新颖的抗MMP16抗体及使用方法交叉引用的申请与流程

序列表本申请含有序列表，该序列表已以ascii格式经由efs-web提交且其全部内容以引用的方式并入本文中。所述ascii复本创建于2016年12月13日，命名为s69697_1340wo_sc7301wo01_st25.txt且大小为112kb(115,073字节)。本申请总体上涉及新颖的抗mmp16抗体或其免疫反应性片段及包含其的组合物，包括抗体药物缀合物，用于治疗、诊断或预防癌症及其任何复发或转移。本发明的所选实施例提供了这样的抗mmp16抗体或抗体药物缀合物用于治疗癌症(包括降低肿瘤发生细胞频率)的用途。发明背景干细胞和祖细胞的分化和增生是正常进程，其作用是在器官发生、细胞修复和细胞替换期间对组织生长提供支持。该系统被紧密调节以确保基于生物体的需求只有适当的信号生成。细胞增生和分化通常只在必要时因替换受损或垂死细胞或因生长而出现。然而，可以由许多因素触发这些过程的破坏，这些因素包括各种信号转导化学物质不足或其过于丰富、存在改变的微环境、基因突变或其组合。正常细胞增生和/或分化的破坏可以导致各种病症，包括增生性病症，如癌症。癌症的常规治疗包括化学疗法、放射疗法和免疫疗法。通常这些治疗是无效的并且手术切除不能提供可行的临床替代方案。当前医疗标准的限制在患者经受一线治疗并随后复发的这些情况下是特别明显的。在这种情况下，难治性肿瘤(通常是侵袭性且不能治愈的)频繁出现。多年来，许多肿瘤的总生存率大体保持不变，至少部分归因于现有疗法预防复发、肿瘤复发和转移的失败。因此，对开发针对增生性病症更具靶向性并且有效的疗法仍然存在巨大需求。本发明解决了这一需求。技术实现要素：在广泛方面中，本发明提供经分离的抗体，及相应的抗体药物或诊断缀合物(adc)，或其组合物，其特异性结合于人类mmp16决定子。在某些实施例中，mmp16决定子是在肿瘤细胞上表达的mmp16蛋白，而在其他实施例中，mmp16决定子在肿瘤起始细胞上表达。在其他实施例中，本发明抗体结合mmp16蛋白且与结合人类mmp16蛋白上的表位的抗体竞争结合。在所选实施例中，本发明包括以下抗体，该抗体包含以下分离的抗体或与其竞争结合，该分离的抗体与表达人mmp16(具有seqidno:1)的细胞结合，其中该分离的抗体包含：(1)seqidno:21的轻链可变区(vl)和seqidno:23的重链可变区(vh)；或(2)seqidno:25的vl和seqidno:27的vh；或(3)seqidno:29的vl和seqidno:31的vh；或(4)seqidno:33的vl和seqidno:35的vh；或(5)seqidno:37的vl和seqidno:39的vh；或(6)seqidno:41的vl和seqidno:43的vh；或(7)seqidno:45的vl和seqidno:47的vh；或(8)seqidno:49的vl和seqidno:51的vh；或(9)seqidno:53的vl和seqidno:55的vh；或(10)seqidno:57的vl和seqidno:59的vh；或(11)seqidno:61的vl和seqidno:63的vh；或(12)seqidno:65的vl和seqidno:67的vh；或(13)seqidno:69的vl和seqidno:71的vh；或(14)seqidno:73的vl和seqidno:75的vh；或(15)seqidno:77的vl和seqidno:79的vh；或(16)seqidno:81的vl和seqidno:83的vh；或(17)seqidno:85的vl和seqidno:87的vh；或(18)seqidno:89的vl和seqidno:91的vh；或(19)seqidno:29的vl和seqidno:93的vh。在另一方面中，本发明包括与包含轻链可变区和重链可变区的mmp16结合的抗体，其中该轻链可变区具有如seqidno:21、seqidno:25、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:37、seqidno:41、seqidno:45、seqidno:49、seqidno:53、seqidno:57、seqidno:61、seqidno:65、seqidno:69、seqidno:73、seqidno:77、seqidno:81、seqidno:85或seqidno:89所示的轻链可变区的三个cdr；并且该重链可变区具有如seqidno:23、seqidno:27、seqidno:31、seqidno:35、seqidno:39、seqidno:43、seqidno:47、seqidno:51、seqidno:55、seqidno:59、seqidno:63、seqidno:67、seqidno:71、seqidno:75、seqidno:79、seqidno:83、seqidno:87、seqidno:91或seqidno:93所示的重链可变区的三个cdr。在其他方面中，本发明包含人源化抗体，这些人源化抗体具有包含seqidno:101的vl和包含seqidno:103的vh或具有包含seqidno:105的vl和包含seqidno:107的vh或具有包含seqidno:109的vl和包含seqidno:107的vh。在某些实施例中，这些人源化抗体将包括位点特异性抗体。在其他所选实施例中，本发明将包含选自由以下组成的组的人源化抗体：hsc73.38(seqidno:120及121)、hsc73.38ss1(seqidno:120及122)、hsc73.39(seqidno:123及124)、hsc73.39v1(seqidno:125及124)及hsc73.39v1ss1(seqidno:125及126)。在本发明的一些方面，该抗体包含嵌合抗体、cdr接枝抗体、人源化抗体或人抗体或其免疫反应性片段。在本发明的其他方面，该抗体(优选地包含上述序列的全部或部分)是内化抗体。在又其他实施例中，所述抗体将包括位点特异性抗体。在其他所选实施例中，本发明包括掺入任何前述抗体的抗体药物缀合物。在某些方面中，本发明包含编码本发明的抗mmp16抗体或其片段的核酸。在其他实施例中，本发明包括包含一种或多种以上描述的核酸的载体或者包含所述核酸或载体的宿主细胞。如以上暗指的，本发明进一步提供了抗mmp16抗体药物缀合物，其中如本文所披露的抗体与有效载荷缀合。在某些方面，本发明包括与hmmp16免疫优先缔合或结合的adc。本发明的相容性抗mmp16抗体药物缀合物(adc)通常可以包括式：ab-[l-d]n或其药学上可接受的盐，其中a)ab包含抗mmp16抗体；b)l包含任选的接头；c)d包含药物；并且d)n为从约1至约20的整数。在某些方面中，本发明的adc包含抗mmp16抗体，诸如上述抗体或其免疫反应性片段。在其他实施例中，本发明的adc包含细胞毒性化合物，该细胞毒性化合物选自放射性同位素、卡奇霉素、吡咯苯并二氮杂卓(pbd)、苯并二氮杂卓衍生物、澳瑞他汀、海兔毒素、多卡米新、美登木素生物碱或本文所述的另外的治疗性部分。在某些优选的实施例中，披露的adc将包含pbd。进一步提供了包含如本文所披露的抗mmp16adc的药物组合物。在某些实施例中，所述组合物将包含大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或甚至大于约95％的所选药物-抗体比(dar)。在一些实施例中所选dar将是2，而在其他实施例中所选dar将是4，并且在其他实施例中所选dar将是6，并且在又其他实施例中所选dar将是8。本发明的另一方面是一种治疗癌症的方法，该方法包括向对有需要的受试者给予如本文所描述的那些药物组合物。在某些方面，所述癌症包括血液系统恶性肿瘤，例如像急性髓性白血病或弥漫性大b细胞淋巴瘤。在其他方面，该受试者将患有实体瘤。关于这样的实施例，所述癌症优选地选自下组，该组由以下组成：肾上腺癌、肝癌、黑素瘤、肾癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、食管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌两者)、甲状腺癌和胶质母细胞瘤。在某些实施例中，受试者患有黑素瘤或胃癌。此外，在所选实施例中，治疗上述癌症的方法包括向该受试者给予除本发明的抗mmp16adc以外的至少一种另外的治疗性部分。在另一个实施例中，本发明包含一种减少肿瘤细胞群中的肿瘤起始细胞的方法，其中该方法包括使肿瘤起始细胞群与如本文中所描述的adc接触(例如体外或体内)，借此降低肿瘤起始细胞的频率。在一方面，本发明包括一种将细胞毒素递送到细胞中的方法，该方法包括使该细胞与以上所描述的adc进行接触。在另一方面，本发明包含检测、诊断或监测受试者中的癌症(例如黑素瘤或恶性血液病)的方法，该方法包含以下步骤：使肿瘤细胞与mmp16检测剂接触(例如体外或体内)，及检测与肿瘤细胞缔合的mmp16试剂。在所选实施例中，检测剂应包含与mmp16基因型决定子缔合的抗mmp16抗体或核酸探针。在相关实施例中，该诊断方法将包括免疫组织化学(ihc)或原位杂交(ish)。本领域的技术人员将了解，此类试剂任选地可经如下文所披露的效应子、标记物或报道子标记或与其缔合且使用多种标准技术(例如mri、cat扫描、pet扫描等)中的任一种进行检测。类似地，本发明还提供了有用于诊断、监测或治疗mmp16相关病症(如癌症)的试剂盒或装置及相关方法。为此，本发明优选地提供可用于检测、诊断或治疗mmp16相关病症的制品，该制品包含含有mmp16adc的接受器及用于使用所述mmp16adc来治疗、监测或诊断mmp16相关病症或提供该病症的给药方案的指导材料。在所选实施例中，所述装置和相关方法将包括接触至少一种循环肿瘤细胞的步骤。在其他实施例中，所披露的试剂盒将包含说明书、标签、插入物、阅读器或指示该试剂盒或装置用于诊断、监测或治疗mmp16相关癌症或为其提供给药方案的类似物。前述是一种概述并因此，在必要时，含有简化、概括及细节的省略；因此，本领域的技术人员将理解，该概述只是说明性的并且不旨在以任何方式进行限制。在此描述的方法、组合物和/或装置和/或其他主题内容的其他方面、特征及优势将于在此所陈述的传授内容中变得显而易见。提供本概述从而以简单的形式介绍概念的选择，并在下面的详细描述部分对其进一步描述。附图说明图1a及1b分别提供mmp16的规范长同种型的经注释的氨基酸序列(图1a)及其示意图(图1b)；图2显示如使用源自患者源异种移植物(pdx)癌症干细胞(csc)、非致瘤(ntg)细胞及正常组织的rna的全转录体(solid)测序所测量的mmp16的表达水平；图3描绘在自正常组织及自多个pdx肿瘤分离的rna样品中的如通过qrt-pcr所测量的mmp16转录物的相对表达水平；图4显示通过在正常组织和各种pdx细胞系中进行微阵列杂交所测量的mmp16转录物表达的归一化强度值；图5显示在来自癌基因组图谱(tcga)(一种公开可用的数据集)的正常组织和原发性肿瘤中的mmp16转录物的表达；图6描绘基于来自tcga数据集的原发性肾癌肿瘤中mmp16转录物的高和低表达的卡本-麦尔存活曲线(kaplan-meiersurvivalcurves)，其中使用rpkm值的算术平均值测定临界指数值；图7a及7b以表格形式提供示例性抗mmp16抗体的染色、同种型、细胞杀死及大鼠交叉反应性特征；图8a及8b以表格形式显示示例性抗mmp16抗体与hmmp15及hmmp24交叉反应的能力，如利用msdelisa(图8a)及比色elisa(图8b)所观察到的；图9说明大量示例性pdx肿瘤细胞系中的mmp16蛋白质表达水平；图10a及10b展示在黑素瘤及胃pdx肿瘤细胞系中所观察到的mmp16表达与若干不同体细胞突变之间的关联；图11a-11h提供鼠类抗mmp16抗体的经注释的氨基酸及核酸序列，其中图11a及11b显示示例性鼠类抗mmp16抗体的轻链(图11a)及重链(图11b)可变区(seqidno:21-93，奇数)的连续氨基酸序列，图11c显示编码上文所提及的轻链及重链可变区的核酸序列(seqidno:20-92，偶数)，图11d描绘人源化vl及vh结构域的氨基酸序列，且图11e描绘人源化vl及vh结构域的核酸序列(seqidno:100-109)，图11f显示全长重链及轻链的氨基酸序列(seqidno:120-126)，且图11g及11h描绘sc73.38(图11g)和sc73.39(图11h)鼠类抗体的轻链及重链可变区的cdr，如使用kabat、chothia、abm及contact方法所测定的；图12a及12b显示使用免疫组织化学对多个pdx肿瘤样品(图12a)及原发性黑素瘤样品(图12b)中的膜性hmmp16蛋白表达的h-评分；图13是浓度依赖性曲线，其显示间接连接至皂草素的所选抗mmp16鼠类、嵌合及人源化抗体内化至过表达mmp16蛋白的hek293t细胞中并杀死这些细胞的能力；图14描绘在体外抗mmp16adc内化且杀死过表达mmp16蛋白的hek293t细胞的能力；图15显示与同种型对照染色的群体(实心灰色)相比，在黑素瘤pdx细胞系(黑线)中通过流式细胞术测定的mmp16的表面蛋白质表达；图16展示在体内抗mmp16adc能够内化至黑素瘤中且引起显著且持久的肿瘤体积减小；以及图17显示在体内与载体对照(灰色条)及同种型对照(黑色条)二者相比，抗mmp16adc能够减小黑素瘤pdx肿瘤起始细胞频率。具体实施方式本发明能以许多不同的形式实施。本文披露了本发明的非限制性的说明性实施例，其例示了本发明的原理。在此使用的任何章节标题只是出于组织的目的，而不应被解释为限制所描述的主题。除非另外指出，否则出于本披露的目的，所有标识的序列登录号都可以见于ncbi参考序列(refseq)数据库和/或ncbi档案序列数据库。已经惊奇地发现，mmp16表型决定子与各种增生性病症(包括瘤形成)临床相关，并且mmp16蛋白及其变体或同种型提供可以用于治疗相关疾病的有用肿瘤标记物。就这一点而言，本发明提供了抗体药物缀合物，其包含工程化抗mmp16抗体靶向剂和细胞毒性有效载荷。如下面更详细论述的和所附实例中所阐明的，所披露的抗mmp16adc在消除肿瘤发生细胞方面特别有效，并且因此有用于某些增生性病症或其进展或复发的治疗和预防。此外，所披露的adc组合物可以表现出当与包含相同组分的常规adc组合物相比时相对较高的dar＝2百分比和意外的稳定性，所述稳定性可以提供改进的治疗指数。另外，已经发现，mmp16标记物或决定子(如细胞表面mmp16蛋白)在治疗上与癌症干细胞(又称为肿瘤永存细胞)相关联并且可以被有效地用于使癌症干细胞消除或沉默。通过使用如本文所披露的抗mmp16缀合物选择性减少或消除癌症干细胞的能力是令人惊讶的，因为已知这样的细胞一般对许多常规治疗具有抗性。也就是说，传统以及更近期的靶向治疗方法的有效性经常受到抗性癌症干细胞的存在和/或出现的限制，这些抗性癌症干细胞甚至在面临这些各样的治疗方法时也能够保持肿瘤生长。另外，与癌症干细胞相关联的决定子因表达量低或不一致、无法保持与肿瘤发生细胞的关联或无法存在于细胞表面处而经常产生较弱的治疗靶。与现有技术的传授内容形成鲜明的对比，本披露的adc和方法有效地克服了这一固有的抗性并且特异性消除、耗竭、沉默这些癌症干细胞或促进这些癌症干细胞的分化，由此消除了它们持续或再诱导潜在肿瘤生长的能力。因此，尤其值得注意的是，mmp16缀合物(如本文所披露的那些)可以被有利地用于所选增生性(例如赘生性)病症或其进展或复发的治疗和/或预防。应理解的是，尽管下文，特别是在特定结构域、区域或表位方面，或在包含神经内分泌特征的癌症干细胞或肿瘤及它们与所披露的抗体药物缀合物的相互作用的上下文中将广泛地论述本发明的优选实施例，但本领域的技术人员应理解的是，本发明的范围不受这些示例性实施例限制。相反地，本发明的最广泛的实施例和所附权利要求广泛地并且明确地针对抗mmp16抗体和缀合物(包括本文所披露的那些)以及它们在治疗和/或预防多种mmp16相关或介导的病症(包括赘生性或细胞增生性病症)中的用途，不管任何特定的作用机制或特异性靶向的肿瘤、细胞组分或分子组分如何。i.mmp16生理学基质金属蛋白酶(mmp)或基质蛋白酶(matrixin)是一组参与多个过程(例如组织的发育重塑、胎盘植入、关节炎中的软骨降解及肿瘤侵袭)的细胞外基质降解酶(matrisian，1992；pmid:1445287)。mmp是最初合成为无活性酶原的锌依赖性肽链内切酶，其至少由以下各项构成：(1)前结构域(pro-domain)，(2)催化结构域，其包括高度保守的hexghxxgxxh基序(seqidno:11)，及(3)不同的四叶式β-螺旋桨结构，即血液结合素样结构域，其通过富含脯氨酸的弹性铰链连接至催化结构域。前结构域负责将mmp维持在酶无活性状态，而血液结合素样结构域负责介导赋予底物特异性所需的蛋白质-蛋白质相互作用。催化结构域内的如下两个氨基酸序列基序对于mmp功能至关重要：hexghxxgxxh基序及prcg(v/n)dp基序(seqidno:12)。hexghxxgxxh基序内的三个组胺酸负责mmp肽链内切酶活性所需的锌离子辅因子的配位；prcgvdp基序含有负责通过与锌配体配位来维持酶原中的潜伏期的半胱氨酸。一般而言，活性酶的产生需要蛋白水解移除前结构域或化学修饰半胱氨酸以破坏cys-zn2+相互作用(例如，所谓的半胱氨酸开关；kessenbrock等人，2010；pmid:20371345)。mmp被分泌(mmp1-13、mmp18-23、mmp26-28)或锚定至细胞膜(mt-mmp、mmp14-17及mmp24-25)。后者这些mmp分类为膜型mmp(mt-mmp)。除所有上述结构域及氨基酸基序外，mt-mmp在前结构域的氨基末端也含有rxr/kr基序(seqidno:13)，其充当前转化酶(pro-convertase)(如弗林蛋白酶(furin))的识别位点，这使得能够在到达细胞表面之前裂解前结构域且随后活化酶原。mt-mmp具有醣磷脂酰肌醇锚定结构域(mmp17、mmp25)(myriampolette等人，2004；pmid:15036258)或跨膜结构域，其后为短胞质尾区(mmp14-16、mmp24)，这些结构域中的任一者促进酶活性定位至细胞周围/基质结构域，同时提供膜中的横向移动。基质金属蛋白酶-16(mmp16；也称为mmp-x2、膜型基质金属蛋白酶3、mt-mmp3、膜型-3基质金属蛋白酶、mt3-mmp及c8orf57)是人类mt-mmp家族的6个成员中之一。mmp16是iii型胶原酶，但也识别宽范围的其他细胞外底物，包括软骨蛋白多醣、明胶、纤连蛋白、玻连蛋白、层黏蛋白-1、纤维蛋白及kiss-1(shimada等人，1999；pmid:10411655；itoh，2015；pmid:25794647)。代表性mmp16蛋白直向同源物包括(但不限于)人类(np_005932)、恒河猴(xp_001084206)、大鼠(np_542954)及小鼠(np_062698)。在人类中，mmp16基因由染色体8q21.3处跨越约29kbp的10个外显子组成。人类mmp16基因座的转录产生至少两个已知rna转录物，编码607个氨基酸蛋白质(np_005932)的较长规范转录物(nm_005941)，及可替代的认为编码457个氨基酸蛋白质(xp_011515344)的经剪切的较短转录物(xm_011515344)。人类mmp16蛋白的氨基酸序列显示于图1a(seqidno:1)中，其中相关结构域及基序注释如下：信号肽以小写粗体表示；加下划线处为前结构域，且关键半胱氨酸开关残基用星号注释且斜体为弗林蛋白酶样识别序列；催化结构域的锌配位基序加框表示；跨膜结构域以加粗斜体小写字母表示，且短细胞质结构域以小写字母字体表示。图1b是规范mmp16蛋白的示意图(实质上依照polette等人，2004，pmid15036258)。尽管mmp16所识别的底物是多样的，但mmp16无法降解1型胶原。相反，据报导其降解纤维蛋白基质。mmp16无效小鼠是可孕的，但显示骨骼发育缺陷。也已显示，mmp16降解mmp14，与前mmp2(pro-mmp2)及timp2相互作用，且裂解nogo-66受体1。尽管对timp2、timp3及tim4的抑制敏感，但mmp16对timp1不敏感。在癌细胞中，mmp16表达频繁失调，且mmp16与其他mmp之间的相互作用是复杂的。在一些情况下，mmp16活化其他mmp，以促进肿瘤细胞侵袭。在特征为肿瘤细胞比对胶原模式、高淋巴管密度、淋巴管侵袭及早期淋巴结转移的侵袭性黑素瘤中可见mmp16的过表达，且mmp16过表达预测较差结果(tatti等人，2015；pmid:25808867)。有趣的是，已显示一些mmp家族成员(例如，mmp3及mmp14)通过独立于蛋白水解活性的机制、即通过血液结合素结构域的功能来促进肿瘤生长(kessenbrock等人，2015；pmid:25661772)。已显示，mmp3的血液结合素结构域与规范wnt信号传导的抑制剂wnt5a相互作用，且mmp3的过表达对乳房干细胞中的规范wnt信号传导的效应进行表型模拟。因此有意义的是，伴随活化β-连环蛋白突变mmp16也在侵袭性胃癌中高度表达，这暗示正反馈效应(lowy等人，2006；pmid:16651426)。作为细胞外基质(ecm)降解蛋白酶的mt-mmp的生理学以及其利用侵袭性黑素瘤及胃癌的过表达表明mmp16作为治疗性介入的理想候选者。ii.癌症干细胞根据当前模型，肿瘤包括非肿瘤发生细胞和肿瘤发生细胞。非肿瘤发生细胞不具有自我更新的能力并且不能可再生地形成肿瘤(甚至当以过量细胞数移植到免疫功能不全的小鼠中时)。肿瘤发生细胞，本文也称为“肿瘤起始细胞”(tic)具有形成肿瘤的能力，其通常构成肿瘤细胞群的0.01-10％的分数。针对造血系统恶性肿瘤，tic可以是非常罕见的，特别是在急性髓样恶性肿瘤(aml)中在1:104至1:107范围内，或者是非常充足的，例如在b细胞谱系的淋巴瘤中。肿瘤发生细胞涵盖肿瘤永存细胞(tpc)(互换地称为癌症干细胞(csc))和肿瘤祖细胞(tprog)两者。csc，像在正常组织中支持细胞分类的正常干细胞一样，能够无限自我复制同时保持多谱系分化的能力。就这一点而言，csc能够产生肿瘤发生的子代和非肿瘤发生的子代，并能够完全重现亲代肿瘤的异质细胞组成，如通过连续的分离并将少数的分离的csc移植到免疫功能不全的小鼠中所证明的。证据表明，除非这些“种子细胞”被消除，肿瘤才更可能转移或重新出现，导致疾病的复发和最终进展。tprog，像csc一样，具有给原代移植物中的肿瘤生长供给燃料的能力。然而，不像csc，它们不能够重现亲代肿瘤的细胞异质性，并且在随后的移植物中再起始肿瘤发生的效率较低，因为tprog通常只能够进行有限数量的细胞分裂，如通过将少数的高度纯化的tprog连续移植到免疫功能不全的小鼠中所证明的。tprog可以进一步分成早期tprog和晚期tprog，它们可以通过表型(例如，细胞表面标记物)和重现肿瘤细胞架构的不同能力来区别。然而它们两者都不能重现肿瘤至与csc相同的程度，早期tprog具有比晚期tprog更大的重现亲代肿瘤特征的能力。尽管存在前述差别，但也已经显示，一些tprog群在个别情况下可以得到通常归因于csc的自更新能力并且它们自身变为csc。csc表现出更高的致瘤性，并且通常比以下相对更不活动：(i)tprog(早期和晚期tprog两者)；和(ii)非肿瘤发生细胞，如终末分化肿瘤细胞和肿瘤浸润细胞，例如，可以来源于csc并且通常包含肿瘤块的成纤维细胞/基质细胞、内皮细胞以及造血细胞。鉴于常规疗法和方案在很大程度上已经被设计成使肿瘤减负荷并且迅速地攻击增生性细胞，因此csc比更快增生的tprog和其他块状肿瘤细胞群(如非肿瘤发生细胞)更耐受于常规疗法和方案。可以使csc相对地化学耐受于常规疗法的其他特征增加了多药抗性转运体的表达，增强了dna修复机制及抗细胞凋亡基因表达。这样的csc性质已经被给晚期瘤患者提供持久响应的标准治疗方案的失败所牵连，因为标准的化学疗法不能有效靶向实际上给持续的肿瘤生长和复发供给燃料的csc。已经惊奇地发现，mmp16表达以使肿瘤发生细胞亚群易感于如本文所陈述的治疗的方式与各种肿瘤发生细胞亚群相关。本发明提供了抗mmp16抗体，其可以特别有用于靶向肿瘤发生细胞，并且可以用于沉默、敏化、中和、减少频率、阻断、废除、干扰、降低、阻碍、抑制、控制、耗尽、节制、调解、减少、重新编程、消除、杀死或以其他方式抑制(统称为“抑制”)肿瘤发生细胞，从而促进增生性病症(例如，癌症)的治疗、管理和/或预防。有利地，可以选择本发明的抗mmp16抗体，因此，无论mmp16决定子的形式(例如，表型的或基因型的)如何，它们优选地在给予于受试者后降低肿瘤发生细胞的频率或致瘤性。肿瘤发生细胞频率的降低可以因以下原因而发生：(i)肿瘤发生细胞的抑制或根除；(ii)控制肿瘤发生细胞的生长、扩增或复发；(iii)干扰肿瘤发生细胞的起始、繁殖、维持或增生；或(iv)通过其他方式妨碍肿瘤发生细胞的存活、再生和/或转移。在一些实施例中，肿瘤发生细胞的抑制可以由于一个或多个生理途径的改变而发生。该途径的改变，无论是通过肿瘤发生细胞的抑制或消除、其潜能的修饰(例如，通过诱导的分化或小生境破坏)或以其他方式干扰肿瘤发生细胞影响肿瘤环境或其他细胞的能力，允许通过抑制肿瘤发生、肿瘤维持和/或转移及复发来进行mmp16相关病症的更有效治疗。应进一步理解的是，所披露的抗体的相同特征使得它们在治疗复发性肿瘤方面特别有效，所述复发性肿瘤已经证实对标准治疗方案具有抗性或难治性。可以用于评估肿瘤发生细胞的频率降低的方法包括但不限于细胞计数分析或免疫组织化学分析，优选通过体外或体内有限稀释分析进行(dylla等人2008，pmid:pmc2413402和hoey等人2009，pmid:19664991)。可以通过将分级或未分级的肿瘤细胞(例如，分别来自治疗或未治疗的肿瘤)在培育菌落形成的固体培养基上培养，并计数和表征生长的菌落来进行体外有限稀释分析。可替代地，可以将肿瘤细胞连续稀释到含有液体培养基的平板的孔中，并且可以在接种后的任何时间，但优选在接种后10天以上，将每个孔针对菌落形成评分为呈阳性或阴性。通过将来自未处理的对照或来自暴露于所选治疗剂的肿瘤的肿瘤细胞以连续稀释液移植到免疫功能不全的小鼠中并随后将每一小鼠针对肿瘤形成评分为呈阳性或阴性来进行体内有限稀释。该评分可以发生在植入的肿瘤是可检测的之后的任何时间，但优选地在移植后60天或以上进行该评分。使用泊松分布统计学或评估预先确定的确定性事件(如在体内产生或不产生肿瘤的能力)的频率，优选地对确定肿瘤发生细胞的频率的有限稀释实验的结果进行分析(fazekas等人，1982，pmid:7040548)。流式细胞术和免疫组织化学还可以用于确定肿瘤发生细胞频率。这两种技术使用一种或多种抗体或试剂，它们结合已知富集肿瘤发生细胞的领域认可的细胞表面蛋白或标记物(参见wo2012/031280)。如本领域已知的，流式细胞术(例如，荧光激活细胞分选术(facs))还可以用于表征、分离、纯化、富集或分选包括肿瘤发生细胞的各种细胞群。流式细胞术通过穿过流体流(其中细胞的混合群是悬浮的)，通过能够测量每秒多达数千颗粒的物理和/或化学特征的电子检测装置而测量肿瘤发生细胞水平。免疫组织化学提供了以下另外的信息，它使得通过用与肿瘤发生细胞标志物结合的经标记的抗体或试剂染色组织样品而使肿瘤发生细胞原位可视化(例如，在组织切片中)成为可能。因此，通过以下方法，例如像流式细胞术、磁激活细胞分选术(macs)、激光介导的切片或facs，本发明的抗体可以用于鉴定、表征、监测、分离、切片或富集肿瘤发生细胞群或亚群。facs是用于以基于特定细胞表面标记物的大于99.5％的纯度分离细胞亚群的可靠方法。用于表征和操纵肿瘤发生细胞(包括csc)的其他相容性技术例如可以见于u.s.p.n.12/686,359、12/669,136和12/757,649中。以下列出的是与csc群相关的并且已用于分离或表征csc的标志物：abca1、abca3、abcb5、abcg2、adam9、adcy9、adora2a、aldh、afp、axin1、b7h3、bcl9、bmi-1、bmp-4、c20orf52、c4.4a、羧肽酶m、cav1、cav2、cd105、cd117、cd123、cd133、cd14、cd16、cd166、cd16a、cd16b、cd2、cd20、cd24、cd29、cd3、cd31、cd324、cd325、cd33、cd34、cd38、cd44、cd45、cd46、cd49b、cd49f、cd56、cd64、cd74、cd9、cd90、cd96、ceacam6、celsr1、clec12a、cpd、crim1、cx3cl1、cxcr4、daf、饰胶蛋白聚糖(decorin)、easyh1、easyh2、edg3、egfr、enpp1、epcam、epha1、epha2、flj10052、flvcr、fzd1、fzd10、fzd2、fzd3、fzd4、fzd6、fzd7、fzd8、fzd9、gd2、gja1、gli1、gli2、gpnmb、gpr54、gprc5b、havcr2、il1r1、il1rap、jam3、lgr5、lgr6、lrp3、ly6e、mcp、mf2、mllt3、mpzl1、muc1、muc16、myc、n33、nanog、nb84、nes、nid2、nma、npc1、osm、oct4、opn3、pcdh7、pcdha10、pcdhb2、ppap2c、ptpn3、pts、rarres1、sema4b、slc19a2、slc1a1、slc39a1、slc4a11、slc6a14、slc7a8、smarca3、smarcd3、smarce1、smarca5、sox1、stat3、steap、tcf4、tem8、tgfbr3、tmepai、tmprss4、tfrc、trka、wnt10b、wnt16、wnt2、wnt2b、wnt3、wnt5a、yy1以及ctnnb1。参见，例如，schulenburg等人，2010，pmid:20185329；u.s.p.n.7,632,678以及u.s.p.n.2007/0292414、2008/0175870、2010/0275280、2010/0162416和2011/0020221。类似地，与某些肿瘤类型的csc相关联的细胞表面表型的非限制性实例包括cd44hicd24low、aldh+、cd133+、cd123+、cd34+cd38-、cd44+cd24-、cd46hicd324+cd66c-、cd133+cd34+cd10-cd19-、cd138-cd34-cd19+、cd133+rc2+、cd44+α2β1hicd133+、cd44+cd24+esa+、cd271+、abcb5+以及本领域中已知的其他csc表面表型。参见，例如，schulenburg等人，2010，同上文；visvader等人，2008，pmid:18784658以及u.s.p.n.2008/0138313。关于本发明特别感兴趣的是csc制剂，其包含实体瘤中的cd46hicd324+表型和白血病中的cd34+cd38-。当其应用于标记物或标记表型时，“阳性”、“低”和“阴性”表达水平如下所定义。具有阴性表达(即“-”)的细胞在此处定义为在另外的荧光发射通道中存在用于其他感兴趣的蛋白质的完全抗体染色混合物标记的情况下，表达小于或等于荧光通道中用同种型对照抗体所观察到的第95个百分位数表达的那些细胞。本领域的技术人员将理解的是，这种用于定义阴性事件的方法称作“荧光扣除(fluorescenceminusone)”或“fmo”染色法。在此将其表达大于使用上述fmo染色程序的用同种型对照抗体所观察到的第95百分位数表达的细胞定义为“阳性”(即“+”)。如在此定义的，存在着宽泛定义为“阳性”的各种细胞群。如果平均观察到的抗原的表达高于使用用如上所述同种型对照抗体进行fmo染色所测定的第95个百分位数，则将细胞定义为阳性。如果平均观察到的表达高于通过fmo染色所测定的第95个百分位数并且在第95个百分位数的一个标准差内，则可以将阳性细胞称为具有低表达(即“lo”)的细胞。可替代地，如果平均观察到的表达高于通过fmo染色所测定的第95个百分位数并且比第95个百分位数大一个标准差以上，则可以将阳性细胞称为具有高表达(即“hi”)的细胞。在其他实施例中，第99百分位数可以优选地用作在阴性与阳性fmo染色之间的分界点并且在一些实施例中，这个百分位数可以大于99％。该cd46hicd324+或cd34+cd38-标记表型和以上刚刚例证的那些可以与标准流式细胞分析和细胞分选技术联合使用以表征、分离、纯化或富集tic和/或tpc细胞或细胞群，用于进一步分析。因此，可以使用以上所述的技术和标记物来确定本发明的抗体降低肿瘤发生细胞的频率的能力。在一些情况下，该抗mmp16抗体可以使肿瘤发生细胞的频率降低10％、15％、20％、25％、30％或甚至35％。在其他实施例中，肿瘤发生细胞的频率的降低可以大约为40％、45％、50％、55％、60％或65％。在某些实施例中，所披露的化合物可以使肿瘤发生细胞的频率降低70％、75％、80％、85％、90％或甚至是95％。应理解的是，肿瘤发生细胞的频率的任何降低都可能导致瘤形成的肿瘤发生、持续、复发及侵袭性的相应降低。iii.抗体a.抗体结构包括接受的命名和编号系统的抗体及其变体和衍生物已经广泛描述于例如abbas等人(2010)，cellularandmolecularimmunology[细胞和分子免疫学](第6版)，w.b.saunderscompany[w.b.桑德斯公司]；或murphey等人(2011)，janeway’simmunobiology[简氏免疫生物学](第8版)，garlandscience[加兰德科学出版社]中。“抗体”或“完整抗体”典型是指包含通过共价二硫键和非共价相互作用保持在一起的两条重(h)多肽链和两条轻(l)多肽链的y型四聚蛋白。每条轻链由一个可变结构域(vl)和一个恒定结构域(cl)组成。每条重链包含一个可变结构域(vh)和恒定区，在igg、iga和igd抗体的情形中，该恒定区包含称为ch1、ch2和ch3的三个结构域(igm和ige具有第四结构域ch4)。在igg、iga和igd类别中，ch1和ch2结构域被柔性铰链区分离，该铰链区是可变长度(在各种igg亚类中从约10至约60个氨基酸)的富含脯氨酸和半胱氨酸的区段。轻链和重链两者中的可变结构域通过约12个或更多个氨基酸的“j”区连接到恒定结构域，并且重链还具有约10个另外的氨基酸的“d”区。每类抗体进一步包含由配对半胱氨酸残基形成的链间和链内二硫键。如在此使用的，术语“抗体”包括多克隆抗体(polyclonalantibodies)、多克隆抗体(multiclonalantibodies)、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体及灵长类化抗体、cdr接枝抗体、人抗体(包括重组产生的人抗体)、重组产生的抗体、胞内抗体、多特异性抗体、双特异性抗体、单价抗体、多价抗体、抗独特型抗体、合成抗体(包括突变蛋白及其变体)；免疫特异性抗体片段，如fd、fab、f(ab’)2、f(ab’)片段、单链片段(例如scfv和scfvfc)；及其衍生物，包括fc融合物和其他修饰，及任何其他免疫活性分子，只要它展现与决定子的优先缔合或结合即可。另外，除非上下文约束另外规定，否则该术语另外包含抗体的所有类别(即，iga、igd、ige、igg及igm)及所有亚类(即，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1及iga2)。对应于不同类别的抗体的重链恒定结构域典型地分别由相应的小写希腊字母α、δ、ε、γ和μ表示。来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链基于其恒定结构域的氨基酸序列可以被分配到两种明显相异的类型之一，称为κ和λ。抗体的可变结构域显示出从一种抗体到另一种抗体的氨基酸组成的显著变化，并且主要负责抗原识别和结合。每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点，使得完整的igg抗体具有两个结合位点(即它是二价的)。vh和vl结构域包含具有极端变异性的三个区域，其被称为高变区，或更通常地，其被称为互补决定区(cdr)，由称为框架区(fr)的四个较少可变区框架化和分离。vh和vl区之间的非共价缔合形成fv片段(对于“片段变量”)，其含有抗体的两个抗原结合位点之一。如在此所使用，氨基酸与每个结构域、框架区和cdr的分配可以根据由kabat等人(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest[具有免疫学兴趣的蛋白的序列](第5版)，美国健康与人类服务部，phs，nih，nih公开号91-3242；chothia等人，1987，pmid:3681981；chothia等人，1989，pmid:2687698；maccallum等人，1996，pmid:8876650；或dubel编辑(2007)handbookoftherapeuticantibodies[治疗性抗体手册]，第3版，德国威利出版公司或abm(牛津大学分子/msi药典)(wily-vchverlaggmbhandcoorabm(oxfordmolecular/msipharmacopia))提供的方案之一进行，除非另有注解。如本领域所熟知的，通常如chothia或kabat中所陈述的进行可变区残基编号。以下表1中示出了包含由kabat、chothia、maccallum(也称为contact)定义的cdr的氨基酸残基和从阿拜斯(abysis)网站数据库(下文)获得的abm。请注意，maccallum使用chothia编号系统。表1kabatchothiamaccallumabmvhcdr131-3526-3230-3526-35vhcdr250-6552-5647-5850-58vhcdr395-10295-10293-10195-102vlcdr124-3424-3430-3624-34vlcdr250-5650-5646-5550-56vlcdr389-9789-9789-9689-97抗体序列中的可变区和cdr可以根据本领域已经开发的一般规则(如以上所示出的，例如kabat编号系统)或通过将序列与已知可变区的数据库比对来鉴定。用于鉴定这些区域的方法描述于kontermann和dubel编辑，antibodyengineering[抗体工程]，springer，newyork，ny[施普林格，纽约州纽约]，2001和dinarello等人，currentprotocolsinimmunology[当前免疫学方案]，johnwileyandsonsinc.，hoboken，nj[约翰·威利父子出版公司，新泽西州霍博肯市]，2000中。抗体序列的示例性数据库描述于“abysis”网站(www.bioinf.org.uk/abs)(由a.c.martin在英国伦敦的伦敦大学生物化学和分子生物学学院维护)和vbase2网站(www.vbase2.org)中，并可通过其进行访问，如retter等人，nucl.acidsres.[核酸研究]，33(数据库发行号(databaseissue)):d671-d674(2005)所述的。优选地，使用abysis数据库分析这些序列，该数据库将来自kabat、imgt和蛋白质数据库(proteindatabank，pdb)的序列数据与来自pdb的结构数据进行整合。参见andrewc.r.martin博士的书，章节proteinsequenceandstructureanalysisofantibodyvariabledomains[抗体可变区的蛋白质序列和结构分析].于antibodyengineeringlabmanual[抗体工程实验室手册](编辑：duebel，s.和kontermann，r.，springer-verlag，heidelberg[施普林格出版社，海德堡]，isbn-13:978-3540413547，也可在网站bioinforg.uk/abs上获得)。abysis数据库网站还包括已经开发用于鉴定可以根据此处的传授内容使用的cdr的一般规则。本文附图11g及11h显示sc73.38及sc73.39抗体的示例性重链及轻链可变区(vh及vl)的注释中该分析的结果。除非另有说明，此处陈述的所有cdr均根据kabat等人的abysis数据库网站获得。对于本发明中论述的重链恒定区氨基酸位置，编号是根据edelman等人，1969，proc，natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]63(1):78-85中首先描述的eu索引进行的，描述了骨髓瘤蛋白质eu的氨基酸序列(据报道它是第一个被测序的人类igg1)。edelman的eu索引还陈述于kabat等人，1991(同上)中。因此，“如kabat中陈述的eu索引”或“kabat的eu索引”或“eu索引”或“eu编号”在重链上下文中是指基于如kabat等人，1991(同上)所陈述的edelman等人的人类igg1eu抗体的残基编号系统。类似地，用于轻链恒定区氨基酸序列的编号系统陈述于kabat等人(同上)中。与本发明相容的示例性κ(seqidno:5)和λ(seqidno:8)轻链恒定区氨基酸序列紧接着在以下陈述：rtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:5)。qpkanptvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadgspvkagvettkpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs(seqidno:8)。类似地，与本发明相容的示例性igg1重链恒定区氨基酸序列紧接着在以下陈述：astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seqidno:2)。本领域技术人员将理解的是，可以使用标准分子生物学技术将这样的重链和轻链恒定区序列(无论野生型的(例如，参见seqidno:2、5或8)或是如本文所披露的被工程化以提供未配对的半胱氨酸的(例如，参见seqidno:3、4、6、7、9或10))可操作地与所披露的重链和轻链可变区缔合，以提供可以掺入本发明的mmp16抗体药物缀合物中的全长抗体。所选本发明抗体(hsc73.38、hsc73.38ss1、hsc73.39、hsc73.39v1及hsc73.39v1ss1)的全长重链及轻链的序列示于本文附图11f中。免疫球蛋白分子中有两种类型的二硫桥或键：链间和链内二硫键。如本领域所熟知的，链内二硫键的位置和数量根据免疫球蛋白类别和种类而变化。虽然本发明不限于抗体的任何特定类别或亚类，但出于说明目的，贯穿本披露应使用igg1免疫球蛋白。在野生型igg1分子中，存在十二个链内二硫键(每条重链上四个以及每条轻链上两个)和四个链间二硫键。链内二硫键通常在一定程度上受到保护，并且比链间键相对不易受还原影响。相反地，链间二硫键位于免疫球蛋白的表面，可到达溶剂，并且通常相对较易还原。两个链间二硫键存在于重链之间，并且各自从一条重链连向其相应轻链。已经证明，链间二硫键对于链缔合不是必需的。该igg1铰链区含有在重链中的形成链间二硫键的半胱氨酸，所述链间二硫键提供结构支持以及促进fab移动的灵活性。该重/重igg1链间二硫键位于残基c226和c229(eu编号)处，而igg1(重/轻)的轻链和重链之间的igg1链间二硫键在κ或λ轻链的c214和重链的上部铰链区中的c220之间形成。b.抗体生成和产生可以使用本领域已知的各种方法来生产本发明的抗体。1.在宿主动物中多克隆抗体的生成在各种宿主动物中多克隆抗体的生产是本领域熟知的(参见例如，harlow和lane(编辑)(1988)antibodies:alaboratorymanual，cshpress[抗体：实验室手册，csh出版社]；以及harlow等人(1989)antibodies，ny，coldspringharborpress[抗体，纽约，冷泉港出版社])。为了生成多克隆抗体，将免疫活性动物(例如，小鼠、大鼠、兔、山羊、非人灵长类动物等)用抗原性蛋白或包含抗原性蛋白的细胞或制剂进行免疫。在一段时间之后，通过对该动物进行抽血或将其处死来获得含有多克隆抗体的血清。该血清能以从该动物获得的形式使用，或该抗体可以部分地或完全地纯化以提供免疫球蛋白级分或分离的抗体制剂。就这一点而言，本发明的抗体可以从任何mmp16决定子产生，该决定子诱导免疫活性动物中的免疫应答。如在此所使用，“决定子”或“靶标”意指与特定细胞、细胞群或组织可鉴定地缔合或在其中或其上明确发现的任何可检测的性状、特性、标记物或因子。决定子或靶标可以是形态性的、功能性的或生物化学性的，并且优选是表型性的。在优选的实施例中，决定子是由特定细胞类型或由细胞在某些条件下(例如在该细胞周期或在特定小生境中的细胞的特定时点期间)有差别地表达(过表达或低表达)的蛋白质。出于本发明的目的，决定子优选在异常癌细胞上差异表达，并且可以包含mmp16蛋白或其任何剪接变体、同种型、同系物或家族成员，或者其特异性结构域、区域或表位。“抗原”、“免疫原性决定子”、“抗原决定子”或“免疫原”意指当引入免疫活性动物时可刺激免疫应答，并被由免疫应答产生的抗体识别的任何mmp16蛋白或其任何片段、区域或结构域。可使用在此涵盖的mmp16决定子的存在或不存在来鉴定细胞、细胞亚群或组织(例如肿瘤、肿瘤发生细胞或csc)。任何形式的抗原或含有该抗原的细胞或制剂都可以用于生成对mmp16决定子具有特异性的抗体。如在此所陈述的，术语“抗原”在广义上使用，并且可以包括所选靶标的任何免疫原性片段或决定子，包括单表位、多表位、单或多结构域、或完整的胞外结构域(ecd)或蛋白质。该抗原可以是分离的全长蛋白质、细胞表面蛋白(例如，用在其表面上表达至少一部分抗原的细胞进行免疫的)、或可溶性蛋白质(例如，仅用该蛋白质的ecd部分进行免疫的)或蛋白质构建体(例如，fc抗原)。该抗原可以在基因修饰的细胞中产生。前述任何抗原可以单独或与本领域已知的一种或多种免疫原性增强佐剂组合使用。编码该抗原的dna可以是基因组的或非基因组的(例如，cdna)，并且可以编码足以引起免疫原性应答的至少一部分ecd。可以使用任何载体来转化其中表达抗原的细胞，所述载体包括但不限于腺病毒载体、慢病毒载体、质粒以及非病毒载体如阳离子脂质。2.单克隆抗体在所选实施例中，本发明考虑到单克隆抗体的使用。如本领域中所知，术语“单克隆抗体”或“mab”是指从基本均质的抗体群获得的一种抗体，即，构成该群体的单个抗体除可能以微量存在的可能的突变(例如，天然存在的突变)外是一致的。单克隆抗体可以使用本领域中已知的多种技术制备，包括杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术、转基因动物(例如，)或其某一组合。例如，可以使用杂交瘤以及生物化学和遗传工程技术来产生单克隆抗体，如以下中更详细地描述：an，zhigiang(编辑)therapeuticmonoclonalantibodies:frombenchtoclinic[治疗性单克隆抗体：从工作台到诊所]，johnwileyandsons[约翰威立公司]，第1版，2009；shire等人(编辑)currenttrendsinmonoclonalantibodydevelopmentandmanufacturing[当前单克隆抗体开发和制造的趋势]，springerscience+businessmediallc[施普林格科学+商业媒体有限责任公司]，第1版，2010；harlow等人，antibodies:alaboratorymanual[抗体：实验手册]，coldspringharborlaboratorypress[冷泉港实验室出版社]，第2版，1988；hammerling等人，monoclonalantibodiesandt-cellhybridomas[单克隆抗体及t细胞杂交瘤]563-681(纽约爱思唯尔公司(elsevier，n.y.)，1981)。产生多个与决定子特异性结合的单克隆抗体之后，基于例如其对决定子的亲和力或内化速率，可以通过各种筛选方法选择特别有效的抗体。如在此所述产生的抗体可以用作“源”抗体并且进一步被修饰以，例如，改善对靶标的亲和力，改善其在细胞培养中的产量，降低体内的免疫原性，创建多特异性构建体等。单克隆抗体生产和筛选的更详细描述示于以下以及所附实例中。3.人类抗体在另一实施例中，抗体可包含全人类抗体。术语“人抗体”是指这样一种抗体，它具有对应于由人类产生的抗体的氨基酸序列的一个氨基酸序列和/或已经使用任何用于制备以下所述的人抗体的技术来产生。人抗体可以使用本领域中已知的各种技术产生。一项技术是噬菌体展示，其中在噬菌体上合成(优选地人)抗体的文库，用所关注抗原或其抗体结合部分对该文库进行筛选，并且分离出结合该抗原的噬菌体，由此可以获得免疫反应性片段。用于制备并筛选这些文库的方法是本领域中众所周知的并且用于产生噬菌体展示文库的试剂盒是可商购的(例如，法玛西亚重组噬菌体抗体系统(pharmaciarecombinantphageantibodysystem)，目录号27-9400-01；以及stratagenesurfzaptm噬菌体展示试剂盒，目录号240612)。还存在可以用于产生并筛选抗体展示文库的其他方法和试剂(参见例如，u.s.p.n.5,223,409；pct公开号wo92/18619、wo91/17271、wo92/20791、wo92/15679、wo93/01288、wo92/01047、wo92/09690；以及barbas等人，proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]88:7978-7982(1991))。在一个实施例中，可以通过对如以上制备的重组的组合抗体文库进行筛选来分离重组人抗体。在一个实施例中，该文库是使用由从b细胞分离的mrna制备的人vl和vhcdna产生的scfv噬菌体展示文库。由天然文库(天然或合成的)产生的抗体可以具有适度亲和力(ka为约106到107m-1)，但也可以如本领域中所描述，通过构建第二文库并从其中再选择，在体外模拟亲和力成熟。例如，可以在体外通过使用易错聚合酶随机引入突变(报导于leung等人，technique[技术]，1:11-15(1989)中)。另外地，可以通过在所选个别fv克隆中，例如使用以带有跨所关注cdr的随机序列的引物进行的pcr使一个或多个cdr随机突变，并针对更高亲和力的克隆进行筛选来进行亲和力成熟。wo9607754描述了一种用于在免疫球蛋白轻链的cdr中诱导诱变以建立轻链基因文库的方法。另一种有效的方法是将通过噬菌体展示所选择的vh或vl结构域与自未免疫接种的供体获得的天然存在的v结构域变体谱系重组并在若干轮链重新改组中针对更高亲和力进行筛选，如marks等人，biotechnol.[生物技术]，10:779-783(1992)中所描述。这一技术允许产生具有约10-9m或更低的解离常数kd(koff/kon)的抗体和抗体片段。在其他实施例中，可以采用类似的程序，使用包含在其表面上表达结合对的真核细胞(例如酵母)的文库。参见例如，u.s.p.n.7,700,302和u.s.s.n.12/404,059。在一个实施例中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体(vaughan等人，naturebiotechnology[自然-生物技术]14:309-314(1996):sheets等人，proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]95:6157-6162(1998))。在其他实施例中，人类结合对可以从在如酵母等真核细胞中产生的组合抗体文库分离。参见例如，u.s.p.n.7,700,302。这些技术有利地允许进行大量候选调节剂的筛选并且提供对候选序列的相对容易的操作(例如，通过亲和力成熟或重组改组)。还可以通过将人类免疫球蛋白基因座引入转基因动物中来制备人抗体，这些转基因动物例如为已经使内源免疫球蛋白基因部分地或完全地失活并且引入了人类免疫球蛋白基因的小鼠。在激发之后，观察到人抗体的产生，这在所有方面都紧密地类似于在人类中所见，包括基因重排、组装及抗体谱系。这一方法描述于例如u.s.p.n.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；及关于技术的u.s.p.n.6,075,181和6,150,584；以及lonberg和huszar，intern.rev.immunol.[国际免疫学评述]13:65-93(1995)中。可替代地，可以经由产生针对靶抗原的抗体的人类b淋巴细胞(这些b淋巴细胞可以从罹患赘生性病症的个体回收或可以是已经在体外进行免疫接种的)的永生化来制备人抗体。参见例如，cole等人，monoclonalantibodiesandcancertherapy[单克隆抗体和癌症疗法]，alanr.liss，第77页(1985)；boerner等人，j.immunol[免疫学杂志]，147(l):86-95(1991)；以及u.s.p.n.5,750,373。无论来源，应理解的是，人抗体序列可以使用领域已知的分子工程技术来制造并引入如本文所述的表达系统和宿主细胞中。这样的非天然的重组产生的人抗体(和受试者组合物)是与本披露的传授内容完全相容的并明确地保持在本发明的范围内。在某些所选方面，本发明的mmp16adc将包含充当细胞结合剂的重组产生的人抗体。4.衍生的抗体：一旦如上所述产生、选择并分离源抗体，则它们进一步被改变以提供具有改进的药学特征的抗mmp16抗体。优选地，使用已知的分子工程技术来修饰或改变所述源抗体以提供具有所希望的治疗特性的衍生抗体。4.1.嵌合和人源化抗体本发明的所选实施例包含免疫特异性结合mmp16的鼠类单克隆抗体，并且其可以被认为是“源”抗体。在所选实施例中，本发明的抗体可以通过对源抗体的恒定区和/或表位结合氨基酸序列的任选修饰从这样的“源”抗体衍生。在某些实施例中，如果源抗体中所选择的氨基酸通过缺失、突变、取代、整合或组合而改变，则抗体是从源抗体“衍生的”。在另一个实施例中，“衍生”抗体是其中源抗体(例如，一个或多个cdr或结构域或整个重链和轻链可变区)的片段与受体抗体序列组合或并入其中以提供衍生抗体(例如嵌合、cdr接枝或人源化抗体)的一种抗体。可以使用来自产抗体的细胞的遗传物质和如下所描述的标准分子生物技术来产生这些“衍生”抗体，例如像，以改善对决定子的亲和力；以改善抗体稳定性；以改善细胞培养的产量和产率；以降低体内的免疫原性；以减少毒性；以促进活性部分的缀合；或以产生多特异性抗体。此类抗体也可以通过化学手段或翻译后修饰来修饰成熟分子(例如糖基化模式或聚乙二醇化)而衍生自源抗体。在一个实施例中，本发明的抗体包含嵌合抗体，这些嵌合抗体衍生自来自已经共价接合的至少两种不同物种或类别的抗体的蛋白质区段。术语“嵌合”抗体是针对这样的构建体，其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种的或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而这个或这些链的剩余部分与来自另一物种的或属于另一个抗体类别或亚类的抗体、以及这类抗体的片段中的相应序列相同或同源(u.s.p.n.4,816,567)。在一些实施例中，本发明的嵌合抗体可以包含与人轻链和重链恒定区可操作地连接的全部或大多数的所选鼠类重链和轻链可变区。在其他所选实施例中，抗mmp16抗体可以“衍生”自本文所披露的小鼠抗体并且包含比全部重链和轻链可变区更少的重链和轻链可变区。在其他实施例中，本发明的嵌合抗体是“cdr-接枝”抗体，其中所述cdr(如使用kabat、chothia、mccallum等所定义的)衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类，同时抗体的剩余部分大部分衍生自来自另一物种的或属于另一抗体类别或亚类的抗体。对于用于人类中，一种或多种所选啮齿动物cdr(例如小鼠cdr)可以移植到人类受体抗体中，替代该人抗体的一个或多个天然存在的cdr。这些构建体一般具有以下益处：提供全强度的人抗体功能(例如，补体依赖性细胞毒性(cdc)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc))，同时减少了受试者对该抗体的不想要的免疫应答。在一个实施例中，所述cdr接枝抗体将包含从掺入人框架序列的小鼠获得的一种或多种cdr。与该cdr接枝抗体类似的是“人源化”抗体。如本文所用，“人源化”抗体是包含衍生自一种或多种非人抗体(供体抗体或源抗体)的一种或多种氨基酸序列(例如cdr序列)的人抗体(受体抗体)。在某些实施例中，“回复突变”可以引入到人源化抗体中，其中受体人抗体的可变区的一个或多个fr中的残基被来自非人物种供体抗体的相应残基替换。这样的回复突变可以有助于保持一种或多种接枝cdr的适当三维构型并因此改进亲和性和抗体稳定性。可以使用来自各种供体物种的抗体，这些供体物种包括但不限于小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。另外，人源化抗体可以包含在受体抗体中或在供体抗体中未发现的新残基，以例如进一步改善抗体性能。可以如以下实例中所陈述提供与本发明相容的cdr接枝和人源化抗体，所述抗体包含来自源抗体的鼠类组分和来自受体抗体的人类组分。可以使用各种领域认可的技术来检测哪些人类序列用作受体抗体，以提供根据本发明的人源化构建体。相容人类种系序列的合集和检测它们作为受体序列的适合性的方法例如披露于dubel和reichert(编辑)(2014)handbookoftherapeuticantibodies[治疗性抗体手册]，第2版，wiley-blackwellgmbh[威利-布莱克威尔股份有限公司]；tomlinson，i.a.等人(1992)j.mol.biol.[分子生物学杂志]227:776-798；cook，g.p.等人(1995)immunol.today[今日免疫学]16:237-242；chothia，d.等人(1992)j.mol.biol.[分子生物学杂志]227:799-817；以及tomlinson等人(1995)emboj[欧洲分子生物学学会杂志]14:4628-4638中。v-base名录(vbase2-retter等人，nucleicacidres.[核酸研究]33；671-674，2005)，其提供了人类免疫球蛋白可变区序列的一个全面名录(由tomlinson，i.a.等人汇编，mrccentreforproteinengineering，cambridge，uk[mrc蛋白质工程中心，英国剑桥])，可以用来鉴定相容受体序列。因此，描述于例如u.s.p.n.6,300,064中的共有人框架序列还可以被证明是相容的受体序列并且可以根据本传授内容而使用。一般而言，根据与鼠类来源框架序列的同源性以及对来源抗体和受体抗体的cdr标准结构的分析来选择人框架受体序列。然后可以使用领域认可的技术来合成衍生抗体的重链和轻链可变区的衍生序列。举例来说，cdr接枝和人源化抗体以及相关方法描述于u.s.p.n.6,180,370和5,693,762中。有关进一步细节，参见例如，jones等人，1986(pmid:3713831)；以及u.s.p.n.6,982,321和7,087,409。cdr接枝或人源化抗体可变区与人类受体可变区的序列同一性或同源性可以如本文所论述的进行测定，并且当这样测量时，将优选地共享至少60％或65％的序列同一性，更优选至少70％、75％、80％、85％或90％的序列同一性，甚至更优选至少93％、95％、98％或99％的序列同一性。优选地，不相同的残基位置因保守性氨基酸置换而不同。“保守氨基酸取代”是一个氨基酸残基被具有类似化学特性(例如，电荷或疏水性)的侧链(r基团)的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。一般而言，保守氨基酸取代不会实质上改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列因保守取代而彼此不同的情形中，序列同一性百分比或相似性程度可以向上调整以校正该取代的保守性质。应理解的是，如附图11a和11b中提供的带注释的cdr和框架序列是根据kabat等人，使用专有abysis数据库所定义的。然而，如本文所论述的以及图11g和11h中所示的，本领域技术人员根据由chothia等人、abm或maccallum等人以及kabat等人所提供的定义容易鉴定cdr。因此，包含根据任何上述系统衍生的一种或多种cdr的抗mmp16人源化抗体明确地保持在本发明的范围内。4.2.位点特异性抗体本发明的抗体可以被工程化以促进与细胞毒素或其他抗癌剂(如以下更详细地论述的)的缀合。根据抗体上细胞毒素的位置以及药物与抗体比(dar)，抗体药物缀合物(adc)制剂包含adc分子的均质群体是有利的。基于本披露，本领域技术人员可以容易地制造如在此所述的位点特异性工程化构建体。如本文所用，“位点特异性抗体”或“位点特异性构建体”意指如下抗体或其免疫反应性片段，其中重链或轻链中的至少一个氨基酸被缺失、改变或取代(优选被另一个氨基酸)以提供至少一个游离半胱氨酸。类似地，“位点特异性缀合物”应保持为意指以下adc，其包含位点特异性抗体以及与成对或游离半胱氨酸缀合的至少一种细胞毒素或其他化合物(例如，报道分子)。在某些实施例中，未配对半胱氨酸残基将包含未配对的链内半胱氨酸残基。在其他实施例中，游离半胱氨酸残基将包含未配对的链间半胱氨酸残基。在仍其他实施例中，游离半胱氨酸可以被工程化到抗体的氨基酸序列中(例如，在ch3结构域中)。在任何情形中，位点特异性抗体可以具有不同同种型，例如，igg、ige、iga或igd；并且在那些类别内，抗体可以具有不同亚类，例如igg1、igg2、igg3或igg4。对于igg构建体，抗体的轻链可以包含各自掺入c214的κ或λ同种型，在所选实施例中，c214可能由于igg1重链中缺少c220残基而未配对。因此，如在此所用，术语“游离半胱氨酸”或“未配对半胱氨酸”可以互换使用，除非上下文另有规定，并且应意指抗体的任何半胱氨酸(或含硫醇的)成分(例如，半胱氨酸残基)，无论是天然存在还是使用分子工程技术特异性地掺入所选残基位置的，其在生理条件下不是天然存在的(或“天然的”)二硫键的一部分。在某些优选实施例中，游离半胱氨酸可以包含天然存在的半胱氨酸，其天然链间或链内二硫桥配偶体已经被取代、消除或以其他方式改变以在生理条件下破坏天然存在的二硫桥，从而使未配对半胱氨酸适合于位点特异性缀合。在其他优选实施例中，游离或未配对半胱氨酸将包含选择性地位于抗体重链或轻链氨基酸序列内的预定位点的半胱氨酸残基。应当理解，在缀合之前，游离或未配对半胱氨酸可以作为硫醇(经还原的半胱氨酸)、作为封端半胱氨酸(cappedcysteine)(经氧化的)或作为与相同或不同分子上的另一半胱氨酸或硫醇基团一起的非天然分子内或分子间二硫键(经氧化的)的一部分存在，这取决于该系统的氧化态。如以下更详细论述的，该适当工程化的抗体构建体的温和还原将提供可用于位点特异性缀合的硫醇。因此，在特别优选的实施例中，游离或未配对半胱氨酸(无论是天然存在的或并入的)将经受选择性还原和随后的缀合以提供均质dar组合物。应当理解，所披露的工程化缀合物制剂展现的有利特性至少部分地基于特异性引导缀合的能力，并且在缀合位置和组合物的绝对dar值方面上大大限制所制造的缀合物。与大多数常规adc制剂不同，本发明不需要完全依赖于抗体的部分或全部还原以提供随机缀合位点和相对不受控制的dar种类的产生。相反，在某些方面，本发明优选地通过工程化靶向抗体来破坏一个或多个天然存在的(即，“天然”)链间或链内二硫桥或者通过在任何位置引入半胱氨酸残基来提供一个或多个预定的未配对(或游离)半胱氨酸位点。为此，应当理解，在所选实施例中，可以使用标准分子工程技术将半胱氨酸残基沿着抗体(或其免疫反应性片段)重链或轻链掺入任何位置或附加到其上。在其他优选实施例中，天然二硫键的破坏可以与引入非天然半胱氨酸(其然后将包含游离半胱氨酸)组合实现，然后可以将其用作缀合位点。在某些实施例中，工程化抗体包含链内或链间半胱氨酸残基的至少一个氨基酸缺失或取代。如在此所使用的“链间半胱氨酸残基”意指参与抗体的轻链和重链之间或抗体的两条重链之间的天然二硫键的半胱氨酸残基，而“链内半胱氨酸残基”是在相同重链或轻链中与另一个半胱氨酸天然配对的半胱氨酸残基。在一个实施例中，缺失或取代的链间半胱氨酸残基参与轻链和重链之间的二硫键的形成。在另一个实施例中，缺失或取代的半胱氨酸残基参与两条重链之间的二硫键。在典型的实施例中，由于抗体的互补结构，其中轻链与重链的vh和ch1结构域配对，并且其中一条重链的ch2和ch3结构域与互补重链的ch2和ch3结构域配对，轻链或重链中单个半胱氨酸的突变或缺失将在工程化抗体中产生两个未配对半胱氨酸残基。在一些实施例中，链间半胱氨酸残基缺失。在其他实施例中，链间半胱氨酸取代另一个氨基酸(例如，天然存在的氨基酸)。例如，氨基酸取代可导致链间半胱氨酸被中性(例如丝氨酸、苏氨酸或甘氨酸)或亲水性(例如甲硫氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)残基替换。在所选实施例中，链间半胱氨酸被丝氨酸替换。在本发明涵盖的一些实施例中，缺失或取代的半胱氨酸残基在轻链(κ或λ)上，从而在重链上留下游离半胱氨酸。在其他实施例中，缺失或取代的半胱氨酸残基位于重链上，在轻链恒定区上留下游离半胱氨酸。组装时，应理解的是，完整抗体的轻链或重链中的单个半胱氨酸的缺失或取代产生具有两个未配对半胱氨酸残基的位点特异性抗体。在一个实施例中，igg轻链(κ或λ)的位置214处的半胱氨酸(c214)被缺失或取代。在另一个实施例中，igg重链上的位置220处的半胱氨酸(c220)被缺失或取代。在另外的实施例中，重链上位置226或位置229处的半胱氨酸被缺失或取代。在一个实施例中，重链上的c220被丝氨酸取代(c220s)，以在轻链中提供所希望的游离半胱氨酸。在另一个实施例中，轻链中的c214被丝氨酸取代(c214s)，以在重链中提供所希望的游离半胱氨酸。这样的位点特异性构建体更详细描述于以下实例中。相容性位点特异性构建体的总结紧接着示于以下表2中，其中通常根据如kabat中所陈述的eu索引进行编号，wt代表“野生型”或没有改变的天然恒定区序列并且δ表示氨基酸残基的缺失(例如，c214δ表明位置214处的半胱氨酸残基已经被缺失)。表2与本发明的位点特异性构建体相容的示例性工程化轻链和重链恒定区紧接着示于以下，其中seqidno:3和4分别包含c220sigg1和c220δigg1重链恒定区，seqidno:6和7分别包含c214s和c214δκ轻链恒定区，并且seqidno:9和10分别包含示例性c214s和c214δλ轻链恒定区。在每种情况下，改变或缺失的氨基酸位点(连同侧翼残基)都加了下划线。如以上所论述，每个重链和轻链变体可以与所披露的重链和轻链可变区(或其衍生物，如人源化的或cdr接枝构建体)可操作地缔合以提供如本文所披露的位点特异性抗mmp16抗体。这样的工程化抗体对于在所披露的adc中的使用而言，特别相容。关于引入或添加一个或多个半胱氨酸残基以提供游离半胱氨酸(与破坏天然二硫键相反)，本领域技术人员可以容易地辨别抗体或抗体片段上的一个或多个相容位置。因此，在所选实施例中，可以将一个或多个半胱氨酸引入ch1结构域、ch2结构域或ch3结构域或其任何组合，这取决于希望的dar、抗体构建体、所选有效载荷以及抗体靶标。在其他优选的实施例中，半胱氨酸可以被引入到κ或λcl结构域中，并且在特别优选的实施例中可以引入cl结构域的c-末端区域。在每个情形中，邻近半胱氨酸插入位点的其他氨基酸残基可以被改变、去除或取代，以促进分子稳定性、缀合效率或为有效载荷(一旦附接)提供保护环境。在具体实施例中，取代的残基出现在抗体的任何可及位点处。通过用半胱氨酸取代这些表面残基，从而反应性硫醇基团被定位在抗体上的易及位点处，并且可以如在此进一步描述的那样被选择性地还原。在具体实施例中，取代的残基出现在抗体的可及位点处。通过用半胱氨酸取代这些残基，从而反应性硫醇基团被定位在抗体的可及位点处，并且可以用于选择性缀合抗体。在某些实施例中，任何一个或多个以下残基可以被半胱氨酸取代：轻链的v205(kabat编号)；重链的a118(eu编号)；和重链fc区的s400(eu编号)。另外的取代位置和制造相容性位点特异性抗体的方法陈述于u.s.p.n.7,521,541中，将其以其整体结合在此。如在此所披露的，以所定义的位点和化学计量的药物荷载产生抗体药物缀合物的策略广泛地适用于全部抗mmp16抗体，因为其主要涉及抗体的保守恒定结构域的工程化。由于抗体的每个类别和亚类的氨基酸序列和天然二硫桥均已得到充分证明，本领域技术人员可以容易地制造不同抗体的工程化构建体，而无需过多的实验，因此，这些构建体被明确地涵盖在本发明的范围内。4.3.恒定区修饰和改变的糖基化本发明的所选实施例还可以包括恒定区(即，fc区)的取代或修饰，包括但不限于氨基酸残基取代、突变和/或修饰，它们产生具有以下特征的化合物，这些特征包括但不限于：改变的药物动力学、增加的血清半衰期、增加的结合亲和力、降低的免疫原性、增加的产量、与fc受体(fcr)的改变的fc配体结合、增强或减弱的adcc或cdc、改变的糖基化和/或二硫键以及修饰的结合特异性。可以生成具有改进的fc效应子功能的化合物，例如，通过涉及fc结构域与fc受体(例如，fcγri、fcγriia和b、fcγriii及fcrn)之间的相互作用的氨基酸残基的变化，该化合物可以导致细胞毒性增加和/或药物代谢动力学改变，如血清半衰期增加(参见例如，ravetch和kinet，annu.rev.immunol[免疫学年鉴]9:457-92(1991)；capel等人，immunomethods[免疫方法]4:25-34(1994)；及dehaas等人，j.lab.clin.med.[实验与临床医学杂志]126:330-41(1995))。在所选实施例中，具有增加的体内半衰期的抗体可以通过对鉴定为涉及fc结构域与fcrn受体之间的相互作用的氨基酸残基进行修饰(例如，取代、缺失或添加)来产生(参见例如，国际公开号wo97/34631；wo04/029207；u.s.p.n.6,737,056和u.s.p.n.2003/0190311)。就这些实施例来说，fc变体可以在哺乳动物，优选人类中提供超过5天、超过10天、超过15天、优选超过20天、超过25天、超过30天、超过35天、超过40天、超过45天、超过2个月、超过3个月、超过4个月或超过5个月的半衰期。半衰期的增加引起更高的血清滴度，由此使抗体给予的频率降低和/或使有待给予的抗体的浓度降低。可以例如在表达人类fcrn的转基因小鼠或转染的人类细胞系中，或在给予了具有变体fc区的多肽的灵长类动物中，对人类fcrn高亲和力结合多肽在体内与人类fcrn的结合及血清半衰期进行检验。wo2000/42072描述了使与fcrn的结合改善或减少的抗体变体。还参见例如，shields等人，j.biol.chem.[生物化学杂志]9(2):6591-6604(2001)。在其他实施例中，fc改变可以引起adcc或cdc活性的增强或减弱。如本领域中所知，cdc是指在补体存在下靶细胞的溶解，并且adcc是指一种细胞毒性形式，其中结合到存在于某些细胞毒性细胞(例如，自然杀手细胞、中性粒细胞及巨噬细胞)上的fcr的分泌型ig使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合到带有抗原的靶细胞并且随后用细胞毒素杀灭靶细胞。在本发明的上下文中，提供了具有“改变的”fcr结合亲和力的抗体变体，如与亲本或未修饰抗体或与包含天然序列fcr的抗体相比较，它具有增强或减少的结合。呈现出减少的结合的这些变体可以具有极少或没有可感知的结合，例如与天然序列相比较，0％-20％结合到fcr，例如，如通过本领域中众所周知的技术所测定。在其他实施例中，如与天然免疫球蛋白fc结构域相比较，该变体将展现增强的结合。应理解的是，这些类型的fc变体可以有利地用于增强所披露的抗体的有效抗赘生特性。在又其他实施例中，这些改变引起结合亲和力的增加、免疫原性的降低、产量增加、糖基化和/或二硫键(例如，对于缀合位点)改变、结合特异性修饰、胞噬作用增加，和/或细胞表面受体(例如，b细胞受体；bcr)下调等。再其他实施例包含一种或多种工程化糖形，例如，位点特异性抗体，其包含改变的糖基化模式或共价附接到该蛋白质(例如，在fc结构域中)的改变的碳水化合物的组成。参见例如shields，r.l.等人，(2002)j.biol.chem.[生物化学杂志]277:26733-26740。工程化糖形可以用于多种目的，包括但不限于，增强或减弱效应子功能、增加抗体对靶标的亲和力或促进抗体的产生。在希望降低效应子功能的某些实施例中，该分子可以被工程化以表达去糖基化的形式。可以引起一个或多个可变区框架糖基化位点的消除以借此消除该位点处的糖基化的取代是众所周知的(参见例如，u.s.p.n.5,714,350和6,350,861)。相反地，可以通过在一个或多个另外的糖基化位点中进行工程化来赋予含fc分子增强的效应子功能或改善的结合。其他实施例包括一种具有改变的糖基化组成的fc变体，如具有减少的岩藻糖基残基量的低岩藻糖基化抗体或具有增加的对分glcnac结构的抗体。已证明这些改变的糖基化模式可增加抗体的adcc能力。工程化的糖形可以通过本领域的普通技术人员已知的任何方法产生，例如，通过使用工程化或变体表达株、通过与一种或多种酶(例如，n-乙酰葡糖胺转移酶iii(gntiii))共表达、通过在不同生物体或来自不同生物体的细胞系中表达包含fc区的分子、或通过在表达了包含fc区的分子之后对一种或多种碳水化合物进行修饰(参见例如，wo2012/117002)。4.4.片段无论选择何种形式的抗体(例如，嵌合、人源化等形式)来实行本发明，应理解的是，其免疫反应性片段(其自身或作为抗体药物缀合物的部分)都可以根据在此的传授内容使用。“抗体片段”包含完整抗体的至少一部分。如在此所使用，术语抗体分子的“片段”包括抗体的抗原结合片段，并且术语“抗原结合片段”是指免疫球蛋白或抗体中与所选抗原或其免疫原性决定子免疫特异性结合或反应，或与衍生这些片段的完整抗体竞争特异性抗原结合的多肽片段。示例性免疫反应性片段包括：可变轻链片段(vl)、可变重链片段(vh)、scfv、f(ab’)2片段、fab片段、fd片段、fv片段、单结构域抗体片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子及由抗体片段形成的多特异性抗体。此外，活性位点特异性片段包含该抗体中保持它与抗原/底物或受体相互作用的能力并且以类似于完整抗体的方式(不过可能具有略微降低的效率)对其进行修饰的一部分。这样的抗体片段可以进一步被工程化以包含一个或多个如本文所述的游离半胱氨酸。在特别优选的实施例中，该mmp16结合结构域将包含scfv构建体。如在此所使用，“单链可变片段(scfv)”意指从保留结合抗原的能力的抗体衍生的单链多肽。scfv的实例包括利用重组dna技术形成的抗体多肽，并且其中免疫球蛋白重链和轻链片段的fv区经由间隔序列连接。用于制备scfv的各种方法是已知的，并且包括描述于u.s.p.n.4,694,778中的方法。在其他实施例中，抗体片段是包含fc区并且保持当存在于完整抗体中时通常与fc区相关的至少一种生物功能(如fcrn结合、抗体半衰期调节、adcc功能及补体结合)的抗体片段。在一个实施例中，抗体片段是具有基本上类似于完整抗体的体内半衰期的单价抗体。例如，此类抗体片段可以包含连接到能够赋予该片段体内稳定性的fc序列(包含至少一个游离半胱氨酸)的抗原结合臂。如本领域的普通技术人员将充分认识到的，片段可以通过分子工程或经由化学或酶处理(如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶)完整或完全抗体或抗体链，或者通过重组手段获得。有关抗体片段的更详细说明，参见例如，fundamentalimmunology[基础免疫学]，w.e.paul编辑，ravenpress，n.y.[纽约瑞文出版社](1999)。在所选实施例中，本发明的抗体片段将包含可以不同构型使用的scfv构建体。举例而言，此类抗mmp16scfv构建体可用于治疗肿瘤的过继免疫基因疗法中。在某些实施例中，本发明抗体(例如scfv片段)可用于产生免疫选择性地与mmp16反应的嵌合抗原受体(car)。根据本发明,抗mmp16car为融合蛋白质，其包含本发明的抗mmp16抗体或其免疫反应性片段(例如scfv片段)、跨膜结构域及至少一种胞内域。在某些实施例中，可将已经基因工程化以表达抗mmp16car的t细胞、自然杀伤细胞或树突细胞引入患有癌症的受试者中，以便刺激该受试者的免疫系统特异性地靶向表达mmp16的肿瘤细胞。在一些实施例中，本发明的car将包含启动初级细胞质信号传导序列(还即，经由t细胞受体复合物启动抗原依赖性初始活化的序列)的胞内结构域，例如来源于cd3ζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b及cd66d的胞内结构域。在其他实施例中，本发明的car将包含启动二级或共刺激信号的胞内结构域，例如来源于cd2、cd4、cd5、cd8α、cd8β、cd28、cd134、cd137、icos、cd154、4-1bb及糖皮质激素诱导性肿瘤坏死因子受体的胞内结构域(参见u.s.p.n.us/2014/0242701)。4.5.多价构建体在其他实施例中，本发明的抗体和缀合物可以是单价或多价(例如二价、三价等)的。如在此所使用，术语“价态”是指与抗体缔合的潜在靶结合位点的数目。每一靶结合位点特异性结合一个靶分子或靶分子上的特定位置或基因座。当抗体是单价时，该分子的每个结合位点将特异性结合到单一抗原位置或表位。当一种抗体包含超过一个靶结合位点(多价)时，每个靶结合位点可以特异性结合相同或不同的分子(例如，可以结合到不同的配体或不同的抗原，或在同一抗原上的不同表位或位置)。参见例如，u.s.p.n.2009/0130105。在一个实施例中，所述抗体是双特异性抗体，其中两条链具有不同的特异性，如millstein等人，1983，nature[自然]，305:537-539中所描述的。其他实施例包括具有另外的特异性的抗体，如三特异性抗体。其他更复杂的相容性多特异性构建体及其制造方法陈述于u.s.p.n.2009/0155255，以及wo94/04690；suresh等人，1986，methodsinenzymology[酶学方法]，121:210；及wo96/27011中。多价抗体可以免疫特异性结合到所希望的靶分子的不同表位或可以免疫特异性结合到靶分子以及异源表位，如异源多肽或固体支撑材料。尽管所选实施例仅结合两种抗原(即，双特异性抗体)，但本发明也涵盖具有另外的特异性的抗体，如三特异性抗体。双特异性抗体还包括交联或“异种缀合”抗体。举例来说，在该异种缀合物中的一种抗体可以偶合到抗生物素蛋白，另一种偶合到生物素。已经例如提出这些抗体使免疫系统细胞靶向不想要的细胞(u.s.p.n.4,676,980)，并且用于治疗hiv感染(wo91/00360、wo92/200373及ep03089)。异种缀合抗体可以使用任何常规的交联方法制备。适合的交联剂以及多种交联技术是本领域中众所周知的，并且披露于u.s.p.n.4,676,980中。5.抗体的重组产生可以使用从抗体产生细胞和重组技术获得的遗传物质来产生或修饰抗体及其片段(参见例如；dubel和reichert(编辑)(2014)handbookoftherapeuticantibodies[治疗性抗体手册]，第2版，wiley-blackwellgmbh[威利-布莱克威尔股份有限公司]；sambrook和russell(编辑)(2000)molecularcloning:alaboratorymanual[分子克隆：实验室手册](第3版)，ny，coldspringharborlaboratorypress[纽约，冷泉港实验室出版社]；ausubel等人(2002)shortprotocolsinmolecularbiology:acompendiumofmethodsfromcurrentprotocolsinmolecularbiology，wiley，john&sons，inc.[精编分子生物学方案：当代分子生物学方案的方法概要，约翰威利父子公司]；以及u.s.p.n.7,709,611)。本发明的另一个方面涉及编码本发明的抗体的核酸分子。核酸可以存在于全细胞、细胞裂解物或者部分纯化或基本上纯的形式中。当通过标准技术(包括碱/sds处理、cscl成带(csclbanding)、柱色谱、琼脂糖凝胶电泳和本领域众所周知的其他技术)从其他细胞成分或其他污染物(例如其他细胞核酸或蛋白质)分离时，核酸是“分离的”或“呈现为基本上纯的”。本发明的核酸可以例如是dna(例如基因组dna、cdna)、rna及其人工变体(例如，肽核酸)，无论单链或双链或rna，rna并且可以包含或不包含内含子。在所选实施例中，核酸是cdna分子。可以使用标准分子生物学技术得到本发明的核酸。对于由杂交瘤(例如，如以下实例所述制备的杂交瘤)表达的抗体，编码抗体的轻链和重链的cdna可通过标准pcr扩增或cdna克隆技术获得。对于从免疫球蛋白基因文库(例如使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可以从文库中回收编码该抗体的核酸分子。可以通过标准重组dna技术进一步操纵编码vh和vl区段的dna片段，例如来将可变区基因转化为全长抗体链基因、fab片段基因或scfv基因。在这些操纵中，编码vl或vh的dna片段可操作地连接到编码另一种蛋白质的另一个dna片段，例如抗体恒定区或柔性接头。如本上下文中使用的术语“可操作地连接”意指连接两个dna片段，使得由这两个dna片段编码的氨基酸序列保留在框架内。通过将编码vh的dna可操作地与编码重链恒定区(在igg1的情况下，为ch1、ch2和ch3)的另一dna分子连接，而将所分离的编码vh区域的dna转化成全长重链基因。人类重链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如kabat等人(1991)(同上))，并且涵盖这些区域的dna片段可通过标准pcr扩增来获得。该重链恒定区可以是igg1、igg2、igg3、igg4、iga、ige、igm或igd恒定区，但最优选地是igg1或igg4恒定区。示例性igg1恒定区示于seqidno:2中。对于fab片段重链基因，编码vh的dna可以可操作地连接到仅编码重链ch1恒定区的另一dna分子。通过将编码vl的dna与编码轻链恒定区(cl)的另一dna分子可操作地连接，可以将编码vl区的分离的dna转化为全长轻链基因(以及fab轻链基因)。人类轻链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如kabat等人(1991)(同上))，并且涵盖这些区域的dna片段可通过标准pcr扩增来获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但最优选地是κ恒定区。示例性的相容性κ轻链恒定区示于seqidno:5中，而示例性的相容性λ轻链恒定区示于seqidno:8中。在每种情况下，vh或vl结构域可以与它们各自的恒定区(ch或cl)可操作地连接，其中所述恒定区是位点特异性恒定区并且提供位点特异性抗体。在所选实施例中，所得位点特异性抗体将包含重链上的两个未配对的半胱氨酸；而在其他实施例中，所述位点特异性抗体将包含cl结构域中的两个未配对半胱氨酸。本文预期的是与本发明的多肽表现出“序列同一性”、“序列相似性”或“序列同源性”的某些多肽(例如抗原或抗体)。例如，衍生的人源化抗体vh或vl结构域可以表现出与来源(例如，鼠类)或受体(例如，人类)vh或vl结构域的序列相似性。“同源性”多肽可以表现出65％、70％、75％、80％、85％或90％序列同一性。在其他实施例中，“同源性”多肽可以表现出93％、95％或98％序列同一性。如在此所使用的，两个氨基酸序列之间的百分比同源性与这两个序列之间的百分比同一性是等同的。这两个序列之间的百分比同一性是这些序列共有的相同位置的数目的函数(即，％同源性＝相同位置的数目/位置的总数目×100)，并考虑到为这两个序列的最优比对而需引入的空位数目和每个空位的长度。可以使用如下面的非限制性实例中所述的数学算法完成序列的比较和两个序列之间百分比同一性的确定。两个氨基酸序列之间的百分比同一性可以使用已经合并在align程序(版本2.0)中的e.meyers和w.miller的算法(comput.appl.biosci.[计算机应用生物科学]，4:11-17(1988))来确定，使用pam120权重残基表，空位长度罚分为12且空位罚分为4。此外，两个氨基酸序列之间的百分比同一性可以使用已经合并在gcg软件包(可在www.gcg.com获得)中的gap程序里的needleman和wunsch(j.mol.biol.[分子生物学杂志]48:444-453(1970))算法来确定，使用blossum62矩阵或pam250矩阵，且空位权重为16、14、12、10、8、6或4和长度权重为1、2、3、4、5或6。另外地或可替代地，本发明的蛋白序列可以被进一步用作“查询序列”以进行针对公共数据库的检索，以例如鉴定相关序列。这类检索可以使用altschul等人(1990)j.mol.biol.[分子生物学杂志]215:403-10的xblast程序(2.0版)来进行。可以用xblast程序，得分＝50，字长＝3进行blast蛋白质检索来获得与本发明的抗体分子同源的氨基酸序列。为获得用于比较目的的空位比对，可利用如altschul等人，(1997)nucleicacidsres.[核酸研究]25(17):3389-3402中所述的缺口blast。当利用blast和缺口blast程序时，可以使用各程序(例如xblast和nblast)的默认参数。不相同的残基位置可以因保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代而不同。“保守氨基酸取代”是一个氨基酸残基被具有类似化学特性(例如，电荷或疏水性)的侧链的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。一般而言，保守氨基酸取代不会实质上改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列因保守取代而彼此不同的情形中，序列同一性百分比或相似性程度可以向上调整以校正该取代的保守性质。在存在非保守氨基酸取代的情形中，在实施例中，表现出序列同一性的多肽将保持本发明的多肽(例如，抗体)的所希望的功能或活性。本文还预期了与本发明的核酸表现出“序列同一性”、“序列相似性”或“序列同源性”的核酸。“同源序列”是指表现出至少约65％、70％、75％、80％、85％或90％序列同一性的核酸分子的序列。在其他实施例中，核酸的“同源序列”可以与参比核酸序列表现出93％、95％或98％序列同一性。本发明还提供了包含可以可操作地连接到启动子的上述核酸(参见例如wo86/05807；wo89/01036；和u.s.p.n.5,122,464)以及真核分泌途径的其他转录调节和加工控制元件的载体。本发明还提供了携带那些载体和宿主表达系统的宿主细胞。如在此所使用，术语“宿主表达系统”包括可被工程化以产生本发明的核酸或多肽和抗体的任何种类的细胞系统。这种宿主表达系统包括但不限于用重组噬菌体dna或质粒dna转化或转染的微生物(例如大肠杆菌或枯草芽孢杆菌)；用重组酵母表达载体转染的酵母(例如酵母属)；或具有重组表达构建体的哺乳动物细胞(例如，cos、cho-s、hek293t、3t3细胞)，所述构建体含有来源于哺乳动物细胞或病毒基因组的启动子(例如，腺病毒晚期启动子)。宿主细胞可用两个表达载体共转染，例如编码重链衍生的多肽的第一载体和编码轻链衍生的多肽的第二载体。转化哺乳动物细胞的方法是本领域中众所周知的。参见例如，u.s.p.n.4,399,216、4,912,040、4,740,461及4,959,455。宿主细胞也可以被工程化以允许产生具有不同特征的抗原结合分子(例如经修饰的糖形或具有gntiii活性的蛋白质)。对于长期高产率产生重组蛋白来说，稳定表达是优选的。因此，稳定地表达所选抗体的细胞系可以使用标准的本领域认可的技术进行工程化，并形成本发明的一部分。除使用含有病毒复制起点的表达载体外，可以用通过适当表达控制元件(例如启动子或增强子序列、转录终止子、聚腺苷酸位点等)和可选择标记物控制的dna来转化宿主细胞。可以使用本领域中众所周知的任何选择系统，包括谷氨酰胺合成酶基因表达系统(gs系统)，该系统提供了用于在所选条件下增强表达的有效方法。以其全部或部分，结合ep0216846、ep0256055、ep0323997和ep0338841、以及u.s.p.n.5,591,639和5,879,936对该gs系统进行论述。用于开发稳定细胞系的另一相容性表达系统是freedomtmcho-skit(生命技术公司(lifetechnologies))。一旦本发明的抗体通过重组表达或所披露的任何其他技术产生，则可以通过本领域已知的方法进行纯化或分离，由此其被鉴定并从其天然环境中分离和/或回收并与会干扰抗体或相关adc的诊断或治疗用途的污染物分离。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。可以使用不同的本领域认可的技术，例如像离子交换和尺寸排阻色谱、透析、渗滤和亲和色谱，特别是蛋白a或蛋白g亲和色谱，来纯化这些分离的制剂。以下实例中更充分地论述了兼容的方法。6.生产后选择不管如何获得，都可以针对所希望的特征(包括例如稳健生长、高抗体产量以及所希望的抗体特征如感兴趣的抗原的高亲和性)对抗体产生细胞(例如，杂交瘤、酵母集落等)进行选择、克隆并且进一步筛选。杂交瘤可以在体外细胞培养中或在体内同基因免疫功能不全动物中扩增。选择、克隆及扩增杂交瘤和/或集落的方法是本领域普通技术人员所熟知的。一旦所希望的抗体被鉴定，则可以使用常见的本领域认可的分子生物和生物化学技术来分离、操纵并表达相关遗传物质。由天然文库产生的抗体(天然的或合成的)可以具有适度的亲和性(ka为约106m-1至107m-1)。为了增强亲和性，可以通过构建抗体文库(例如，通过使用易错聚合酶而引入体外随机突变)并重新选择对来自那些第二文库的抗原具有高亲和力的抗体(例如，通过使用噬菌体或酵母展示)而在体外模仿亲和力成熟。wo9607754描述了用于在免疫球蛋白轻链的cdr中诱导诱变以建立轻链基因文库的方法。可以使用各种技术来选择抗体，包括但不限于噬菌体或酵母展示，其中在噬菌体或酵母上合成人类组合抗体或scfv片段的文库，用感兴趣的抗原或其结合抗体的部分筛选该文库，并且分离结合该抗原的噬菌体或酵母，从该噬菌体或酵母可以获得抗体或免疫反应性片段(vaughan等人，1996，pmid:9630891；sheets等人，1998，pmid:9600934；boder等人，1997，pmid:9181578；pepper等人，2008，pmid:18336206)。用于产生噬菌体或酵母展示文库的试剂盒可商业获得。还存在可以用于产生并筛选抗体展示文库的其他方法和试剂(参见u.s.p.n.5,223,409；wo92/18619，wo91/17271，wo92/20791，wo92/15679，wo93/01288，wo92/01047，wo92/09690；以及barbas等人，1991，pmid:1896445)。这样的技术有利地允许进行大量候选抗体的筛选并且提供对序列的相对容易的操作(例如，通过重组改组)。iv.抗体的表征在某些实施例中，可以针对有利的特性，包括例如稳健生长、高抗体产量及如以下更详细地论述的所希望的位点特异性抗体特征，对抗体产生细胞(例如，杂交瘤或酵母集落)进行选择、克隆并且进一步筛选。在其他情形中，可以通过选择用于接种动物的特定抗原(例如，特定mmp16同种型)或靶抗原的免疫反应性片段来实现该抗体的表征。在再其他实施例中，所选抗体可以如以上所描述进行工程化以增强或改善免疫化学特征，如亲和力或药物动力学。a.中和抗体在所选实施例中，本发明的抗体可以是“拮抗剂”或“中和”抗体，这意味着抗体可以与决定子缔合并直接或者通过阻止决定子与结合配偶体(如配体或受体)的缔合而阻断或抑制所述决定子的活性，从而中断否则将由分子的相互作用引起的生物反应。如例如通过靶分子活性或体外竞争性结合测定中所测量的，当过量的抗体将与决定子结合的结合配偶体的量降低至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更多时，中和抗体或拮抗剂抗体将实质上抑制决定子与其配体或底物的结合。应理解的是，改良的活性可以使用本领域认可的技术直接地测量，或可以通过变化的活性的下游影响(例如，肿瘤发生或细胞存活)来测量。b.内化抗体在某些实施例中，所述抗体可以包括内化抗体，使得该抗体将结合决定子并且将被内化(连同任何缀合的药学活性部分一起)到所选靶细胞(包括肿瘤发生细胞)中。内化的抗体分子的数量可足以杀灭抗原表达细胞，尤其是抗原表达肿瘤发生细胞。取决于抗体或在一些情况下抗体药物缀合物的效力，将单个抗体分子吸收到细胞中可足以杀灭该抗体所结合的靶细胞。关于本发明，有证据证明，相当大部分的所表达的mmp16蛋白保持与肿瘤发生细胞表面的缔合，从而允许所披露的抗体或adc的定位和内化。在所选实施例中，这样的抗体将在内化后与杀灭细胞的一种或多种药物缔合或缀合。在一些实施例中，本发明的adc将包含内化的位点特异性adc。如在此所使用，“内化”的抗体是在与相关的决定子结合后被靶细胞吸收(与任何缀合的细胞毒素一起)的抗体。这样的内化的adc的数量将优选地足以杀灭决定子表达细胞，尤其是表达决定子的癌症干细胞。取决于细胞毒素或作为一个整体的adc的效力，在一些情况下，将若干抗体分子吸收到细胞中足以杀灭该抗体所结合的靶细胞。例如，某些药物(如pbd或卡奇霉素)足以有效以致缀合到抗体的若干分子毒素的内化就足以杀灭靶细胞。可以通过包括以下实例中所描述的那些的各种本领域认可的测定(例如皂草素测定，如mab-zap和fab-zap；先进的靶向系统)来确定抗体在与哺乳动物细胞结合后是否内化。检测抗体是否内化到细胞中的方法也描述于u.s.p.n.7,619,068中。c.耗竭抗体在其他实施例中，本发明的抗体是耗竭抗体。术语“耗竭”抗体是指优选地与在细胞表面之上或附近的抗原结合并且诱导、促进或引起该细胞的死亡(例如，通过cdc、adcc或引入细胞毒性剂)的一种抗体。在实施例中，所选耗竭抗体将与细胞毒素缀合。优选地，耗竭抗体将能够杀灭确定的细胞群中的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％或99％的mmp16表达细胞。如本文所用，术语“表观ic50”是指与毒素连接的初级抗体杀死50％的表达由初级抗体识别的一种或多种抗原的细胞的浓度。毒素可以直接缀合于初级抗体，或可经由识别初级抗体的二级抗体或抗体片段与初级抗体缔合，且该二级抗体或抗体片段直接与毒素缀合。优选地，耗竭抗体的ic50将小于5μm、小于1μm、小于100nm、小于50nm、小于30nm、小于20nm、小于10nm、小于5nm、小于2nm或小于1nm。在一些实施例中，该细胞群可以包含富集的、分割的、纯化的或分离的肿瘤发生细胞(包括癌症干细胞)。在其他实施例中，该细胞群可以包含完整肿瘤样品或包含癌症干细胞的异种肿瘤提取物。可以使用标准生物化学技术，根据在此的传授内容对肿瘤发生细胞的耗竭进行监测并定量。d.结合亲和力本文披露的是对特异性决定子例如mmp16具有高结合亲和力的抗体。术语“kd”是指特定的抗体-抗原相互作用的解离常数或表观亲和力。当解离常数kd(koff/kon)≤10-7m时，本发明的抗体可以免疫特异性地结合其靶抗原。当kd≤5×10-9m时，抗体以高亲和力特异性结合抗原，并且当kd≤5×10-10m时，抗体以非常高亲和力特异性结合抗原。在本发明的一个实施例中，该抗体具有≤10-9m的kd及约1×10-4/sec的解离速率。在本发明的一个实施例中，解离速率为<1×10-5/sec。在本发明的其他实施例中，抗体以介于约10-7m与10-10m之间的kd结合决定子，且在又另一实施例中其以kd≤2×10-10m结合。本发明的仍其他所选的实施例包含以下抗体，这些抗体具有小于10-6m、小于5×10-6m、小于10-7m、小于5×10-7m、小于10-8m、小于5×10-8m、小于10-9m、小于5×10-9m、小于10-10m、小于5×10-10m、小于10-11m、小于5×10-11m、小于10-12m、小于5×10-12m、小于10-13m、小于5×10-13m、小于10-14m、小于5×10-14m、小于10-15m或小于5×10-15m的kd(koff/kon)。在某些实施例中，免疫特异性结合到决定子例如mmp16的本发明的抗体可以具有的缔合速率常数或kon(或ka)速率(抗体+抗原(ag)kon←抗体-ag)为至少105m-ls-l、至少2×105m-ls-l、至少5×105m-ls-l、至少106m-ls-l、至少5×106m-ls-l、至少107m-ls-l、至少5×107m-ls-l或至少108m-ls-l。在另一个实施例中，免疫特异性结合到决定子例如mmp16的本发明的抗体可以具有的解离速率常数或koff(或kd)速率(抗体+抗原(ag)koff←抗体-ag)为小于l0-ls-l、小于5×l0-ls-l、小于l0-2s-l、小于5×l0-2s-l、小于l0-3s-l、小于5×l0-3s-l、小于l0-4s-l、小于5×l04s-l、小于l0-5s-l、小于5×l0-5s-l、小于l0-6s-l、小于5×l0-6s-l、小于l0-7s-l、小于5×l0-7s-l、小于l0-8s-l、小于5×l0-8s-l、小于l0-9s-l、小于5×l0-9s-l或小于l0-10s-l。可以使用本领域已知的各种技术来确定结合亲和力，例如表面等离子体共振、生物层干涉法、双极化干涉法、静态光散射、动态光散射、等温滴定量热法、elisa、分析超速离心和流式细胞术。e.分仓及表位映射本文所披露的抗体可根据其所缔合的离散表位来表征。“表位”是抗体或免疫反应性片段特异性结合的决定子的一个或多个部分。免疫特异性结合可以基于如上所述的结合亲和力，或者通过抗体对蛋白质和/或大分子的复杂混合物中的其靶抗原的优先识别(例如在竞争性测定中)来确认和定义。“线性表位”由允许抗体的免疫特异性结合的抗原中的连续氨基酸形成。即使当抗原变性时，也典型地保持了优先结合线性表位的能力。相反，“构象表位”通常包含抗原氨基酸序列中的非连续氨基酸，但在抗原的二级、三级或四级结构的情况下，这些非连续氨基酸足够接近以被单一抗体同时结合。当具有构象表位的抗原变性时，抗体通常将不再识别该抗原。表位(连续或非连续)一般包括处于独特空间构象的至少3个、并且更通常至少5个或8-10个或12-20个氨基酸。根据抗体所属的组或“仓”来表征本发明的抗体也是可能的。“分仓”是指使用竞争性抗体结合测定来鉴定不能同时结合免疫原性决定子的抗体对，从而鉴定“竞争”结合的抗体。可以通过以下测定来确定竞争性抗体，在该测定中被测试的抗体或免疫学功能片段防止或抑制参比抗体与共同抗原的特异性结合。典型地，此类测定涉及使用结合到固体表面或细胞、未标记的测试抗体和标记的参比抗体的经纯化的抗原(例如，mmp16或其结构域或片段)。在测试抗体存在下，通过确定结合于固体表面或细胞的标记的量来测量竞争性抑制。有关用于确定竞争性结合的方法的其他细节提供于本文的实例中。通常，当竞争性抗体过量存在时，它将使参比抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，结合被抑制至少80％、85％、90％、95％、或97％或更多。相反地，当参比抗体结合时，它将优选地使随后添加的测试抗体(即，mmp16抗体)的结合抑制至少30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，测试抗体的结合被抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更多。通常可以使用各种本领域认可的技术来确定分仓或竞争性结合，例如像免疫测定如蛋白质印迹、放射免疫测定、酶联免疫吸附测定(elisa)、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体固定测定、免疫放射测定、荧光免疫测定以及蛋白a免疫测定。此类免疫测定是本领域常规且熟知的(参见，ausubel等人编辑，(1994)currentprotocolsinmolecularbiology[当前分子生物学方案]，第1卷，johnwiley&sons，inc.，newyork[约翰威立父子公司，纽约])。另外地，可以使用交叉阻断测定(参见例如，wo2003/48731；以及harlow等人(1988)antibodies，alaboratorymanual，coldspringharborlaboratory，edharlowanddavidlane[抗体：实验室手册，冷泉港实验室，edharlow和davidlane])。用于确定竞争性抑制(以及由此产生的“仓”)的其他技术包括：使用例如biacoretm2000系统(ge医疗集团)的表面等离子体共振；使用例如octetred(福特生物公司(fortebio))的生物层干涉法；或使用例如facscantoii(bd生物科学公司(bdbiosciences))的流式细胞术珠粒阵列；或多重luminextm检测测定(路明克斯公司(luminex))。luminex是一种能够进行大规模的多重抗体配对的基于珠粒的免疫测定平台。该测定比较了抗体对与靶抗原的同时结合模式。该对中的一种抗体(捕获mab)与luminex珠结合，其中每个捕获mab与不同颜色的珠结合。另一种抗体(检测器mab)与荧光信号(例如藻红蛋白(pe))结合。该测定分析了抗体与抗原的同时结合(配对)，并将具有类似配对谱的抗体组合在一起。检测器mab和捕获mab的相似谱表明这两种抗体结合相同或紧密相关的表位。在一个实施例中，可以使用皮尔森(pearson)相关系数来确定配对谱以鉴定与被测试的抗体组中的任何特定抗体最密切相关的抗体。在实施例中，如果抗体对的皮尔森相关系数为至少0.9，则确定测试/检测器mab处于与参考/捕获mab相同的仓内。在其他实施例中，皮尔森相关系数为至少0.8、0.85、0.87或0.89。在另外的实施例中，皮尔森相关系数为至少0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1。分析从luminex测定获得的数据的其他方法描述于u.s.p.n.8,568,992中。luminex同时分析100种不同类型的珠(或更多)的能力提供了几乎无限的抗原和/或抗体表面，这导致与生物传感器测定相比抗体表位谱分析中改善的通量和分辨率(miller等人，2011，pmid:21223970)。类似地，包含表面等离子体共振的分仓技术是与本发明相容的。如在此所使用，“表面等离子体共振”是指一种光学现象，它允许通过检测生物传感器矩阵内蛋白浓度的变化来分析实时特异性相互作用。使用市售设备如biacoretm2000系统，可以容易地确定选择的抗体是否与确定的抗原彼此竞争结合。在其他实施例中，可用于确定测试抗体是否与参比抗体“竞争”结合的技术是“生物层干涉法”，这是一种光学分析技术，其分析从两个表面：生物传感器尖端(tip)上的一层固定化蛋白质和内部参比层反射的白光的干涉图案。结合到生物传感器尖端的分子数量的任何改变都引起可以实时测量的干涉图案的转变。可以使用如下的octetred机器来进行这样的生物层干涉测定。将参比抗体(ab1)捕获到抗小鼠捕获芯片上，然后使用高浓度非结合抗体来阻断该芯片并且收集基线。然后，通过特异性抗体(ab1)捕获重组靶蛋白并且将尖端浸入与具有相同抗体(ab1)的孔(作为对照)中或浸入具有不同测试抗体(ab2)的孔中。如通过将结合水平与对照ab1相比较所测定的，如果未发生另外的结合，那么确定ab1和ab2为“竞争性”抗体。如果针对ab2观察到另外的结合，则确定ab1和ab2不相互竞争。这一方法可以扩大到使用代表独特仓的96孔板中的一整行抗体来筛选较大的独特抗体文库。在实施例中，如果参比抗体使测试抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，则测试抗体将与参比抗体竞争。在其他实施例中，结合被抑制至少80％、85％、90％、95％、或97％或更多。一旦包含一组竞争性抗体的仓已被定义，则可以进行进一步表征以确定该组抗体所结合的抗原上的特定结构域或表位。使用由cochran等人，2004，pmid:15099763所描述的方案的修改来进行结构域水平表位作图。精细表位作图是在包含抗体所结合决定子的表位的抗原上，确定特异性氨基酸的过程。在某些实施例中，可以使用噬菌体或酵母展示来进行精细表位作图。其他相容的表位作图技术包括丙氨酸扫描突变体、肽印迹(reineke，2004，pmid:14970513)或肽切割分析。另外，可以利用诸如表位切除、表位提取和抗原的化学修饰等的方法(tomer，2000，pmid:10752610)，使用酶如蛋白水解酶(例如，胰蛋白酶、内蛋白酶glu-c、内蛋白酶asp-n、胰凝乳蛋白酶等)；化学试剂如琥珀酰亚胺酯及其衍生物，含伯胺的化合物，肼和碳水化合物，游离氨基酸等。在另一个实施例中，修饰辅助的谱分析，又称为基于抗原结构的抗体谱分析(asap)可以用于根据每一抗体与化学或酶促修饰的抗原表面的结合谱的相似性对针对相同抗原的大量单克隆抗体进行分类(u.s.p.n.2004/0101920)。一旦在抗原上确定了所希望的表位，就有可能例如通过使用本文所述的技术，用包含所选表位的肽进行免疫接种来产生针对该表位的另外的抗体。v.抗体缀合物在一些实施例中，本发明的抗体可以与药学活性部分或诊断部分缀合以形成“抗体药物缀合物”(adc)或“抗体缀合物”。术语“缀合”被广泛地使用并且意指任何药学活性部分或诊断部分与本发明的抗体的共价或非共价缔合，而不管缔合方法如何。在某些实施例中，该缔合通过抗体的赖氨酸或半胱氨酸残基来实现。在一些实施例中，药物活性部分或诊断部分可以经由一个或多个位点特异性游离半胱氨酸与抗体缀合。所披露的adc可以用于治疗和诊断目的。本发明的adc可以用于将细胞毒素或其他有效载荷递送到靶位置(例如，肿瘤发生细胞和/或表达mmp16的细胞)。如本文所阐述，术语“药物”或“弹头”可以互换使用，并且将意指生物活性或可检测分子或药物，包括如下所述的抗癌剂或细胞毒素。“有效载荷”可以包含与任选的接头化合物的组合的“药物”或“弹头”。缀合物上的弹头可以包含肽、蛋白质或在体内代谢为活性剂的前药、聚合物、核酸分子、小分子、结合剂、模拟剂、合成药物、无机分子、有机分子及放射性同位素。在优选的实施例中，所披露的adc将所结合的有效载荷在相对无反应、无毒性状态下导引至靶位点，随后释放且活化弹头(例如如本文所披露的pbds1-5)。弹头的这种靶向释放优选地通过有效载荷和adc制剂的相对均质的组合物的稳定缀合(例如，经由抗体上的一个或多个半胱氨酸)来实现，其使过度缀合的(over-conjugated)毒性adc种类最少化。与药物相偶联的接头被设计为一旦被递送到肿瘤部位时大量释放弹头，本发明的缀合物可以显著减少不希望的非特异性毒性。这有利地在肿瘤部位提供相对高水平的活性细胞毒素，同时使非靶向细胞和组织的暴露最小化，从而提供增强的治疗指数。将理解的是，虽然本发明的一些实施例包含掺入治疗性部分(例如细胞毒素)的有效载荷，但是掺入诊断剂和生物相容性修饰剂的有效载荷可从所披露的缀合物提供的靶向释放中受益。因此，针对示例性治疗有效载荷的任何披露也适用于含有如在此所论述的诊断剂或生物相容性修饰物的有效载荷，除非上下文另有规定。所选有效载荷可以与该抗体共价或非共价连接，并且至少部分取决于用于实现该缀合的方法而展现不同的化学计量的摩尔比率。本发明的缀合物通常可以由下式表示：ab-[l-d]n或其药学上可接受的盐，其中：a)ab包含抗mmp16抗体；b)l包括任选的接头；c)d包含药物；并且d)n是从约1到约20的整数。本领域技术人员将理解，根据上述式的缀合物可以使用许多不同的接头和药物制造，并且缀合方法将根据组分的选择而变化。因此，与所披露的抗体的反应性残基(例如，半胱氨酸或赖氨酸)缔合的任何药物或药物接头化合物是与本文的传授内容相容的。类似地，允许所选择的药物与抗体的缀合(包括位点特异性缀合)的任何反应条件都在本发明的范围内。尽管如此，本发明的一些优选实施例包含使用稳定剂与如在此所述的温和还原剂的组合进行的药物或药物接头与游离半胱氨酸的选择性缀合。这种反应条件倾向于提供更均质的制剂，该制剂具有较少的非特异性缀合和污染物以及相应较少的毒性。a.弹头1.治疗剂本发明的抗体可以与作为治疗性部分的药学活性部分或药物缀合、连接或融合或以其他方式缔合，所述药物如抗癌剂，包括但不限于细胞毒性剂(或细胞毒素)、细胞生长抑制剂、抗血管生成剂、减瘤剂、化学治疗剂、放射性治疗剂、靶向性抗癌剂、生物反应修饰剂、癌症疫苗、细胞因子、激素疗法、抗转移剂和免疫治疗剂。示例性抗癌剂或细胞毒素(包括同系物及其衍生物)包含1-脱氢睾酮、安曲霉素、放线菌素d、博来霉素、卡奇霉素(包括n-乙酰基卡奇霉素)、秋水仙素、环磷酰胺、细胞松弛素b、更生霉素(以前称为放线菌素)、二羟基炭疽菌、二酮、多卡米新、埃米汀、表柔比星、溴化乙锭、依托泊苷、糖皮质激素、短杆菌肽d、利多卡因、美登木素生物碱如dm-1和dm-4(immunogen公司)、苯并二氮杂卓衍生物(immunogen公司)、光辉霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、紫杉醇、普罗卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、替尼泊苷(tenoposide)、丁卡因及以上任一项的药学上可接受的盐或溶剂合物、酸或其衍生物。另外的相容性细胞毒素包含多拉司他汀和澳瑞他汀(auristatin)，包括单甲基澳瑞他汀e(mmae)和单甲基澳瑞他汀f(mmaf)(赛特基因公司(seattlegenetics))；鹅膏菌素，如α-鹅膏菌素、β-鹅膏菌素、γ-鹅膏菌素或ε-鹅膏菌素(海德伯格制药公司(heidelbergpharma))；dna小沟结合剂，如倍癌霉素(duocarmycin)衍生物(信达加公司(syntarga))；烷化剂，如经修饰的或二聚的吡咯并苯并二氮杂卓(pbd)、氮芥、塞替派(thioepa)、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(bcnu)、洛莫司汀(ccnu)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素c以及顺二氯二氨合铂(ii)(ddp)顺铂；剪接抑制剂，如米亚霉素(meayamycin)类似物或衍生物(例如fr901464，如u.s.p.n.7,825,267中所陈述)；管结合剂(tubularbindingagent)，如埃博霉素类似物和微管蛋白抑制剂(tubulysin)；紫杉醇；及dna损伤剂，如卡奇霉素和埃斯波霉素(esperamicin)；抗代谢物，如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷及5-氟尿嘧啶氨烯咪胺；抗有丝分裂剂，如长春花碱和长春新碱；以及蒽环类，如柔红霉素(以前称为道诺霉素)和多柔比星；以及以上任一项的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。在所选实施例中，本发明的抗体可以与抗cd3结合分子缔合以募集细胞毒性t细胞并且使其靶向肿瘤发生细胞(百特技术公司(bitetechnology)；参见例如，fuhrmann等人(2010)annualmeetingofaacrabstract[美国癌症研究学会年会摘要]，第5625期)。在另外的实施例中，本发明的adc可以包含使用适当接头缀合的治疗性放射性同位素的细胞毒素。可以与这样的实施例可相容的示例性放射性同位素包括但不限于，碘(131i、125i、123i、121i)、碳(14c)、铜(62cu、64cu、67cu)、硫(35s)、镭(223ra)、氚(3h)、铟(115in、113in、112in、111in)、铋(212bi、213bi)、锝(99tc)、铊(201ti)、镓(68ga、67ga)、钯(103pd)、钼(99mo)、氙(133xe)、氟(18f)、153sm、177lu、159gd、149pm、140la、175yb、166ho、90y、47sc、186re、188re、142pr、105rh、97ru、68ge、57co、65zn、85sr、32p、153gd、169yb、51cr、54mn、75se、113sn、117sn、76br、211at以及225ac。其他放射性核素也可用作诊断和治疗剂，尤其是在60到4,000kev能量范围内的那些。在其他所选实施例中，本发明的adc将与细胞毒性苯并二氮杂卓衍生物弹头进行缀合。可以与披露的抗体缀合的相容性苯并二氮杂卓衍生物(和任选的接头)描述于例如u.s.p.n.8,426,402和pct申请wo2012/128868和wo2014/031566中。与pbd一样，相容性苯并二氮杂卓衍生物被认为在dna的小沟中结合并抑制核酸合成。据报道，这些化合物具有有效的抗肿瘤特性，并且因此特别适用于本发明的adc。在一些实施例中，本发明的adc可包含pbd及其药学上可接受的盐或溶剂合物、酸或衍生物，作为弹头。pbd是烷化剂，烷化剂通过共价结合到小沟中的dna并抑制核酸合成来发挥抗肿瘤活性。已经显示pbd具有有效的抗肿瘤特性，同时展现出最少的骨髓抑制。与本发明可相容的pbd可以使用若干类型接头(例如包含马来酰亚胺部分并带有游离巯基的肽基接头)连接到抗体，并且在某些实施例中呈二聚物形式(即，pbd二聚物)。可以缀合到所披露的抗体的相容性pbd(和任选的接头)描述于例如u.s.p.n.6,362,331、7,049,311、7,189,710、7,429,658、7,407,951、7,741,319、7,557,099、8,034,808、8,163,736、2011/0256157以及pct文件wo2011/130613、wo2011/128650、wo2011/130616、wo2014/057073和wo2014/057074中。下面紧接着详细地论述了与本发明相容的pbd化合物的实例。关于本发明，已经显示pbd具有有效的抗肿瘤特性，同时表现出最小的骨髓抑制。与本发明相容的pbd可以使用若干类型接头中的任一种(例如包含马来酰亚胺部分并带有游离巯基的肽基接头)与mmp16靶向剂连接，并且在某些实施例中呈二聚体形式(即，pbd二聚体)。pbd具有以下通用结构：它们在其芳族a环和吡咯c环中的取代基的数量、类型和位置以及c环的饱和度方面都不同。在b环中，在n10-c11位置上存在亚胺(n＝c)、甲醇胺(nh-ch(oh))或甲醇胺甲基醚(nh-ch(ome))，该位置是负责烷化dna的亲电子中心。所有已知的天然产物在手性c11a位置处具有(s)-构型，当从c环向a环看时，该(s)-构型提供了右旋扭曲。这给予它们针对与b型dna的小沟的同螺旋性的适当三维形状，导致在结合位点处的紧密贴合(kohn，在antibioticsiii.[抗生素iii]springer-verlag[施普林格出版社]，纽约，第3-11页(1975)中；hurley和needham-vandevanter，acc.chem.res.[化学研究评述]，19，230-237(1986))。它们在小沟中形成加合物的能力使其能够干扰dna加工并充当细胞毒性剂。如上暗指的，为了增加其效能，pbd通常以可与本文所述的抗mmp16抗体缀合的二聚体形式使用。在本发明的某些实施例中，可缀合至所披露调节剂的相容性pbd描述于u.s.p.n.2011/0256157中。本披露提供显示具有某些有利性质的pbd二聚体(即包含两个pbd部分的那些二聚体)。就此而言，所选本发明的adc包含具有式(ab)或(ac)的pbd毒素：其中：虚线指示在c1与c2或c2与c3之间任选的存在双键；r2独立地选自h、oh、＝o、＝ch2、cn、r、or、＝ch-rd、＝c(rd)2、o-so2-r、co2r以及cor，并且任选地进一步选自卤基或二卤基；其中rd独立地选自r、co2r、cor、cho、co2h及卤基；r6和r9独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn及卤基；r7独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn及卤基；r10为连接到如本文所描述的mmp16抗体或其片段或衍生物的接头；q独立地选自o、s及nh；r11为h或r，或其中q为o，r11可以为so3m，其中m为金属阳离子；x选自o、s或n(h)，并且在所选实施例中，包括o；r”是c3-12亚烷基，其链可以间杂有一个或多个杂原子(例如o、s、n(h)、nme和/或芳香族环，例如苯或吡啶，这些环任选地被取代)；r及r’各自独立地选自任选地经取代的c1-12烷基、c3-20杂环基及c5-20芳基基团，且任选地对于基团nrr’，r和r’与其所附接的氮原子一起形成任选地经取代的4-、5-、6-或7元杂环；并且其中r2”、r6”、r7”、r9”、x”、q”以及r11”(如果存在)分别如根据r2、r6、r7、r9、x、q以及r11所定义，并且rc为封端基团。下面紧接着更详细地描述包括上述结构的所选实施例。双键在一个实施例中，在c1与c2和c2与c3之间不存在双键。在一个实施例中，这些虚线指示了在c2与c3之间任选地存在双键，如以下所示：在一个实施例中，当r2为c5-20芳基或c1-12烷基时，双键存在于c2与c3之间。在一个优选的实施例中，r2包括甲基基团。在一个实施例中，这些虚线指示了在c1与c2之间任选地存在双键，如以下所示：在一个实施例中，当r2为c5-20芳基或c1-12烷基时，双键存在于c1与c2之间。在一个优选的实施例中，r2包括甲基基团。r2在一个实施例中，r2独立地选自h、oh、＝o、＝ch2、cn、r、or、＝ch-rd、＝c(rd)2、o-so2-r、co2r以及cor，并且任选地进一步选自卤基或二卤基。在一个实施例中，r2独立地选自h、oh、＝o、＝ch2、cn、r、or、＝ch-rd、＝c(rd)2、o-so2-r、co2r以及cor。在一个实施例中，r2独立地选自h、＝o、＝ch2、r、＝ch-rd以及＝c(rd)2。在一个实施例中，r2独立地为h。在一个实施例中，r2独立地为r，其中r包括ch3。在一个实施例中，r2独立地为＝o。在一个实施例中，r2独立地为＝ch2。在一个实施例中，r2独立地为＝ch-rd。在该pbd化合物内，基团＝ch-rd可以具有以下所示的任一构型：在一个实施例中，该构型为构型(i)。在一个实施例中，r2独立地为＝c(rd)2。在一个实施例中，r2独立地为＝cf2。在一个实施例中，r2独立地为r。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的c5-20芳基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的c1-12烷基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的c5-20芳基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的c5-7芳基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的c8-10芳基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的苯基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的萘基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的吡啶基。在一个实施例中，r2独立地为任选地取代的喹啉基或异喹啉基。在一个实施例中，r2带有一个到三个取代基，其中1个和2个为更优选的，并且单取代的基团是最优选的。这些取代可以处于任何位置。在r2为c5-7芳基的情况下，单一取代基优选地处于不与到该化合物的其余部分的键相邻的环原子上，即，优选地在相对于到该化合物的其余部分的键的β或γ位。因此，在该c5-7芳基为苯基的情况下，该取代基优选地在间位或对位，并且更优选地在对位中。在一个实施例中，r2选自：其中星号指示附接点。在r2为c8-10芳基，例如喹啉基或异喹啉基的情况下，它可以在这些喹啉或异喹啉环的任何位置处带有任何数量的取代基。在一些实施例中，它带有一个、两个或三个取代基，并且这些取代基可以位于近端或远端环或两者(如果有超过一个取代基)上。在一个实施例中，在r2任选地被取代的情况下，这些取代基选自以下取代基部分中所给的那些取代基。在r任选地被取代的情况下，这些取代基优选地选自：卤基、羟基、醚、甲酰基、酰基、羧基、酯、酰氧基、氨基、酰氨基、酰基酰氨基、氨基羰氧基、脲基、硝基、氰基及硫醚。在一个实施例中，在r或r2任选地被取代的情况下，这些取代基选自下组，该组由以下组成：r、or、sr、nrr’、no2、卤基、co2r、cor、conh2、conhr以及conrr’。在r2为c1-12烷基的情况下，任选的取代基可以另外地包括c3-20杂环基和c5-20芳基。在r2为c3-20杂环基的情况下，任选的取代基可以另外地包括c1-12烷基和c5-20芳基。在r2为c5-20芳基的情况下，任选的取代基可以另外地包括c3-20杂环基和c1-12烷基。应了解的是，术语“烷基”涵盖烯基和炔基以及环烷基亚类。因此，在r2为任选地取代的c1-12烷基的情况下，应了解的是，该烷基任选地含有一个或多个碳-碳双键或三键，这些键可以形成共轭系统的一部分。在一个实施例中，该任选地取代的c1-12烷基含有至少一个碳-碳双键或三键，并且该键与出现在c1与c2或c2与c3之间的双键共轭。在一个实施例中，该c1-12烷基是选自饱和c1-12烷基、c2-12烯基、c2-12炔基和c3-12环烷基。如果在r2上的取代基为卤基，那么它优选地为f或cl，更优选地为cl。如果在r2上的取代基为醚，那么在一些实施例中，它可以是烷氧基，例如c1-7烷氧基(例如甲氧基、乙氧基)，或在一些实施例中，它可以是c5-7芳氧基(例如苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基)。如果在r2上的取代基为c1-7烷基，那么它可以优选地为c1-4烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基)。如果在r2上的取代基为c3-7杂环基，那么在一些实施例中，它可以是含c6氮的杂环基，例如吗啉基、硫吗啉基、哌啶基、哌嗪基。这些基团可以经由氮原子结合到pbd部分的其余部分。这些基团可以进一步被例如c1-4烷基取代。如果在r2上的取代基为双-氧基-c1-3亚烷基，那么这优选地为双-氧基-亚甲基或双-氧基-亚乙基。r2的特别优选的取代基包括甲氧基、乙氧基、氟代、氯代、氰基、双-氧基-亚甲基、甲基-哌嗪基、吗啉基及甲基-噻吩基。特别优选的取代的r2基团包括但不限于，4-甲氧基-苯基、3-甲氧基苯基、4-乙氧基-苯基、3-乙氧基-苯基、4-氟代-苯基、4-氯代-苯基、3,4-双氧基亚甲基-苯基、4-甲基噻吩基、4-氰基苯基、4-苯氧基苯基、喹啉-3-基及喹啉-6-基、异喹啉-3-基及异喹啉-6-基、2-噻吩基、2-呋喃基、甲氧基萘基及萘基。在一个实施例中，r2为卤基或二卤基。在一个实施例中，r2为-f或-f2，这些取代基在以下分别地以(iii)和(iv)说明：rd在一个实施例中，rd独立地选自r、co2r、cor、cho、co2h及卤基。在一个实施例中，rd独立地为r。在一个实施例中，rd独立地为卤基。r6在一个实施例中，r6独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn-及卤基。在一个实施例中，r6独立地选自h、oh、or、sh、nh2、no2及卤基。在一个实施例中，r6独立地选自h和卤基。在一个实施例中，r6独立地为h。在一个实施例中，r6和r7一起形成基团-o-(ch2)p-o-，其中p为1或2。r7r7独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn及卤基。在一个实施例中，r7独立地为or。在一个实施例中，r7独立地为or7a，其中r7a独立地为任选地取代的c1-6烷基。在一个实施例中，r7a独立地为任选地取代的饱和c1-6烷基。在一个实施例中，r7a独立地为任选地取代的c2-4烯基。在一个实施例中，r7a独立地为me。在一个实施例中，r7a独立地为ch2ph。在一个实施例中，r7a独立地为烯丙基。在一个实施例中，该化合物是二聚物，其中每一单体的r7基团一起形成连接单体的具有式x-r″-x的二聚物桥。r9在一个实施例中，r9独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn-及卤基。在一个实施例中，r9独立地为h。在一个实施例中，r9独立地为r或or。r10优选地相容性接头(如本文所述的那些)通过在r10位(即，n10)处的一个或多个共价键将mmp16抗体连接到pbd药物部分。q在某些实施例中，q独立地选自o、s和nh。在一个实施例中，q独立地为o。在一个实施例中，q独立地为s。在一个实施例中，q独立地为nh。r11在所选实施例中，r11为h或r，或其中q为o，可以为so3m，其中m为金属阳离子。该阳离子可以是na+。在某些实施例中，r11为h。在某些实施例中，r11为r。在某些实施例中，其中q为o，r11为so3m，其中m为金属阳离子。该阳离子可以是na+。在某些实施例中，其中q为o，r11为h。在某些实施例中，其中q为o，r11为r。x在一个实施例，x选自o、s或n(h)。优选地，x为o。r”r”是c3-12亚烷基，其链可以间杂有一个或多个杂原子，例如o、s、n(h)、nme和/或芳香族环，例如苯或吡啶，这些环任选地被取代。在一个实施例中，r”为c3-12亚烷基，其链可以间杂有一个或多个杂原子和/或芳香族环，例如苯或吡啶。在一个实施例中，该亚烷基任选地间杂有一个或多个选自o、s及nme的杂原子和/或芳香族环，这些环任选地被取代。在一个实施例中，该芳香族环为c5-20亚芳基，其中亚芳基属于通过从芳香族化合物的两个芳香族环原子去除两个氢原子获得的二价部分，该部分具有从5到20个环原子。在一个实施例中，r”为c3-12亚烷基，其链可以间杂有一个或多个杂原子，例如o、s、n(h)、nme和/或芳香族环，例如苯或吡啶，这些环任选地被nh2取代。在一个实施例中，r”为c3-12亚烷基。在一个实施例中，r”选自c3、c5、c7、c9以及c11亚烷基。在一个实施例中，r”选自c3、c5以及c7亚烷基。在一个实施例中，r”选自c3和c5亚烷基。在一个实施例中，r”为c3亚烷基。在一个实施例中，r”为c5亚烷基。以上所列的亚烷基可以任选地间杂有一个或多个杂原子和/或芳香族环，例如苯或吡啶，这些环任选地被取代。以上所列的亚烷基可以任选地间杂有一个或多个杂原子和/或芳香族环，例如苯或吡啶。以上所列的亚烷基可以为未取代的线性脂肪族亚烷基。r和r’在一个实施例中，r独立地选自任选地取代的c1-12烷基、c3-20杂环基及c5-20芳基。在一个实施例中，r独立地为任选地取代的c1-12烷基。在一个实施例中，r独立地为任选地取代的c3-20杂环基。在一个实施例中，r独立地为任选地取代的c5-20芳基。以上关于r2的描述是与优选的烷基和芳基以及任选的取代基的身份和数目有关的不同实施例。适当时，由于r2适用于r，故关于其所陈述的优先选择适用于所有其他r，例如，其中r6、r7、r8或r9为r。关于r的优先选择也适用于r’。在本发明的一些实施例中，提供了一种具有取代基-nrr’的化合物。在一个实施例中，r和r’连同它们所附接的氮原子形成任选地取代的4-、5-、6-或7-元杂环状环。该环可以含有另外的杂原子，例如n、o或s。在一个实施例中，该杂环状环本身被基团r取代。在另外的n杂原子存在的情况下，该取代基可以位于该n杂原子上。除了上述pbd之外，某些二聚体pbd已经显示出特别有活性并且可以与本发明结合使用。为此，本发明的抗体药物缀合物(即如本文所披露的adc1-6)可以包含下文紧接着作为pbd1-5列出的pbd化合物。请注意，下面的pbd1-5包含分离接头后释放的细胞毒性弹头，如本文更详细描述的那些。作为药物-接头化合物的组分的pbd1-5各自的合成极详细地呈现于wo2014/130879中，将其关于这样的合成通过引用结合在此。鉴于wo2014/130879，可包含本发明的adc的所选弹头的细胞毒性化合物可以如本文所陈述地容易地生成和使用。因此，在从接头分离时可以从所披露的adc中释放的所选pbd化合物紧接着示于以下：以及应理解的是，上述每个二聚体pbd弹头将优选在靶细胞内化和接头破坏时释放。如下面更详细描述的，某些接头将包含可切割的接头，其可以掺入允许活性pbd弹头释放而不保留接头的任何部分的自灭部分。释放后，pbd弹头将与靶细胞的dna结合并交联。据报道，这种结合阻断了靶癌细胞的分裂而不扭曲其dna螺旋，从而潜在地避免了出现耐药性的普遍现象。在其他优选的实施例中，弹头可以通过不包含自灭部分的可切割接头而与mmp16靶向部分连接。根据本披露，这样的化合物在一个或多个肿瘤部位的递送和释放可以证明在治疗或管理增生性病症方面是临床上有效的。关于所述化合物，应理解的是，每个披露的pbd在每个c-环中具有两个sp2中心，这可以允许比在每个c-环中仅具有一个sp2中心的化合物的在dna的小沟中具有更强的结合(以及由此产生的更大的毒性)。因此，当用于如本文所陈述的mmp16adc时，所披露的pbd可以证明对于增生性病症的治疗特别有效。上文提供了与本发明相容的示例性pbd化合物，并且决不意味着限制根据本文的传授内容可以成功掺入抗mmp16缀合物中的其他pbd。而是，可以与如本文所述和下文实例中所陈述的抗体缀合的任何pbd是与所披露的缀合物相容的，并且明确地在本发明的界限和范围内。除了上述试剂之外，本发明的抗体还可以与生物反应修饰剂缀合。在某些实施例中，该生物反应修饰剂将包括白细胞介素2、干扰素或各种类型的集落刺激因子(例如，csf、gm-csf、g-csf)。更一般地，相关药物部分可以是具有所希望的生物活性的多肽。这样的蛋白质可以包括例如毒素，如相思豆毒素、蓖麻毒素a、豹蛙酶(或另一种细胞毒性rna酶)、绿脓杆菌外毒素、霍乱毒素、白喉毒素；凋亡剂，如肿瘤坏死因子(例如tnf-α或tnf-β)、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生的生长因子、组织纤溶酶原活化物、aimi(wo97/33899)、aimii(wo97/34911)、fas配体(takahashi等人，1994，pmid:7826947)及vegi(wo99/23105))、血栓剂、抗血管生成剂(例如，血管抑素或内皮抑素)、淋巴因子(例如，白细胞介素-1(il-1)、白细胞介素-2(il-2)、白细胞介素-6(il-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)及粒细胞集落刺激因子(g-csf))或生长因子(例如，生长激素(gh))。2.诊断剂或检测剂在其他实施例中，将本发明的抗体或其片段或衍生物缀合到一种诊断或可检测试剂、标记物或报道子(它可以例如为生物分子(例如肽或核苷酸)、小分子、荧光团或放射性同位素)。标记的抗体可以用于监测过度增生性病症的进展或进程，或作为一种临床测试程序的一部分，以确定包括所披露的抗体的特定疗法(即，治疗诊断剂)的功效或确定治疗的未来过程。这些标记物或报道子也可以用于纯化所选抗体、用于抗体分析学(例如表位结合或抗体分仓)、分开或分离肿瘤发生细胞、或用于临床前程序或毒理学研究中。此类诊断和/或检测可以通过将抗体与可检测物质偶合实现，这些可检测物质包括但不限于，不同酶，包含例如辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，如但不限于，抗生蛋白链菌素生物素和抗生物素蛋白/生物素；荧光材料，如但不限于，伞酮、荧光素、荧光素异硫氰酸酯、若丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红素；发光材料，如但不限于，鲁米诺；生物发光材料，如但不限于，荧光素酶、虫荧光素及水母发光蛋白；放射性材料，如但不限于，碘(131i、125i、123i、121i,)、碳(14c)、硫(35s)、氚(3h)、铟(115in、113in、112in、111in,)、锝(99tc)、铊(201ti)、镓(68ga、67ga)、钯(103pd)、钼(99mo)、氙(133xe)、氟(18f)、153sm、177lu、159gd、149pm、140la、175yb、166ho、90y、47sc、186re、188re、142pr、105rh、97ru、68ge、57co、65zn、85sr、32p、89zr、153gd、169yb、51cr、54mn、75se、113sn以及117tin；以及使用不同正电子发射断层扫描的正电子发射金属、非放射性顺磁性金属离子，及放射性标记或缀合到特定放射性同位素的分子。在这样的实施例中，适当的检测方法是本领域熟知的并且可容易地从众多商业来源获得。在其他实施例中，可以将抗体或其片段与标记物序列或化合物(如肽或荧光团)融合或偶联以促进纯化或诊断或分析程序，如免疫组织化学、生物层干涉法、表面等离子体共振、流式细胞术、竞争性elisa、fac等。在一些实施例中，该标记物包含组氨酸标签，如由pqe载体(凯杰公司(qiagen))等提供的那些，其中有许多是可商购的。可用于纯化的其他肽标签包括但不限于，血球凝集素“ha”标签，该标签对应于衍生自流感血球凝集素蛋白的表位(wilson等人，1984，cell[细胞]37:767)；及“flag”标签(u.s.p.n.4,703,004)。3.生物相容性修饰剂在所选实施例中，必要时，本发明的抗体可以与生物相容性修饰剂缀合，这些修饰剂可以用于调整、改变、改善或缓和抗体表征。例如，可以通过附接相对较高分子量的聚合物分子(如可商购的聚乙二醇(peg)或类似的生物相容性聚合物)来产生具有增加的体内半衰期的抗体或融合构建体。本领域技术人员应理解，获得的peg可以呈许多不同的分子量和分子构象，可以对这些进行选择以赋予该抗体特定特性(例如，可以裁剪半衰期)。peg可以在存在或不存在多官能接头的情况下，通过peg与所述抗体或抗体片段的n-末端或c-末端缀合或经由赖氨酸残基上存在的ε-氨基而附接到抗体或抗体片段或衍生物。可以使用使生物活性的损失最少的线性或分支聚合物衍生化。缀合程度可以通过sds-page和质谱法密切监测，以确保peg分子与抗体的最佳缀合。可以通过例如尺寸排除或离子交换色谱来从抗体peg缀合物中分离未反应的peg。以类似的方式，可以将所披露的抗体缀合到白蛋白，以使该抗体或抗体片段在体内更稳定或具有更长的体内半衰期。这些技术是本领域中众所周知的，参见例如，wo93/15199、wo93/15200及wo01/77137；及ep0413,622。其他生物相容性缀合物对于普通技术人员是显而易见的并且可以容易地根据在此的传授内容鉴定。b.接头化合物如上所指示，与本发明相容的有效载荷包括一个或多个弹头以及任选地将弹头与抗体靶向剂缔合的接头。许多接头化合物可用于将本发明的抗体缀合到相关的弹头上。所述接头仅需要与抗体上的反应性残基(优选半胱氨酸或赖氨酸)和所选的药物化合物共价结合。因此，与所选抗体残基反应并可用于提供本发明的相对稳定的缀合物(位点特异性或其他)的任何接头都与本文的传授内容相容。相容的接头可以有利地与亲核的经还原的半胱氨酸和赖氨酸进行结合。涉及经还原的半胱氨酸和赖氨酸的缀合反应包括但不限于，硫醇-马来酰亚胺、硫醇-卤(酰卤)、硫醇-烯、硫醇-炔、硫醇-乙烯基砜、硫醇-双砜、硫醇-硫代磺酸酯、硫醇-吡啶基二硫化物和硫醇-对氟反应。如在此进一步所论述的，硫醇-马来酰亚胺生物缀合是最广泛使用的方法之一，归因于其快速反应速率和温和的缀合条件。该方法的一个问题是反-迈克尔反应以及来自抗体的马来酰亚胺连接的有效载荷损失或转移到等离子体中的其他蛋白质(例如像人类血清白蛋白)的可能性。然而，在一些实施例中，使用如在本文以下实例中所陈述的选择性还原和位点特异性抗体可用于稳定缀合物并减少这种不希望的转移。硫醇-酰卤反应提供了不能进行反-迈克尔反应并因此更稳定的生物缀合物。然而，与基于马来酰亚胺的缀合相比，硫醇-卤化物反应通常具有较慢的反应速率，并且因此在提供不希望的药物与抗体比方面效率不高。硫醇-吡啶基二硫化物反应是另一种流行的生物缀合途径。吡啶基二硫化物与游离硫醇进行快速交换，得到混合二硫化物和吡啶-2-硫酮的释放。混合二硫化物可以在释放有效载荷的还原性细胞环境中被裂解。在生物缀合中获得更多关注的其他方法是硫醇-乙烯基砜和硫醇-双砜反应，其中每一种都与此处的传授内容相容并且明确地包括在本发明的范围内。在所选实施例中，相容性接头将赋予adc在细胞外环境中的稳定性，防止adc分子的聚集并保持adc自由地溶解于水性介质中并处于单体状态。在运输或递送到细胞中之前，adc优选地为可溶的并且保持完整，即，该抗体保持连接到药物部分。虽然所述接头在靶细胞外是稳定的，但它们可以被设计成在细胞内部以某一有效速率裂解或降解。因此，有效的接头将：(i)维持该抗体的特异性结合特性；(ii)允许该缀合物或药物部分的细胞内递送；(iii)保持稳定和完整，即，未裂解或降解，直到该缀合物已经被递送或运输到其靶位点；并且(iv)维持药物部分的细胞毒性、杀细胞作用或细胞生长抑制作用(在某些情况下，包括任何旁观者效应)。adc的稳定性可以通过标准分析技术如hplc/uplc、质谱、hplc以及分离/分析技术lc/ms和lc/ms/ms来测量。如上所陈述，抗体与药物部分的共价附接需要该接头具有两个反应性官能团，即，在反应性的意义上为二价的。可用于附接两个或更多个功能性或生物活性部分(如mmae和抗体)的二价接头试剂是已知的，并且已经描述了提供与本文的传授内容相容的所得缀合物的方法。与本发明相容的接头可以广泛地分类为可裂解和不可裂解的接头。可以包括酸不稳定接头(例如肟和腙)、蛋白酶可裂解接头和二硫键接头的可裂解接头被内化到靶细胞中，并在细胞内部的内体-溶酶体途径中被裂解。细胞毒素的释放和活化依赖于促进酸不稳定化学键(如腙或肟)裂解的内体/溶酶体酸性区室。如果将溶酶体特异性蛋白酶裂解位点工程化成接头，则细胞毒素将在其细胞内靶标附近释放。可替代地，含有混合二硫化物的接头提供了细胞毒性有效载荷在细胞内释放的方法，因为它们在细胞的还原环境(而不是血流中的富氧环境)中被选择性地裂解。相比之下，含有酰胺连接的聚乙二醇或烷基间隔物的相容性不可裂解的接头在靶细胞内的adc的溶酶体降解期间释放有毒的有效载荷。在一些方面，接头的选择将取决于在缀合物、特定适应症和抗体靶标中使用的具体药物。因此，本发明的某些实施例包含通过裂解剂可裂解的接头，该接头存在于细胞内环境中(例如，在溶酶体或核内体或细胞凹陷内)。该接头可以例如为一种肽基接头，它被细胞内的肽酶或蛋白酶(包括但不限于，溶酶体或核内体蛋白酶)裂解。在一些实施例中，该肽基接头为至少两个氨基酸长或至少三个氨基酸长。裂解剂可以包括组织蛋白酶b和d及纤溶酶，已知它们各自水解二肽药物衍生物，引起靶细胞内部活性药物的释放。通过硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶-b可裂解的示例性肽基接头是包含phe-leu的肽，因为已经发现组织蛋白酶-b在癌组织中高度表达。这样的接头的其他实例例如描述于u.s.p.n.6,214,345中。在特定实施例中，由细胞内的蛋白酶可裂解的肽基接头为val-cit接头、val-ala接头或phe-lys接头。使用该治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优势是当缀合时该药剂典型地衰减，并且该缀合物的血清稳定性相对较高。在其他实施例中，该可裂解接头是ph敏感的。典型地，该ph敏感性接头将在酸性条件下可水解。例如，可以使用在溶酶体中可水解的酸不稳定性接头(例如，腙、肟、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺-乌头酰胺、原酸酯、乙缩醛、缩酮等)(参见例如，u.s.p.n.5,122,368；5,824,805；5,622,929)。这样的接头在中性ph条件(如在血液中的那些)下相对稳定，但在低于ph5.5或5.0(其与溶酶体的ph值近似)下不稳定(例如，可裂解)。在又其他实施例中，该接头在还原条件下为可裂解的(例如，二硫化物接头)。本领域中已知多种二硫化物接头，包括例如，可以使用sata(n-琥珀酰亚胺基-s-乙酰基硫代乙酸酯)、spdp(n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、spdb(n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)及smpt(n-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)形成的那些。在又其他特定实施例中，该接头是丙二酸酯接头(johnson等人，1995，anticancerres.[抗癌研究]15:1387-93)、马来酰亚胺苯甲酰基接头(lau等人，1995，bioorg-med-chem.[生物有机化学与医药化学]3(10):1299-1304)、或3'-n-酰胺类似物(lau等人，1995，bioorg-med-chem.[生物有机化学与医药化学]3(10):1305-12)。在本发明的某些方面，所选接头将包含具有下式的化合物：其中星号表示与药物的自消附接点，cba(即细胞结合剂)包含抗mmp16抗体，l1包含接头单元和任选地可裂解的接头单元，a是将l1连接到抗体上的反应性残基的连接基团(任选地包含间隔子)，l2优选地是共价键，并且可能存在或可能不存在的u可以包括全部或部分自消单元，其有利于在肿瘤部位完全分离接头与弹头。在一些实施例(例如在u.s.p.n.2011/0256157中所陈述的那些)中，相容性接头可以包括：其中星号表示与药物的附接点，cba(即细胞结合剂)包含抗mmp16抗体，l1包含接头和任选地可裂解的接头，a是将l1连接到抗体上的反应性残基的连接基团(任选地包含间隔子)，并且l2是共价键或与-oc(＝o)-一起形成自消部分。应理解的是，在存在的情况下，l1和l2的性质可以变化极大。这些基团是基于其裂解特征而选择，这些特征可以通过该缀合物将被递送到其的位点处的条件规定。在酶作用下裂解的那些接头是优选的，不过也可以使用通过ph值(例如，酸或碱不稳定的)、温度改变或在照射时(例如，光不稳定的)而可裂解的接头。在还原或氧化条件下可裂解的接头也可以用于本发明中。在某些实施例中，l1可以包含连续的氨基酸序列。该氨基酸序列可以是酶裂解的靶底物，借此允许该药物释放。在一个实施例中，l1是通过酶作用可裂解的。在一个实施例中，该酶是酯酶或肽酶。在另一个实施例中，l1是组织蛋白酶不稳定性接头。在一个实施例中，l1包含二肽。该二肽可以表示为-nh-x1-x2-co-，其中-nh-和-co-分别表示氨基酸基团x1和x2的n-末端和c-末端。该二肽中的氨基酸可以是天然氨基酸的任何组合。在该接头为一种组织蛋白酶不稳定性接头的情况下，该二肽可以是组织蛋白酶介导的裂解的作用位点。另外地，对于具有羧基或氨基侧链官能团的那些氨基酸(分别例如glu和lys)，co和nh可以表示该侧链的官能团。在一个实施例中，二肽-nh-x1-x2-co-中的基团-x1-x2-选自：-phe-lys-、-val-ala-、-val-lys-、-ala-lys-、-val-cit-、-phe-cit-、-leu-cit-、-ile-cit-、-phe-arg-及-trp-cit-，其中cit为瓜氨酸。优选地，二肽-nh-x1-x2-co-中的基团-x1-x2-选自：-phe-lys-、-val-ala-、-val-lys-、-ala-lys-以及-val-cit-。最优选地，二肽nh-x1-x2-co-中的基团-x1-x2-为-phe-lys-或-val-ala-或val-cit。在某些所选实施例中，该二肽将包含-val-ala-。在一个实施例中，l2以共价键的形式存在。在一个实施例中，l2是存在的并且与-c(＝o)o-一起形成自消接头。在一个实施例中，l2为酶活性的底物，借此允许该弹头释放。在一个实施例中，在l1在酶作用下可裂解并且l2存在的情况下，该酶将l1与l2之间的键裂解。l1和l2，当存在时，可以通过选自以下各项的键连接：-c(＝o)nh-、-c(＝o)o-、-nhc(＝o)-、-oc(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nhc(＝o)o-、-oc(＝o)nh-及-nhc(＝o)nh-。l1中连接到l2的氨基可以是氨基酸的n-末端，或可以衍生自氨基酸侧链的氨基，例如赖氨酸氨基酸侧链。l1中连接到l2的羧基可以是氨基酸的c-末端，或可以衍生自氨基酸侧链的羧基，例如谷氨酸氨基酸侧链。l1中连接到l2的羟基可以衍生自氨基酸侧链的羟基，例如丝氨酸氨基酸侧链。术语“氨基酸侧链”包括见于以下中的那些基团：(i)天然存在的氨基酸，如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸及缬氨酸；(ii)微量氨基酸，如鸟氨酸和瓜氨酸；(iii)非天然氨基酸、β-氨基酸、天然存在的氨基酸的合成类似物和衍生物；及(iv)其所有对映异构体、非对映异构体、同分异构富集的、同位素标记的(例如，2h、3h、14c、15n)、受保护的形式及外消旋混合物。在一个实施例中，-c(＝o)o-和l2一起形成以下基团：其中星号指示与药物或细胞毒性剂位置的附接点，波浪线指示与接头l1的附接点，y为-n(h)-、-o-、-c(＝o)n(h)-或-c(＝o)o-，并且n为0到3。该亚苯基环任选地被一个、两个或三个取代基取代。在一个实施例中，该亚苯基任选地被卤基、no2、烷基或羟基烷基取代。在一个实施例中，y是nh。在一个实施例中，n是0或1。优选地，n为0。在y为nh并且n为0时，自消接头可以称为对-氨基苄基羰基接头(pabc)。在其他实施例中，该接头可以包括自消接头并且与二肽一起形成基团-nh-val-cit-co-nh-pabc-。在其他所选实施例中，该接头可以包括基团-nh-val-ala-co-nh-pabc-，其示于以下：其中星号指示与所选细胞毒性部分的附接点，并且波浪线指示与可缀合到该抗体的接头(例如间隔子-抗体结合区段)的其余部分的附接点。在酶促裂解该二肽之后，当远端位点活化时，该自消接头将允许完全释放受保护的化合物(即，细胞毒素)，沿以下所示的路线进行：其中星号指示与所选细胞毒性部分的附接点，并且l*是包含现在切割的肽基单元的接头的其余部分的活化形式。弹头的完全释放确保它将保持所希望的毒性活性。在一个实施例中，a是共价键。因此，l1和抗体是直接连接的。例如，在l1包含连续氨基酸序列的情况下，该序列的n-末端可以直接地连接到抗体残基。在另一个实施例中，a是间隔基。因此，l1和抗体是间接地连接的。在某些实施例中，l1及a可通过选自以下的键连接：-c(＝o)nh-、-c(＝o)o-、-nhc(＝o)-、-oc(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nhc(＝o)o-、-oc(＝o)nh-及-nhc(＝o)nh-。如将在以下更详细论述的，本发明的药物接头将优选地与半胱氨酸(包括游离半胱氨酸)上的活性硫醇亲核试剂连接。为此，抗体的半胱氨酸可以通过用不同还原剂如dtt或tcep或如在此所陈述的温和还原剂进行处理而与接头试剂缀合反应来制造。在其他实施例中，本发明的药物接头将优选地与赖氨酸连接。优选地，该接头含有亲电子官能团，用于与该抗体上的亲核官能团反应。在抗体上的亲核基团包括但不限于：(i)n-末端胺基；(ii)侧链胺基，例如赖氨酸；(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸；及(iv)糖羟基或氨基，其中该抗体为糖基化的。胺、硫醇及羟基是亲核性的并且能够与接头部分和接头试剂上的亲电子基团反应形成共价键，这些接头部分和接头试剂包括：(i)马来酰亚胺基；((ii)活化的二硫化物；(iii)活性酯，如nhs(n-羟基琥珀酰亚胺)酯、hobt(n-羟基苯并三唑)酯、卤代甲酸酯及酰基卤；(iv)烷基和苯甲基卤化物，如卤代乙酰胺；以及(v)醛、酮和羧基。与本发明相容的示例性官能团紧接着示于以下：在一些实施例中，半胱氨酸(包括位点特异性抗体的游离半胱氨酸)与药物-接头部分之间的连接是通过存在于接头上的硫醇残基和末端马来酰亚胺基团进行的。在这样的实施例中，抗体与药物-接头之间的连接可以如下：其中星号指示与药物-接头的其余部分的附接点，并且波浪线指示与抗体的其余部分的附接点。在此类实施例中，s原子可优选地来源于位点特异性游离半胱氨酸。关于其他相容性接头，结合部分可以包含可与抗体上的活化的残基反应以提供所希望的缀合物的末端溴乙酰胺或碘乙酰胺。在任何情况下，鉴于本披露，本领域技术人员可以容易地将所披露的每一药物-接头化合物与相容性抗mmp16抗体(包括位点特异性抗体)缀合。根据本披露，本发明提供了制备相容性抗体药物缀合物的方法，该方法包括将抗mmp16抗体与选自下组的药物-接头化合物缀合，该组由以下组成：以及出于即时应用的目的，将dl用作“药物-接头”(或式ab-[l-d]n中的“接头-药物”)的缩写并且将包含如以上所示的药物接头1-6(即dl1、dl2、dl3、dl4、dl5和dl6)。请注意，dl1和dl6包含相同的弹头和相同的二肽亚基，但连接基团间隔子不同。因此，切割接头后，dl1和dl6都释放pbd1。应理解的是，使用本领域认可的技术，附有末端马来酰亚胺部分(dl1-dl4和dl6)或碘乙酰胺部分(dl5)的接头可以与所选mmp16抗体上的一个或多个游离巯基缀合。前述化合物的合成途径陈述于wo2014/130879中，其明确地通过引用结合在此，用于合成上述dl化合物，而在下面的实例中陈述了缀合这些pbd接头组合的具体方法。因此，在所选方面，本发明涉及与所披露的dl部分缀合的mmp16抗体，以提供紧接着在下面的adc1-6中大体上示出的mmp16免疫缀合物。因此，在某些方面中，本发明涉及式ab-[l-d]n的adc，其包含选自由以下组成的组的结构：和以及其中ab包含抗mmp16抗体或其免疫反应性片段，并且n是从约1至约20的整数。本领域技术人员将理解，上述结构由式ab-[l-d]n定义，并且如本文所描绘的多于一个药物接头分子可以共价缀合至mmp16抗体(例如，n可以是从约1到约20的整数)。更具体地说，如下面更详细论述的，应理解，多于一个有效载荷可以与每个抗体缀合，并且以上示意图必须如此解释。举例来说，adc6可以包含与1、2、3、4、5、6、7或8个或更多个有效载荷缀合的mmp16抗体，并且此类adc的组合物通常将包含药物抗体比率(dar)种类的混合物。在某些方面中，本发明的mmp16pbdadc(诸如上文刚刚描绘的adc)将包含如随附实例中所阐述的抗mmp16抗体或其免疫反应性片段。在具体实施例中，adc3包含hsc73.38ss1(例如，hsc73.38ss1pbd6)。在其他方面，本发明的mmp16pbdadc包含hsc73.39ss1(例如，hsc73.39ss1pbd6)。c.缀合应理解的是，可以使用许多熟知的反应来将药物部分和/或接头附接到所选抗体上。例如，利用半胱氨酸的巯基的各种反应可用于缀合所希望的部分。一些实施例将包含如以下详细论述的抗体的缀合物，该抗体的缀合物包含一个或多个游离半胱氨酸。在其他实施例中，本发明的adc可以通过将药物与存在于所选抗体中的赖氨酸残基的溶剂暴露的氨基基团进行缀合而产生。仍其他实施例包括n-末端苏氨酸和丝氨酸残基的活化，它们然后可用于将所披露的有效载荷与抗体附接。将优选地裁剪所选缀合方法以优化与抗体附接的药物的数量并提供相对较高的治疗指数。用于将治疗性化合物与半胱氨酸残基缀合的各种方法是本领域已知的，并且对于本领域技术人员而言是显而易见的。在碱性条件下，半胱氨酸残基将被去质子化以产生硫醇盐亲核试剂，其可以与软亲电子试剂如马来酰亚胺和碘乙酰胺进行反应。通常用于这种缀合的试剂可以直接与半胱氨酸硫醇进行反应以形成缀合蛋白或与接头-药物进行反应以形成接头-药物中间体。在接头的情况下，利用有机化学反应、条件和试剂的若干路径是本领域技术人员已知的，这些路径包括：(1)本发明的蛋白的半胱氨酸基团与接头试剂的反应，以经由共价键形成蛋白质-接头中间体，之后与活化的化合物反应；和(2)化合物的亲核基团与接头试剂的反应，以经由共价键形成药物-接头中间体，之后与本发明的蛋白的半胱氨酸基团反应。从前述对于本领域技术人员来说显而易见的是，双功能(或二价)接头可用于本发明。例如，双功能接头可以包含用于与一个或多个半胱氨酸残基共价连接的硫醇修饰基团以及用于与该化合物共价或非共价连接的至少一个附接部分(例如第二硫醇修饰部分)。在缀合之前，可以通过用还原剂如二硫苏糖醇(dtt)或三(2-羧乙基)膦(tcep))处理来使抗体对于与接头试剂缀合具有反应性。在其他实施例中，可以通过赖氨酸与试剂(包括但不限于2-亚氨基硫杂环戊烷(traut's试剂)、sata、satp或sat(peg)4)进行反应导致胺转化为硫醇而将另外的亲核基团引入抗体中。关于这样的缀合，半胱氨酸硫醇或赖氨酸氨基基团是亲核的并能与接头试剂和化合物-接头中间体或药物上的亲电子基团进行反应以形成共价键，所述接头试剂和化合物-接头中间体或药物包括：(i)活性酯如nhs酯、hobt酯、卤代甲酸盐(haloformate)和酰基卤；(ii)烷基和苄基卤化物，如卤代乙酰胺；(iii)醛、酮、羧基和马来酰亚胺基团；和(iv)经由硫化物交换的二硫化物，包括吡啶基二硫化物。化合物或接头上的亲核基团包括，但不限于：能与接头部分和接头试剂上的亲电子基团反应以形成共价键的胺、硫醇、羟基、酰肼、肟、肼、氨硫脲、肼羧化物和芳酰肼基团。缀合试剂通常包括：马来酰亚胺、卤代乙酰基、碘乙酰胺琥珀酰亚胺酯、异硫氰酸酯、磺酰氯、2,6-二氯三嗪基、五氟苯酯和亚磷酰胺，尽管也可利用其他的官能团。在某些实施例中，方法包括例如使用马来酰亚胺、碘乙酰亚胺或卤代乙酰基/烷基卤化物、氮丙啶、丙烯酰基衍生物与半胱氨酸的硫醇进行反应以产生与化合物具有反应性的硫醚。游离硫醇与活化的吡啶基二硫化物的二硫化物交换也可用于生产缀合物(例如，使用5-硫代-2-硝基苯甲酸(tnb))。优选地使用马来酰亚胺。如上所指示，赖氨酸也可以用作反应性残基以实现如本文所陈述的缀合。亲核赖氨酸残基通常通过胺反应性琥珀酰亚胺酯来靶向。为了获得最佳数目的去质子化赖氨酸残基，水性溶液的ph必须低于赖氨酸铵基的pka，该赖氨酸铵基的pka为10.5，所以该反应的典型ph为约8和9。偶联反应的常用试剂是nhs-酯，它通过赖氨酸酰化机制与亲核赖氨酸反应。其他经历类似反应的相容性试剂包括异氰酸酯和异硫氰酸酯，其也可以与本文的传授内容结合使用以提供adc。一旦赖氨酸已被激活，许多上述连接基团可用于将弹头共价结合到抗体上。用于将化合物与苏氨酸或丝氨酸残基(优选n-末端残基)进行缀合的方法也是本领域已知的。例如，已经描述了其中羰基前体衍生自丝氨酸或苏氨酸的1,2-氨基醇的方法，所述羰基前体可以通过高碘酸盐氧化选择性且快速地转化为醛形式。醛和与本发明的蛋白质附接的化合物中的半胱氨酸的1,2-氨基硫醇的反应形成稳定的噻唑烷产物。该方法对于在n-末端丝氨酸或苏氨酸残基处标记蛋白质特别有用。在一些实施例中，反应性硫醇基团可以通过引入一个、两个、三个、四个或更多个游离半胱氨酸残基而引入所选抗体(或其片段)中(例如，制备包含一个或多个游离非天然半胱氨酸氨基酸残基的抗体)。这样的位点特异性抗体或工程化抗体允许缀合物制剂展现增强的稳定性和基本均质性，这至少部分地归因于提供了一个或多个工程化游离半胱氨酸位点和/或在此所陈述的新型缀合程序。不同于完全或部分地还原每个链内或链间抗体二硫键以提供缀合位点的常规缀合方法(并且其与本发明完全相容)，本发明另外提供了某些制备的游离半胱氨酸位点的选择性还原和药物接头至所述位点的附接。就这一点而言，应理解的是，由工程化位点促进的缀合特异性和选择性还原允许在所希望的位置处的高百分比的定点缀合。值得注意的是，这些缀合位点中的一些(例如存在于轻链恒定区的末端区域中的那些)典型地难以在它们倾向与其他游离半胱氨酸交叉反应时有效缀合。然而，通过所得的游离半胱氨酸的分子工程化和选择性还原，可以获得有效的缀合速率，其显著减少不想要的高dar污染物和非特异性毒性。更一般而言，工程化构建体和披露的包含选择性还原的新型缀合方法提供了具有改善的药代动力学和/或药效动力学和潜在地改善的治疗指数的adc制剂。在某些实施例中，位点特异性构建体提供一个或多个游离半胱氨酸，该一个或多个游离半胱氨酸在还原时包含亲核的且能够与接头部分(例如以上所披露的那些)上的亲电子基团反应以形成共价键的硫醇基团。如以上所论述，本发明的抗体可以具有可还原的未配对的链间或链内半胱氨酸或引入的非天然半胱氨酸，即提供这种亲核基团的半胱氨酸。因此，在某些实施例中，经还原的游离半胱氨酸的游离巯基与所披露的药物-接头的末端马来酰亚胺或卤代乙酰胺基团的反应将提供所希望的缀合。在这样的情形中，可以通过用还原剂如二硫苏糖醇(dtt)或三(2-羧乙基)膦(tcep)进行处理来使抗体的游离半胱氨酸对于与接头试剂缀合具有反应性。因此，每个游离半胱氨酸理论上将呈现活性硫醇亲核试剂。虽然这样的试剂是与本发明特别相容的，但是应当理解，可以使用本领域技术人员通常已知的不同反应、条件和试剂来实现位点特异性抗体的缀合。此外，已经发现，可以选择性地还原工程化抗体的游离半胱氨酸以提供增强的定点缀合和不想要的潜在毒性污染物的减少。更具体地，已经发现“稳定剂”如精氨酸可以调节蛋白质中分子内和分子间相互作用，并且可以与所选择的还原剂(优选相对温和的)联合使用来选择性地还原游离半胱氨酸并促进如此处所陈述的位点特异性缀合。如在此所使用，术语“选择性还原”或“选择性地还原”可以互换使用，并且意指还原一个或多个游离半胱氨酸，而不实质性破坏工程化抗体中存在的天然二硫键。在所选实施例中，这种选择性还原可以通过使用某些还原剂或某些还原剂浓度来实现。在其他实施例中，工程化构建体的选择性还原将包含与还原剂(包括温和还原剂)组合使用稳定剂。应当理解，术语“选择性缀合”意指在本文所述的细胞毒素存在下，已经选择性地还原的工程化抗体的缀合。在这方面，这样的稳定剂(例如精氨酸)与所选还原剂的组合使用可以显著改善位点特异性缀合的效率，如通过抗体重链和轻链上缀合的程度和该制剂的dar分布所测定的。wo2015/031698中广泛披露了相容的抗体构建体和选择性缀合技术以及试剂，将其关于这样的方法和结构特别结合在此。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但是这种稳定剂可以调节静电微环境和/或调节所希望的缀合位点处的构象变化，从而允许相对温和的还原剂(其不会实质上还原完整的天然二硫键)促进所希望的一个或多个游离半胱氨酸位点处的缀合。已知此类试剂(例如某些氨基酸)形成盐桥(通过氢键和静电相互作用)，并且能以此方式调节蛋白质-蛋白质的相互作用，以赋予稳定效果，这可能导致有利的构象变化和/或减少不利的蛋白质-蛋白质相互作用。此外，这些试剂可以用于抑制还原后不希望的分子内(和分子间)半胱氨酸-半胱氨酸键的形成，从而促进所希望的缀合反应，其中工程化位点特异性半胱氨酸与药物结合(优选经由接头)。由于选择性还原条件不能显著还原完整的天然二硫键，所以随后的缀合反应自然地被驱动到游离半胱氨酸上的相对较少的反应性硫醇(例如，优选2个游离硫醇/抗体)。如先前所暗指，这样的技术可以用于显著降低根据本披露制造的缀合物制剂中的非特异性缀合和相应的不想要的dar物质的水平。在所选实施例中，与本发明相容的稳定剂通常将包含具有碱性pka的至少一个部分的化合物。在某些实施例中，该部分将包含伯胺，而在其他实施例中，该胺部分将包含仲胺。在仍其他实施例中，胺部分将包含叔胺或胍基。在其他所选实施例中，胺部分将包含氨基酸，而在其他相容的实施例中，胺部分将包含氨基酸侧链。在又其他实施例中，胺部分将包含蛋白原氨基酸。在仍其他实施例中，胺部分包含非蛋白质的氨基酸。在一些实施例中，相容性稳定剂可以包含精氨酸、赖氨酸、脯氨酸和半胱氨酸。在某些优选的实施例中，稳定剂将包含精氨酸。此外，相容性稳定剂可以包括胍和具有碱性pka的含氮杂环。在某些实施例中，相容性稳定剂包含具有至少一个pka大于约7.5的胺部分的化合物，在其他实施例中，主题胺部分将具有大于约8.0的pka，在又其他实施例中，胺部分将具有大于约8.5的pka，并且在再其他实施例中，稳定剂将包含具有大于约9.0的pka的胺部分。其他实施例将包含稳定剂，其中胺部分将具有大于约9.5的pka，而某些其他实施例将包含展现至少一个pka大于约10.0的胺部分的稳定剂。在仍其他实施例中，稳定剂将包含具有pka大于约10.5的胺部分的化合物，在其他实施例中，稳定剂将包含具有pka大于约11.0的胺部分的化合物，而在仍其他实施例中，稳定剂将包含pka大于约11.5的胺部分。在又其他实施例中，稳定剂将包含具有pka大于约12.0的胺部分的化合物，而在再其他实施例中，稳定剂将包含pka大于约12.5的胺部分。本领域技术人员将理解，可以使用标准技术容易地计算或确定相关的pka，并用于确定使用所选化合物作为稳定剂的适用性。显示在与某些还原剂组合时，所披露的稳定剂在靶向缀合到游离位点特异性半胱氨酸上是特别有效的。出于本发明的目的，相容性还原剂可以包括任何化合物，其产生用于缀合的还原的游离位点特异性半胱氨酸，而不显著地破坏工程化抗体的天然二硫键。在优选地由选择的稳定剂和还原剂的组合提供的这样的条件下，活化的药物接头在很大程度上受限于结合所希望的一个或多个游离位点特异性半胱氨酸位点。特别优选相对温和的还原剂或以相对低浓度使用的还原剂，以提供温和的条件。如在此所使用，术语“温和还原剂”或“温和还原条件”应保持为意指在一个或多个游离半胱氨酸位点提供硫醇而不实质性破坏工程化抗体中存在的天然二硫键的还原剂(任选在稳定剂存在下)引起的任何试剂或状态。也就是说，温和还原剂或条件(优选与稳定剂组合)能够有效还原一个或多个游离半胱氨酸(提供硫醇)，而不会显著破坏蛋白质的天然二硫键。所希望的还原条件可以由许多基于巯基的化合物提供，这些化合物建立了用于选择性缀合的适当环境。在实施例中，温和还原剂可以包含具有一个或多个游离硫醇的化合物，而在一些实施例中，温和还原剂将包含具有单个游离硫醇的化合物。与本发明的选择性还原技术相容的还原剂的非限制性实例包括谷胱甘肽、正乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、2-氨基乙烷-1-硫醇和2-羟基乙烷-1-硫醇。应当理解，上面陈述的选择性还原方法在与游离半胱氨酸的靶向缀合方面特别有效。在这方面，可以通过本领域接受的不同的技术来确定缀合到位点特异性抗体中的希望靶位点的程度(在此定义为“缀合效率”)。可以通过评估在一个或多个靶缀合位点(例如，在每条轻链的c-末端上的游离半胱氨酸)上相对于所有其他缀合位点的缀合百分比，来确定药物与抗体的位点特异性缀合的效率。在某些实施例中，本文的方法提供了将药物有效缀合至包含游离半胱氨酸的抗体。在一些实施例中，缀合效率是至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或更高，如通过相对于所有其他缀合位点的靶缀合百分比所测量的。还应当理解，能够缀合的工程化抗体可以含有游离的半胱氨酸残基，该游离的半胱氨酸残基含有当产生或储存该抗体时被封闭或封端的巯基基团。这种帽包括与巯基基团相互作用并防止或抑制缀合形成的小分子、蛋白质、肽、离子和其他物质。在一些情况下，未缀合的工程化抗体可以包含结合相同或不同抗体上的其他游离半胱氨酸的游离半胱氨酸。如本文所论述，这种交叉反应性在制造程序中可导致不同污染物。在一些实施例中，工程化抗体可能在缀合反应之前需要脱封端。在特定实施例中，本文的抗体是未封端的并且展示出能够缀合的游离巯基。在特定实施例中，本文的抗体经历不干扰或重排天然存在的二硫键的脱封端反应。应当理解，在大多数情况下，在正常还原反应(还原或选择性还原)期间将发生脱封端反应。d.dar分布及纯化在所选实施例中，与本发明相容的缀合和纯化方法有利地提供了产生包含窄dar分布的相对均质的adc制剂的能力。就这一点而言，所披露的构建体(例如位点特异性构建体)和/或选择性缀合就药物和工程化抗体之间的化学计量比以及关于毒素位置提供了样品内的adc物质的均质性。如上所简单论述，术语“药物与抗体比”或“dar”是指药物与抗体的摩尔比。在某些实施例中，缀合物制剂相对于其dar分布基本上可以是均匀的，这意味着在该adc制剂内是具有相对于荷载位点(即游离半胱氨酸)也一致的特定dar(例如，2或4的dar)的位点特异性adc的主要种类。在本发明的其他某些实施例中，可能的是，通过使用位点特异性抗体和/或选择性还原以及缀合来实现所希望的均质性。在其他实施例中，可以通过使用与选择性还原组合的位点特异性构建体来实现所希望的均质性。在又其他实施例中，可以使用分析型或制备型色谱技术来纯化相容性制剂以提供所希望的均质性。在这些实施例的每一个中，可以使用本领域已知的不同技术来分析adc样品的均质性，包括但不限于质谱法、hplc(例如尺寸排阻hplc、rp-hplc、hic-hplc等)或毛细管电泳。关于adc制剂的纯化，应当理解，可以使用标准药物制备方法来获得所希望的纯度。如本文所论述，液相色谱法如反相(rp)和疏水相互作用色谱(hic)可以通过药物荷载值分离混合物中的化合物。在一些情形中，离子交换色谱(iec)或混合模式色谱(mmc)也可用于分离具有特定载药量的物质。所披露的adc及其制剂可以包含不同化学计量摩尔比的药物和抗体部分，这取决于抗体的构型，并且至少部分地取决于用于实现缀合的方法。在某些实施例中，每个adc的载药量可以包括1至20个弹头(即，n是1-20)。其他所选的实施例可以包括具有从1到15个弹头的载药量的adc。在仍其他实施例中，adc可以包含1-12个弹头，或更优选地1-10个弹头。在一些实施例中，adc将包含从1到8个弹头。虽然理论载药量可能相对较高，但实际限制(如游离半胱氨酸交叉反应性和弹头疏水性)倾向于限制包含由于聚集体和其他污染物而造成的此类dar的均质制剂的产生。也就是说，较高的载药量，例如>8或10，可能导致某些抗体-药物缀合物的聚集、不溶性、毒性或丧失细胞渗透性，这取决于有效载荷。鉴于这些问题，本发明提供的载药量优选地在每个缀合物1至8个药物的范围内，即其中1、2、3、4、5、6、7或8个药物共价附接到每一抗体上(例如，对于igg1，其他抗体可以具有取决于二硫键数量的不同荷载能力)。优选地，本发明的组合物的dar将为约2、4或6，并且在一些实施例中，dar将包含约2。尽管本发明提供相对高水平的均质性，但所披露的组合物实际上包含具有一系列药物化合物(在igg1的情形中，潜在地从1至8)的缀合物的混合物。因此，所披露的adc组合物包括缀合物的混合物，其中大部分构成抗体与一个或多个药物部分共价连接，并且(尽管工程化构建体提供了相对缀合特异性以及选择性还原)，其中药物部分可以通过不同硫醇基团附接到抗体上。也就是说，在缀合之后，本发明的adc组合物将包含在不同浓度下具有不同载药量(例如，每个igg1抗体1至8个药物)的缀合物的混合物(连同主要由游离半胱氨酸交叉反应性引起的某些反应污染物)。然而，使用选择性还原和制造后纯化，缀合组合物可以被驱动到其中它们大部分含有单个主要的希望的adc种类(例如，2的载药量)和相对低水平的其他adc种类(例如，1、4、6等的载药量)的点上。平均dar值表示关于组合物作为整体(即，所有adc种类一起)的药物荷载的加权平均值。由于所采用的量化方法的固有不确定性和在商业环境中完全去除非主要的adc种类的难度，可接受的dar值或规格通常表示为平均值、范围或分布(即，2+/-0.5的平均dar)。优选地，在药物环境中使用包含在该范围(即1.5至2.5)内的测量平均dar的组合物。因此，在一些实施例中，本发明将包含平均dar为1、2、3、4、5、6、7或8各自+/-0.5的组合物。在其他实施例中，本发明将包含2、4、6或8+/-0.5的平均dar。最后，在所选实施例中，本发明将包含2+/-0.5或4+/-0.5的平均dar。应当理解，在一些实施例中，范围或偏差可以小于0.4。因此，在其他实施例中，这些组合物将包含1、2、3、4、5、6、7或8各自+/-0.3的平均dar，2、4、6或8+/-0.3的平均dar，甚至更优选2或4+/-0.3的平均dar，或甚至2+/-0.3的平均dar。在其他实施例中，igg1缀合物组合物优选包含1、2、3、4、5、6、7或8各自+/-0.4的平均dar和相对较低水平(即，小于30％)的非主要的adc种类。在其他实施例中，adc组合物将包含2、4、6或8各自+/-0.4的平均dar与相对较低水平(<30％)的非主要的adc种类。在一些实施例中，adc组合物将包含2+/-0.4的平均dar与相对较低水平(<30％)的非主要的adc种类。在又其他实施例中，当针对存在于组合物中的所有其他dar种类而测量时，主要adc种类(例如，dar为2或dar为4)将以大于50％的浓度、以大于55％的浓度、以大于60％的浓度、以大于65％的浓度、以大于70％的浓度、以大于75％的浓度、以大于80％的浓度、以大于85％的浓度、以大于90％的浓度、以大于93％的浓度、以大于95％的浓度或甚至以大于97％的浓度存在。如以下实例中详述的，可以通过常规手段如uv-vis分光光度法、反相hplc、hic、质谱、elisa和电泳，来表征来自缀合反应的adc的制剂中的药物/抗体分布。也可以确定依据药物/抗体的adc定量分布。通过elisa，可以确定adc的特定制剂中药物/抗体的平均值。然而，通过抗体-抗原结合和elisa检测限制不能辨别药物/抗体分布。此外，用于检测抗体-药物缀合物的elisa测定不能确定药物部分附接到抗体的位置，例如重链或轻链片段或特定氨基酸残基。vi.诊断和筛选a.诊断本发明提供了用于检测、诊断或监测增生性病症的体外和体内方法以及筛选来自患者的细胞以鉴定肿瘤细胞(包括肿瘤发生细胞)的方法。这样的方法包括鉴定患有癌症需治疗或监测癌症进展的个体，包括将患者或从患者获得的样品(体内或体外)与能够特异性识别并缔合mmp16决定子的检测剂(例如抗体或核酸探针)进行接触并检测与样品中检测剂的缔合的存在与否或水平。在所选实施例中，该检测剂将包含与如本文所述的可检测标记或报道分子缔合的抗体。在某些其他实施例中，mmp16抗体将被施用并使用二次标记的抗体(例如，抗鼠抗体)进行检测。在又其他实施例(例如，原位杂交或ish)中，与基因组mmp16决定子反应的核酸探针将用于增生性病症的检测、诊断或监测。更一般而言，mmp16决定子的存在和/或水平可以使用本领域普通技术人员可用于蛋白质或核酸分析的许多技术中的任一种来测量，例如，直接物理测量(例如质谱)、结合测定(例如免疫测定、凝集测定和免疫色谱测定)、聚合酶链式反应(pcr、rt-pcr、rt-qpcr)技术、分支寡核苷酸技术、rna印迹技术、寡核苷酸杂交技术以及原位杂交技术。该方法还可以包括测量由化学反应引起的信号，例如光吸收的变化，荧光的变化，化学发光或电化学发光的产生，反射率、折射率或光散射的变化，可检测标记从表面的积聚或释放，氧化或还原或氧化还原物质，电流或电势，磁场变化等。通过测量经标记的结合试剂的参与，通过测量标记的光致发光(例如，通过测量荧光、时间分辨荧光、隐失波荧光、上转换磷光体、多光子荧光等)、化学发光、电化学发光、光散射、光吸收、放射性、磁场、酶活性(例如，通过引起光吸收或荧光变化或引起化学发光的发射的酶促反应来测量酶活性)，合适的检测技术可以检测结合事件。可替代地，可以使用不需要使用标记的检测技术，例如基于测量质量(例如表面声波测量)、折射率(例如，表面等离子体共振测量)或者分析物的固有发光的技术。在一些实施例中，该检测剂与样品中特定细胞或细胞组分的缔合表示该样品可以含有肿瘤发生细胞，借此指示该患有癌症的个体可以用如本文所述的抗体或adc有效地治疗。在某些优选的实施例中，测定可以包括免疫组织化学(ihc)测定或其变体(例如，荧光、显色、标准abc、标准lsab等)、免疫细胞化学或其变体(例如，直接、间接荧光、显色等)或原位杂交(ish)或其变体(例如显色原位杂交(cish)或荧光原位杂交(dna-fish或rna-fish))。就这一点而言，本发明的某些方面包括使用标记的mmp16进行免疫组织化学(ihc)。更具体地，mmp16ihc可以被用作一种诊断工具以帮助诊断各种增生性病症并监测对于包括mmp16抗体疗法的治疗的潜在响应。在某些实施例中，mmp16将与一个或多个报道分子缀合。在其他实施例中，mmp16抗体(例如，sc73.101或sc73.114)将是未标记的，并将用与一种或多种报道分子缔合的单独的试剂(例如抗鼠抗体)进行检测。如在此所论述并在下面实例中所示的，相容性诊断测定可以对已经化学地固定(包括但不限于：甲醛、戊二醛、四氧化锇、重铬酸钾、乙酸、醇类、锌盐类、氯化汞、四氧化铬及苦味酸)并包埋(包括但不限于：甲基丙烯酸乙二醇酯、石蜡及树脂)或经由冷冻保存的组织进行。这样的测定可以用于指导治疗决定并且确定给药方案及时程。本发明的其他特别相容的方面涉及使用原位杂交来检测或监测mmp16决定子。原位杂交技术或ish是本领域技术人员所熟知的。简而言之，将细胞固定，并将含有特定核苷酸序列的可检测探针加入到固定的细胞中。如果细胞含有互补的核苷酸序列，则可以被检测到的探针会与它们杂交。使用本文所陈述的序列信息，可以设计探针来鉴定表达基因型mmp16决定子的细胞。探针优选地与对应于这样的决定子的核苷酸序列杂交。可以对杂交条件进行常规优化，以通过非完全互补杂交使背景信号最小化，尽管优选地探针优选与所选mmp16决定子完全互补。在所选实施例中，用附接于探针的荧光染料标记探针，通过标准荧光方法可容易地检测荧光染料。如本领域技术人员所知，相容性体内治疗剂或诊断测定可以包括本领域认可的成像或监测技术，如磁共振成像、计算机断层扫描(例如cat扫描)、正电子断层扫描(例如pet扫描)、放射线照相术、超声波等。在某些实施例中，本发明的抗体可用于检测和定量患者样品(例如血浆或血液)中特定决定子(例如，mmp16蛋白)的水平，其转而可以用于检测、诊断或监测与相关决定子相关的增生性病症。例如，血液和骨髓样品可以与流式细胞术结合使用以检测和测量mmp16表达(或另一种共表达的标记物)，并监测疾病和/或治疗响应的进展。在相关实施例中，本发明的抗体可以用于在体内或体外对循环肿瘤细胞进行检测、监测和/或定量(wo2012/0128801)。在仍其他实施例中，循环肿瘤细胞可以包含肿瘤发生细胞。在本发明的某些实施例中，可以在疗法或方案之前，使用所披露的抗体对受试者或来自受试者的样品中肿瘤发生细胞进行评估或表征，以确立一个基线。在其他实例中，可从衍生自经过治疗的受试者的样品评估肿瘤发生细胞。在另一个实施例中，本发明提供了一种在体内分析癌症进展和/或发病机理的方法。在另一个实施例中，体内癌症进展和/或发病机理的分析包括确定肿瘤进展的程度。在另一个实施例中，分析包括肿瘤的鉴别。在另一个实施例中，肿瘤进展的分析是针对原发肿瘤进行的。在另一个实施例中，如本领域的普通技术人员所知，取决于癌症的类型，分析是随时间而进行的。在另一个实施例中，起源于原发肿瘤的转移性细胞的继发肿瘤的进一步分析是在体内进行的。在另一个实施例中，分析了继发肿瘤的尺寸和形状。在一些实施例中，进行了进一步离体分析。在另一个实施例中，本发明提供了一种在体内分析癌症进展和/或发病机理的方法，该方法包括确定细胞转移或对循环肿瘤细胞的水平进行检测并定量。在又另一个实施例中，细胞转移的分析包括在与原发肿瘤不连续的部位处细胞的进行性生长的测定。在一些实施例中，可以进行程序来检测经由血管系统、淋巴腺、体腔内或其组合分散的肿瘤细胞。在另一个实施例中，就细胞迁移、播散、外渗、增生或其组合进行了细胞转移分析。在某些实例中，可以在治疗之前，使用所披露的抗体对受试者或来自受试者的样品中的肿瘤发生细胞进行评估或表征，以确立一个基线。在其他实例中，样品源自受治疗的受试者。在一些实例中，在受试者开始或终止治疗之后至少约1、2、4、6、7、8、10、12、14、15、16、18、20、30、60、90天、6个月、9个月、12个月或>12个月，从该受试者取得样品。在某些实例中，在一定数量的剂量(例如，在2、5、10、20、30或更多剂量的疗法之后)之后对肿瘤发生细胞进行评估或表征。在其他实例中，在接受了一次或多次疗法之后的1周、2周、1个月、2个月、1年、2年、3年、4年或更多年之后对肿瘤发生细胞进行表征或评估。b.筛选在某些实施例中，本发明的抗体可用于筛选样品，以鉴定通过与决定子相互作用而改变肿瘤细胞的功能或活性的化合物或试剂(例如，抗体或adc)。在一个实施例中，使肿瘤细胞与抗体或adc接触，并且可以使用抗体或adc来筛选表达某一靶标(例如mmp16)的细胞的肿瘤以鉴定这样的细胞用于包括但不限于诊断目的的目的，以监测这些细胞以确定治疗功效或以富集这种靶表达细胞的细胞群。在又另一个实施例中，方法包括直接或间接地使肿瘤细胞与检测试剂或化合物接触，并确定该测试剂或化合物是否调节与决定子相关的肿瘤细胞的活性或功能，例如，细胞形态或生活力的变化、标记物的表达、分化或去分化、细胞呼吸、线粒体活性、膜完整性、成熟、增生、生活力、凋亡或细胞死亡。直接相互作用的一个实例是物理相互作用，而间接相互作用包括例如组合物对中间分子的作用，而这又作用于参比实体(例如，细胞或细胞培养物)。筛选方法包括高通量筛选，其可以包括例如在培养皿、管、烧瓶、转瓶或板上定位或放置(任选地在预定位置)细胞阵列(例如微阵列)。高通量机械或人工处理方法可以在较短时间段内探查化学相互作用并且确定许多基因的表达水平。已经开发了以下技术，这些技术利用分子信号，例如经由荧光团或微阵列(mocellin和rossi，2007，pmid:17265713)以及以非常快的速度处理信息的自动化分析(参见，例如，pinhasov等人，2004，pmid:15032660)。可以筛选的文库包括例如，小分子文库、噬菌体展示文库、完全人抗体酵母展示文库(艾迪玛公司(adimab))、sirna文库及腺病毒转染载体。vii.药物制剂和治疗应用a.配制品和给药途径本发明的抗体或adc可以使用本领域认可的技术以各种方式配制。在一些实施例中，本发明的治疗性组合物能以纯形式或与最少量的另外组分一起给予，而其他组分可以任选地被配制以含有合适的药学上可接受的载体。如在此所使用，“药学上可接受的载体”包含本领域熟知的赋形剂、媒介物、佐剂和稀释剂，并且可以从商业来源获得，用于药物配制(参见，例如，gennaro(2003)remington:thescienceandpracticeofpharmacywithfactsandcomparisons:drugfactsplus[雷明顿：制药科学与实践及药物事实与比较：药物事实]，第20版，mackpublishing[默克出版公司]；ansel等人(2004)pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems[药物剂型与药物递送系统]，第7版，lippencottwilliams和wilkins；kibbe等人，(2000)handbookofpharmaceuticalexcipients[药物赋形剂手册]，第3版，pharmaceuticalpress[医药出版社])。合适的药学上可接受的载体包含相对呈惰性的物质并且可以促进抗体或adc的施用，或者可以帮助将活性化合物加工成被药学上优化用于递送至作用部位的制剂。这样的药学上可接受的载体包括可以改变配制品的形式、稠度、粘度、ph、张力、稳定性、渗透压、药代动力学、蛋白质聚集或溶解度的试剂，并且包括缓冲剂、润湿剂、乳化剂、稀释剂、成胶囊剂和皮肤渗透促进剂。载体的某些非限制性实例包括盐水、缓冲盐水、右旋糖、精氨酸、蔗糖、水、甘油、乙醇、山梨糖醇、葡聚糖、羧甲基纤维素钠及其组合。用于全身给药的抗体可以被配制用于肠、肠胃外或局部给药。事实上，可以同时使用全部三种类型的配制物来实现活性成分的全身给药。赋形剂以及供肠胃外和非肠胃外药物递送的配制品陈述于remington:thescienceandpracticeofpharmacy[雷明顿：制药科学与实践](2000)，第20版，mackpublishing[默克出版公司]中。用于肠给药的适合配制物包括硬或软明胶胶囊、丸剂、片剂(包括包衣片剂)、酏剂、悬浮液、糖浆或吸入剂及其控制释放形式。适用于胃肠外给药(例如通过注射)的配制品包括水性或非水性、等渗、无热原的无菌液体(例如溶液、悬浮液)，其中活性成分溶解、悬浮或以其他方式提供(例如，在脂质体或其他微粒中)。这些液体可以另外含有其他药学上可接受的载体，例如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、悬浮剂、增稠剂和使配制品与预期的受体的血液(或其他相关的体液)等渗的溶质。赋形剂的实例包括例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。用于这种配制品的合适的等渗的药学上可接受的载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸林格氏注射液。在特别优选的实施例中，可以将本发明的经配制的组合物冻干以提供可在给予前重建的抗体或adc的粉末形式。用于制备可注射溶液的无菌粉末可以通过冻干包含所披露的抗体或adc的溶液来产生，以产生包含活性成分以及任何可选的共溶解的生物相容性成分的粉末。一般而言，通过将活性化合物掺入含有基本分散介质或溶剂(例如，稀释剂)以及任选地其他生物相容成分的无菌媒介物中来制备分散液或溶液。相容性稀释剂是药学上可接受的(对人给予是安全和无毒的)稀释剂，并且可用于制备液体配制品，如冻干后重溶的配制品。示例性稀释剂包括无菌水、抑菌性注射用水(bwfi)、ph缓冲溶液(例如磷酸缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或葡萄糖溶液。在一个替代性实施例中，稀释剂可以包括盐和/或缓冲剂的水性溶液。在某些优选的实施例中，抗mmp16抗体或adc将与药学上可接受的糖组合一起冻干。“药学上可接受的糖”是当与感兴趣的蛋白质结合时显著防止或减少蛋白质在储存时的化学和/或物理不稳定性的分子。当旨在冻干配制品，然后重组。如在此所使用，药学上可接受的糖也可以被称为“冻干保护剂”。示例性糖及其相应的糖醇包括：氨基酸，如谷氨酸一钠或组氨酸；甲胺，如甜菜碱；易溶盐，如硫酸镁；多元醇如三元或更高分子量的糖醇，例如甘油、葡聚糖、赤藓糖醇、丙三醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇；丙二醇；聚乙二醇；及其组合。另外的示例性冻干保护剂包括甘油和明胶以及糖，即蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖和水苏糖。还原糖的实例包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、麦芽酮糖、异麦芽酮糖和乳果糖。非还原糖的实例包括选自糖醇和其他直链多元醇的多羟基化合物的非还原糖苷。优选的糖醇是单糖苷，尤其是通过还原二糖(如乳糖、麦芽糖、乳果糖和麦芽酮糖)而获得的那些化合物。糖苷侧基可以是糖苷的或半乳糖苷的。糖醇的另外的实例是葡萄糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇和异麦芽酮糖。优选的药学上可接受的糖是非还原糖，如海藻糖或蔗糖。药学上可接受的糖以“保护量”加入到配制品中(例如冻干前)，这意味着蛋白质在储存期间(例如在重构和储存之后)基本上保持其物理和化学稳定性和完整性。无论是否从冻干粉末重溶，液体mmp16adc配制品(例如，如上所陈述)可以在给予之前进一步被稀释(优选在水性载体中)。例如，上述液体配制品可以进一步被稀释到含有0.9％氯化钠注射液、usp或等效物(作必要的修正)的输液袋中，以达到用于给药的所需剂量水平。在某些方面，完全稀释的mmp16adc溶液将经由静脉内输注使用iv装置进行给予。优选地，所给予的mmp16adc药物溶液(无论通过静脉内(iv)输注还是注射)是透明的、无色的并且没有可见颗粒。本发明的化合物和组合物可以通过不同途径在体内给予于对其有需要的受试者，包括但不限于，口服、静脉内、动脉内、皮下、肠胃外、鼻内、肌肉内、心脏内、室内、气管内、口腔、直肠、腹膜内、皮内、局部、透皮及胸内，或以其他方式通过植入或吸入给予。主题组合物可以被配制成呈固体、半固体、液体或气态形式的制剂；包括但不限于，片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、油膏、溶液、栓剂、灌肠剂、注射剂、吸入剂及气雾剂。适合的配制物和给药途径可以根据预定的应用和治疗方案选择。b.剂量和给药方案特定的剂量方案，即，剂量、时程及重复，将取决于特定的个体以及经验考虑，如药物动力学(例如半衰期、清除率等)。给药频率的确定可以由本领域技术人员(如主治医师)基于以下考虑来作出：所治疗的病症和所治疗的病症的严重程度，所治疗的受试者的年龄和一般健康状态等。可以在治疗过程中基于评估所选组合物和给药方案的疗效来调整给药频率。可以基于特定疾病、障碍或病症的标记进行这种评估。在个体患有癌症的实施例中，这些包括：经由触诊或目测观察直接测量肿瘤大小；通过x射线或其他成像技术间接测量肿瘤大小；如通过直接肿瘤活检和肿瘤样品的显微镜检查所评估的改善；间接肿瘤标记物(例如，对于前列腺癌的psa)或根据本文描述的方法鉴别的抗原的测量；增生性细胞或肿瘤发生细胞的数量的减少；维持这样的赘生性细胞的减少；赘生性细胞的增生的减少；或延缓转移的发展。本发明的mmp16抗体或adc能以各种范围给予。这些包括每剂每千克体重约5μg到每千克体重约100mg；每剂每千克体重约50μg到每千克体重约5mg；每剂每千克体重约100μg到每千克体重约10mg。其他范围包括每剂约100μg/kg体重到约20mg/kg体重，和每剂约0.5mg/kg体重到约20mg/kg体重。在某些实施例中，该剂量为至少约100μg/kg体重、至少约250μg/kg体重、至少约750μg/kg体重、至少约3mg/kg体重、至少约5mg/kg体重、至少约10mg/kg体重。在所选实施例中，mmp16抗体或adc将以每剂约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100μg/kg体重给予(优选静脉内)。其他实施例可以包括以每剂约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000μg/kg体重给予抗体或adc。在其他实施例中，所披露的缀合物将以2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、9或10mg/kg给予。在仍其他实施例中，这些缀合物能以每剂12、14、16、18或20mg/kg体重给予。在又其他实施例中，这些缀合物能以每剂25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg体重给予。根据此处的传授内容，本领域技术人员可以基于临床前动物研究、临床观察结果以及标准医疗和生物化学技术及测量容易地确定不同mmp16抗体或adc的适当剂量。其他给药方案可以根据体表面积(bsa)计算值判定，如u.s.p.n.7,744,877中所披露。如众所周知的，bsa是使用患者的身高和体重进行计算并且提供了如通过他或他的体表面积所表示的受试者的体格的量度。在某些实施例中，这些缀合物能以从1mg/m2到800mg/m2、从50mg/m2到500mg/m2的剂量并且以100mg/m2、150mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、300mg/m2、350mg/m2、400mg/m2或450mg/m2的剂量给予。还应理解的是，可以使用本领域认可的并且凭经验的技术来确定适当剂量。抗mmp16抗体或adc可以按照特定安排给予。一般而言，将mmp16缀合物的有效剂量给予受试者一次或多次。更特别地，该adc的有效剂量是一个月一次、一个月超过一次或一个月不到一次给予受试者。在某些实施例中，mmp16抗体或adc的有效剂量可以给予多次，包括持续至少一个月、至少六个月、至少一年、至少两年的时间或若干年的时间。在又其他实施例中，所披露的抗体或adc的给药之间可以间隔若干天(2、3、4、5、6或7)、若干周(1、2、3、4、5、6、7或8)或若干月(1、2、3、4、5、6、7或8)，或甚至一年或若干年。在一些实施例中，涉及缀合抗体的治疗过程将包括在数周或数月的时间段内的多剂量的所选药物。更具体地，本发明的抗体或adc可以每天、每两天、每四天、每周、每十天、每两周、每三周、每个月、每六周、每两个月、每十周或每三个月给予一次。就这一点而言，应理解的是，基于患者响应和临床实践，这些剂量可以改变或该时间间隔可以调整。本发明还涵盖分成若干部分给药的不连续给药或每日剂量。本发明的组合物和抗癌剂可以在隔日或隔周可互换地给予；或可以给出一系列抗体治疗，之后是一次或多次的抗癌剂疗法治疗。在任何情况下，如本领域的普通技术人员所了解，化学治疗剂的适当剂量一般大约为将在临床疗法中已经采用的那些，其中这些化学治疗剂是单独或与其他化学治疗剂组合给与。在另一个实施例中，本发明的mmp16抗体或adc可以用于维持疗法中以在该疾病最初出现之后降低或消除肿瘤复发的几率。优选地，该病症将经过治疗并且最初的肿块消除、减小或以其他方式改善，由此该患者是无症状的或得到缓和。此时，可以给予该受试者药学上有效量的所披露的抗体一次或多次，即使是使用标准诊断程序存在极少或无疾病指征。在另一个优选实施例中，本发明的调节剂可以用于预防或作为一种辅助疗法以预防或降低在减瘤程序之后肿瘤转移的可能性。如本披露中所使用，“减瘤程序”意指任何减少肿瘤块或减轻肿瘤负荷或肿瘤增生的程序、技术或方法。示例性减瘤剂包括但不限于，手术、放射治疗(即，射束放射)、化学疗法、免疫疗法或切除。在本领域技术人员根据本披露容易地确定的适当时间，所披露的adc可以如通过临床、诊断或治疗诊断程序所提出来给予，以减少肿瘤转移。本发明的又其他实施例包括向无症状但有发生癌症的风险的受试者给予所披露的抗体或adc。也就是说，本发明的抗体或adc可以在真正预防意义上使用并且提供给经过检查或测试并且具有一个或多个所述风险因素(例如，染色体组指征、家族史、体内或体外测试结果等)但尚未显现赘瘤的患者。对用于已经提供一次或多次给药的个体中所披露的治疗性组合物的剂量和方案也可以凭经验确定。举例来说，可以给个体递增剂量的如在此所描述制造的治疗性组合物。在所选实施例中，对应地基于凭经验确定或观察的副作用或毒性，可以使该剂量逐渐增加或减少或衰减。为了评估所选组合物的功效，可以如先前所描述，跟踪特定疾病、病症或病状的标记物。对于癌症，这些包括经由触诊或目测观察来直接测量肿瘤大小、通过x射线或其他成像技术来间接测量肿瘤大小；如通过直接肿瘤活检和肿瘤样品的显微镜检查所评估的改善；间接肿瘤标记物(例如，对于前列腺癌的psa)根据在此描述的方法鉴定的肿瘤发生抗原的测量；疼痛或麻痹的减少；言语、视力、呼吸或与肿瘤相关的其他能力丧失的改善；食欲增加；或如通过公认的测试所测量的生活质量增加或存活期延长。本领域技术人员应清楚的是，该剂量将取决于个体、赘生性病状的类型、赘生性病状的阶段、该赘生性病状是否已经开始转移到个体中的其他位置以及过去和当前所使用的治疗而变化。c.组合疗法如以上所暗指，组合疗法可以特别有用于减少或抑制不想要的赘生性细胞增生，减少癌症的发生，减少或预防癌症的复发，或者减少或预防癌症的扩散或转移。在这些情形中，本发明的抗体或adc可以通过去除csc而充当敏化剂或化学敏化剂，这些试剂将以其他方式支持并且维持肿块并借此允许更有效地使用当前的医疗标准的减瘤剂或抗癌剂。也就是说，在某些实施例中，所披露的抗体或adc可以提供一种增强的作用(例如，加和性或协同性)，由此加强了另一种给予的治疗剂的作用模式。在本发明的上下文中，“组合疗法”应当在广义上解释并且仅仅是指抗mmp16抗体或adc以及一种或多种抗癌剂的给予，这些抗癌剂包括但不限于，细胞毒性剂、细胞生长抑制剂、抗血管生成剂、减瘤剂、化学治疗剂、放射疗法及放射治疗剂、靶向性抗癌剂(包括单克隆抗体和小分子实体)、brm、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞因子、激素疗法、放射疗法以及抗转移剂和免疫治疗剂，包括特异性和非特异性方法。这些组合的结果无需为当分开地进行每种治疗(例如抗体和抗癌剂)时所观察的作用的加和。尽管至少加和作用一般是所希望的，但超出单一疗法之一的任何增加的抗肿瘤作用都是有益的。另外，本发明不需要组合治疗展现出协同作用。然而，本领域技术人员应理解，在包含优选实施例的某些所选组合情况下，可以观察到协同作用。因此，在某些方面，组合疗法相比于(i)单独使用的抗mmp16抗体或adc，或(ii)单独使用的治疗性部分，或(iii)在不添加抗mmp16抗体或adc的情况下使用治疗性部分与另一治疗性部分的组合，具有治疗协同作用或改善了癌症治疗中可测量的治疗效果。如在此所使用的术语“治疗协同作用”是指抗mmp16抗体或adc以及一种或多种治疗性部分的组合，该组合具有大于抗mmp16抗体或adc或一种或多种治疗性部分的组合的累加效应的治疗效果。通过与对照或基线测量进行比较来量化所披露的组合的期望结果。如在此所使用，相关术语，如“改善”、“增加”或“减少”指示相对于对照的值，如在本文所述的治疗开始之前在同一个体中的测量，或在一个对照个体(或多个对照个体)中在不存在本文所述的抗mmp16抗体或adc的情况下但在其他治疗性部分(如标准护理治疗)存在的情况下的测量。代表性对照个体是与所治疗的个体患有相同类型的癌症的个体，其与所治疗的个体是大约同一年龄的(以确保治疗的个体和对照个体中的疾病阶段是可比较的)。响应于疗法的变化或改善通常具有统计显著性。如本文所使用的，术语“显著性”或“显著的”涉及两个或更多个实体之间存在非随机关联的概率的统计分析。为了确定关系是否是“显著的”或具有“显著性”，可以计算“p值”。低于用户定义的截断点的p值被认为是显著的。可以认为小于或等于0.1、小于0.05、小于0.01、小于0.005、或小于0.001的p值是显著的。协同治疗效果可以是比由单一治疗性部分或抗mmp16抗体或adc引起的治疗效果，或由抗mmp16抗体或adc或给定组合的单一治疗性部分引起的治疗效果的总和大至少约两倍、或至少约五倍、或至少约十倍、或至少约二十倍、或至少约五十倍、或至少约一百倍的效果。与由单一治疗性部分或抗mmp16抗体或adc引起的治疗效果，或由抗mmp16抗体或adc或给定组合的单一治疗性部分引起的治疗效果的总和相比，协同治疗效果也可以被观察为至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％或更多的治疗效果的增加。协同效应也是一种当组合使用时允许减少治疗剂给药剂量的效果。在实行组合疗法时，可以向受试者以单一组合物形式或以两种或更多种相异的组合物形式使用相同或不同给药途径同时地给予抗mmp16抗体或adc以及一种或多种治疗性部分。可替代地，使用抗mmp16抗体或adc的治疗可以在治疗性部分治疗之前或之后以例如从数分钟到数周范围内的时间间隔进行。在一个实施例中，该治疗性部分和抗体或adc是彼此在约5分钟到约两周内给予。在又其他实施例中，该抗体与治疗性部分的给药之间可以间隔若干天(2、3、4、5、6或7)、若干周(1、2、3、4、5、6、7或8)或若干月(1、2、3、4、5、6、7或8)。该组合疗法可以被给予直至病症以不同时程(如每日一次、两次或三次，每两天一次，每三天一次，每周一次，每两周一次，每个月一次，每两个月一次，每三个月一次，每六个月一次)被治疗、减轻或治愈，或者可以连续地给予。该抗体和一种或多种治疗性部分可以在隔日或隔周给予；或可以给出一系列抗mmp16抗体或adc治疗，之后是使用另外的治疗性部分的一次或多次治疗。在一个实施例中，将抗mmp16抗体或adc与一个或多个治疗性部分组合给予用于短的治疗周期。在其他实施例中，给予该组合疗法用于长的治疗周期。可以经由任何途径给予该组合疗法。举例而言，在过去十年中，转移性黑素瘤的治疗选择已得到显著发展。靶向braf及mek激酶抑制剂，以及更近期地，靶向免疫检查点受体pd-1、pd-l1、ctla-4的免疫调节疗法的研发已代替长期且相对无效的il-2及达卡巴嗪方案，这些方案在20世纪后期主导黑素瘤护理。约一半的转移性黑素瘤具有编码braf的基因中的突变，主要显现在位置600(v600)处缬氨酸氨基酸的活化错义改变中，其诱导所编码激酶的组成型活化且驱动也包括活化下游mek激酶的增生机制的活化。在braf及mek激酶上游的gtp酶nras也常发生突变，并且在转移性黑素瘤中，以与braf活化突变大量互斥的方式被组成性活化，这强调该信号传导通路在黑素瘤生物学中的重要性。已研发出若干选择性靶向突变的braf的抑制剂，包括当前经许可的药物威罗菲尼(vemurafenib)、阿巴拉非尼(abrafinib)及索拉菲尼(sorafenib)。其他braf靶向激酶抑制剂也处于研发中，包括gdc-0879、plx-4720及lgx818(恩科菲尼(encorafenib))。braf抑制剂可使患者中的braf突变体黑素瘤病灶产生显著消退，然而，对此类药物的反应一致地短暂且抗药性通常出现在初始反应的60-120天内。因此，尽管braf靶向抑制剂可提供暂时性临床益处，但其通常无法带来持久性治愈。最近已了解，在患有braf突变体转移性黑素瘤的患者中，同时抑制分裂原活化蛋白激酶mek1及mek2与braf抑制协同作用。靶向mek激酶的抑制剂(包括曲美替尼(trametinib)、司美替尼(selumetinib)、比尼替尼(binimetinib)及考比替尼(cobimetinib))已显示在转移性黑素瘤环境中的显著临床活性，以及曲美替尼在brafv600e黑素瘤中及比尼替尼在nras突变体黑素瘤中的明显单一药剂活性。mek靶向考比替尼与braf靶向威罗菲尼的组合已证实提供其他益处，这将无进展存活期改善至一年以上。重要的是，尽管这些靶向疗法中的每一种皆在所选黑素瘤患者群体中提供益处，但其皆一致地引起短暂肿瘤消退且通常在治疗6个月内复发，且因此迄今这些疗法的益处限于具有brafv600突变的患者。除braf及mek靶向抑制剂外，大量较不充分表征的小分子药剂正处于黑素瘤的研究中。已经以sch772984、mk8353及gdc0994的形式研发出细胞外信号相关激酶(erk)(一种被认为参与braf/mek抑制剂抗性的激酶)的抑制剂，然而尚未公开临床数据。类似地，正积极寻求pi3k及pten路径的抑制剂，包括渥曼青霉素(wortmannin)、ly294002、api-2、sr13668、bi-69a11、gsk690693及mek-2206。kit(一种在2％-3％的黑素瘤中突变的激酶)的抑制剂也处于研究中，包括在kit扩增性黑素瘤患者中已产生3个月存活益处的伊马替尼(imatinib)。参与细胞运动性的gtp酶rac1在约5％的黑素瘤中发生突变。正致力于靶向rac1及参与rac1信号转导的下游伴侣(partner)、pak1、mtor、jnk及nf-kb。简言之，继续评估作为黑素瘤中的靶标且具有不同程度的效能的多个激酶路径。对肿瘤免疫监视及限制的机制基础的最新及快速扩展性理解已使得能够研发靶向免疫系统的新型肿瘤药物。在哺乳动物免疫反应内已演化出多个安全检查点以将免疫系统引导至耐受正常组织，同时保留消灭受感染及致瘤转化细胞的能力。在黑素瘤恶性肿瘤生成(malignogenesis)的进程中，正常细胞过程失调，从而破坏免疫系统识别及消灭这些转化细胞的能力。细胞表面受体ctla-4、pd-1、tim-3、btla、vista、lag-3及其他受体在免疫细胞上表达，且在接合在肿瘤细胞上表达的同源配体(包括cd80、cd86、pd-l1、半乳凝素-9、tnfsfr14、ii类mhc及其他配体)后，介导效应物或辅助免疫反应的抑制或停止。因此，抑制这些免疫调节检查点相互作用的相互作用的药剂用于活化免疫反应且可再接合细胞毒性抗肿瘤活性。阻断ctla-4(伊匹单抗(ipilimumab)及曲美木单抗(tremilimumab))、pd-1(纳武单抗及派姆单抗)及pd-l1(阿替珠单抗(atezolizumab)、bms-936559、德瓦鲁单抗(durvalumab))的抗体(统称为检查点抑制剂或检查点阻断物)已显示在未经选择的黑素瘤患者中具有显著的单一药剂临床活性，但具有大量的免疫相关副作用。与靶向激酶抑制剂不同，持久的缓解在经小子集抗ctla-4/pd-1/pd-l1治疗的患者中的可能性是真实的，且在5年后在几乎20％的经伊匹单抗治疗的患者中观察到持续的存活期。尽管有此希望，但迄今为止尚未建立预测反应的生物标记物。针对检查点阻断疗法的反应的两种新出现但未证实的生物标记物呈总体突变负荷的形式，该特征可能对应于增加的可用于免疫识别及活化以及cd8t细胞的总肿瘤侵袭的新表位。重要的是，支持这些生物标记物的研究已在相对较小的回顾性群体中进行，且还未用于确定性前瞻性研究。也已研发出若干基于非抗体的其他免疫相关疗法。在小临床研究中，经黑素瘤肿瘤溶解物脉冲处理的树突细胞的自体移植产生显著的抗肿瘤效应，但在患有转移性黑素瘤的患者中具有有限的总存活益处。类似地，溶瘤性单纯疱疹病毒源疫苗塔里莫拉维克病毒(talimogenelaherparepvec)或t-vec显著降低iii期黑素瘤或先前未经治疗的转移性黑素瘤死亡的风险。也已证实其他免疫相关方法(例如过继性t细胞转移)具有临床益处但因显著毒性已中断。最新研究已展示达卡巴嗪、il-2、靶向braf-及mek抑制剂以及多类免疫疗法的多种组合的临床效用。在braf突变体患者中在brafv600e靶向泽波拉夫(zelboraf)后pd-l1靶向阿替珠单抗的交错给药使得总体反应率显著增加且延长反应的持续时间，但具有增加的副作用。类似地，评估ctla-4靶向阿巴拉非尼及纳武单抗的同时及交错组合的最新研究已揭露增加的反应率，且伴随有不良事件率增加。免疫调节剂、靶向激酶抑制剂及更传统黑素瘤治疗剂的多种其他组合正处于积极研究中，这显示不同程度的希望。mmp16靶向抗体药物缀合物可类似地显示与上文所列的治疗类别中的一类或多类具有协同活性。由于作用机制与先前建立的治疗的作用机制不同，故交叉毒性及抗性机制相对不可能。此外，由抗体药物缀合物诱导的抗体结合及细胞死亡可引起黑素瘤中活跃地接合免疫系统的炎性环境，这使这些恶性肿瘤进一步暴露于免疫阻断方法下。由于在黑素瘤中使用其他组合治疗策略，mmp16靶向抗体与其他药剂的共给予可在同时或依序给予时更有效，该特征必须在诊所凭经验来建立。在所选实施例中，本发明的化合物和组合物可以与检查点抑制剂(如pd-1抑制剂或pdl-1抑制剂)联合使用。pd-1及其配体pd-l1包含抗肿瘤t淋巴细胞应答的负调节剂。在一个实施例中，组合疗法可包含抗mmp16抗体或adc以及抗pd-1抗体(例如兰布鲁珠单抗(lambrolizumab)、纳武单抗、pidilizumab)及任选地一个或多个其他治疗部分。在另一个实施例中，组合疗法可包含抗mmp16抗体或adc以及抗pd-l1抗体(例如阿维鲁单抗(avelumab)、阿替珠单抗、德瓦鲁单抗、mpdl3280a、medi4736、msb0010718c)及任选地一个或多个其他治疗部分。在又另一个实施例中，组合疗法可包含抗mmp16抗体或adc以及抗pd-1抗体(例如派姆单抗)，将其向用其他抗-pd-1和/或靶向braf组合疗法(例如威罗菲尼或达拉非尼(dabrafinib))治疗后持续进展的患者给予。在一些实施例中，抗mmp16抗体或adc可以与各种一线癌症疗法组合使用。因此，在所选实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和细胞毒性剂(如异环磷酰胺、丝裂霉素c、长春地辛、长春碱、依托泊苷、伊立替康、吉西他滨、紫杉烷、长春瑞滨、甲氨蝶呤和培美曲塞)以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在某些赘生性指示物(例如，血液学指示物，如aml或多发性骨髓瘤)中，所披露的adc可以与细胞毒性剂如阿糖胞苷(arac)加上蒽环霉素(阿柔比星、安吖啶、阿霉素、柔红霉素、伊达比星等)或米托蒽醌、氟达拉滨、羟基脲、氯法拉滨、cloretazine组合使用。在其他实施例中，本发明的adc可以与g-csf或gm-csf引发、脱甲基化试剂如阿扎胞苷或地西他滨、flt3选择性酪氨酸激酶抑制剂(例如，米哚妥林、来他替尼和舒尼替尼)、全反式视黄酸(atra)和三氧化二砷组合给予(其中后两种组合可以对急性早幼粒细胞白血病(apl)特别有效)。在另一个实施例中，该组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和铂基药物(例如卡铂或顺铂)以及任选地一种或多种其他治疗性部分(例如长春瑞滨；吉西他滨；紫杉烷，例如像多西他赛或紫杉醇；伊立替康；或培美曲塞)。在另一个实施例中，例如在乳腺癌的治疗中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和环磷酰胺以及任选地一种或多种另外的治疗性部分(例如阿霉素、紫杉烷、表柔比星、5-fu和/或氨甲蝶呤)。在另一个实施例中，用于治疗egfr阳性nsclc的组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和阿法替尼以及任选地一种或多种其他治疗性部分(例如埃罗替尼和/或贝伐单抗)。在另一个实施例中，用于治疗egfr阳性nsclc的组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和埃罗替尼以及任选地一种或多种其他治疗性部分(例如贝伐单抗)。在另一个实施例中，用于治疗alk阳性nsclc的组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和色瑞替尼以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在另一个实施例中，用于治疗alk阳性nsclc的组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和克唑替尼以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在另一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和贝伐单抗以及任选地一种或多种其他治疗性部分(例如紫杉烷(例如像多西他赛或紫杉醇)；和/或铂类似物)。在另一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和贝伐单抗以及任选地一种或多种其他治疗性部分(例如吉西他滨和/或铂类似物)。在一个实施例中，该组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和铂基药物(例如卡铂或顺铂)类似物以及任选地一种或多种其他治疗性部分(例如紫杉烷，例如像多西他赛和紫杉醇)。在一个实施例中，该组合疗法包含使用抗mmp16抗体或adc及铂基药物(例如卡铂或顺铂)类似物以及任选的一种或多种其他治疗性部分(例如紫杉烷，诸如多西他赛和紫杉醇和/或吉西他滨和/或阿霉素)。在具体的实施例中，用于治疗铂抗性肿瘤的组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和阿霉素和/或依托泊苷和/或吉西他滨和/或长春瑞滨和/或异环磷酰胺和/或亚叶酸调节的5-氟尿嘧啶和/或贝伐单抗和/或他莫昔芬；以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在另一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和parp抑制剂以及任选的一种或多种其他治疗性部分。在另一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和贝伐单抗以及任选地环磷酰胺。组合疗法可包含抗mmp16抗体或adc及对包含突变型或异常表达的基因或蛋白质(例如brafv600e)的肿瘤(例如黑素瘤)有效的化学治疗性部分。t淋巴细胞(例如细胞毒性淋巴细胞(ctl))在抵抗恶性肿瘤的宿主防御中发挥重要作用。ctl通过在抗原呈递细胞上呈递肿瘤相关抗原而被激活。活性特异性免疫疗法是一种可以用于通过用源自已知癌症相关抗原的肽给患者接种来增强t淋巴细胞对癌症的响应的方法。在一个实施例中，组合疗法可包含抗mmp16抗体或adc及针对癌症缔合抗原(例如wt1.)的疫苗。在其他实施例中，组合疗法可以包括在伴有自体ctl或自然杀手细胞的体外扩展、激活和过继性再导入的情况下给予抗mmp16抗体或adc。ctl激活也可以通过增强抗原呈递细胞的肿瘤抗原呈递的策略来促进。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)促进树突细胞的募集和树突细胞交叉引发的激活。在一个实施例中，组合疗法可以包括分离抗原呈递细胞、用刺激性细胞因子(例如gm-csf)激活这些细胞，用肿瘤相关抗原引发，并且然后将这些抗原呈递细胞过继性再导入患者中，结合使用抗mmp16抗体或adc和任选地一种或多种不同的治疗部分。在一些实施例中，抗mmp16抗体或adc可以与各种一线黑素瘤疗法组合使用。在一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和达卡巴嗪以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在另外的实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和阿巴拉非尼(abrafinib)以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在另一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和铂基治疗性部分(例如卡铂或顺铂)以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在一些实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和长春花生物碱治疗性部分(例如长春碱、长春瑞滨、长春新碱或长春地辛)以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和白细胞介素-2以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在另一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和干扰素-α以及任选地一种或多种其他治疗性部分。在其他实施例中，抗mmp16抗体或adc可以与辅助性黑素瘤治疗和/或外科手术(例如肿瘤切除术)组合使用。在一个实施例中，组合疗法包括使用抗mmp16抗体或adc和干扰素-α以及任选地一种或多种其他治疗性部分。本发明还提供了抗mmp16抗体或adc与放射疗法的组合。如本文所使用的术语“放射疗法”是指用于在肿瘤细胞内诱导局部dna损伤的任何机制，如γ照射、x射线、uv照射、微波、电子发射等。还涵盖了使用放射性同位素向肿瘤细胞的定向传递的组合疗法，并且该疗法可以组合或作为本文所披露的抗mmp16抗体的缀合物使用。典型地，放射疗法是以脉冲方式经一段从约1到约2周的时间给予。任选地，该放射疗法可以按单次剂量或按多次连续剂量给予。在其他实施例中，抗mmp16抗体或adc可以与下述一种或多种化学治疗剂组合使用。d.抗癌剂如在此所使用的术语“抗癌剂”是“治疗性部分”的一个子集，其又是被描述为“药学活性部分”的药剂的子集。更特别地，“抗癌剂”是指可以用于治疗细胞增生性病症(如癌症)的任何药剂(或其药学上可接受的盐)，并且包括但不限于，细胞毒性剂、细胞生长抑制剂、抗血管生成剂、减瘤剂、化学治疗剂、放射治疗剂、靶向性抗癌剂、生物反应修饰剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞因子、激素疗法、抗转移剂以及免疫治疗剂。注意，前述抗癌剂的分类并不排除彼此，并且所选药剂可以分为一个或多个类别。例如，相容性抗癌剂可以被分类为细胞毒性剂和化学治疗剂。因此，前述术语中的每一个都应当根据本披露并且然后根据它们在医学领域中的使用来解释。在优选的实施例中，抗癌剂可以包括抑制或消除，或设计成抑制或消除癌细胞或可能变为癌性或产生肿瘤发生子代(例如肿瘤发生细胞)的细胞的任何化学试剂(例如化学治疗剂)。就这一点而言，所选化学试剂(细胞周期依赖性试剂)经常针对细胞生长或分裂必需的细胞内过程，并且因此针对一般迅速生长并且分裂的癌性细胞特别有效。例如，长春新碱使微管蛋白解聚合，并由此抑制迅速分裂的肿瘤细胞进入有丝分裂。在其他情况下，所选化学试剂是不依赖于细胞周期的试剂，其在其生命周期的任何时间点干扰细胞存活，并且可能对定向治疗剂(例如adc)有效。举例来说，某些吡咯并苯并二氮杂卓与细胞dna的小沟结合并在递送至细胞核时抑制转录。关于组合疗法或adc组分的选择，应理解的是，鉴于本披露，本领域技术人员可容易地鉴定相容性细胞周期依赖性试剂和不依赖于细胞周期的试剂。在任何情况下，并且如上所暗指，应理解的是，除了本文所披露的抗mmp16抗体和adc之外，所选抗癌剂还可以彼此(例如，chop疗法)组合给予。此外，应进一步理解的是，在所选实施例中，这样的抗癌剂可以包含缀合物并且可以在给药之前与抗体缔合。在某些实施例中，所披露的抗癌剂将与抗mmp16抗体连接以提供如本文所披露的adc。如在此所使用，术语“细胞毒性剂”(或细胞毒素)通常是指对细胞有毒的物质，因为其降低或抑制细胞功能和/或引起肿瘤细胞的破坏。在某些实施例中，该物质是源自活生物体或其类似物(从天然来源纯化或合成制备的)的天然存在的分子。细胞毒性剂的实例包括但不限于以下小分子毒素或酶活性毒素：细菌(例如卡奇霉素、白喉毒素、绿脓杆菌内毒素和外毒素、葡萄球菌肠毒素a)、真菌(例如，α-帚曲菌素、局限曲菌素)、植物(例如，相思豆毒素、篦麻毒素、葫莲根毒蛋白、槲寄生素、美洲商陆抗病毒蛋白、皂草毒素、白树毒素、苦瓜毒素、天花粉毒素、大麦毒素、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、垂序商陆蛋白[papi、papii及pap-s]、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、米特格林(mitegellin)、局限曲菌素、酚霉素、新霉素及单端孢霉烯族毒素)或动物(例如，细胞毒性rna酶，如细胞外胰腺rna酶；dna酶i，包括其片段和/或变体)。本文陈述了包括某些放射性同位素、美登木素生物碱、澳瑞他汀、多拉司他汀、多卡米新、鹅膏蕈碱和吡咯并苯并二氮杂卓的另外的相容性细胞毒性剂。可以与本发明的抗体组合(或缀合)使用的细胞毒性剂或抗癌剂的实例包括但不限于：烷化剂、烷基磺酸酯、阿那曲唑、鹅膏蕈碱、氮丙啶、乙烯亚胺及甲基三聚氰胺、多聚乙酰、喜树碱、bez-235、硼替佐米、苔藓抑素、海绵他汀、cc-1065、色瑞替尼、克唑替尼、念珠藻环肽、多拉斯他丁、多卡米新、伊斯罗宾、埃罗替尼、水鬼蕉碱、萨克丁特(sarcodictyin)、海绵素、氮芥、抗生素、烯二炔达内霉素、双膦酸酯、埃斯波霉素、色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、坎磷酰胺、卡拉比星、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、环磷酰胺、放线菌素d、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸、阿霉素、表柔比星、依索比星、依西美坦、氟尿嘧啶、氟维司群、吉非替尼、伊达比星、拉帕替尼、来曲唑、洛那法尼、麻西罗霉素、乙酸甲地孕酮、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、帕唑帕尼、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、雷帕霉素、罗多比星、索拉非尼、链黑霉素、链脲佐菌素、三苯氧胺、柠檬酸三苯氧胺、替莫唑胺、tepodina、替吡法尼、杀结核菌素、乌苯美司、凡德他尼、伏氯唑、xl-147、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物、叶酸类似物、嘌呤类似物、雄激素、抗肾上腺素、叶酸补充剂(如甲酰四氢叶酸)、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、安吖啶、贝斯特布斯(bestrabucil)、比生群、伊达曲沙、地磷酰胺、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、艾普塞隆、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、香菇多糖、罗尼达宁(lonidainine)、类美登醇、米托胍腙、米托蒽醌、莫哌达醇、尼曲瑞林(nitraerine)、喷司他丁、蛋氨氮芥、比柔比星、洛索蒽醌、鬼臼酸、2-乙肼、丙卡巴肼、多糖复合物、雷佐生；根瘤菌素；sf-1126、西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素(t-2毒素、疣孢菌素a、漆斑菌素a及蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；盖克托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷；环磷酰胺；塞替派；紫杉烷、苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲胺蝶呤；铂类似物、长春花碱；铂；依托泊苷；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞宾；诺消灵；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；西罗达；伊班膦酸盐；伊立替康、拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸；视黄醇；卡培他滨；康普瑞汀；亚叶酸；奥沙利铂；xl518，pkc-α、raf、h-ras、egfr及vegf-a的抑制剂，这些抑制剂减少细胞增生；及以上任一项的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。这一定义中还包括用于调控或抑制对于肿瘤的激素作用的抗激素剂，如抗雌激素和选择性雌激素受体抗体，抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂，这些抑制剂调控肾上腺中雌激素的产生，及抗雄激素；以及曲沙他滨(1,3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸、核糖酶，如vegf表达抑制剂和her2表达抑制剂；疫苗，ril-2；拓扑异构酶1抑制剂；rmrh；长春瑞滨和埃斯波霉素，及以上任一项的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。相容性细胞毒性剂或抗癌剂还可以包含商业上或临床上可用的化合物，如埃罗替尼(基因技术公司(genentech)/osi制药公司(osipharm.))、多西他赛(赛诺菲-安万特公司(sanofi-aventis))、5-fu(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，cas号51-21-8)、吉西他滨(礼来公司(lilly))、pd-0325901(cas号391210-10-9，辉瑞公司)、顺铂(顺式二胺，二氯铂(ii)、cas号15663-27-1)、卡铂(cas号41575-94-4)、紫杉醇(百时美施贵宝肿瘤学(bristol-myerssquibboncology)、新泽西州普林斯顿)、曲妥珠单抗(基因技术公司)、替莫唑胺(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂双环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺，cas号85622-93-1，先灵葆雅公司(scheringplough))、三苯氧胺((z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-n,n-二甲基乙胺，)和阿霉素另外的商业上或临床上可用的抗癌剂包括依鲁替尼(艾伯维公司(abbvie))、奥沙利铂(赛诺菲公司(sanofi))、硼替佐米(千禧制药公司(millenniumpharm.))、索坦(sutent)(su11248，辉瑞公司)、来曲唑(诺华公司(novartis))、甲磺酸伊马替尼(诺华公司)、xl-518(mek抑制剂，exelixis，wo2007/044515)、arry-886(mek抑制剂，azd6244，数组生物制药公司(arraybiopharma)，阿斯利康公司)、sf-1126(pi3k抑制剂，萨马福尔制药公司(semaforepharmaceuticals))、bez-235(pi3k抑制剂，诺华公司)、xl-147(pi3k抑制剂，exelixis)、ptk787/zk222584(诺华公司)、氟维司群(阿斯利康公司)、亚叶酸(醛叶酸)、雷帕霉素(西罗莫司，惠氏公司)、拉帕替尼(gsk572016，葛兰素史克公司(glaxosmithkline))、洛那法尼(sarasartm，sch66336，先灵葆雅公司)、索拉非尼(bay43-9006，拜耳实验室)、吉非替尼(阿斯利康公司)、伊立替康(cpt-11，辉瑞公司)、替吡法尼(zarnestratm，强生公司(johnson&johnson))、abraxanetm(不含克列莫佛)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米颗粒配制品(美国制药合作伙伴公司(americanpharmaceuticalpartners)，伊利诺伊州绍姆堡(schaumberg，il))、凡德他尼(rinn，zd6474，阿斯利康公司)、氯醌、ag1478、ag1571(su5271；苏根公司(sugen))、坦罗莫司(惠氏公司)、帕唑帕尼(葛兰素史克公司)、坎磷酰胺(泰力克公司(telik))、噻替派和环磷酰胺长春瑞滨卡培他滨(罗氏公司)、三苯氧胺(包括柠檬酸三苯氧胺)、(柠檬酸托他米芬)、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦，辉瑞公司)、甲霜灵、法多唑、(伏氯唑)、(来曲唑；诺华公司)和(阿那曲唑；阿斯利康公司)。术语“药学上可接受的盐”或“盐”是指分子或大分子的有机或无机盐。可以与氨基基团形成酸加成盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖质酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、以及双羟萘酸盐(即1,1’亚甲基双-(2-羟基3-萘甲酸盐))。药学上可接受的盐可以涉及包含另一种分子，如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他平衡离子。该平衡离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐在其结构中可以具有多于一个带电荷的原子。在多个带电荷的原子是药学上可接受的盐的一部分的情况下，该盐可以具有多个平衡离子。因此，药学上可接受的盐可以具有一个或多个带电荷的原子和/或一个或多个平衡离子。类似地，“药学上可接受的溶剂化物”或“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与分子或大分子的缔合。形成药学上可接受的溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、dmso、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。在其他实施例中，本发明的抗体或adc可以与目前临床试验中或可商购的多种抗体(或免疫治疗剂)中的任一种组合使用。所披露的抗体可以与选自下组的抗体组合使用，该组由以下组成：阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿托珠单抗、阿仑单抗、阿妥莫单抗、阿托昔单抗、anatumomab、阿西莫单抗、阿特朱单抗、艾维单抗、巴维昔单抗、贝妥莫单抗、贝伐单抗、比伐珠单抗、博纳吐单抗、布妥昔单抗、坎妥珠单抗、卡妥索单抗、西妥昔单抗、西他珠单抗、西妥木单抗、利伐珠单抗(clivatuzumab)、坎妥木单抗(conatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、多妥珠单抗(dalotuzumab)、达妥木单抗(daratumumab)、地莫单抗、曲兹妥单抗(drozitumab)、杜利妥单抗(duligotumab)、杜维单抗、杜昔妥单抗(dusigitumab)、依美昔单抗、艾妥珠单抗(elotuzumab)、恩脱昔单抗(ensituximab)、厄妥索单抗、达珠单抗、法妥珠单抗(farletuzumab)、拉妥珠单抗(ficlatuzumab)、费妥木单抗(figitumumab)、法伏妥单抗(flanvotumab)、弗妥昔单抗(futuximab)、加尼妥单抗(ganitumab)、吉妥珠单抗、吉瑞昔单抗、来巴妥单抗(glembatumumab)、替伊莫单抗、伊戈伏单抗、麦妥珠单抗(imgatuzumab)、印妥昔单抗(indatuximab)、伊珠单抗、英妥木单抗、伊匹单抗、伊妥木单抗、拉贝珠单抗、lambrolizumab、来沙木单抗、林妥珠单抗、洛伐珠单抗(lorvotuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、曼妥木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗、米妥珠单抗(milatuzumab)、明瑞莫单抗、米妥莫单抗、莫妥木单抗(moxetumomab)、那妥单抗(narnatumab)、那莫单抗、尼妥木单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗、纳武单抗、若莫单抗(nofetumomabn)、obinutuzumab、卡妥珠单抗(ocaratuzumab)、奥法木单抗、奥拉妥单抗(olaratumab)、奥拉帕尼、昂妥珠单抗(onartuzumab)、奥妥珠单抗(oportuzumab)、瑞戈伏单抗(oregovomab)、帕尼单抗、帕图珠单抗(parsatuzumab)、帕托单抗(patritumab)、派姆单抗盘图莫单抗(pemtumomab)、帕妥珠单抗、pidilizumab、平妥单抗、普立木单抗、拉妥木单抗(racotumomab)、拉图单抗(radretumab)、雷莫芦单抗、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗、罗妥木单抗、沙妥莫单抗、昔洛珠单抗、sibrotuzumab、司妥昔单抗、司妥佐单抗(simtuzumab)、索利图单抗(solitomab)、他妥珠单抗(tacatuzumab)、他妥莫单抗(taplitumomab)、替妥莫单抗(tenatumomab)、替普莫单抗(teprotumumab)、加珠单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、托卡珠单抗(tucotuzumab)、乌妥昔单抗(ublituximab)、维妥珠单抗、沃妥珠单抗(vorsetuzumab)、伏妥莫单抗、扎鲁木单抗、cc49、3f8、medi0680、mdx-1105、及其组合。其他实施例包括被批准用于癌症疗法的抗体的使用，包括但不限于，利妥昔单抗、吉妥珠单抗奥佐米星、阿仑单抗、替伊莫单抗、托西莫单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、帕木单抗、奥法木单抗、伊匹单抗及布妥昔单抗威多廷。本领域的普通技术人员将能够容易地鉴定与在此的传授内容相容的另外的抗癌剂。e.放射性疗法本发明还提供了抗体或adc与放射疗法(即，用于在肿瘤细胞内诱导dna损伤的任何机制，如γ照射、x射线、uv照射、微波、电子发射等)的组合。还涵盖了使用放射性同位素向肿瘤细胞的定向传递的组合疗法，并且所披露的抗体或adc可以与靶向性抗癌剂或其他靶向手段联合使用。典型地，放射疗法是以脉冲方式经一段从约1到约2周的时间给予。该放射疗法可以给予患有头颈癌的受试者，持续约6到7周。任选地，该放射疗法可以按单次剂量或按多次连续剂量给予。viii.适应症本发明提供了本发明的抗体和adc用于诊断、治疗性诊断、治疗和/或预防各种病症(包括赘生性病症、炎症、血管生成性病症和免疫疾病以及由病原体引起的病症)的用途。在某些实施例中，待治疗的疾病包括包含实体瘤的赘生性病症。在其他实施例中，待治疗的疾病包括恶性血液病。在某些实施例中，本发明的抗体或adc将被用于治疗表达mmp16决定子的肿瘤或肿瘤发生细胞。优选地，有待治疗的“受试者”或“患者”将为人类，不过如在此所使用，这些术语明确地被视作包含任何哺乳动物物种。应理解的是，本发明的化合物和组合物可用于在疾病的不同阶段和其治疗周期的不同时间点治疗受试者。因此，在某些实施例中，本发明的抗体和adc将被用作一线治疗，并且被给予于之前没有针对癌性病症进行治疗的受试者。在其他实施例中，本发明的抗体和adc将被用于治疗二线和三线患者(即，先前针对同一病症分别治疗一次或两次的那些患者)。仍其他实施例将包括已经用所披露的mmp16adc或用不同治疗剂治疗相同或相关病症三次或更多次的四线或更高线患者(例如胃癌或结肠直肠癌患者)的治疗。在其他实施例中，本发明的化合物和组合物将用于治疗先前已经被治疗(用本发明的抗体或adc或用其他抗癌剂)并且已经复发或被确定为对先前的治疗难以治疗的受试者。在所选实施例中，本发明的化合物和组合物可用于治疗具有复发性肿瘤的受试者。在某些实施例中，本发明的化合物及组合物将作为单一药剂或以组合形式用作前线或诱导疗法且给予先前尚未针对癌症病状加以治疗的受试者。在其他实施例中，本发明的化合物及组合物将在巩固或维持治疗期间作为单一药剂或以组合形式使用。在其他实施例中，本发明的化合物和组合物将用于治疗先前已经被治疗(用本发明的抗体或adc或用其他抗癌剂)并且已经复发或被确定为对先前的治疗难以治疗的受试者。在所选实施例中，本发明的化合物和组合物可用于治疗具有复发性肿瘤的受试者。在其他实施例中，本发明的化合物及组合物将用作调理疗法的一部分，该调理疗法作为接收自体或同种异体造血干细胞移植物，其中以骨髓、脐带血液或移动的周边血液作为干细胞源。根据本发明经历治疗的赘生性病症可为良性或恶性；实体肿瘤；且可选自包括(但不限于)以下之组：肾上腺肿瘤、aids相关癌症、肺泡软组织肉瘤、星形胶质细胞肿瘤、自主神经节瘤、膀胱癌(鳞状细胞癌及移行细胞癌)、囊胚病症、骨癌(釉质瘤、动脉瘤骨胞囊、骨软骨瘤、骨肉瘤)、大脑及脊髓癌症、转移性脑瘤、乳腺癌、颈动脉体肿瘤、子宫颈癌、软骨肉瘤、脊索瘤、嫌色细胞肾细胞癌、透明细胞癌瘤、结肠癌、结肠直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、促结缔组织增生小型圆细胞肿瘤、室管膜瘤、上皮病症、尤文氏肿瘤(ewing’stumors)、骨外黏液样软骨肉瘤、骨纤维生成不良、骨骼纤维性结构不良、胆囊及胆管癌症、胃癌、胃肠道疾病、妊娠滋养细胞疾病、生殖细胞肿瘤、腺病症、头颈癌、下丘脑疾病、肠癌症、胰岛细胞瘤、卡堡氏肉瘤(kaposi’ssarcoma)、肾癌(肾胚细胞瘤、乳头状肾细胞癌)、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤样肿瘤、脂肪肉瘤/恶性脂肪瘤样肿瘤、肝癌(肝母细胞瘤、肝细胞癌)、淋巴瘤、淋巴瘤(霍奇金氏(hodgkin’s)及非霍奇金氏淋巴瘤)、肺癌(小细胞癌瘤、腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌等)、巨噬细胞病症、神经管胚细胞瘤、黑素瘤、脊膜瘤、多发性内分泌瘤、多发性骨髓瘤(包括浆细胞瘤、局部骨髓瘤及髓外骨髓瘤)、骨髓发育不良症候群、骨髓增生疾病(包括骨髓纤维化、真性红血液细胞增多症及特发性血小板减少)、神经母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌瘤、副甲状腺肿瘤、儿科癌症、周边神经鞘肿瘤、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、前列腺癌、后葡萄膜黑素瘤、罕见血液科病症、肾转移癌、杆状肿瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌症、胃癌、基质病症、滑膜肉瘤、睪丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移癌及子宫癌症(子宫颈癌、子宫内膜癌及平滑肌瘤)。在某些实施例中，本发明的化合物和组合物将被用作一线治疗，并且被给予于先前没有针对癌性病症进行治疗的受试者。在其他实施例中，本发明的化合物和组合物将用于治疗先前已经被治疗(用本发明的抗体或adc或用其他抗癌剂)并且已经复发或被确定为对先前的治疗难以治疗的受试者。在所选实施例中，本发明的化合物和组合物可用于治疗具有复发性肿瘤的受试者。在其他优选实施例中，该增生性病症将包含实体瘤，包括但不限于，肾上腺肿瘤、肝肿瘤、肾肿瘤、膀胱肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、胃肿瘤、卵巢肿瘤、宫颈肿瘤、子宫肿瘤、食管肿瘤、结肠直肠肿瘤、前列腺肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤(小细胞肿瘤和非小细胞肿瘤)、甲状腺肿瘤、癌瘤、肉瘤、胶质母细胞瘤及多种头颈肿瘤。在某些所选方面中且如下文实例中所显示，所披露的adc在治疗转移性黑素瘤、胃癌、肾癌、乳腺癌及胰腺癌时尤其有效。如所指示，所披露抗体及adc在治疗黑素瘤时尤其有效。在其他实施例中，所披露组合物可用于治疗黑素瘤。在所选实施例中，抗体和adc可以被给予于表现出局限期疾病或扩散期疾病的患者。在其他实施例中，向以下患者给予所披露的经缀合抗体：难治性患者(即，在初始疗程期间或在完成初始疗程后不久疾病复发的那些环状)；敏感患者(即，在一级疗法后复发长于2-3个月的那些患者)；或对以下药剂展现抗性的患者：烷基化剂(例如阿巴拉非尼)和/或细胞因子疗法(例如il-2)和/或免疫检查点阻断治疗(例如伊匹单抗、曲美木单抗、纳武单抗、派姆单抗、阿替珠单抗、bms-936559、德瓦鲁单抗)和/或肿瘤疫苗(例如塔里莫拉维克病毒(talimogenelaherparepve))和/或braf突变环境中的靶向激酶抑制剂疗法(例如威罗菲尼、阿巴拉菲尼(abrafini)、恩科菲尼、阿巴拉非尼、曲美替尼、司美替尼、比尼替尼及考比替尼)。在某些优选的实施例中，本发明的mmp16adc可以给予于一线患者。在其他实施例中，本发明的mmp16adc可以给予于二线患者。在仍其他实施例中，本发明的mmp16adc可以给予于三线患者。ix.制品本发明包括包含一个或多个容器(container)或接受器(receptacle)的药物包装和试剂盒，其中容器可以包含一个或多个剂量的本发明的抗体或adc。这样的试剂盒或包装本质上可以是诊断性的或治疗性的。在某些实施例中，该包装或试剂盒包含单位剂量，意指组合物的预定量，该组合物例如包含本发明的抗体或adc，含或不含一种或多种另外的试剂，以及任选地一种或多种抗癌剂。在某些其他实施例中，该包装或试剂盒含有可检测量的抗mmp16抗体或adc，具有或不具有相关的报道分子以及任选地一种或多种另外的试剂，用于癌性细胞的检测、定量和/或可视化。在任何情况下，本发明的试剂盒通常将包含在合适的容器或接受器中的本发明的抗体或adc，药学上可接受的配制品，以及任选地在相同或不同容器中的一种或多种抗癌剂。所述试剂盒还可以含有其他药学上可接受的配制品或装置，用于诊断或组合疗法。诊断装置或仪器的实例包括可用于检测、监测、量化或分析与增生性病症相关的细胞或标记物的那些(关于这样的标记物的完整列表，参见上文)。在一些实施例中，这些装置可以用于在体内或体外对循环肿瘤细胞进行检测、监测和/或定量(参见例如wo2012/0128801)。在仍其他实施例中，循环肿瘤细胞可以包含肿瘤发生细胞。本发明预期的试剂盒还可以含有合适的试剂以将本发明的抗体或adc与抗癌剂或诊断剂进行组合(例如，参见u.s.p.n.7,422,739)。当试剂盒的组分被提供在一种或多种液体溶液中时，该液体溶液可以是非水性的，尽管通常优选的是水性溶液，特别优选无菌水性溶液。试剂盒中的配制品还可以作为可以在加入合适的液体时重构的干燥粉末或以冻干形式提供。用于重溶的液体可以包含在单独的容器中。这样的液体可以包含无菌的药学上可接受的缓冲液或其它稀释剂，如抑菌性注射用水、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液或葡萄糖溶液。在试剂盒包含本发明的抗体或adc组合另外的治疗剂或试剂的情况下，能以摩尔当量组合或者一种组分超过另一种组分来预先混合该溶液。可替代地，本发明的抗体或adc以及任何任选的抗癌剂或其他药剂(例如类固醇)可以在给予患者之前分开保持在不同的容器中。在某些优选的实施例中，包含本发明的组合物的上述试剂盒将包含标签、标记物、药品说明书、条形码和/或阅读器，这表明试剂盒内容物可用于治疗、预防和/或诊断癌症。在其他优选的实施例中，试剂盒可以包括标签、标记物、药品说明书、条形码和/或阅读器，这表明试剂盒内容物可以根据某一剂量或给药方案给予以治疗患有癌症的受试者。在特别优选的方面，所述标签、标记物、药品说明书、条形码和/或阅读器表明试剂盒内容物可用于治疗、预防和/或诊断恶性血液病(例如aml)，或提供用于治疗肺癌的剂量或给药方案。在其他特别优选的方面，所述标签、标记物、药品说明书、条形码和/或阅读器表明试剂盒内容物可用于治疗、预防和/或诊断肺癌(例如腺癌)，或提供用于治疗肺癌的剂量或给药方案。合适的容器或接受器包括，例如瓶子、小瓶、注射器、输液袋(i.v.袋)等。这些容器可以由多种材料(例如玻璃或药学上相容的塑料)形成。在某些实施例中，所述一个或多个接受器可以包含无菌存取口。例如，该容器可以是具有可通过皮下注射针刺穿的塞子的静脉输液袋或小瓶。在一些实施例中，该试剂盒可以含有一种通过其将该抗体和任何任选的组分给予患者的构件，例如，一个或多个针或注射器(预装满的或空的)、滴眼管、移液管或其他此类装置，由该装置，可以将配制物注射或引入到受试者中或施用到身体的患病区域。本发明的试剂盒还将典型地包括一种用于容纳小瓶或此类装置及其他组分的紧密封闭的构件以供商业销售，如例如吹塑的塑料容器，在其中放置并且保持所希望的小瓶和其他装置。x.杂项除非在此另外定义，否则结合本发明使用的科技术语应当具有本领域的普通技术人员通常所了解的意义。另外，除非上下文另外需要，否则单数形式的术语应当包括复数形式并且复数形式的术语应当包括单数形式。此外，说明书和所附权利要求书中提供的范围包括端点和这些端点之间的所有点。因此，2.0到3.0的范围包括2.0、3.0及2.0与3.0之间的所有点。一般而言，在此所描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及化学的技术是本领域中众所周知并且常用的那些。在此使用的与这样的技术相关联的命名法也是本领域常用的。除非另外指明，否则本发明的方法及技术通常根据本领域中熟知的常规方法且如本说明书通篇所引用的各种参考文献中所描述来进行。xi.参考文献将在此援引的全部专利、专利申请、和出版物、和以电子方式可获得的材料(包括，例如，核苷酸序列提交，例如genbank和refseq；和氨基酸序列提交，例如swissprot、pir、prf、pbd；以及来自genbank和refseq中经注释的编码区的翻译)的完整披露内容通过引用结合，而不管短语“通过引用结合”是否相关于特定参考文献使用。以上的详细说明和后面的实例仅是出于清晰理解的目的而给出的。不应理解为由此构成任何不必要的限制。本发明不限于所显示和描述的具体细节。由权利要求书限定的本发明包括对于本领域技术人员而言显而易见的变化。在此使用的任何章节标题只是出于组织的目的，而不应被解释为限制所描述的主题。实例通过参照以下实例将更容易地了解总体如上所述的本发明，这些实例是通过说明方式提供并且并非旨在成为本发明的限制。这些实例不旨在表示以下实验是所进行的全部或唯一实验。除非另外指示，否则份数是重量份，分子量是重量平均分子量，温度是摄氏度，并且压力是在大气压或接近大气压下。序列表概述表3提供了本文包括的氨基酸和核酸序列的概述。表3肿瘤细胞系概述pdx肿瘤细胞类型用缩写表示，后面是数字，数字表示特定的肿瘤细胞系。测试样品的传代次数是由p0-p#外加样品名称指示，其中p0指示直接地从患者肿瘤获得的未传代样品，并且p#指示在测试之前已经通过小鼠对肿瘤进行传代的次数。如本文所用，肿瘤类型及亚型的缩写示于如下表4中：表4实例1使用全转录体测序来鉴定mmp16表达为了表征存在于癌症患者中的实体瘤的细胞异质性并鉴定临床相关的治疗靶标，使用本领域认可的技术开发并维持大的pdx肿瘤库。包含大量离散的肿瘤细胞系的pdx肿瘤库在免疫功能低下小鼠中通过肿瘤细胞的多次传代而增生，其中所述肿瘤细胞最初从罹患多种实体瘤恶性肿瘤的癌症患者获得。低传代pdx肿瘤是其天然环境中肿瘤的代表，提供了对驱动肿瘤生长和抵抗目前治疗的潜在机制的临床相关见解。可以将肿瘤细胞宽泛地分为两个类型的亚群：非肿瘤发生细胞(ntg)和肿瘤起始细胞(tic)。当被植入进免疫功能低下的小鼠中时，tic具有形成肿瘤的能力。癌症干细胞(csc)是tic的一个子集，其能够无限期地自我复制同时维持多向分化的能力。ntg虽然有时能够在体内生长，但不会形成当植入时重现原始肿瘤的异质性的肿瘤。为了进行全转录组分析，在达到800-2000mm3后或在骨髓中建立白血病(<5％的人源骨髓细胞结构)后针对aml，从小鼠切除pdx肿瘤。使用本领域认可的酶消化技术将切除的pdx肿瘤解离成单细胞悬浮液(参见，例如，u.s.p.n.2007/0292414)。将解离的块状肿瘤细胞与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)一起孵育以检测死细胞，与抗小鼠cd45和h-2kd抗体一起孵育以鉴定小鼠细胞，并且与抗人epcam抗体一起孵育以鉴定人上皮细胞。人类黑素瘤细胞被识别为dapi-、小鼠cd45-、小鼠h2kd-和esa-细胞。此外，将肿瘤细胞与荧光缀合的抗人cd46和/或其他csc标记抗体一起孵育以鉴定cd46hicsc，并且然后使用facsaria细胞分选仪(bd生物科学公司)进行分选(参见u.s.p.n2013/0260385、2013/0061340和2013/0061342)。以类似方式使原发性人类肿瘤解离，且用dapi、抗人类cd45、抗人类cd2、抗人类cd3、抗人类cd11a、抗人类cd14、抗人类cd16、抗人类cd46及抗人类cd324染色。用facsaria细胞分选仪分选对cd45、cd2、cd3、cd11a、cd14及cd16来说阴性染色且对人类cd46来说阳性染色的细胞用于rna分析，且在鼠类移植测定中被证实为致瘤csc群体。通过在补充有1％2-巯基乙醇的rlt加rna(rltplusrna)裂解缓冲液(凯杰公司(qiagen))中裂解细胞来从肿瘤细胞中提取rna，在-80℃下冷冻裂解物，并且然后使用rneasy分离试剂盒(凯杰公司)解冻裂解物用于rna提取。使用nanodrop分光光度计(赛默科技公司(thermoscientific))和/或生物分析仪2100(bioanalyzer2100，安捷伦科技公司(agilenttechnologies))来量化rna。正常组织rna购自各种来源(生命技术公司(lifetechnology)、安捷伦公司(agilent)、sciencell公司、生物链公司(biochain)以及克隆技术公司(clontech))。通过oligoligation/detection(solid)4.5或solid5500xl新一代测序系统(生命技术公司(lifetechnologies))，使用应用生物系统(abi)测序来进行高质量rna的全转录组测序。就此而言，solid全转录组分析是使用经修改的来自abi的完全转录组方案(针对低输入总rna所设计)或ovationrna-seq系统v2tm(nugen技术公司)、使用自1ng来自块状肿瘤样品的总rna所产生的cdna进行。所得cdna文库加以片段化，且添加条形码衔接子以允许在测序运行期间汇集来自不同样品的片段文库。由solid平台所产生的数据定位于如使用ncbihg19.2版的公开的人类基因组进行的47版参考序列(refseq)所注释的34,609个基因，并且提供了大多数样品中rna水平的可验证的测量。来自solid平台的测序数据使用映射至基因的外显子区域的度量标准rpm(读数/每百万)或rpkm(读数/每千碱基/百万)以标称形式表示，使得基本的基因表达分析能够被标准化并列举为rpm转录物或rpkm转录物。如图2中所示，mmp16mrna在原发性sk肿瘤细胞亚群以及经传代sk肿瘤细胞中的表达(黑色条)通常高于正常细胞中的表达(灰色条)。在br中的csc群体中也可见与正常细胞(灰色条)相比增加的mmp16表达。黑素瘤及黑素瘤csc群体中升高的mmp16mrna表达的鉴别指示mmp16值得作为潜在诊断及免疫治疗靶标加以进一步评估。此外，ccs中的mmp16与brpdx肿瘤中的ntg相比增加的表达指示mmp16是这些肿瘤类型中致瘤细胞的良好标记物。实例2使用qrt-pcr的肿瘤中的mmp16mrna的表达为了证实肿瘤细胞中的mmp16rna表达，使用fluidigmbiomarktmhd系统根据工业标准方案对各种pdx细胞系进行qrt-pcr。如实例1中所述自块状pdx肿瘤细胞提取rna。使用高容量cdna封存试剂盒(生命科技公司(lifetechnologies))，根据制造商说明书将1.0ngrna转化成cdna。然后将使用mmp16探针特异性taqman测定法预扩增的cdna材料用于随后的qrt-pcr实验。比较mmp16在正常组织中的表达(normtox或norm)与在br-基底样、br-管腔上皮a、ov及melpdx肿瘤细胞系中的表达(图3；每一点表示每个个体组织或pdx细胞系的平均相对表达，且小横线表示几何平均值)。“normtox”代表如下各种正常组织的样品：结肠、内皮细胞(动脉、静脉)、食道、心脏、肾、肺、胰腺、皮肤(成纤维细胞、角质形成细胞)、小肠、脾、胃和气管。另一组称为“norm”的正常组织代表相对于adc型药物具有推定的较低毒性风险的以下正常组织样品：外周血单个核细胞及t细胞、正常骨髓、脂肪、膀胱、乳房、子宫颈、黑色素细胞及卵巢。两种最高表达的正常组织是脾及pbmc。图3进一步显示与正常组织相比，mmp16表达平均在br-基底样、mel及ov-s/ps-2的子集中较高，但几何平均值在ov肿瘤样本中总体较低。此数据支持如下早期发现：与正常组织相比，mmp16mel及其他pdx肿瘤子集的表达升高。实例3使用微阵列测定肿瘤中mmp16mrna的表达为发现表达mmp16的其他致瘤细胞系，如下实施微阵列实验且分析数据。实质上如实例2中所述自mel、br-基底样、br-管腔上皮a型、br-管腔上皮b型pdx肿瘤提取1-2μg的完整肿瘤总rna。使用agilentsureprintge人8x60v2微阵列平台分析这些样品，该平台包含针对人基因组中的27,958个基因和7,419个lncrna而设计的50,599个生物学探针。标准的行业惯例被用于标准化和转换强度值以量化每个样品的基因表达。每个样品中mmp16表达的归一化强度绘制在图4中，并且针对每个肿瘤类型导出的几何平均值由横条表示。正常组织包括乳房、结肠、心脏、肾、肝、肺、pbmc、皮肤、脾及胃。图4的更紧密综述显示与正常组织相比，mmp16表达在大多数mel肿瘤细胞系及br-基底样、br-管腔上皮a型及br-管腔上皮b型的至少一些肿瘤样品中上调。上述肿瘤类型中对mmp16表达升高的这一观察证实了先前实例的结果。具体而言，在所有三个平台上分析的mel肿瘤样品显示实质上升高的mmp16表达。更通常而言，这些数据展示，mmp16在多个肿瘤亚型(包括mel、br-基底样、br-管腔上皮a型、br-管腔上皮b型)中表达，且可为用于研发这些适应症中的基于抗体的治疗剂的良好靶标。实例4使用癌症基因组图谱的肿瘤中的mmp16表达使用称为癌症基因组图谱(tcga)的、原发性肿瘤和正常样品的大型公开可用数据集来证实hmmp16mrna在各种肿瘤中的过表达。来自illuminahiseq_rnaseqv2平台的hmmp16表达数据从tcga数据门户(https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/tcgadownload.jsp)下载并进行解析以聚合来自每个基因的各个外显子的读数，以产生单个值读数/千碱基外显子/百万个映射读数(rpkm)。图5显示与正常组织相比，mmp16表达在br、kdy及mel中升高。这些数据进一步证实mmp16mrna的水平升高可发现于各种肿瘤类型中，表明抗mmp16抗体及adc可为这些肿瘤的有用治疗剂。图6展示所有kdytcga肿瘤子集的卡普兰迈耶存活率曲线(kaplanmeiersurvivalcurves)，其中患者存活率数据是可获得的。根据kdy肿瘤中的mmp16mrna高表达(即表达高于临限指数值)或mmp16mrna的低表达(即表达低于临限指数值)来将所有kdy患者分层。临限指数值计算为rpkm值的中值，其在kdy患者中经计算为0.12。图下方所列的“处于风险中之数目”显示各患者首次诊断之日(第0天)之后的每1000天，数据集中保留的存活患者的数目。kdy患者的两个存活率曲线存在显著差异(根据对数秩曼特尔考克斯检验(log-rank(mantel-cox)test)，p＝0.0041；或根据格汉-布雷斯洛-威尔科克森检验(gehan-breslow-wilcoxontest)，p＝0.0044)。kdy-rpcc的两个存活率曲线存在显著差异(根据对数秩曼特尔考克斯检验(log-rank(mantel-cox)test)，p＝0.0042；或根据格汉-布雷斯洛-威尔科克森检验(gehan-breslow-wilcoxontest)，p＝0.0068)。这些数据显示，与展现mmp16低表达的患有kdy肿瘤的患者相比，展现mmp16高表达的患有kdy肿瘤的患者具有较短的存活时间。这表明抗-mmp16疗法可用于治疗kdy，且mmp16表达可用作预后生物标记物，基于此可作出治疗决策。实例5重组mmp16蛋白的克隆及表达以及过表达细胞表面mmp16蛋白的细胞系的工程化人类mmp16(hmmp16)慢病毒dna构建体为生成过表达hmmp16蛋白的细胞系，如下构建含有编码hmmp16前蛋白的开放阅读框的慢病毒载体。首先，使用标准分子克隆技术来引入编码igk信号肽的核苷酸序列，随后在pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp(systembiosciences)的多克隆位点的上游引入天冬氨酸/赖氨酸表位标签，产生载体plmegpa。该双启动子构建体使用cmv启动子来驱动天冬氨酸/赖氨酸标记的细胞表面蛋白的表达，独立于驱动copgfpt2apuro报道子和选择性标记的表达的下游ef1启动子。plmegpa中的t2a序列促进肽键缩合的核糖体跳过，导致两种独立蛋白的表达：在t2a肽的上游编码的报道子copgfp的高水平表达，与在t2a肽的下游编码的puro选择性标记蛋白的共表达，这允许在嘌呤霉素存在下选择经转导的细胞。使用ncbi登录nm_005941作为设计参考，自geneart(赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientific))订购编码hmmp16前蛋白的合成dna片段。将合成基因进行密码子优化，用于在哺乳动物细胞系中表达，并且侧翼有限制性内切核酸酶位点，以使得能够在plmegpa中的igk信号肽-天冬氨酸/赖氨酸表位标签的下游进行框内亚克隆。这产生plmegpa-hmmp16-nflag慢病毒载体，其编码在hmmp16前蛋白的n末端附有天冬胺酸/赖氨酸标签的融合蛋白。hmmp16、hmmp15及hmmp24细胞外结构域融合蛋白为生成含有人类mmp16前蛋白的ecd的融合蛋白，自geneart订购编码hmmp16前蛋白ecd(例如，np_005932的a32-a564，由nm_005941编码的蛋白质)的合成dna片段。此序列经密码子优化，且含有另外的点突变(e247a)以使天然mmp16蛋白的蛋白酶活性失活。使用标准分子技术，将此合成dna亚克隆至位于免疫球蛋白κ(igk)信号肽序列的框内和其下游以及位于编码9x组胺酸标签(产生phmmp16ecd(e247a)-his)或人类igg2fc蛋白(产生phmmp16ecd(e247a)-fc)的dna的框内和其上游的cmv驱动的表达载体中。这些cmv驱动的表达载体允许在hek293t和/或cho-s细胞中的高水平瞬时表达。为生成含有人类mmp15前蛋白的ecd的融合蛋白，自geneart订购编码hmmp15前蛋白ecd(例如，np_002419的l42-n625)的合成dna片段。此序列经密码子优化，且含有另外的点突变(e260a)以使天然mmp15蛋白的蛋白酶活性失活。使用标准分子技术，将此合成dna亚克隆至位于免疫球蛋白κ(igk)信号肽序列的框内和其下游以及位于编码9x组胺酸标签(产生phmmp15ecd(e260a)-his)或人类igg2fc蛋白(产生phmmp15ecd(e260a)-fc)的dna的框内和其上游的cmv驱动的表达载体中。这些cmv驱动的表达载体允许在hek293t和/或cho-s细胞中的高水平瞬时表达。为生成含有人类mmp24前蛋白的ecd的融合蛋白，自geneart订购编码hmmp24前蛋白ecd(例如，np_006681之a53-a602)的合成dna片段。此序列经密码子优化，且含有另外的点突变(e283a)以使天然mmp24蛋白的蛋白酶活性失活。使用标准分子技术将所得dna片段亚克隆至位于免疫球蛋白κ(igk)信号肽序列的框内及下游以及编码9x-组氨酸标签(产生phmmp24ecd(e283a)-his)或人类igg2fc蛋白质(产生phmmp124ecd(e283a)-fc)的dna的上游及框内的cmv驱动的表达载体中。这些cmv驱动的表达载体允许在hek293t和/或cho-s细胞中的高水平瞬时表达。大鼠mmp16(rmmp16)dna构建体为产生过表达rmmp16蛋白的细胞系，通过将经密码子优化的编码大鼠mmp16前蛋白的合成dna片段(geneart)(源自ncbi登录xm_006237921的序列)亚克隆至上述慢病毒载体plmegpa的多克隆位点中来构建慢病毒载体plmegpa-rmmp16-nflag。plmegpa双启动子慢病毒载体容许带有n末端dykddddk标签的rmmp16前蛋白与gfp及嘌呤霉素n-乙酰基转移酶选择标记物共表达。为生成可溶性重组rmmp16蛋白，自geneart订购编码蛋白酶失活的(例如，e247a)rmmp16前蛋白ecd(例如，xp_006237983的a32-a564，由xm_006237921编码的蛋白质)的合成dna片段，并使用标准分子技术，将其亚克隆至位于免疫球蛋白κ(igk)信号肽序列的框内和其下游以及位于编码9x组胺酸标签(产生prmmp16ecd(e247a)-his)或人类igg2fc蛋白(产生prmmp16ecd(e247a)-fc)的dna的框内和其上游的cmv驱动的表达载体中。mmp16、mmp15及mmp24ecd融合蛋白产生使用聚乙烯亚胺聚合物作为转染试剂，用选自以下中之一的表达构建体转染hek293t细胞的悬浮或贴壁培养物或者悬浮cho-s细胞：phmmp16ecd(e247a)-his、phmmp16ecd(e247a)-fc、prmmp16ecd(e247a)-his、prmmp16ecd(e247a)-fc、phmmp16ecd(e260a)-his、phmmp16ecd(e260a)-fc、phmmp16ecd(e260a)-fc或phmmp16ecd(e260a)-fc。在转染之后三至五天，使用适用于标签的nickel-edta(凯杰公司)或mabselectsuretmproteina(通用医疗生命科学公司(gehealthcarelifesciences))柱根据制造商说明自澄清的细胞上清液中纯化his或fc融合蛋白。细胞系工程化使用本领域的技术人员熟知的标准慢病毒转导技术，分别使用两种慢病毒载体plmegpa-hmmp16-nflag或plmegpa-rmmp16-nflag来产生过表达hmmp16或rmmp16蛋白的基于hek293t的稳定细胞系。使用嘌呤霉素选择经转导的细胞，接着进行高表达hek293t亚克隆(例如对gfp呈强阳性的细胞)的荧光活化细胞分选(facs)。实例6抗mmp16抗体的生成为产生抗mmp16鼠类抗体，进行两次免疫活动。第一次活动由一只balb/c小鼠及一只fvb小鼠组成。第二次活动由两只balb/c小鼠、两只fvb小鼠、两只cd-1小鼠、两只a/j小鼠、两只c57bl/6小鼠及两只cfw小鼠组成。每一免疫活动包含用10μghmmp16-his蛋白以及适宜佐剂接种。在初始接种后，每周两次向小鼠注射10μghmmp16-his蛋白以及适宜佐剂持续4周，其中使用10μghmmp16-his蛋白以及适宜佐剂实施最后接种。将小鼠处死，并且对引流淋巴结(腿弯部、腹股沟以及髂骨肌)进行解剖并且将其用作抗体产生细胞的来源。使用模型btxhybrimmune系统(btx哈佛装置公司(btxharvardapparatus))，通过电促细胞融合将b细胞(150x106个细胞)的单细胞悬浮液与非分泌型sp2/0-ag14骨髓瘤细胞(atcc#crl-1581)以1.5:1的比例进行融合。将细胞重悬于由dmem培养基组成的杂交瘤选择培养基中，该dmem培养基补充有重氮丝氨酸、15％胎克隆i血清、10％bm条件培养基、1mm非必需氨基酸、1mmhepes、100iu青霉素-链霉素和50μm2-巯基乙醇，并在100ml选择培养基/烧瓶中的四个t225烧瓶中进行培养。将这些烧瓶放入一个含有5％co2和95％空气的潮湿的37℃培养箱中，保持6天。在融合后6天，从这些烧瓶收集杂交瘤文库细胞，将杂交瘤细胞在90μl经补充杂交瘤选择培养基(如上文所述)中以一个细胞/孔(使用facsariai细胞分选仪)平铺于4个falcon384孔板中。将杂交瘤培养10天，且使用elisa及流式细胞术筛选上清液中对hmmp16具有特异性的抗体。如下实施流式细胞术分析。将1×105个hek293t细胞/孔及用hmmp16稳定转导的hek293t细胞与25μl杂交瘤上清液一起孵育60分钟。将细胞用pbs/2％fcs洗涤，并且然后与25μl/样品dyelight649标记的山羊抗小鼠igg(以1:500稀释于pbs/2％fcs中的fc片段，特异性二级)一起孵育30分钟。将细胞用pbs/2％fcs洗涤两次并重悬于含有dapi的pbs/2％fcs中，并通过流式细胞术分析荧光(其超过用同种型对照抗体染色的细胞的荧光)。如下实施elisa分析。使用25μl稀释于1×pbs中的浓度为0.5μg/ml的hmmp16-his蛋白将elisa板包覆60分钟。然后使用pbst将elisa板洗涤三次。使用50μlpbs/5％bsa作为阻断溶液来包覆板。然后用pbst将elisa板洗涤3次。然后将25μl以1-10,000稀释于pbs中的mu-hrp铺板且使其孵育45分钟。然后用pbst将elisa板洗涤3次。然后将1步式ultratmb-elisa底物添加至elsia板中且使其孵育5-10分钟。为在孵育时间结束后终止tmbmu-hrp反应，将25μl2mh2so4添加至elisa板中。使用victro5，使用450nm处的高吸光度读数来测定背景及阴性对照上的抗体染色hmmp16。将剩余的未使用的杂交瘤文库细胞在液氮中冷冻以用于将来的文库测试和筛选。免疫活动产生大量与表达hmmp16的hek293t细胞免疫特异性反应且不与初始hek293t细胞免疫特异性反应的鼠类抗体。实例7抗mmp16抗体的特征使用多种方法来表征在实例6中生成的抗-mmp16小鼠抗体的同种型、与rmmp16的交叉反应性及染色或杀死表达人类mmp16的细胞的能力。图7a及7b提供汇总根据第一次接种活动(图7a)或第二次接种活动(图7b)产生的大量示例性鼠类抗hmmp16抗体的特征的表。使用milliplex小鼠免疫球蛋白同种型分型试剂盒(millipore)，根据制造商方案测定大量示例性抗体的同种型。mmp16特异性抗体的结果可见于图7a及7b中，位于标记有“同种型”的栏下，其中同种型的分布看上去相对均等。也使用流式细胞术测试示例性抗体以测定其与在细胞表面上表达的hmmp16缔合的能力。为此目的，将过表达hmmp16的经工程化的hek293t细胞(根据实例5制备)连同初始对照细胞与指定抗体一起孵育30分钟且使用bdfacscantoii流式细胞仪根据制造商说明书，通过流式细胞测量术分析hmmp16表达。抗原表达是以经工程化的细胞表面上所观测到的几何平均荧光强度变化(δmfi)量化，相较于已经同种型对照抗体染色的相同细胞，该等细胞已经抗mmp16抗体染色。经工程化的细胞与尚未经工程化的细胞之间还观测到几何平均荧光强度变化(δmfi)。关于平均荧光强度的测定结果示于图7a及b、标记有fc的栏中。该数据的综述显示几乎所有的所披露抗体结合细胞表面上的hmmp16。为确定本发明的所披露抗体是否与rmmp16交叉反应，实施elisa测定。具体而言，用pbs缓冲液中的1μg/ml经纯化rmmp16ecd(e247a)-his包覆板且在4℃下孵育过夜。然后用pbst(pbs加0.05％tween20)洗涤板，且在室温下用pbs中的3％bsa阻断1小时。洗涤板，且在室温下添加30μl0.5μg/ml的抗mmp16抗体持续1小时。洗涤板，且在室温下添加25μl/孔的0.5μg/mlhrp抗小鼠igg(杰克逊免疫学(jacksonimmunology)目录号115-035-071)持续30分钟。洗涤板且添加25μl/孔的tmb底物(pierce/invitrogen目录号34022)并使其孵育8分钟。添加25μl/孔的2nh2so4以终止hrp-tmb反应。在添加h2so4后使用perkinelmer2030victorx5直接读取板在450nm处的吸光度。高信号指示结合(图7a)。为了确定本发明的抗mmp16抗体是否能够内化以便介导细胞毒性剂递送至活肿瘤细胞，使用示例性抗mmp16抗体及连接至皂草素的二级抗小鼠抗体fab片段进行体外细胞杀死测定。皂草素是使核糖体失活的植物毒素，由此抑制蛋白质合成并导致细胞死亡。皂草素仅在细胞内具有细胞毒性，它可以进入核糖体，但不能独立地内化。因此，在这些测定中皂草素介导的细胞毒性指示抗小鼠fab-皂草素构建体在相关抗mmp16小鼠抗体结合和内化时内化到靶细胞中的能力。将超表达hmmp16(根据实例5制备)的hek293t细胞的单细胞悬浮液以每孔500个细胞铺板到bd组织培养板(bd生物科学公司)中。一天后，将图7a及7b中所示的不同浓度的经纯化抗mmp16抗体(鼠类)与固定浓度的2nm抗小鼠iggfab-皂草素构建体(高级靶向系统(advancedtargetingsystems))一起添加至培养物中来测试小鼠抗体。孵育96小时后，根据制造商的说明使用celltiter-(普洛麦格公司(promega))对活细胞进行计数。使用含有仅与第二fab-皂草素缀合物一起孵育的细胞的培养物的原发光计数被设定为100％参考值，并且所有其他计数被计算为参考值的百分比。结果呈现为存活细胞的百分比。如图7a及图7b中在栏ivk下所示，这些数据展示浓度为250pm的抗mmp16抗体-皂草素缀合物的大子集可以不同的效力有效地杀死过表达hmmp16的hek293t细胞。因此，可将展现有利特征(例如，内化)的抗体缀合至所选细胞毒素以提供可有效地消除表达mmp16的致瘤细胞的adc。实例8抗mmp16抗体的交叉反应性如先前所论述，hmmp16是由6个家族成员组成的膜型基质金属蛋白酶(mt-mmp)的成员。mmp16与mmp15及mmp24分别共享59.8％及72.3％同源性。使用elisa测定来确定本发明抗体是否与其他mt-mmp家族成员并且具体地是mmp15或mmp24交叉反应。结果显示于附图8a(其中抗体来自第一次接种(sc73.3至sc73.75))及图8b(其中抗体来自第二次接种(sc73.101至sc73.261))中。更具体而言，用pbs缓冲液中的2μg/ml经纯化的hmmp16ecd(e247a)-fc、hmmp15ecd(e260a)-fc及hmmp24ecd(e283a)-fc包覆板且在4℃下孵育过夜。然后用pbst(pbs加0.05％tween20)洗涤板，且在室温下用pbs中的3％bsa阻断1小时。洗涤板，且在室温下添加30μl0.5μg/ml的抗mmp16抗体持续1小时。洗涤板，且在室温下添加25μl/孔的0.5μg/ml带有磺基标签的山羊抗小鼠igg(msd目录号r32ac-5)持续30分钟。洗涤板并在水中将含表面活性剂的msd读取缓冲液t(msdreadbuffert)稀释到1x并且向每孔中添加150μl。在msd扇形成像仪2400(msdsectorimager2400)上对板进行读数。高信号指示结合(图8a)。关于图8b中所示的数据，用100μl/孔的稀释于pbs中的3μg/mlhmmp15-his、hmmp16-his、hmmp24-fc及ppap2c-fc包覆板，且在4℃下孵育过夜。然后用pbst(pbs加0.05％tween20)洗涤板3次，且在室温下用pbs中的2％bsa阻断1小时。然后将板于pbst中洗涤3次。然后在室温下以50μl/孔添加稀释于含有2％bsa的pbs中的0.5μg/ml初级抗体(抗hmmp16抗体)持续1小时。然后用pbst将板洗涤3次。将hrp缀合的山羊抗小鼠igg稀释于pbs、2％bsa(1/10,000)中，然后在室温下以50μl/孔添加，持续30分钟。然后将板于pbst中洗涤3次。然后以40μl/孔添加四甲基联苯胺(tmb)。然后以40μl/孔添加终止溶液(0.16m硫酸)。在450nm处在spectramax上读取板。高信号指示结合。如图8a及8b中所示，所有经测试抗体均识别hmmp16但程度不同，且一些与mmp15及mmp24交叉反应。更特定而言，发现至少两种抗体sc73.225及sc73.248识别hmmp15及hmmp24二者。发现sc73.7及sc73.17识别hmmp15，而sc73.7与hmmp24交叉反应。sc73.101严格结合至hmmp16。这种多样性允许选择抗体以提供具有尤其有利的治疗特征的mmp16adc。实例9肿瘤中的mmp16蛋白表达鉴于mmp16mrna转录物水平升高与实例1至3中描述的各种肿瘤相关，因此进行工作以测试mmp16蛋白质表达在pdx肿瘤中是否还升高。为了检测和量化mmp16蛋白表达，使用msd发现平台(细观发现公司)开发了电化学发光mmp16夹心elisa测定法。从小鼠中切除pdx肿瘤并在干冰/乙醇上进行急速冷冻。将蛋白质提取缓冲液(生物链协会公司(biochaininstitute))添加到解冻的肿瘤片中并使用tissuelyser系统(凯杰公司)将肿瘤粉碎。通过离心(20,000g，20分钟，4℃)使溶解物澄清，且使用二喹啉甲酸量化每一溶解物中的总蛋白质浓度。然后将蛋白质裂解物归一化至5mg/ml并储存于-80℃直至使用。自商业来源购得正常组织。msd测定中使用的elisa夹心抗体对由sc73.26捕捉及sc73.7检测组成。总而言之，尽管sc73.7的交叉反应性，但该对是特异于hmmp16的hmmp16，因为sc73.26仅拉下hmmp16蛋白。来自裂解物样品的mmp16蛋白浓度通过内插来自标准蛋白质浓度曲线的值来测定，该浓度曲线是使用纯化的重组型hmmp16ecd(e247a)-his蛋白质(如实例5中所述产生)所产生。如下进行mmp16蛋白标准曲线和蛋白定量测定：在4℃下，将msd标准板用在pbs中的15μl的2μg/mlsc73.26捕获抗体包覆过夜。在pbst中洗涤板并且在振荡下在35μlmsd3％阻断剂a溶液中阻断一小时。再在pbst中洗涤板。也向这些孔中添加10μl的在含有10％蛋白提取缓冲液的msd1％阻断剂a中的的10x稀释的裂解液(或连续稀释的重组mmp16标准品)并在振荡下孵育两小时。再在pbst中洗涤板。然后根据制造商的方案，使用sulf0-tagnhs酯对sc73.7检测抗体加磺基标签。在室温下，在振荡下，将在msd1％阻断剂a中的0.5μg/ml的10μl标记的sc73.7抗体添加到洗涤的板中持续1小时。在pbst中洗涤板。在水中将含表面活性剂的msd读取缓冲液t稀释到1x并且向每孔中添加35μl。在msd扇形成像仪2400上使用综合软件分析程序读取板，以经由内插法从标准曲线推断pdx样品中的mmp16浓度。然后，将值除以总蛋白浓度，得到每毫克总裂解物蛋白质中的mmp16的纳克数。所得浓度阐述于图9中，其中各点代表来源于单一pdx肿瘤系的mmp16蛋白质浓度。尽管每个点来源于单个pdx系，但在大多数情形中，对来自同一pdx系的多个生物样品进行测试并对多个值求平均值以提供数据点。图9显示mel、ga、pa、br、em、cr及lu肿瘤样品的代表性样品展现高mmp16蛋白表达。各样品的mmp16蛋白质表达水平以ng/mg总蛋白质给出且针对各肿瘤类型推断所得的中值由横条指示。测试的正常组织包括肾上腺、动脉、结肠、食道、胆囊、心脏、肾、肝、肺、外周和坐骨神经、胰腺、骨骼肌、皮肤、小肠、脾、胃、气管、红细胞和白细胞以及血小板、膀胱、脑、乳腺、眼睛、淋巴结、卵巢、脑下垂体、前列腺以及脊髓。未检测到mmp16蛋白表达水平高于任一正常组测定的量化下限。这些数据与上文针对mmp16表达所述的mrna转录数据的组合强烈地强化了mmp16为基于抗体的治疗性干预的有吸引力靶标的提议。实例10mmp16表达状态及体细胞突变可通过进行基因组dna(gdna)的靶向再测序来测定sk和ga患者源的异种移植物(pdx)系中多种相关基因的突变状态。在一些实施例中，可使用黑素瘤相关及胃相关基因的突变状态作为代用生物标记物(如下文更详细阐述)来确定各个基因突变与mmp16表达之间是否存在关联。在其他实施例中，可使用黑素瘤相关基因的突变状态来测定基因突变与对用本发明的抗mmp16抗体或adc进行治疗的反应之间是否存在相关性。在其他实施例中，可使用黑素瘤相关及胃相关基因的突变状态来确定有效的组合疗法。为确定可预测mmp16表达的突变，使用ionampliseq及iontorrentpgm技术通过主要癌症驱动基因的靶向再测序来分析来自sk及gapdx肿瘤的gdna。简言之，使用标准分子技术收集来自这些肿瘤的gdna且使用ionampliseqlibrary试剂盒2.0自涵盖多达250bp的超过3000个扩增子、覆盖数百个主要癌症驱动基因的编码及非编码区的ampliseq引物(美国生命技术公司(lifetechnologies))的定制组制备文库。接着使各pdx衍生的文库样品与独特的ionxpressbarcode衔接子(美国生命技术公司)连接以实现在各测序运行内合并多个文库样品。接着根据制造商说明用iontorrentpgm机器进行测序。检查如通过微阵列或电致化学发光夹心elisa测定(msd，上文实例9)所测定的具有一定范围的mmp16表达的sk肿瘤或如通过msd所测定具有一定范围的mmp16表达的ga肿瘤的突变数据与mmp16表达之间的关联。突变由在测序基因的蛋白质编码区中发生的任何非同义改变而定义，所述非同义改变包括密码子的非同义的错义、插入或缺失，扩增子缺失或扩增子扩增、无义非同义、移码和突变，其导致测序基因的改变的剪接位点变体。观察到，携带kmt2d或il6st基因中的突变的skpdx肿瘤展示与不携带这些基因中任一者中的突变的pdx肿瘤相比显著较高的mmp16表达(p＝0.04，韦尔奇t测试(welch’st-test))，其中mmp16表达通过微阵列或msd来测定(图10a)。对于gapdx，含有setpb1或mecom中的突变的肿瘤更可能表达mmp16，其中mmp16表达通过msd来测定(图10b)。在ga数据集中所观察到的显著性趋势可归因于样本大小小于sk数据集。这些数据表明，在这些基因中检测到的突变与mmp16的表达或mmp16表达的不存在相关联。这些突变可用作生物标记物来预测患者群体中的mmp16表达且更精确地指导这些肿瘤子集的治疗。实例11mmp16抗体的测序如下文所述对实例6中所产生的抗mmp16小鼠抗体进行测序。根据制造商的说明使用rneasy微型试剂盒(凯杰公司)从所选的杂交瘤细胞中纯化总rna。每个样品使用104与105个之间的细胞。将分离的rna样品储存在-80℃直至使用。使用了包含八十六种被设计成靶向完整小鼠vh谱系的小鼠特异性前导序列引物的两种5’引物混合物，以及对所有小鼠ig同种型具有特异性的3’小鼠cγ引物来对每个杂交瘤的ig重链的可变区进行扩增。类似地，使用包含六十四种被设计成扩增每个vκ小鼠家族的5’vκ前导序列的两种引物混合物与对小鼠κ恒定区具有特异性的单个反向引物的组合来对κ轻链进行扩增并测序。如下使用凯杰onesteprt-pcr试剂盒从100ng总rna扩增vh和vl转录物。对每个杂交瘤执行总计四次rt-pcr反应：两次针对vκ轻链并且两次针对vh重链。pcr反应混合物包括1.5μl的rna、0.4μl的100μm的重链或κ轻链引物(由整合dna技术公司(integrateddnatechnologies)定制合成)、5μl的5xrt-pcr缓冲液、1μldntp、以及0.6μl的含有逆转录酶和dna聚合酶的酶混合物。热循环仪程序是rt步骤50℃持续60分钟、95℃持续15分钟，然后35个循环的(94.5℃持续30秒、57℃持续30秒、72℃持续1分钟)。然后在72℃下最后孵育10分钟。使用与上述用于扩增可变区相同的特异性可变区引物对提取的pcr产物进行测序。pcr产物被送到外部测序供应商(mclab)进行pcr纯化和测序服务。使用imgt序列分析工具(http://www.imgt.org/imgtmedical/sequence_analysis.html)分析核苷酸序列，以鉴定具有最高序列同源性的种系v、d和j基因成员。通过使用专有抗体序列数据库将vh和vl基因与小鼠种系数据库进行比对，将这些衍生序列与igv-和j-区的已知种系dna序列进行比较。图11a描绘来自抗mmp16抗体的众多新颖小鼠轻链可变区的连续氨基酸序列，而图11b描绘来自相同抗mmp16抗体的新颖小鼠重链可变区的连续氨基酸序列。鼠类轻链和重链可变区氨基酸序列在seqidno:21-93奇数中提供。总地来说，图11a及11b提供了名称如下的若干小鼠抗mmp16抗体的带注释的序列：sc73.6，其具有seqidno:21的轻链可变区(vl)及seqidno:23的重链可变区(vh)；sc73.9，其具有seqidno:25的vl及seqidno:27的vh；sc73.10，其具有seqidno:29的vl及seqidno:31的vh；sc73.12，其具有seqidno:33的vl及seqidno:35的vh；sc73.14，其具有seqidno:37的vl及seqidno:39的vh；sc73.16，其具有seqidno:41的vl及seqidno:43的vh；sc73.17，其具有seqidno:45的vl及seqidno:47的vh；sc73.19，其具有seqidno:49的vl及seqidno:51的vh；sc73.28，其具有seqidno:53的vl及seqidno:55的vh；sc73.32，其具有seqidno:57的vl及seqidno:59的vh；sc73.33，其具有seqidno:61的vl及seqidno:63的vh；sc73.38，其具有seqidno:65的vl及seqidno:67的vh；sc73.58，其具有seqidno:69的vl及seqidno:71的vh；sc73.59，其具有seqidno:73的vl及seqidno:75的vh；sc73.69，其具有seqidno:77的vl及seqidno:79的vh；sc73.74，其具有seqidno:81的vl及seqidno:83的vh；sc73.101，其具有seqidno:85的vl及seqidno:87的vh；sc73.114，其具有seqidno:89的vl及seqidno:91的vh；以及sc73.39，其具有seqidno:29的vl及seqidno:93的vh。前述seqidno:紧接着汇总于下表5中。表5在图11a及11b中，vl及vh氨基酸序列被注释以鉴定根据kabat等人定义的框架区(即fr1-fr4)和互补决定区(即，图11a中的cdrl1-cdrl3或图11b中的cdrh1-cdrh3)。使用专有版本的阿拜斯数据库分析可变区序列以提供cdr和fr名称。虽然cdr是根据kabat等人定义的，但本领域技术人员应理解，还可以根据chothia、mccallum或任何其他本领域接受的命名系统来定义cdr和fr名称。此外，图11c提供了编码图11a和11b所示氨基酸序列的核酸序列(seqidno:20-92，偶数)。如图11a和11b以及表5中所见，每个特定鼠类抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列的seqidno通常是连续的奇数。因此，单克隆抗mmp16抗体sc73.6包含分别针对轻链及重链可变区的氨基酸seqidno:21及23；sc73.9包含seqidno:25及27；sc73.10包含seqidno:29及31等。图11a及11b中所示编号方案的唯一例外是sc73.39(seqidno:29及93)，其包含与抗体73.10中所发现与独特重链可变区配对的轻链可变区相同的轻链可变区。在任何情况下，编码鼠类抗体氨基酸序列(图11c所示)的相应核酸序列具有紧接在相应氨基酸seqidno之前的seqidno。因此，举例而言，sc73.6抗体的vl及vh的核酸序列的seqidno.分别为seqidno:20及22。除图11a-11c中的经注释序列外，图11g及11h提供sc73.38(图11g)及sc73.39(图11h)的轻链及重链可变区的cdr名称，如使用kabat、chothia、abm及contact方法所测定的。图11g及11h中所描绘的cdr序列是使用如上文所论述的abysis数据库专有版本衍生而来。如后续实例所示，本领域技术人员应理解，所披露的鼠类cdr可以接枝到人类构架序列中以提供根据本发明的cdr接枝或人源化的抗mmp16抗体。此外，鉴于本披露，可以容易地确定根据本文的传授内容制备和测序的任何抗mmp16抗体的cdr，并使用推断的cdr序列提供本发明的cdr接枝或人源化的抗mmp16抗体。对于如图11a-11b中所示的具有重链和轻链可变区序列的抗体而言尤其如此。实例12嵌合及人源化mmp16抗体的生成嵌合抗mmp16抗体是使用如下本领域公认技术生成的。使用实例1中所述的方法，自产生抗mmp16抗体的杂交瘤中提取总rna且pcr扩增rna。从本发明的抗mmp16抗体的核酸序列(图11c)获得关于小鼠抗体的vh及vl链的v、d及j基因区段的数据。使用以下限制位点设计针对这些抗体的vh及vl链的构架序列的引物组：用于vh片段的agei及xhoi，以及用于vl片段的xmai及draiii。用qiaquickpcr纯化试剂盒(凯杰公司)纯化pcr产物，随后用限制性内切酶agei和xhoi消化vh片段，并用xmai和draiii消化vl片段。将vh和vl消化的pcr产物进行纯化并分别连接到igh或igκ表达载体中。连接反应是用200ut4-dna连接酶(新英格兰生物实验室(newenglandbiolabs))、7.5μl消化并且纯化的基因特异性pcr产物及25ng线性化载体dna进行，总体积10μl。经由在42℃下热休克，用3μl连接产物对感受态大肠杆菌dh10b细菌(生命技术公司)进行转化，并且将其以100μg/ml的浓度铺板到氨比西林板上。在对扩增的连接产物进行纯化和消化之后，将vh片段克隆到包含huigg1的pee6.4表达载体(pee6.4huigg1)(龙沙公司(lonza))的agei-xhoi限制性位点中，并将vl片段克隆到包含人κ轻恒定区的pee12.4表达载体(pee12.4hu-κ)(龙沙公司)的xmai-draiii限制性位点中。通过用pee6.4huigg1和pee12.4hu-κ表达载体共转染cho-s细胞来表达嵌合抗体。将各2.5μg的pee6.4huigg1和pee12.4hu-κ载体dna添加到在400μl的opti-mem中的15μgpei转染试剂中。将混合物在室温下孵育10分钟且添加至细胞中。转染后三至六天收获上清液。通过在800×g下离心10分钟从细胞碎片清除含有重组嵌合抗体的培养上清液并在4℃储存。将重组嵌合抗体用蛋白a珠粒进行纯化。另外，借助专有分析程序(abysis数据库，uclbusiness)及标准分子工程化技术对所选鼠类抗mmp16抗体如下进行cdr接枝或人源化。基于人类种系抗体序列的框架序列和cdr经典结构与相关小鼠抗体的框架序列和cdr之间的最高同源性，选择/设计可变区的人类框架区。出于分析的目的，将氨基酸分配到每个cdr结构域是根据kabat等人的编号进行。一旦选择了可变区，它们就从合成的基因区段(整合dna技术公司(integrateddnatechnologies))产生。使用如上文针对嵌合抗体所述的分子方法来克隆和表达人源化抗体。人源化抗体hsc73.38(seqidno:101及103)及hsc73.39(seqidno:105及107)的vl及vh氨基酸序列分别源自相应小鼠抗体sc73.38(seqidno:65及67)及sc73.39(seqidno:29及93)的vl及vh序列。人源化抗体的氨基酸序列显示于图11d中，而相应核酸序列显示于图11e中。下表6显示无需框架变化来维持这些抗体的有利性质。表6表6进一步显示生成hsc73.39的变种，其中vlcdrl2中的s27fn(kabat编号)突变被引入以产生hsc73.39v1抗体(seqidno:109及107)。应了解，引入突变(在图11d中加下划线表示)以移除可能具有复杂的抗体产生和降低的分子稳定性的潜在醣基化位点。上文所提及的人源化抗体的vl及vh氨基酸序列对(各自源自相应鼠类抗体的vl及vh序列)以及包含这些vl及vh结构域的相应示例性全长轻链及重链的seqidno:汇总于下表7中。表7此实例中所述的示例性人源化抗体展示，可如本文所披露生成并衍生出临床上相容的抗体。在本发明的某些方面，可以将这样的抗体掺入mmp16adc中以提供包含有利的治疗指数的组合物。此外，如在下一实例中所论述的，表5还显示如本文所述制造的所选位点特异性抗体(hsc73.38ss1及hsc73.39v1ss1)的组成。实例13位点特异性mmp16抗体的生成除天然人源化igg1抗mmp16抗体外，构建经工程化人类igg1/κ抗mmp16位点特异性抗体，这些抗体包含经突变以提供未配对半胱氨酸的天然轻链(lc)恒定区及重链(hc)恒定区。在该方面，hc的上部铰链区中的半胱氨酸220(c220)(其通常与初始igg1抗体中的lc中的半胱氨酸214(c214)形成链间双硫键)被丝氨酸(c220s)取代。当组装时，hc及lc形成在适用于与治疗剂缀合的轻链恒定区的c终端包含两个游离半胱氨酸的抗体。除非另有说明，恒定区残基的所有编号均根据kabat等人所述的eu编号方案。为了产生人源化初始igg1抗体及位点特异性构建体，将vh核酸克隆至含有hc恒定区(例如seqidno:2)或其c220s突变(例如seqidno:3)的表达载体上。用hsc73.38lc(seqidno:120)共转染编码天然hsc73.38hc(seqidno:121)或hsc73.38的突变体c220shc(seqidno:122)的载体以提供hsc73.38抗体(seqidno:120及121)及hsc73.38ss1抗体(seqidno:120及122)。类似地，用hsc73.39lc(seqidno:123)及hsc73.39v1lc(seqidno:125)共转染编码天然hsc73.39hc(seqidno:124)的载体以提供hsc73.39抗体(seqidno:123及124)及hsc73.39v1抗体(seqidno:125及124)。最后，在cho-s细胞中用编码hsc73.39的c220s突变体hc(seqidno:126)的载体共转染hsc73.39v1lc(seqidno:125)以提供抗体hsc73.39v1ss1(seqidno:125及126)。在每一情形下，抗体均使用哺乳动物瞬时表达系统来表达。全长位点特异性抗体重链及轻链的氨基酸序列(以及天然人源化抗体hsc73.38、hsc73.39及hsc73.39v1的氨基酸序列)显示于图11f中。通过sds-page表征经工程化的抗mmp16位点特异性抗体以证实已产生正确突变体。在存在和不存在还原剂如dtt(二硫苏糖醇)的情况下，在来自生命技术公司的预制10％tris-甘氨酸微型凝胶上进行sds-page。电泳后，用胶体考马斯溶液对凝胶进行染色(数据未显示)。在还原条件下，观察到对应于游离lc和游离hc的两个条带。这种图是还原条件下igg分子的典型图。在非还原条件下，条带图不同于天然igg分子的条带图，指示在hc与lc之间不存在二硫键。观察到对应于hc-hc二聚体的约98kd的条带。此外，观察到对应于游离lc的模糊条带和对应于lc-lc二聚体的约48kd的主要条带。由于每个lc的c-末端上的游离半胱氨酸，预期形成一定量的lc-lc物质。实例14mmp16抗体-药物缀合物的制备使多种含有鼠类可变区的嵌合抗体及人源化抗mmp16抗体(包括hsc73.38及hsc73.39的位点特异性构建体)经由具有游离硫氢基基团的末端马来酰亚胺基部分缀合至吡咯并苯并二氮杂卓(例如，pbd1)，以产生抗体药物缀合物(adc)，包括hsc73.38pbd1、hsc73.38ss1pbd1、hsc73.39pbd1、hsc73.39v1pbd1及hsc73.39v1ss1pbd1。将这些缀合物连同适当的缀合及未缀合对照物一起用于后续实例中。如下制备初始抗mmp16adc。通过在室温下添加预设摩尔数的在磷酸盐缓冲盐水(pbs)中的摩尔三(2-羧基乙基)-膦(tcep)/摩尔抗体及5mmedta历时90分钟来部分地还原抗mmp16抗体的半胱氨酸键。然后，在室温下，经由马来酰亚胺接头，将所得的部分还原的制剂与pbd1(pbd1的结构在以上本说明书中提供)缀合最少30分钟。然后通过添加与接头-药物相比过量的n-乙酰基半胱氨酸(nac)，使用在水中制备的10mm储备溶液来淬灭反应。20分钟的最少淬灭时间之后，通过添加0.5m乙酸将ph调节至6.0。通过使用30kda膜的渗滤而将adc的制剂进行缓冲液交换到渗滤缓冲液中。然后用蔗糖和聚山梨醇酯-20配制渗滤的抗mmp16adc至目标终浓度。通过反相hplc(rp-hplc)来分析所得的抗mmp16adc的蛋白浓度(通过测量uv)、聚集(sec)、药物与抗体比(dar)以及活性(体外细胞毒性)。使用经修饰的部分还原工艺来缀合示例性位点特异性人源化抗mmp16adc。所需产物是在每个lc恒定区上最大缀合在未配对半胱氨酸(ss1构建体中的c214)上的adc，并且使具有大于2(dar>2)的药物与抗体比(dar)的adc最小化，同时使具有dar为2(dar＝2)的adc最大化。为了进一步提高缀合的特异性，使用包含稳定剂(例如l-精氨酸)和温和还原剂(例如谷胱甘肽)的方法在与接头-药物缀合之前选择性还原抗体，然后是渗滤和配制步骤。在含有预先确定浓度的还原型谷胱甘肽(gsh)的1ml-精氨酸/5mmedta的缓冲液(ph8.0)中，将每种位点特异性抗体的制剂在室温下进行选择性还原最少两小时。然后使用30kda膜(milliporeamiconultra)将所有制剂进行缓冲液交换到20mmtris/3.2mmedta缓冲液(ph7.0)中以去除还原性缓冲液。然后在室温下使所得经选择性还原的制剂经由马来酰亚胺接头缀合至pbd1或pbd3(pbd的结构提供于上文中)，持续至少30分钟。然后通过添加与接头-药物相比过量的nac，使用在水中制备的10mm储备溶液来淬灭反应。20分钟的最少淬灭时间之后，通过添加0.5m乙酸将ph调节至6.0。通过使用30kda膜的渗滤而将所得的adc的位点特异性制剂进行缓冲液交换到渗滤缓冲液中。然后用蔗糖和聚山梨醇酯-20配制渗滤的抗mmp16adc至目标终浓度。通过反相hplc(rp-hplc)来分析所得的位点特异性抗mmp16adc的蛋白浓度(通过测量uv)、聚集(sec)、药物与抗体比(dar)以及活性(体外细胞毒性)。将所有缀合物冷冻并储存直至使用。实例15肿瘤中mmp16蛋白质表达的免疫组织化学对pdx肿瘤(图12a)及原发性人类肿瘤组织切片(图12b)实施免疫组织化学(ihc)以评价mmp16在肿瘤细胞中的表达及定位。首先，为鉴别ihc相容性抗mmp16抗体，用多种示例性抗mmp16抗体对hek293t亲代细胞沉淀物(阴性对照)及过表达mmp16(oe)的hek293t细胞沉淀物(阳性对照)实施ihc。抗mmp16抗体(克隆sc73.101)能够比所测试的本发明的其他抗mmp16抗体更有效地特异性检测mmp16oehek293t细胞沉淀物(数据未显示)。通过竞争实验确认此抗mmp16抗体(克隆sc73.101)的特异性。简言之，将抗体与人类mmp16蛋白或非特异性蛋白质一起孵育，然后对阴性及阳性对照细胞沉淀物实施ihc。在阳性对照上不存在阳性染色确定人类mmp16蛋白干扰抗mmp16抗体与mmp16oehek293t细胞的结合(数据未显示)。还使用其他mmp家族成员(例如mmp15及24蛋白)通过elisa来确认抗mmp16抗体(克隆sc73.101)不具针对其他家族成员的交叉反应性。除使用经工程化的oehek293细胞系沉淀物外，对各种黑素瘤pdx系及人类黑素瘤样品实施ihc。简言之，将经福尔马林固定的石蜡包埋的组织于载玻片上制成切片且脱蜡，再水化，并在99℃下用抗原修复液(s1700，dakousa，carpinteria，ca)处理20分钟。冷却及洗涤后，用tris缓冲盐水(tbs)中的3％过氧化氢、抗生物素蛋白、生物素阻断试剂盒(运载体实验室(vectorlaboratories)，伯林盖姆(burlingame)，加利福尼亚州)及tbs中的3％牛血清白蛋白中的10％马血清阻断载玻片。将抗人类mmp16(10μg/ml，sc73.101)施加于载玻片上并在室温下孵育1小时，然后进行马抗小鼠生物素化抗体(运载体实验室(vectorlaboratories))及abcelite(运载体实验室(vectorlaboratories))孵育。将小鼠igg2a用于同种型对照。用dab进行信号检测且在盖玻片之前用苏木精复染载玻片。在10×物镜下审查经染色载玻片且对膜染色进行评分以生成h评分。使用下式分配h评分：[1×(具有1+强度的细胞％)+2×(具有2+强度的细胞％)+3×(具有3+强度的细胞％)]。因此，此评分产生范围为0至300的连续变量。图12a显示5个黑素瘤pdx系中有4个强烈地表达mmp16蛋白。图12b显示原发性人类黑素瘤样品上的mmp16表达。27/46(59％)的案例对mmp16呈阳性。mmp16决定子表达的广泛存在强化使用mmp16决定子作为治疗及诊断靶标的可行性。实例16抗mmp16抗体促进体外细胞毒性剂的递送为了确定本发明的抗mmp16抗体是否能够内化以便介导细胞毒性剂递送至活肿瘤细胞，使用示例性抗mmp16抗体及连接至皂草素的二级抗小鼠抗体fab片段进行体外细胞杀死测定。皂草素是使核糖体失活的植物毒素，由此抑制蛋白质合成并导致细胞死亡。皂草素仅在细胞内具有细胞毒性，它可以进入核糖体，但不能独立地内化。因此，在这些测定中皂草素介导的细胞毒性指示抗小鼠fab-皂草素构建体在相关抗mmp16小鼠抗体结合和内化时内化到靶细胞中的能力。将过表达hmmp16的hek293t细胞以及初始对照细胞的单细胞悬浮液(根据实例5制备)以500个细胞/孔铺板至bd组织培养板(bd生物科学公司)中。一天后，将不同浓度的经纯化抗mmp16抗体(在一情形下为sc73.38及hsc73.38且在另一情形下为嵌合sc73.39及hsc73.39)与固定浓度的2nm抗小鼠iggfab-皂草素构建体(高级靶向系统(advancedtargetingsystems))一起添加至培养物中。孵育96小时后，根据制造商的说明使用celltiter-(普洛麦格公司(promega))对活细胞进行计数。使用含有仅与第二fab-皂草素缀合物一起孵育的细胞的培养物的原发光计数被设定为100％参考值，并且所有其他计数被计算为参考值的百分比。结果呈现为存活细胞的百分比。抗mmp16人源化抗体(hsc73.38及hsc73.39)可有效地杀死过表达mmp16的hek-293t细胞。人源化抗体显示与衍生出其的嵌合抗体(在hsc73.39的情形下)以及鼠类抗体(在hsc73.38的情形下)相当或比其更佳的效力(图13)。前述结果表明抗mmp16抗体介导所缀合的细胞毒性有效载荷发生内化的能力，支持抗mmp16抗体可具有作为adc的靶向部分的治疗效用的假设。实例17抗mmp16抗体药物缀合物杀死体外hmmp16+细胞为确定本发明的抗mmp16adc是否能够内化以介导细胞毒性剂递送至活肿瘤细胞，使用抗mmp16adc、hsc73.38ss1pbd1及hsc73.39ss1pbd1(如上文实例14中所述产生)来实施体外细胞杀死测定。将过表达hmmp16或初始hek293t细胞的hek293t细胞的单细胞悬浮液以500个细胞/孔铺板于bdtissueculture板(bd生物科学公司(bdbiosciences))中。一天后，将各种浓度的经纯化的与pbd1缀合的adc或人类igg1对照抗体添加至培养物中。将细胞孵育96小时。孵育之后，根据制造商的说明书使用celltiter-(普洛麦格公司)枚举活细胞。将使用含有未处理细胞的培养物的原发光计数设为100％参考值，并且将所有其他计数计算为参考值的百分比。图14显示与人类igg1对照adc相比，所有经处理细胞对抗mmp16adc更敏感。此外，与过表达mmp16的hek293t细胞相比，adc对不过表达mmp16的初始hek293t细胞具有极小影响，展示了adc对mmp16抗原的特异性(图14)。上述结果展示抗mmp16adc特异性介导细胞毒性有效载荷内化及细胞毒性有效载荷递送至表达mmp16的细胞的能力。实例18使用流式细胞术的肿瘤上的mmp16蛋白表达使用流式细胞术来评价本发明的抗mmp16抗体特异性检测黑素瘤pdx肿瘤细胞系表面上的人类mmp16蛋白存在的能力。收集pdx肿瘤并使用本领域认可的酶组织消化技术解离以获得pdx肿瘤细胞的单细胞悬液(参见，例如，u.s.p.n.2007/0292424)。将pdx肿瘤单一细胞悬浮液与4’6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)一起孵育以检测死细胞，与抗小鼠cd45和h-2kd抗体一起孵育以鉴定小鼠细胞，并且与抗人epcam抗体一起孵育以鉴定人体癌细胞。通过流式细胞术使用bdfacscantoii流动细胞计数器及抗mmp16抗体sc73.204来分析所得单细胞悬浮液的hmmp16表达。图15显示抗hmmp16抗体sc73.204检测到块状pdx肿瘤细胞表面上的hmmp16表达。在所有样品中，抗mmp16抗体(黑线)检测到与igg同种型对照抗体相比增加的mmp16表达(灰色填充)。更具体而言，图15显示在多个melpdx肿瘤系(例如mel3、mel67、mel68；黑线)上而非在其他melpdx肿瘤系(mel43；黑线)上检测到mmp16表达。采用同种型对照抗体来确认染色特异性(灰色填充)。此外，表达可以以肿瘤细胞表面上所观测到的几何平均荧光强度变化(δmfi)进行量化，相较于已经用同种型对照抗体染色的相同肿瘤，这些肿瘤细胞已经用抗mmp16抗体染色。概述所分析的各种肿瘤细胞系的δmfi的表作为插入显示于图15中。总体而言，此数据表明，mmp16在黑素瘤pdx肿瘤细胞中表达，使mmp16成为使用抗mmp16抗体药物缀合物的靶向疗法的良好指示。实例19抗mmp16抗体药物缀合物抑制体内肿瘤生长基本上如下文所述使用标准技术测试例如如上文实例14中所述生成的抗mmp16adc，以证实其抑制免疫缺陷小鼠中人类黑素瘤(mel)肿瘤生长的能力。使用本领域公认的技术使5个表达mmp16的患者源异种移植物(pdx)肿瘤系(例如melpdx肿瘤系)及不表达mmp16的对照肿瘤系在雌性nod/scid小鼠的侧腹部中皮下生长。每周一次或两次监测肿瘤体积及小鼠体重。当肿瘤体积达到150-250mm3时，将小鼠随机分配到治疗组且向其腹膜内注射单一剂量的1.6mg/kg(sc73.38pdb1)抗mmp16adc或单一剂量的mg/kg抗半抗原对照iggadc。处理后，监测肿瘤体积及小鼠体重直至肿瘤超过800mm3或小鼠不适。图16显示所披露的adc对携带展示mmp16表达的不同肿瘤的小鼠中的肿瘤生长的影响。就此而言，用缀合至pbd1的示例性mmp16抗体sc73.38处理黑素瘤pdx模型mel19产生持久的肿瘤消退，所述肿瘤消退因宿主动物年龄而持续直至研究结束。类似地，用缀合至pbd1的示例性抗体sc73.38处理不同黑素瘤pdx模型mel67及mel79产生持久的肿瘤消退。用缀合至pbd1的示例性mmp16抗体sc73.38处理不同黑素瘤pdxmel78产生持续超过110天的肿瘤缩小，其中原来的5只经处理动物中有一只复发。最后，相对于载体或同种型处理组，用sc73.38pbd1处理mel66稍微延迟肿瘤生长，虽然肿瘤体积与随机化体积相比并未减小。经缀合的调节剂显著缩小体内肿瘤体积持续较长时间的令人惊奇的能力进一步验证抗mmp16adc作为治疗增生性病症的治疗剂的用途。实例20mmp16抗体药物缀合物减小癌症干细胞频率为证实用抗mmp16adc处理会减小黑素瘤中致瘤细胞频率，在用sc73.38pbd1处理后实施体内限制性稀释测定以提供图17中所示的数据。使melpdx肿瘤皮下生长于免疫缺陷宿主小鼠中。当平均肿瘤体积为150mm3-250mm3时，将小鼠随机分成两组，每组各7只小鼠。在第0天，向小鼠腹膜内注射剂量为1.6mg/kg的抗半抗原对照人类igg1pbd1或sc73.38pbd1。在第8天，对来自每一组(总共4只)的2只代表性小鼠实施安乐死且收获其肿瘤并分散成单细胞悬浮液。经同种型对照处理的肿瘤在5只剩余小鼠中继续生长，而经sc73.38pbd1处理的肿瘤体积在5只剩余小鼠中减小至0或几乎为0。如先前所述使来自两个处理组中每一组的肿瘤解离成单细胞悬浮液并通过facs使用facsariaiii(贝克顿迪金森公司(bectondickenson))自周围鼠类细胞如下分离活人类细胞。用fitc缀合的抗鼠类h2kd及抗鼠类cd45抗体(生物传奇公司(biolegend))标记肿瘤细胞，且然后重悬浮于1μg/mldapi中(以检测死细胞)。然后在标准条件下对所得悬浮液进行分选。收集不表达小鼠标记物mh2kd及mcd45且不吸收dapi的活人类细胞，同时丢弃鼠类及死细胞。向10只受试小鼠中移植501个、151个、51个或16个各自来自经sc73.38pbd1处理的肿瘤的经分选活人类细胞。为进行比较，向10只受试小鼠中移植500个、150个、50个或15个各自来自经igg1pbd1处理的肿瘤的经分选活人类细胞。向10只受试小鼠中移植499个、149个、49个或14个各自来自经载体对照处理的肿瘤的经分选活人类细胞。每周测量受试小鼠中的肿瘤，且在肿瘤达到1500mm3之前对个体小鼠实施安乐死。在连续四周任一只小鼠中未出现新肿瘤后结束研究。在那时，针对肿瘤生长，将受试小鼠评分为阳性或阴性，其中阳性生长具有超过100mm3的体积。图17显示经igg1pbd1对照处理的携带mel19及mel67黑素瘤的小鼠所形成的肿瘤远多于经sc73.38pbd1处理的携带黑素瘤的小鼠。使用泊松分布统计学(l-calc软件，干细胞技术公司(stemcelltechnologies))测定每一群体中的癌症干细胞频率。癌症干细胞频率的实质性减小表明，除减小黑素瘤体积外，本发明的抗mmp16adc显著且特异性减小癌症干细胞群体，且延伸开来降低黑素瘤复发、转移或再生长的几率。本领域技术人员将进一步理解的是，本发明能以其他特定形式实施而不脱离其精神或中心属性。由于本发明的前述说明仅仅披露了其示例性实施例，所以应当理解的是，其他变化也被考虑为在本发明的范围之内。因此，本发明并不局限于在此已经详细描述的具体实施例。而是，应参考所附的如本发明的范围和内容所指示的权利要求书。当前第1页12