLP-1化合物的消除半衰期优选地为至少一小时，更加优选地至少3、5、7、10、15、20小时并且最优选地为至少24小时。在实施例5中所报导的半衰期为消除半衰期；就是它对应着消除的终末log-线性速率。本领域的技术人员应当理解半衰期是一个导出参数，它作为清除率和分布容积两者的函数而变化。清除率是对身体消除药物的能力的测量。例如，由于对药物的修饰而使得清除率下降时，可以预计半衰期提高了。然而只有当分布容积没有改变时，这种相互关系是精确的。通过方程t≈0.693(V/C)给出了一种有用的在终末log-线性半衰期(t)、清除率(C)和分布容积(V)之间的近似关系。清除率并不表示有多少药物被去除，而是由于清除而完全没有药物的生物体液诸如血液或者血浆的体积。清除率表示为单位时间内的体积。本发明的PEG化GLP-1化合物的清除率优选地为200ml/h/kg或者更少，更加优选地为180、150、120、100、80、60ml/h/kg或者更少并且最优选地为50、40或者20ml/h/kg或者更少(见实施例5)。在本发明中，在GLP-1或者GLP-1类似物肽中的第7、28、29、31或者32位没有掺入Cys氨基酸，因为掺入后会导致所得肽的活性丧失。可以考虑所有其它的残基用半胱氨酸进行替代，但是优选地是此种半胱氨酸掺入到GLP-1或者GLP-1类似物肽中选自第11、12、16、22、23、24、25、26、27、30、34、35、36和37位中的位点，优选地是每个分子不超过2个或者1个Cys氨基酸。当GLP-1分子中存在Cys氨基酸时，甚至更加优选地是它们位于选自第22、26、34、35、36和37位的位点，甚至更加优选地存在于第26和/或34位。所得到的分子是Cys氨基酸被PEG化的，这导致产生了在保留全部或者部分生物学活性的同时又具有与未修饰的分子或者天然分子相比半衰期更长的修饰的分子。在本发明中，备选的GLP-1或者GLP-1类似物肽是在第18、22和26位的1个、2个或者3个赖氨酸残基处进行PEG化或者在肽的羧基末端的氨基酸进行PEG化。本发明的另一个实施方案是具有如SEQIDNO3-10所示序列的非PEG化GLP-1化合物，其条件是在分子中有2或者1个Cys。申请者发现在GLP-1化合物中的特定位置上的残基可以用Cys进行替代并且仍然保留着生物学活性。这些非PEG化GLP-1化合物是在生产本发明的PEG化GLP-1化合物过程中使用的中间物。这些化合物也可以用作治疗剂来治疗那些不需要延长半衰期的疾病，例如过敏性结肠综合征。一旦制备和纯化了本发明使用的肽，可以通过向Cys或者Lys残基或者羧基末端氨基酸共价连接至少一个PEG分子来进行修饰。通过连接聚合物赋予难以处理的肽或者蛋白质分子适当的新特性而并不导致丧失其功能性是困难的。在本领域已经描述过广泛的多种方法来产生共价连接的PEG并且本发明使用的具体方法不用于限制(综述文章见Roberts，M.等，AdvancedDrugDeliveryReviews，54459-476，2002)。PEG的羧基末端连接可以通过使用重组GLP-1肽作为前体的酶偶联或者本领域已知的备选方法进行，该备选方法描述于例如美国专利4,343,898或者InternationalJournalofpeptide&ProteinResearch.43127-38，1994。蛋白质的PEG化可以克服与使用肽或者蛋白质作为治疗剂相关的许多药理学和毒物学/免疫学问题。然而，对于任何具体的肽，还不确定肽的PEG化形式与肽的非PEG化形式相比是否具有明显的生物活性损失。PEG化蛋白质的生物活性可受一些因素影响，这些因素例如i)PEG分子的大小；ii)连接的具体位置；iii)修饰的程度；iv)不利的连接条件；v)是否使用接头用于连接或者聚合物是否直接连接；vi)有害副产物的产生；vii)活化的聚合物造成的损伤；或者viii)电荷的保留。根据所使用的偶联反应，细胞因子的聚合物修饰尤其会导致生物活性的急剧降低。[Francis，G.E.，等，(1998)PEGylationofcytokinesandothertherapeuticproteinsandpeptidestheimportantceofbiologicaloptimizationofcouplingtechniques，Intl.J.Hem.681-18]。本发明的PEG化GLP-1化合物具有天然GLP-1或者更加优选地具有Val8-GLP-1(7-37)OH的至少0.5％的体外生物学活性。更加优选地，本发明的PEG化GLP-1化合物具有天然GLP-1或者更加优选地具有Val8-GLP-1(7-37)OH的至少1％或者3％的体外生物学活性。此种生物学活性可以通过如文中所述的(实施例4)体外潜能测定法或者本领域已知的其它GLP-1测定法进行确定。虽然如在具体的测定法中测量的那样本发明的一些PEG化GLP-1化合物的生物学活性低于天然GLP-1或者Val8-GLP-1(7-37)OH的生物学活性；但是这种活性的降低可以通过化合物延长的半衰期和/或更低的清除率值以及通过GLP-1化合物的延长的消除半衰期这一有利的特性进行补偿。还进一步考虑将exendin-4中与在GLP-1肽中发现的能够容纳半胱氨酸残基而生物学活性没有消除的位点相类似的位置用半胱氨酸进行替代，并且导致产生仍具有与GLP-1受体结合能力的exendin-4类似物。优选地，本发明的每个exendin-4类似物有不超过2或者1个Cys氨基酸。优选地，Cys存在于分子中选自第11、12、16、22、23、24、25、26、27、30、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43和44位(见式VIII)的位点；优选地选自第22、26、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43和44位的位点；甚至更加优选地是第26和/或34位的位点。分子中存在的Cys氨基酸共价连接有PEG分子上导致产生与天然exendin-4相比消除半衰期更长的PEG化exendin-4类似物。本发明的PEG化exendin-4类似物肽(如式VIII所描述)优选地具有非PEG化的exendin-4类似物的至少0.5％、1.0％、3％、10％、30％或者50％的生物学活性。野生型exendin4的序列为HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPS(SEQIDNO11)。PEG的典型形式是具有末端羟基的线性聚合物，并且分子式为HO-CH2CH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH，此处n为大约8-大约4000。末端的氢可以用保护基团例如烷基或者烷醇基进行取代。优选地，PEG具有至少一个羟基，更加优选地是它具有末端羟基。就是该羟基优选地被激活与肽进行反应。对于本发明有用的PEG可以有多种形式。本领域存在多种PEG衍生物并且它们适用于本发明。(见，例如美国专利号5,445,090、5,900,461、5,932,462、6,436,386、6,448,369、6,437,025、6,448,369、6,495,659、6,515,100和6,514,491以及Zalipsky，S.BioconjugateChem.6150-165,1995)。共价连接到本发明GLP-1化合物上的PEG分子并不是意在用于限制具体的类型。PEG的分子量优选地为500-100,000道尔顿并且更加优选地为20,000-60,000道尔顿并且最优选地为20,000-40,000道尔顿。PEG可以是线性的或者分支的并且本发明的PEG化GLP-1化合物可以具有1、2、3、4、5或者6个被连接到肽上的PEG分子。最优选地是每个PEG化GLP-1化合物分子上具有一个PEG分子；然而，当每个肽分子上不止一个PEG分子时，则优选地是不多于6个。还进一步考虑了将PEG分子的两个末端成为同功能化的或者异功能化，从而将两个或者多个GLP-1化合物交联在一起。本发明提供了具有一个或多个PEG分子共价连接到其上的GLP-1化合物。一种用于制备本发明PEG化GLP-1化合物的方法涉及到PEG-马来酰亚胺的使用，以将PEG直接连接到肽的巯基上。通过在肽的上述位点加上或者插入一个Cys残基可以引入巯基的功能性。巯基功能性还可以引入到肽的侧链上(例如含巯基酸的赖氨酸ε-氨基的酰化作用)。本发明PEG化过程利用迈克尔加成(Michaeladdition)形成稳定的硫醚接头。反应是高度特异的并且在有其它官能团存在的温和条件下进行。PEG马来酰亚胺作为反应聚合物用来制备充分定义的生物活性的PEG-蛋白质辍合物。优选地是在过程中使用相对于PEG马来酰亚胺而言超出一摩尔的含巯基GLP-1化合物从而驱动反应进行完全。反应优选地是在室温下pH4.0和9.0之间反应15-40小时进行。使用常规分离方法将过多的非PEG化的含巯基肽容易地从PEG化的产物中分离出来。制作PEG化GLP-1化合物的可以仿效的条件在实施例1中进行了阐述。半胱氨酸的PEG化可以通过使用PEG马来酰亚胺或者分叉PEG马来酰亚胺来完成。GLP-1化合物具有多种的生物学活性。例如，已经发现GLP-1刺激胰岛素的释放，从而导致细胞摄取葡萄糖并且血糖水平降低[见，例如，Mojsov，S.，(1992)Int.J.peptideProteinResearch，40333]。GLP-1在治疗非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)方面特别有希望，因为它不出现在当前的NIDDM治疗中出现的低血糖症的危险。还可以考虑将GLP-1用于对肥胖症、过敏性结肠综合征和功能性消化不良。考虑了本发明PEG化GLP-1化合物的用途，包括在制造用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、中风、心肌梗死、过敏性结肠综合征或者功能性消化不良的药物中的用途。PEG化GLP-1化合物可以同本领域已知的其它修饰组合在一起来增加GLP-1半衰期(见，例如2002年8月1日申请的美国专利申请系列号60/346474和2002年8月21日申请的美国专利申请系列号60/405,097)并且因此增加的化合物的半衰期甚至高于单独的PEG化或者其它单独的修饰方法。如文中所使用，术语“GLP-1化合物”还包括文中所述的化合物的可药用盐。本发明的GLP-1化合物可以具有足够酸的、足够碱的或者两者的官能团，并且相应地能够与许多无机碱和无机酸和有机酸的任何一种发生反应形成盐。通常采用的形成酸加成盐的酸是无机酸和有机酸，无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等等，有机酸例如对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸等等。此种盐的例子包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、一磷酸氢盐、二磷酸氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、琥珀酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸酯、乙炔-1，6-二酸酯、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、丙酸苯酯、丁酸苯酯、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、羟乙酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等等。碱加成盐包括那些无机碱来源的盐，例如铵或者碱或者碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等等。因此对于制备本发明的盐有用的此类碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾等等。本发明的PEG化GLP-1化合物特别适合于肠胃外施用，它们还可以经口、鼻施用或者通过吸入进行递送。肠胃外施用包括例如全身施用例如通过肌内、静脉内、皮下或者腹膜内注射。PEG化GLP-1化合物可以与作为治疗上述疾病的药物组合物的一部分的可药用载体、稀释剂或者赋形剂一起施用于受试者。药物组合物可以是溶液，如果肠胃外施用时可以是GLP-1化合物混悬液或者用二价金属离子例如锌络合的GLP-1化合物混悬液。适宜的药物载体包含不与肽或者肽衍生物发生相互作用的惰性成分。可以采用的标准药物制剂技术如Remington′sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCompany，Easton，PA中描述的那些技术。用于肠胃外施用的适宜药物载体包括例如无菌水、生理盐水、抑菌盐(含有约0.9％mg/ml苯甲醇的盐)、磷酸缓冲盐、Hank′s液、林格乳酸盐等等。适宜赋形剂的一些例子包括乳糖、右旋糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇和甘露醇。本发明的PEG化GLP-1化合物可以配制成施用后血浆水平可以维持有效范围达一段延长的时间阶段的制剂。影响口服肽递送的主要障碍是由于肽被酸和酶的降解导致生物利用率差、通过上皮细胞膜的吸收较差和暴露于消化道酸性pH环境后肽转变成不溶的形式。对于肽如本发明包含的那些肽的口服递送系统是本领域已知的。例如，可以使用微球体包裹PEG化GLP-1化合物然后经口递送。例如，可以将PEG化GLP-1化合物包裹在由商业可得的生物可降解的聚合物聚(丙交酯共乙交酯)-COOH和作为填充剂的橄榄油组成的微球体内。见Joseph等(2000)Diabetologia431319-1328。微球体技术的其它类型也是商业可得的，例如Alkermes的Medisorb和Prolease生物可降解聚合物。Medisorb聚合物可以用任何丙交酯异构体产生。丙交酯∶乙交酯的比率可以在0∶100和100∶0之间变动，这允许具有较广范围的聚合物特性。这使得可以设计出吸收时间为几周至几个月的递送系统和可植入装置。Emisphere公司还发表了很多文章讨论肽和蛋白质经口递送技术。例如见Leone-bay等的WO9528838，其公开了促进吸收的包含经修饰氨基酸的特定载体。文中所述的PEG化GLP-1化合物可以用于治疗患有多种疾病和病症的受试者。本发明包含的PEG化GLP-1化合物通过作用于称作“GLP-1受体”的受体而发挥它们的生物学效应(见Dillon等(1993)CloningandFunctionalExpressionoftheHumanGlucagon-likePeptide-1(GLP-1)Receptor，Endocrinology，1331907-1910)。因而可以用本发明的PEG化GLP-1化合物治疗患有对GLP-1受体刺激或者GLP-1化合物施用具有有利反应的疾病和/或病症的受试者。这些受试者被称作是“需要用GLP-1化合物进行治疗的”或者“需要GLP-1受体活化的”。受试者包括患有非胰岛素依赖型糖尿病、胰岛素依赖型糖尿病、中风(见Efendic的WO00/16797)、心肌梗塞(见Efendic的WO98/08531)、肥胖症(见Efendic的WO98/19698)、手术后代谢改变(见Efendic的美国专利号6,006,753)、功能性消化不良和过敏性结肠综合征(见Efendic的WO99/64060)的受试者。受试者还包括需要用GLP-1化合物预防治疗的受试者，例如处于发展成非胰岛素依赖型糖尿病危险之中的受试者(见WO00/07617)。另外的受试者包括那些具有葡萄糖耐性障碍或者空腹葡萄糖障碍的、相对于受试者的身高和体格体重高出正常体重25％的、行部分胰腺切除术的、一个或两个双亲中患有非胰岛素依赖型糖尿病的、患有妊娠期糖尿病的以及患有急性或者慢性胰腺炎的、处于发展成非胰岛素依赖型糖尿病危险之中的受试者。本发明的PEG化GLP-1化合物可以用于使血糖水平正常化、阻止胰腺β-细胞退化、诱导β-细胞增殖、刺激胰岛素基因转录、上调IDX-1/PDX-1或其它生长因子、改善β-细胞功能、活化休眠β-细胞、使细胞分化成β-细胞、刺激β-细胞复制、抑制β-细胞凋亡、调节体重以及诱导体重降低。PEG化GLP-1化合物的“有效量”是当施用于需要GLP-1受体活化的受试者后能够导致产生目的治疗和/或预防效果而没有导致产生不可接受副作用的量。“目的治疗效果”包括下面的一种或多种1)与疾病或者不良状况相关症状的改善；2)与疾病或者不良状况相关症状发作的延缓；3)与缺乏治疗相比寿命的延长和4)与缺乏治疗相比生活质量更高。例如，治疗糖尿病的PEG化GLP-1化合物的“有效量”是这样一种量，即与缺乏治疗相比血糖浓度得到更好地控制，由此使糖尿病并发症如视网膜病、神经病变或者肾脏疾病发作延缓的量。用于预防糖尿病的PEG化GLP-1化合物的“有效量”是指与缺乏治疗相比能够延缓血糖水平升高发作的量，这种血糖的升高需要用抗低血糖的药物磺酰尿、噻唑烷二酮类、胰岛素和/或氯苯呱哌嗪进行治疗。施用于受试者的PEG化GLP-1化合物的“有效量”还取决于疾病的类型和严重程度以及受试者的特征，例如总体健康状况、年龄、性别、体重以及对药物的耐受。一般情况下，施用本发明的PEG化GLP-1化合物会导致血浆浓度在大约5pmol/L至大约200pmol/L的范围内。经测定Val8-GLP-1(7-37)OH的最适血浆水平为30pmol/L至大约200pmol/L之间。对于成年人，本发明的PEG化GLP-1化合物的一般剂量范围为从大约0.01mg/天至大约1000mg/天。剂量范围优选地为大约0.1mg/天至大约100mg/天，更加优选地为大约1.0mg/天至大约10mg/天。“受试者”是哺乳动物，优选地是人，但是也可以是动物，例如作为陪伴动物(例如狗、猫等等)、农场动物(例如母牛、绵羊、猪、马等等)和实验室动物(例如大鼠、小鼠、豚鼠等等)。通过使用液相或者固相肽合成技术的标准方法可以制备用于产生本发明PEG化GLP-1化合物的肽。肽合成仪可以商业获得，例如位于FosterCityCA的AppliedBiosystems公司。用于固相合成的试剂可以从例如MidwestBiotech(Fishers，IN)商业获得。根据厂商的说明书，固相肽合成仪可以用于阻断干扰基团、保护欲进行反应的氨基酸、未反应氨基酸的偶联、脱偶联以及帽化反应。一般地，在室温下、在一种惰性溶剂如二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮或者亚甲基氯中、并且在偶联剂如二环己基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑和碱例如二异丙基乙胺存在的情况下，将N-氨基甲酰基保护的氨基酸和树脂上的生长肽链的N-末端氨基酸偶联起来。使用试剂如三氟乙酸或者哌啶将N-氨基甲酰基保护基从所得到的肽树脂中去除并且将下一个所期望的N-保护的氨基酸加入到肽链上而重复偶联反应。适宜的胺保护基在本领域是众所周知的并且描述于Green和Wuts，“ProtectingGroupsinorganicSynthesis”，JohnWileyandSons，1991，其全文引用作为参考。实例包括叔丁氧羟基(tBoc)和芴甲氧羰基(Fmoc)。还可以使用标准的自动固相合成方案并使用叔丁氧羟基或者芴甲氧羰基α-氨基酸和适当的侧链保护来合成肽。在合成完毕之后，使用标准的氟化氢方法将肽从固相支持物上断裂下来同时使侧链脱保护。然后使用反相层析在VydacC18柱上应用0.1％三氟乙酸(TFA)中的乙腈梯度将粗制的肽进一步纯化。为了去除乙腈，将肽从含有0.1％TFA、乙腈和水的溶液中低压冷冻干燥。通过分析型反相层析证实其纯度。通过质谱对肽进行证实。肽可以溶解在中性pH的含水缓冲液中。通过下面的实施例对本发明进行阐明，但无论如何这些实施例不意味着对本发明进行限制。实施例实施例1-GLP-1相关类似物的PEG化在允许硫醚键形成的条件下进行PEG化反应。具体而言，溶液的pH范围为大约4-9并且含巯基肽的浓度范围为超过甲氧基PEG2-MAL浓度1-10摩尔。在室温下进行正常的PEG化反应。然后使用反相HPLC或者大小排阻层析(SEC)分离PEG化GLP-1肽。使用分析型RP-HPLC、HPLC-SEC、SDS-PAGE和/或MALDI质谱对PEG化GLP-1类似物进行表征。为了产生通过硫醚键与PEG共价连接的衍生物，将含巯基GLP-1肽与40kDa的聚乙二醇-马来酰亚胺(PEG-马来酰亚胺)进行反应。例如，将肽Cex-51-C(V8E22I33C40GLP-1，长度为45aa，7.5mg，1.8μmol)溶解于2ml含有20mMEDTA的200mM磷酸盐缓冲液pH7.4。然后用氩清洗溶液。向该溶液中加入40mg甲氧基PEG2-MAL即一种分叉的PEG马来酰亚胺(Lot#PT-02B-10，ShearwaterPolymers，Inc.，Huntsville，Alabama)(PEG肽为0.55∶1的摩尔/摩尔比)。反应进行2小时。然后通过RP-HPLC纯化得到25mgPEG化肽，通过大小排阻HPLC对PEG化的肽进行表征并且测试了其体外活性。实施例2-40kDa-PEG-马来酰亚胺与GLP类似物进行反应使用马来酰亚胺活化的分叉的40kDamPEG(ShearwaterPolymers，Inc.)将GLP-1类似物例如C16E22V8GLP和V8C38GLP在所导入的半胱氨酸残基上进行选择性的PEG化。对于PEG化反应，将欲PEG化的肽溶解于100mMTRIS缓冲液pH8.0中并且加入的肽要超过40kDa-mPEG1.25倍的摩尔浓度。在室温下搅拌2-3小时进行反应然后在大约5℃的条件下在10mM柠檬酸盐，10mM磷酸盐，pH7.4中透析(7kDa膜)过夜。通过阴离子交换层析使用中性pH的NaCl梯度在Mono-Q柱(AmershamBiosciencesCorp，Piscataway，NJ)上将PEG化GLP分子进行纯化。实施例3-DSPE-3.4kDa-PEG-马来酰亚胺与GLP-1类似物反应使用马来酰亚胺活化的用一种脂即二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)终止的3.4kDamPEG(ShearwaterPolymers，Inc.)将GLP-1类似物例如C16E22V8GLP-1和V8C38GLP-1在所导入的半胱氨酸残基上进行选择性PEG化。对于PEG化反应，将肽溶解于100mMTRIS缓冲液pH8.0中并且加入的肽要超过DSPE-3.4kDa-PEG马来酰亚胺1.25倍的摩尔浓度。将无水乙醇加入至大约17％以帮助DSPE-3.4kDa-PEG-马来酰亚胺溶解。在室温下搅拌2-3小时进行反应然后在大约5℃的条件下在10mM柠檬酸盐，10mM磷酸盐，pH7.4中透析(7kDa膜)过夜。通过阴离子交换层析使用中性pH的NaCl梯度在Mono-Q柱(AmershamBiosciencesCorp，Piscataway，NJ)上将PEG化GLP分子进行纯化。实施例4-体外活性测定将使用PanVeraLLCCRE-BLAM系统表达人GLP-1受体的HEK-293细胞以20,000-40,000个细胞/孔/100μl含10％FBS的DMEM培养基接种于多聚-d-赖氨酸包被的96孔黑色、透明底的培养板中。在接种后的第二天，将培养基轻轻地拍打出去并加入80μl无血清的DMEM培养基。在接种后的第三天，向每个孔中加入20μl含有0.5％BSA和不同浓度PEG化GLP-1化合物的无血清DMEM培养基以便制作出剂量-反应曲线。通常，为了产生剂量-反应曲线使用了含有3纳摩尔-30纳摩尔PEG化肽的14个稀释浓度，从该曲线中可以确定EC50值。在与PEG化肽孵育5小时后，加入20μlβ-内酰胺酶底物(CCF2/AM，PanVeraLLC)并继续孵育1小时，此时在细胞荧光计上测定荧光强度。该测定法进一步描述于Zlokarnik等(1998)，Science，27884-88。如所描述，测试了下面的PEG化GLP-1肽并将EC50值在下面列出(将V8GLP-1的EC50值设为100％)V8C16-3.4kDaDPSE-PEG4％V8-3.4kDaPEG-FMOC87％V8C38-3.4kDaDPSE-PEG18％V8C38-40kDaPEG3％V8E22C16-40kDaPEG0.7％V8E22I33C40-40kDaPEG(CEX-51)9.4+/-1.5％[n＝5]实施例5-衍生的GLP-1肽的药物代谢动力学分析对于雄性SD大鼠以0.1mg/kg的剂量通过静脉内(IV)或者皮下(SC)途径施用PEG化GLP-1类似物(V8E22I33C40-40kDaPEG(PEG化的、C40-修饰的CEX-51))。在给药后的0-336小时内不同时间将动物进行放血处理(对于IV施用，每个时间点取2只动物，对于SC施用每个时间点取3只动物)。从每一个样品收集血浆并且用放射免疫测定法进行分析。使用模型依赖(对于IV所得的数据)和模型非依赖(对于SC所得的数据)的方法(WinNonlinPro)计算药物代谢动力学参数。药物代谢动力学参数报告于下表1。通过IV进行施用的PEG化GLP-1类似物的消除半衰期大约为1.5天，而通过SC进行施用的PEG化GLP-1类似物的消除半衰期大约为1.3天。没有不利临床观察与经IV或者SC施用0.1mg/kg的V8E22I33C40-40kDaPEG相关。对于化合物可以观察到延长的消除半衰期、降低的清除率以及相对高的皮下生物利用率(大约60％)。表1-a所观察的血浆浓度最大值。b所观察的达血浆浓度最大值的时间。c所测定的从0到无穷大的血浆浓度-时间曲线下的面积。d以天计的消除半衰期。e作为生物利用率函数的总的身体清除率。f作为生物利用率函数的稳态时的分布容积。g生物利用率的百分数。当将V8-GLP(7-37)OH以10μg/kg的剂量以同样的IV途径施用于Fischer344大鼠后，如下面所列所得到的清除率和消除半衰期极其不同。清除率1449ml/hr/kgt1/2(小时)0.05对于雄性猕猴以0.1mg/kg的剂量通过静脉内(IV)或者皮下(SC)途径施用PEG化GLP-1类似物(V8E22I33C40-40kDaPEG(PEG化的、C40-修饰的CEX-51))。在给药后的0-336小时内不同时间将动物进行放血处理。从每一个样品收集血浆并且用放射免疫测定法进行分析。使用模型依赖(对于IV所得的数据)和模型非依赖(对于SC所得的数据)的方法计算药物代谢动力学参数(WinNonlinPro)。药物代谢动力学参数报告于下表2。通过IV施用的PEG化GLP-1类似物的消除半衰期大约为59.5小时而通过SC施用的PEG化GLP-1类似物的消除半衰期大约为61.6小时。表2.a所观察的血浆浓度最大值。b所观察的达血浆浓度最大值的时间。c所测定的从0到无穷大的血浆浓度-时间曲线下的面积。d消除半衰期。e作为生物利用率函数的总的身体清除率。f作为生物利用率函数的分布容积。SD＝标准差实施例6-衍生的GLP-1肽的药物动力学分析对于雄性的C57BL/6OlaHsd-Lepob小鼠以3nmol/kg(12.33mg/kg＝0.62μg(微克)/50g小鼠)或者10nmol/kg(41mg/kg＝2μg(微克)/50g小鼠)的剂量，经皮下(SC)途径施用PEG化GLP-1类似物(V8E22I33C40-40kDaPEG(PEG化的、C40-修饰的CEX-51))，对应的对照小鼠只接受载体。在上午11:00点将动物进行单次注射PEG化GLP-1类似物或者载体(每个时间点6只小鼠)。然后将小鼠进行禁食过夜并进行IPTGG处理(1g右旋糖/kg，腹膜内注射)。在葡萄糖注射之前和之后的15、30、60、90和120分钟之后重复取样用于测定葡萄糖和胰岛素。药物动力学参数公布于下表。序列表<110>伊莱利利公司<120>聚乙二醇连接的GLP-1化合物<130>X-16020<140>60/456081<141>2003-03-19<160>10<170>PatentIn版本3.2<210>1<211>31<212>PRT<213>人(Homosapiens)<400>1HisAlaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGly151015GlnAlaAlaLysGluPheIleAlaTrpLeuValLysGlyArgGly202530<210>2<211>30<212>PRT<213>人<400>2HisAlaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGly151015GlnAlaAlaLysGluPheIleAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>3<211>31<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe，Trp，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>Xaa在位置12是Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，或Val<220><221>MISC_FEATURE<222>(13)..(13)<223>Xaa在位置13是Tyr，Trp，或Phe<220><221>MISC_FEATURE<222>(14)..(14)<223>Xaa在位置14是Leu，Phe，Tyr，或Trp<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly，Glu，Asp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala，Val，Ile，Leu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu，Ile，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala，Glu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Val或Ile<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Arg或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Gly，His，Cys，缺失，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(31)..(31)<223>酰胺化<400>3XaaXaaGluGlyXaaXaaThrSerAspXaaSerXaaXaaXaaGluXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaPheIleXaaTrpLeuXaaXaaXaaXaaXaa202530<210>4<211>31<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val，Phe，Tyr，Trp，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>Xaa在位置12是Ser，Tyr，Trp，Phe，Lys，Ile，Leu，或Val<220><221>MISC_FEATURE<222>(13)..(13)<223>Xaa在位置13是Tyr或Phe<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly，Glu，Asp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala，Val，Ile，Leu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Val或Ile<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Arg或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Gly，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(31)..(31)<223>酰胺化<400>4XaaXaaGluGlyXaaXaaThrSerAspXaaSerXaaTyrLeuGluXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaPheIleXaaTrpLeuXaaXaaXaaXaaXaa202530<210>5<211>44<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe，Trp，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>Xaa在位置12是Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，或Val<220><221>MISC_FEATURE<222>(13)..(13)<223>Xaa在位置13是Tyr，Trp，或Phe<220><221>MISC_FEATURE<222>(14)..(14)<223>Xaa在位置14是Leu，Phe，Tyr，或Trp<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly，Glu，Asp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala，Val，Ile，Leu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu，Ile，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala，Glu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Val或Ile<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys，Asp，Arg，Glu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Gly，Pro，Arg，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Gly，Pro，Ser，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(32)..(32)<223>Xaa在位置32是Ser，Pro，His或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(33)..(33)<223>Xaa在位置33是Ser，Arg，Thr，Trp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>Xaa在位置34是Ser，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(35)..(35)<223>Xaa在位置35是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(36)..(36)<223>Xaa在位置36是Pro，Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(36)..(36)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(37)..(37)<223>Xaa在位置37是Pro，Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(37)..(37)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Xaa在位置38是Pro，Ala，Arg，Lys，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(38)..(38)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(39)..(39)<223>Xaa在位置39是Ser，His，Pro，Lys，Arg，Gly，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(39)..(39)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(40)..(40)<223>Xaa在位置40是His，Ser，Arg，Lys，Pro，Gly，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(40)..(40)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(41)..(41)<223>Xaa在位置41是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(41)..(41)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(42)..(42)<223>Xaa在位置42是Gly，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(42)..(42)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(43)..(43)<223>Xaa在位置43是Pro，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(43)..(43)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(44)..(44)<223>Xaa在位置44是Ser，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(44)..(44)<223>酰胺化<400>5XaaXaaGluGlyXaaXaaThrSerAspXaaSerXaaXaaXaaGluXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaPheIleXaaTrpLeuXaaXaaXaaXaaXaaXaa202530XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa3540<210>6<211>41<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成的构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe，Trp，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>Xaa在位置12是Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，Val<220><221>MISC_FEATURE<222>(13)..(13)<223>Xaa在位置13是Tyr，Trp，或Phe<220><221>MISC_FEATURE<222>(14)..(14)<223>Xaa在位置14是Leu，Phe，Tyr，或Trp<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly，Glu，Asp，Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala，Val，Ile，Leu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu，Ile，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala，Glu或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Val或Ile<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys，Asp，Arg，Glu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Gly，Pro，Arg，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31Gly，Pro，Ser，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(32)..(32)<223>Xaa在位置32是Ser，Pro，His，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(33)..(33)<223>Xaa在位置33是Ser，Arg，Thr，Trp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>Xaa在位置34是Ser，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(35)..(35)<223>Xaa在位置35是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(36)..(36)<223>Xaa在位置36是Pro，Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(36)..(36)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(37)..(37)<223>Xaa在位置37是Pro，Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(37)..(37)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Xaa在位置38是Pro，Ala，Arg，Lys，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(38)..(38)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(39)..(39)<223>Xaa在位置39是Ser，His，Pro，Lys，Arg，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(39)..(39)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(40)..(40)<223>Xaa在位置40是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(40)..(40)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(41)..(41)<223>Xaa在位置41是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(41)..(41)<223>酰胺化<400>6XaaXaaGluGlyXaaXaaThrSerAspXaaSerXaaXaaXaaGluXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaPheIleXaaTrpLeuXaaXaaXaaXaaXaaXaa202530XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa3540<210>7<211>41<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成的构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，Tyr，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly，Glu，Asp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala，Val，Ile，Leu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Val或Ile<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys，Asp，Arg，Glu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Gly，Pro，Arg，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Gly，Pro，Ser，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(32)..(32)<223>Xaa在位置32是Ser，Pro，His，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(33)..(33)<223>Xaa在位置33是Ser，Arg，Thr，Trp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>Xaa在位置34是Ser，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(35)..(35)<223>Xaa在位置35是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(36)..(36)<223>Xaa在位置36是Pro，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(37)..(37)<223>Xaa在位置37是Pro，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Xaa在位置38是Pro，Ala，Arg，Lys，HisCys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(38)..(38)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(39)..(39)<223>Xaa在位置39是Ser，His，Pro，Lys，Arg，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(39)..(39)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(40)..(40)<223>Xaa在位置40是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(40)..(40)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(41)..(41)<223>Xaa在位置41是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(41)..(41)<223>酰胺化<400>7XaaXaaGluGlyXaaXaaThrSerAspXaaSerSerTyrLysGluXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaPheIleXaaTrpLeuXaaXaaXaaXaaXaaXaa202530XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa3540<210>8<211>41<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成的构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly，Glu，Asp，Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala，Val，Ile，Leu，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Val或Ile<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Pro或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(32)..(32)<223>Xaa在位置32是Ser，Pro，His，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(33)..(33)<223>Xaa在位置33是Ser，Arg，Thr，Trp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>Xaa在位置34是Ser，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(35)..(35)<223>Xaa在位置35是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(36)..(36)<223>Xaa在位置36是Pro，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(37)..(37)<223>Xaa在位置37是Pro，Ala，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Xaa在位置38是Pro，Ala，Arg，Lys，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(38)..(38)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(39)..(39)<223>Xaa在位置39是Ser，His，Pro，Lys，Arg，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(39)..(39)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(40)..(40)<223>Xaa在位置40是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(40)..(40)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(41)..(41)<223>Xaa在位置41是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(41)..(41)<223>酰胺化<400>8XaaXaaGluGlyXaaXaaThrSerAspXaaSerSerTyrLysGluXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaPheIleXaaTrpLeuXaaXaaXaaXaaXaaXaa202530XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa3540<210>9<211>44<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Val或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Gln或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Glu或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Lys或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Pro或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(32)..(32)<223>Xaa在位置32是Ser，Pro，His或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(33)..(33)<223>Xaa在位置33是Ser，Arg，Thr，Trp，Lys，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>Xaa在位置34是Ser，Gly，或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(35)..(35)<223>Xaa在位置35是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(36)..(36)<223>Xaa在位置36是Pro，Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(36)..(36)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(37)..(37)<223>Xaa在位置37是Pro，Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(37)..(37)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Xaa在位置38是Pro，Ala，Arg，Lys，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(38)..(38)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(39)..(39)<223>Xaa在位置39是Ser，His，Pro，Lys，Arg，Gly，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(39)..(39)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(40)..(40)<223>Xaa在位置40是His，Ser，Arg，Lys，Pro，Gly，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(40)..(40)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(41)..(41)<223>Xaa在位置41是His，Ser，Arg，Lys，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(41)..(41)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(42)..(42)<223>Xaa在位置42是Gly，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(42)..(42)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(43)..(43)<223>Xaa在位置43是Pro，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(43)..(43)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(44)..(44)<223>Xaa在位置44是Ser，His，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(44)..(44)<223>酰胺化<400>9HisAlaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGly151015GlnAlaAlaLysGluPheIleAlaTrpLeuValLysGlyGlyProXaa202530XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa3540<210>10<211>39<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成的构建体<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa在位置1是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、b-羟基组氨酸、高组氨酸、a-氟甲基组氨酸或者a-甲基组氨酸、Arg、Tyr<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>Xaa在位置2是Gly，Ser，Ala，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(3)..(3)<223>Xaa在位置3是Glu，Ala，或Asp<220><221>MISC_FEATURE<222>(4)..(4)<223>Xaa在位置4是Gly，Ala，或Val<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>Xaa在位置5是Thr，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>Xaa在位置6是Phe，Cys，Ala，或Tyr<220><221>MISC_FEATURE<222>(7)..(7)<223>Xaa在位置7是Thr或Ser<220><221>MISC_FEATURE<222>(8)..(8)<223>Xaa在位置8是Ser，Ala，或Thr<220><221>MISC_FEATURE<222>(9)..(9)<223>Xaa在位置9是Asp或Glu<220><221>MISC_FEATURE<222>(10)..(10)<223>Xaa在位置10是Leu，Cys，Ala，Ile，Val，或Met<220><221>MISC_FEATURE<222>(11)..(11)<223>Xaa在位置11是Ser或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>Xaa在位置12是Lys或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(13)..(13)<223>Xaa在位置13是Gln或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(14)..(14)<223>Xaa在位置14是Met，Ala，Leu，Ile，或Val<220><221>MISC_FEATURE<222>(15)..(15)<223>Xaa在位置15是Glu或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(16)..(16)<223>Xaa在位置16是Glu，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(17)..(17)<223>Xaa在位置17是Glu，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>Xaa在位置18是Ala或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(19)..(19)<223>Xaa在位置19是Val，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(20)..(20)<223>Xaa在位置20是Arg，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>Xaa在位置21是Leu，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(22)..(22)<223>Xaa在位置22是Phe，Ala，或Tyr<220><221>MISC_FEATURE<222>(23)..(23)<223>Xaa在位置23是Ile，Val，Leu，Gly，或Met<220><221>MISC_FEATURE<222>(24)..(24)<223>Xaa在位置24是Glu，Cys，Ala，或Asp<220><221>MISC_FEATURE<222>(25)..(25)<223>Xaa在位置25是Trp，Ala，Phe，或Tyr<220><221>MISC_FEATURE<222>(26)..(26)<223>Xaa在位置26是Leu或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>Xaa在位置27是Lys或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>Xaa在位置28是Asn，Cys，或Ala<220><221>MISC_FEATURE<222>(29)..(29)<223>Xaa在位置29是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(30)..(30)<223>Xaa在位置30是Gly或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(31)..(31)<223>Xaa在位置31是Pro或Cys<220><221>MISC_FEATURE<222>(32)..(32)<223>Xaa在位置32是Ser，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(32)..(32)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(33)..(33)<223>Xaa在位置33是Ser，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(33)..(33)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>Xaa在位置34是Gly，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(34)..(34)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(35)..(35)<223>Xaa在位置35是Ala，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(35)..(35)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(36)..(36)<223>Xaa在位置36是Pro，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(36)..(36)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(37)..(37)<223>Xaa在位置37是Pro，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(37)..(37)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Xaa在位置38是Pro，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(38)..(38)<223>酰胺化<220><221>MISC_FEATURE<222>(39)..(39)<223>Xaa在位置39是Ser，Cys，缺乏，或经修饰的残基<220><221>MOD_RES<222>(39)..(39)<223>酰胺化<400>10XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa151015XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa202530XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa3权利要求1.PEG化GLP-1化合物，其包含共价连接有至少一个PEG分子的GLP-1化合物，其中每一个PEG连接到化合物的Cys或者Lys氨基酸上或者羧基末端氨基酸上并且其中PEG化GLP-1化合物的消除半衰期至少为1小时。2.PEG化GLP-1化合物，其中所述的PEG化GLP-1化合物包含如SEQIDNO1所示的GLP-1(7-37)OH的氨基酸序列在选自第26位Lys、第34位Lys和第37位Gly中的3个、2个或者1个残基处共价连接有PEG分子。3.PEG化GLP-1化合物，其中所述的PEG化GLP-1化合物包含如SEQIDNO2所示的GLP-1(7-36)OH的氨基酸序列在选自第26位Lys、第34位Lys和第36位Arg中的3个、2个或者1个残基处共价连接有PEG分子。4.包含式I(SEQIDNO3)氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37式I(SEQIDNO3)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe、Trp、Tyr或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa18是Ser、Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr、Trp或者Phe；Xaa20是Leu、Phe、Tyr或者Trp；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu、Ile、Ala或者Cys；Xaa30是Ala、Glu或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Arg或者Cys；Xaa37是Gly、His、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。5.包含式II(SEQIDNO4)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37式II(SEQIDNO4)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val、Phe、Tyr、Trp或者Cys；Xaa18是Ser、Tyr、Trp、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr或者Phe；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Arg或者Cys；和Xaa37是Gly、Cys、NH2或者缺乏，并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。6.包含式III(SEQIDNO5)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47-Xaa48-Xaa49-Xaa50式III(SEQIDNO5)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe、Trp、Tyr或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa18是Ser、Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr、Trp或者Phe；Xaa20是Leu、Phe、Tyr或者Trp；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu、Ile、Ala或者Cys；Xaa30是Ala、Glu或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys、Asp、Arg、Glu或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly、Pro、Arg或者Cys；Xaa37是Gly、Pro、Ser或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala、Cys或者NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Gly、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Pro、Gly、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；Xaa48是Gly、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa49是Pro、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa50是Ser、His、Cys、Ser-NH2、His-NH2、Cys-NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是如果Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45、Xaa46、Xaa47、Xaa48或者Xaa49缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。7.包含式IV(SEQIDNO6)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47式IV(SEQIDNO6)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe、Trp、Tyr或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa18是Ser、Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val；Xaa19是Tyr、Trp或者Phe；Xaa20是Leu、Phe、Tyr或者Trp；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu、Ile、Ala或者Cys；Xaa30是Ala、Glu或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys、Asp、Arg、Glu或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly、Pro、Arg或者Cys；Xaa37是Gly、Pro、Ser或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是如果Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45或者Xaa46缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。8.包含式V(SEQIDNO7)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Ser-Tyr-Lys-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47式V(SEQIDNO7)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Pbe或者Cys；Xaa16是Val、Trp、Ile、Leu、Phe、Tyr或者Cys；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys、Asp、Arg、Glu或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly、Pro、Arg或者Cys；Xaa37是Gly、Pro、Ser或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala或者Cys；Xaa43是Pro、Ala或者Cys；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是如果Xaa44、Xaa45、Xaa46或者Xaa47缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。9.包含式VI(SEQIDNO8)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Xaa11-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Ser-Tyr-Lys-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47式VI(SEQIDNO8)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸；Xaa8是Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr；Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val或者Cys；Xaa22是Gly、Glu、Asp、Lys或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala、Val、Ile、Leu或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa33是Val或者Ile；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly或者Cys；Xaa37是Pro或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala或者Cys；Xaa43是Pro、Ala或者Cys；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是如果Xaa44、Xaa45、Xaa46或者Xaa47缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys。10.包含式VII(SEQIDNO9)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46-Xaa47-Xaa48-Xaa49-Xaa50式VII(SEQIDNO9)其中Xaa11是Thr或者Cys；Xaa12是Phe或者Cys；Xaa16是Val或者Cys；Xaa22是Gly或者Cys；Xaa23是Gln或者Cys；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Ala或者Cys；Xaa26是Lys或者Cys；Xaa27是Glu或者Cys；Xaa30是Ala或者Cys；Xaa34是Lys或者Cys；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly或者Cys；Xaa37是Pro或者Cys；Xaa38是Ser、Pro、His或者Cys；Xaa39是Ser、Arg、Thr、Trp、Lys或者Cys；Xaa40是Ser、Gly或者Cys；Xaa41是Ala、Asp、Arg、Glu、Lys、Gly或者Cys；Xaa42是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Ala、Arg、Lys、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa45是Ser、His、Pro、Lys、Arg、Gly、Cys、NH2或者缺乏；Xaa46是His、Ser、Arg、Lys、Pro、Gly、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa47是His、Ser、Arg、Lys、Cys、NH2或者缺乏；Xaa48是Gly、His、Cys、NH2或者缺乏；Xaa49是Pro、His、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa50是Ser、His、Cys、Ser-NH2、His-NH2、Cys-NH2或者缺乏；其中所述的GLP-1化合物包含1到6个的进一步取代并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子，或者3个、2个或者1个Lys残基共价连接有PEG分子，并且条件是如果Xaa44、Xaa45、Xaa46或者Xaa47缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏；并且条件是在分子中具有2个、1个或者0个Cys；并且条件是如果Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45、Xaa46、Xaa47、Xaa48或者Xaa49缺乏时则下游的每一氨基酸缺乏。11.权利要求10的PEG化GLP-1化合物，其中进一步的替代选自下列替代中的至少一种a)第7位His被D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸替代；b)第8位Ala被Gly、Val、Leu、Ile、Ser或者Thr替代；c)第12位Phe被Trp或者Tyr替代；d)第16位Val被Trp、Ile、Leu、Phe或者Tyr替代；e)第18位Ser被Trp、Tyr、Phe、Lys、Ile、Leu或者Val替代；f)第19位Tyr被Trp或者Phe替代；g)第20位Leu被Phe、Tyr或者Trp替代；h)第22位Gly被Glu、Asp或者Lys替代；i)第25位Ala被Val、Ile或者Leu替代；j)第27位Glu被Ile或者Ala替代；k)第30位Ala被Glu替代；l)第33位Val被Ile替代；并且m)第34位Lys被Asp、Arg或者Glu替代。12.包含式VIII(SEQIDNO10)的氨基酸序列的PEG化GLP-1化合物Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45式VIII(SEQIDNO10)其中Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨组氨酸、2-氨基组氨酸、β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基组氨酸或者α-甲基组氨酸、Arg、Tyr、Ala或者Val；Xaa8是Gly、Ser、Ala或者Thr；Xaa9是Glu、Ala或者Asp；Xaa10是Gly、Ala或者Val；Xaa11是Thr、Cys或者Ala；Xaa12是Phe、Cys、Ala或者Tyr；Xaa13是Thr或者Ser；Xaa14是Ser、Ala或者Thr；Xaa15是Asp或者Glu；Xaa16是Leu、Cys、Ala、Ile、Val或者Met；Xaa17是Ser或者Ala；Xaa18是Lys或者Ala；Xaa19是Gln或者Ala；Xaa20是Met、Ala、Leu、Ile或者Val；Xaa21是Glu或者Ala；Xaa22是Glu、Cys或者Ala；Xaa23是Glu、Cys或者Ala；Xaa24是Ala或者Cys；Xaa25是Val、Cys或者Ala；Xaa26是Arg、Cys或者AlaXaa27是Leu、Cys或者Ala；Xaa28是Phe、Ala或者Tyr；Xaa29是Ile、Val、Leu、Gly或者Met；Xaa30是Glu、Cys、Ala或者Asp；Xaa31是Trp、Ala、Phe或者Tyr；Xaa32是Leu或者Ala；Xaa33是Lys或者Ala；Xaa34是Asn、Cys或者Ala；Xaa35是Gly或者Cys；Xaa36是Gly或者Cys；Xaa37是Pro或者CysXaa38是Ser、Cys、NH2或者缺乏；Xaa39是Ser、Cys、NH2或者缺乏；Xaa40是Gly、Cys、NH2或者缺乏；Xaa41是Ala、Cys、NH2或者缺乏；Xaa42是Pro、Cys、NH2或者缺乏；Xaa43是Pro、Cys、NH2或者缺乏；Xaa44是Pro、Cys、NH2或者缺乏；并且Xaa45是Ser、Cys、NH2或者缺乏；并且其中2个或者1个Cys残基共价连接有PEG分子；并且条件是在分子中具有2个或1个Cys；进一步的条件是Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa18、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa22、Xaa23、Xaa24、Xaa26、Xaa27、Xaa30、Xaa31、Xaa32中不多于3个为Ala；并且进一步的条件是如果Xaa1是His、Arg或者Tyr则Xaa9、Xaa10和Xaa16中至少一个是Ala；并且进一步的条件是如果Xaa38、Xaa39、Xaa40、Xaa41、Xaa42、Xaa43或者Xaa44缺乏则下游的每一氨基酸缺乏。13.对需要刺激GLP-1受体的受试者刺激GLP-1受体的方法，其中所述的方法包括对受试者施用有效量的权利要求1-12中任意一项所述的PEG化GLP-1化合物的步骤。14.权利要求13的方法，其中对受试者进行非胰岛素依赖型糖尿病的治疗。15.权利要求13的方法，其中对受试者进行非胰岛素依赖型糖尿病的预防性治疗。16.权利要求13的方法，其中对受试者进行肥胖症、中风、心肌梗塞、突然发作、过敏性结肠综合征或者功能性消化不良的治疗。17.权利要求1-13中任意一项所述的PEG化GLP-1化合物的用途，其中所述的用途是用于制备治疗非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、中风、心肌梗塞、过敏性结肠综合征或者功能性消化不良的药物。18.权利要求17的用途，其中药物用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病。19.权利要求17的用途，其中药物用于治疗肥胖症。20.权利要求17的用途，其中药物用于治疗过敏性结肠综合征或者功能性消化不良。全文摘要本发明提供了偶联有至少一个聚乙二醇分子或其衍生物的GLP－1化合物，导致产生了与其非PEG化肽相比半衰期延长和清除率减慢的生物活性肽。这些PEG化GLP－1化合物和组合物可用于治疗能够通过降低血液葡萄糖、抑制胃和/或肠蠕动和胃和/或肠排空或者抑制食物摄取而受益的糖尿病、肥胖症、过敏性结肠综合征和其它疾病。文档编号A61K38/00GK1832959SQ200480007436公开日2006年9月13日申请日期2004年3月19日优先权日2003年3月19日发明者R·D·迪马其,W·格莱斯纳,R·L·小米利肯,A·M·维克,张连山申请人:伊莱利利公司