本发明药物技术领域，尤其涉及一种化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
流感是流行性感冒(influenza)的简称，是一种流感病毒引发的急性上呼吸道传染病，一般秋冬季节是高发期。流感传染性强、传播速度快，主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。典型的临床症状是：急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状。目前流感依旧是威胁人类生命健康的主要疾病之一。据不完全统计，全世界每年平均大约有25～50万人死于流感。
流感病毒还根据其表面的血凝素(ha)和神经氨酸酶(na)的抗原性不同而分为很多亚型。其中na有9种不同亚型(n1～n9)，ha有16种亚型(h1～h16)，二者可以相互组合而形成一百多种亚型。神经氨酸酶(na)，由节段6编码(基因长度为1407个核苷酸残基)，为四聚体，由4条相同的糖基化多肽组成。na可水解细胞表面糖蛋白受体的末端唾液酸残基，促进病毒的释放与迁移，防止病毒聚集。
目前为止，已经被fda批准上市的神经氨酸酶抑制剂(nais)有扎那米韦、奥司他韦和帕拉米韦。奥司他韦为唯一口服药物。然而，奥司他韦耐药菌株不断出现，例如h274y，i117v，e119a，r292k等神经氨酸酶突变株，使na抑制剂的有效性下降。因此，目前迫切需要研究新的神经氨酸酶抑制剂。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于一种化合物及其制备方法和应用，本发明提供的化合物可以作为神经氨酸酶抑制剂，且抑制活性高。
本发明提供了一种化合物，具有式(i)所示结构，
其中，所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基。
优选的，所述含取代基的c1～c30的烷基中的取代基为碳碳双键、碳碳三键、卤素、未取代的芳基或取代的芳基。
优选的，所述取代的芳基中的取代基为卤素、c1～c10的烷氧基或c1～c10的烷基。
优选的，所述r为不含取代基的c2～c5的直链烷基、不含取代基的c2～c5的支链烷基或含取代基的c4～c15的烷基。
优选的，所述r为被苯基、甲基苯基、溴苯基、甲氧基苯基、萘基或二甲氧基苯基取代的c2-c5烷基、c2～c5的不饱和烷基、不含取代基的c2～c5的直链烷基或不含取代基的c2～c5的支链烷基。
优选的，所述r为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、烯丙基、1-烯丁基、1-烯戊基、邻甲基苄基、对甲基苄基、对溴基苄基、邻溴基苄基、对甲氧基苄基、邻甲氧基苄基、萘甲基、萘乙基、苯乙基、苯丙基、苯丁基或4-二甲基苯乙基。
优选的，所述化合物为(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-丙酰基胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-丁酰基胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-戊酰基胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(4-烯基戊酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-甲基乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-甲基丁酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-(2-甲基苯基)乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-(4-甲基苯基)乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-(4-溴-苯基)乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-萘基乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-苯基丙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-(3，4-二-甲氧基苯基)丙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸或(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(2-(4-苯基丁酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸。
本发明还提供了一种本发明所述的化合物的制备方法，包括：
1)将磷酸奥司他韦与式(ii)结构的化合物反应，得到式(iii)结构的化合物，
其中，所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基；
2)将式(iii)结构的化合物转化成式(i)结构的化合物，
本发明还提供了一种本发明所述的化合物的盐，具有式(i-s)所示结构，
其中，所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基；
所述x为药学上可接受的酸。
一种本发明所述的化合物以及本发明所述的化合物的盐在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。
与现有技术相比，本发明提供了一种化合物及其制备方法和应用，本发明提供的化合物可以作为神经氨酸酶抑制剂，实验结果表明，本发明提供的化合物对h1n1、h3n2、h259y(h1n1)型流感病毒的神经氨酸酶具有较强的抑制作用，尤其是对h259y(h1n1)型流感病毒的神经氨酸酶的抑制作用，均超过或相当于阳性药奥司他韦羧酸。可见，本发明的化合物具有较高活性，可以用于制备神经氨酸酶抑制剂，且该化合物的制备方法简单，原料易得，成本较低。
具体实施方式
本发明提供了一种化合物，具有式(i)所示结构，
其中，所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基。
按照本发明，所述含取代基的c1～c30的烷基中的取代基优选为碳碳双键、碳碳三键、卤素、未取代的芳基或取代的芳基，更优选为碳碳双键、碳碳三键、氯、溴、碘、未取代的苯基、未取代的萘基、未取代的蒽基、取代的苯基、取代的萘基或取代的蒽基；其中，所述取代的苯基、取代的萘基或取代的蒽基中的取代基优选为卤素、c1～c10的烷氧基或c1～c10的烷基，更优选为氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基、乙基、丙基、异丙基或正丁基。
具体的，所述r优选为不含取代基的c2～c5的直链烷基、不含取代基的c2～c5的支链烷基或含取代基的c4～c15的烷基，更优选为被苯基、甲基苯基、溴苯基、甲氧基苯基、萘基或二甲氧基苯基取代的c2-c5烷基、c2～c5的不饱和烷基、不含取代基的c2～c5的直链烷基或不含取代基的c2～c5的支链烷基，更优选为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、烯丙基、1-烯丁基、1-烯戊基、邻甲基苄基、对甲基苄基、对溴基苄基、邻溴基苄基、对甲氧基苄基、邻甲氧基苄基、萘甲基、萘乙基、苯乙基、苯丙基、苯丁基或4-二甲基苯乙基。
更具体的，本发明所述的化合物优选为(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-丙酰基胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-丁酰基胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-戊酰基胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(4-烯基戊酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-甲基乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-甲基丁酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-(2-甲基苯基)乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-(4-甲基苯基)乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-(4-溴-苯基)乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-萘基乙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-苯基丙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸、(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-(3，4-二-甲氧基苯基)丙酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸或(3r，4r，5s)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(2-(4-苯基丁酰基)胍基)-1-环己烯-1-羧酸。
本发明还提供了一种本发明所述的化合物的制备方法，包括：
1)将磷酸奥司他韦与式(ii)结构的化合物反应，得到式(iii)结构的化合物，
其中，所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基；
2)将式(iii)结构的化合物转化成式(i)结构的化合物，
按照本发明，本发明磷酸奥司他韦与式(ii)结构的化合物反应，得到式(iii)结构的化合物；其中，式(ii)化合物中r的限定与前述化合物中r的限定相同；所述反应的催化剂优选为氯化汞(ii)和有机碱；所述有机碱优选为三乙胺(et3n)；所述反应的溶剂优选为dmf；所述反应的温度优选为室温；所述磷酸奥司他韦与所述式(ii)结构化合物的摩尔比优选为(1～3)∶1，更优选为(1～2)∶1。
本发明中，本发明对所述式(ii)结构的化合物的来源没有特殊限定，可以购买也可以自制，本发明中，本发明优选按照以下方法制备：
将式(iv)结构的化合物与r-cooh反应，得到式(ii)结构的化合物，
其中，所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基，
该步反应中，所述反应的催化剂优选为六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(pybop)和甲基吗啉(nmm)；所述反应的溶剂优选为dmf；所述反应的温度优选为室温；所述式(iv)结构的化合物与所述r-cooh的摩尔比优选为1∶(1～5)，更优选为1∶(2～4)。
本发明中，所述式(iv)结构的化合物优选按照以下方法制备得到：将甲基硫脲氢碘酸盐和二碳酸二叔丁酯(boc2o)混合反应，制备得到式(iv)结构的化合物；其中，所述反应的碱为氢氧化钠或氢氧化钾；所述反应的溶剂优选为醇和水的混合溶液，其中，所述混合溶液中，所述醇与所述水的体积比为(8～12)∶1，更优选为10∶1；所述所述醇优选为乙醇或叔丁醇；所述反应的温度优选为-10～40℃，更优选为0～30℃。
按照本发明，本发明将式(iii)结构的化合物转化成式(i)结构的化合物，本发明对式(iii)结构的化合物转化成式(i)结构的化合物的方法没有特殊限定，本领域技术人员可以根据本领域公知常识选择合适的合成方法，具体的，本发明优选首先将式(iii)结构的化合物转化成式(v)结构的化合物；再将式(v)结构的化合物转化为式(i)结构的化合物；
其中，将式(iii)结构的化合物转化成式(v)结构的化合物的反应中，所用催化剂优选为三氟乙酸(tfa)，所述反应的溶剂优选为二氯甲烷；所述反应中，所述三氟乙酸与所述二氯甲烷的体积比优选为1∶(1～10)，更优选为1∶(3～5)；所述反应的温度优选为室温。
将式(v)结构的化合物转化为式(i)结构的化合物的反应中，所述反应的碱为无机碱，更优选为碳酸钠或碳酸钾；所述反应的溶剂优选为甲醇和乙醇中的一种或两种；所述无机碱与所述式(v)结构的化合物的摩尔比优选为(1～10)∶1，更优选为(4～6)∶1；所述反应的温度优选为室温。
本发明还提供了一种本发明所述的化合物的盐，具有式(i-s)所示结构，
其中，所述所述r为不含取代基的c1～c10的烷基或含取代基的c1～c30的烷基；
所述x为药学上可接受的酸。
其中，所述x优选为三氟乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸或盐酸。
本发明还提供了一种本发明所述的化合物以及本发明所述的化合物的盐在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用，所述神经氨酸酶抑制剂优选为h1n1-h259y型神经氨酸酶抑制剂。
本发明提供了一种化合物及其制备方法和应用，本发明提供的化合物可以作为神经氨酸酶抑制剂，实验结果表明，本发明提供的化合物对h1n1、h3n2、h259y(h1n1)型流感病毒的神经氨酸酶具有较强的抑制作用，尤其是对h259y(h1n1)型流感病毒的神经氨酸酶的抑制作用，均超过或相当于阳性药奥司他韦羧酸。可见，本发明的化合物具有较高活性，可以用于制备神经氨酸酶抑制剂，且该化合物的制备方法简单，原料易得，成本较低。
下面将结合本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
式(i)化合物的反应流程如下
所合成的化合物具体结构式分别标记为a1～a13，具体见表1：
表1
以a1为例，其具体制备方法为：
中间体1的合成：取s-甲基硫脲氢碘酸盐(11g，50.4mmol)溶于100ml叔丁醇中，加入10ml溶有氢氧化钠(2g，50.4mmol)的水溶液，室温搅拌30min。冰浴下加入50ml溶解9gboc2o的叔丁醇溶液，乳浊液，室温搅拌过夜，反应完全，停止反应加入140ml二氯甲烷，饱和碳酸钠水溶液洗涤2次，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，快速柱层析(pe∶ea＝6∶1)，得中间体1，7.1g，白色固体，产率74％。
中间体2的合成：将丙酸(172mg，2.32mmol)，pybop(1.21g，2.32mmol)，nmm(469mg，4.64mmol)溶于4mldmf，室温搅拌30min，加入中间体1(220mg，1.16mmol)，室温搅拌，过夜，反应完全。停止反应，加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，快速柱层析(pe∶ea＝25∶1)，得中间体2。
中间体3的合成：将磷酸奥司他韦(200mg，0.82mmol)，中间体2(202mg，0.82mmol)三乙胺(274mg，2.71mmol)溶于3mldmf溶液中，室温搅拌，10min，冰浴下加入氯化汞(268mg，0.98mmol)，5min后有沉淀析出，室温搅拌，过夜，待反应完全，停止反应，冷却至室温，加入水、乙酸乙酯稀释反应液，硅藻土过滤，去除固体沉淀，滤液乙酸乙酯萃取2次，饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，快速柱层析(pe∶ea＝3∶2)，得中间体3。
中间体4的合成：将中间体3(200mg，0.39mmol)溶于5mltfa/二氯甲烷＝1/1溶液中，室温搅拌，5h，浓缩至干，加入乙醚，有沉淀析出，过滤得到中间体4。
目标化合物a1的合成：将中间体4(100mg，0.24mmol)溶解于16ml乙醇，4ml溶有碳酸钾(132mg，0.96mmol)的水溶液加入其中，有少量固体析出，超声2min，室温搅拌，12小时，反应完全，停止反应，反应液减压浓缩至少量，加入10％的hcl水溶液调ph＝4～5，有白色固体析出，减压浓缩至干，hplc制备(乙腈/0.1％甲酸水)，得产物a1，18mg，产率36％。
目标化合物a1三氟乙酸盐的制备：将目标化合物a1(100mg，0.26mmol)，二氯甲烷5ml，三氟乙酸5ml，室温搅拌反应，12小时，反应完毕，加入乙醚5ml，过滤，制得目标化合物a1三氟乙酸盐。
化合物a1：1hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：8.00(1h，d，j＝8.5hz)，6.68(1h，s)，4.12-4.10(1h，m)，4.04-3.94(1h，m)，3.91-3.85(1h，m)，3.62-3.59(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.4hz，4.7hz)，2.42(2h，q，j＝7.3hz)，2.34-2.28(1h，m)，1.83(3h，s)，1.50-1.37(4h，m)，1.03(3h，t，j＝7.3hz)，0.87-0.79(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：176.8，170.4，167.9，153.8，136.8，129.5，81.8，74.6，52.7，49.9，30.2，29.6，26.2，25.7，23.1，9.9，9.5，8.7；hr-ms(esi)m/z：calcdforc18h30n4o5[m+h]+383.2294[m+na]+405.2114，found383.2294，405.2109.
化合物a2-a13的制备按照化合物a1的方法制备，将丙酸改变为相对应的羧酸，相对应的羧酸和其它原料按照化合物a1的当量比和用量投料，其它实验步骤相同，制得化合物a2-a13及其药用盐。
化合物a2：白色固体，产率27％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.77(1h，s)，8.98(1h，d，j＝7.8hz)，8.85(2h，s)，8.00(1h，d，j＝8.4hz)，6.69(1h，s)，4.12-4.05(1h，m)，4.04-3.95(1h，m)，3.95-3.85(1h，m)，3.44-3.36(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.5hz，4.3hz)，2.39(2h，t，j＝7.2hz)，2.34-2.29(1h，m)，1.82(3h，s)，1.61-1.52(2h，m)，1.49-1.37(4h，m)，0.91-0.78(9h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：175.6，170.2，167.5，153.4，137.2，129.0，81.8，74.6，52.6，50.0，38.5，29.4，26.2，25.7，23.1，17.8，13.7，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc19h32n4o5[m+h]+397.2451，found397.2478.
化合物a3：白色固体，产率40％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.77(1h，s)，8.98(1h，d，j＝7.9hz)，8.83(2h，s)，8.00(1h，d，j＝8.4hz)，6.69(1h，s)，4.11-4.06(1h，m)，4.05-3.95(1h，m)，3.95-3.85(1h，m)，3.43-3.35(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.4hz，4.4hz)，2.40(2h，t，j＝7.2hz)，2.36-2.29(1h，m)，1.82(3h，s)，1.57-1.49(2h，m)，1.47-1.39(2h，m)，1.34-1.24(4h，m)，0.89-0.78(9h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：175.7，170.3，167.5，153.4，137.2，129.0，81.8，74.6，52.6，49.9，36.4，29.4，26.4，26.1，25.7，23.1，21.9，14.0，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc20h34n4o5[m+h]+411.2607，found411.2624.
化合物a4：白色固体，产率46％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.77(1h，s)，8.98(1h，d，j＝7.7hz)，8.84(2h，s)，8.01(1h，d，j＝8.4hz)，6.69(1h，s)，5.86-5.76(1h，m)，5.08-4.99(2h，m)，4.15-4.06(1h，m)，4.06-3.94(1h，m)，3.94-3.85(1h，m)，3.42-3.38(1h，m)，2.71(1h，dd，j＝17.5hz，4.4hz)，2.54-2.51(2h，m)，2.36-2.28(3h，m)，1.82(3h，s)，1.49-1.37(4h，m)，0.87-0.78(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：174.9，170.3，167.5，153.4，137.2，137.0，129.0，116.2，81.8，74.6，52.6，50.0，35.8，29.5，28.2，26.2，25.7，23.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc20h32n4o5[m+h]+409.2451，found409.2458.
化合物a5：白色固体，产率46％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：12.78(1h，s)，8.96(1h，d，j＝8.2hz)，8.84(2h，s)，8.00(1h，d，j＝8.5hz)，6.70(1h，s)，4.13-4.05(1h，m)，4.05-3.95(1h，m)，3.95-3.87(1h，m)，3.42-3.39(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.5hz，4.6hz)，2.65-2.58(1h，m)，2.37-2.30(1h，m)，1.82(3h，s)，1.48-1.39(4h，m)，1.10(6h，d，j＝6.8hz)，0.86-0.78(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：179.3，170.3，167.5，153.7，137.1，129.0，81.8，74.5，52.5，49.9，35.8，29.4，26.1，25.7，23.1，18.9，18.8，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc19h32n4o5[m+h]+397.2451，found397.2478.
化合物a6：白色固体，产率44％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：12.77(1h，s)，9.00(1h，d，j＝7.6hz)，8.83(2h，s)，7.99(1h，d，j＝8.4hz)，6.69(1h，s)，4.12-4.05(1h，m)，4.05-3.96(1h，m)，3.96-3.88(1h，m)，3.42-3.37(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.4hz，4.3hz)，2.37-2.32(1h，m)，2.28(2h，d，j＝7.0hz)，2.07-1.97(1h，m)，1.82(3h，s)，1.49-1.38(4h，m)，0.92(6h，d，j＝6.7hz)，0.87-0.78(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：175.0，170.3，167.5，153.4，137.1，129.1，81.8，74.6，52.7，49.9，45.6，29.4，26.2，25.7，25.3，23.1，22.4，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc20h34n4o5[m+h]+411.2607，found411.2612.
化合物a7：白色固体，产率69％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：12.77(1h，s)，9.00(1h，s)，8.89(2h，s)，7.99(1h，d，j＝8.5hz)，7.22-7.13(4h，m)，6.68(1h，s)，4.12-4.05(1h，m)，4.05-3.94(1h，m)，3.92-3.88(1h，m)，3.80(2h，s)，3.39-3.37(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.4hz，4.6hz)，2.36-2.30(1h，m)，2.24(3h，s)，1.81(3h，s)，1.45-1.36(4h，m)，0.85-0.77(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：173.4，170.3，167.5，153.5，137.4，137.2，132.6，130.8，130.5，129.0，127.9，126.4，81.8，74.5，52.7，50.1，41.2，29.4，26.1，25.7，23.1，19.6，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc24h34n4o5[m+h]+459.2607，found459.2610.
化合物a8：白色固体，产率36％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.76(1h，s)，8.95(1h，d，j＝8.1hz)，8.85(2h，s)，7.98(1h，d，j＝8.4hz)，7.18-7.13(4h，m)，6.68(1h，s)，4.12-4.05(1h，m)，4.05-3.94(1h，m)，3.92-3.88(1h，m)，3.71(2h，s)，3.39-3.37(1h，m)，2.71(1h，dd，j＝17.4hz，4.5hz)，2.35-2.30(1h，m)，2.28(3h，s)，1.81(3h，s)，1.46-1.36(4h，m)，0.86-0.76(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：173.7，170.3，167.5，153.5，137.2，136.8，130.8，129.8，129.5，129.0，81.8，74.6，52.6，50.0，42.9，29.4，26.1，25.7，23.1，21.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc24h34n4o5[m+h]+459.2607，found459.2650.
化合物a9：白色固体，产率27％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.76(1h，s)，8.93(1h，s)，8.85(2h，s)，7.99(1h，d，j＝8.5hz)，7.54(2h，d，j＝8.3hz)，7.25(2h，d，j＝8.3hz)，6.68(1h，s)，4.12-4.05(1h，m)，4.04-3.94(1h，m)，3.92-3.88(1h，m)，3.77(2h，s)，3.39-3.37(1h，m)，2.71(1h，dd，j＝17.5hz，4.7hz)，2.35-2.29(1h，m)，1.80(3h，s)，1.46-1.35(4h，m)，0.85-0.76(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：173.1，170.3，167.5，153.6，137.2，133.3，132.3，131.7，129.0，120.9，81.8，74.5，52.6，50.1，42.5，29.4，26.1，25.7，23.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc23h31brn4o5[m+h]+523.1556found523.1564，525.1546.
化合物a10：白色固体，产率43％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.76(1h，s)，8.94(1h，d，j＝7.6hz)，8.86(2h，s)，7.98(1h，d，j＝8.5hz)，7.92-7.86(3h，m)，7.82(1h，s)，7.55-7.49(2h，m)，7.44(1h，d，j＝8.3hz)，6.68(1h，s)，4.11-4.06(1h，m)，4.02-3.97(1h，m)，3.95(2h，s)，3.92-3.86(1h，m)，3.39-3.36(1h，m)，2.72(1h，dd，j＝17.4hz，4.6hz)，2.36-2.30(1h，m)，1.80(3h，s)，1.45-1.35(4h，m)，0.84-0.75(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：173.5，170.3，167.5，153.4，137.2，133.4，132.5，131.5，129.0，128.6，128.4，128.1，128.0，127.9，126.8，126.5，81.8，74.6，52.6，50.1，43.5，29.4，26.1，25.7，23.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc27h34n4o5[m+h]+495.2607，found495.2618.
化合物a11：白色固体，产率45％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.78(1h，s)，9.04(1h，d，j＝7.0hz)，8.78(2h，s)，8.00(1h，d，j＝8.4hz)，7.31-7.18(5h，m)，6.69(1h，s)，4.13-4.07(1h，m)，4.03-3.95(1h，m)，3.93-3.86(1h，m)，3.42-3.36(1h，m)，2.87(2h，t，j＝7.3hz)，2.76-2.68(3h，m)，2.35-2.29(1h，m)，1.81(3h，s)，1.47-1.38(4h，m)，0.87-0.78(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：174.9，170.3，167.5，153.4，140.6，137.2，129.0，128.9，128.7，126.7，81.9，74.6，52.6，50.0，38.2，29.9，29.5，26.2，25.7，23.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc24h34n4o5[m+h]+459.2607，found459.2610.
化合物a12：白色固体，产率30％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.74(1h，s)，9.00(1h，d，j＝7.9hz)，8.88(2h，s)，8.00(1h，d，j＝8.4hz)，6.85(1h，d，j＝8.2hz)，6.84(1h，s)，6.72(1h，d，j＝8.2hz)，6.69(1h，s)，4.12-4.08(1h，m)，4.03-3.95(1h，m)，3.93-3.87(1h，m)，3.73(3h，s)，3.71(3h，s)，3.42-3.36(1h，m)，2.81(2h，t，j＝6.9hz)，2.73-2.68(3h，m)，2.35-2.29(1h，m)，1.81(3h，s)，1.49-1.36(4h，m)，0.87-0.78(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：175.0，170.3，167.5，153.4，149.1，147.7，137.2，132.9，129.0，120.5，112.6，112.3，81.9，74.6，56.0，55.8，52.6，50.0，38.6，29.7，29.5，26.2，25.7，23.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc26h38n4o7[m+h]+519.2819，found519.2830.
化合物a13：白色固体，产率30％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ(ppm)：12.76(1h，s)，8.92(1h，d，j＝7.4hz)，8.78(2h，s)，8.01(1h，d，j＝8.4hz)，7.29(2h，t，j＝7.5hz)，7.21-7.17(3h，m)，6.69(1h，s)，4.11-4.07(1h，m)，4.03-3.95(1h，m)，3.93-3.88(1h，m)，3.41-3.38(1h，m)，2.71(1h，dd，j＝17.6hz，4.2hz)，2.60(2h，t，j＝7.3hz)，2.42(2h，t，j＝7.3hz)，2.36-2.29(1h，m)，1.91-1.85(2h，m)，1.82(3h，s)，1.49-1.39(4h，m)，0.87-0.78(6h，m)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ(ppm)：175.4，170.3，167.5，153.4，140.7，137.1，129.0，128.8，128.7，126.4，81.9，74.6，52.5，50.0，36.1，34.6，29.4，26.2，26.0，25.7，23.1，9.9，9.5；hr-ms(esi)m/z：calcdforc25h36n4o5[m+h]+473.2764，found473.2769.
实施例2、奥司他韦胍基羧酸衍生物体外抗病毒活性实验
1、实验材料：a/puertorico/8/1934(h1n1)；a/hongkong/498/97(h3n2)；a/puertorico/8/1934(h259y，naresisitantstrain)；奥司他韦酸盐(对照药)；酶底物munana
(2′-4-methylumbelliferyl-a-n-acetylneuraininate，2′-4-甲基伞形酮-α-n-乙酰神经氨酸，sigma)；pbs缓冲液或者生理盐水；恒温培养箱；酶标仪。
2、实验原理：流感病毒神经氨酸酶是一种具有酶活性的表面糖蛋白，对流感病毒的复制有重要作用。本实验室采用munana作为底物检测流感病毒na活性。munana是流感病毒na的特异性底物，在na作用下产生的催化产物在激发光照射下，可以产生荧光；荧光强度的变化，可以灵敏反映神经氨酸酶的活性。
3、方法步骤：
1)药物稀释：在药物稀释板中，将待测化合物和奥司他韦羧酸盐用dmso3倍梯度稀释8个浓度梯度；
2)药物与流感病毒na作用：将梯度稀释后的待测化合物转移至测试板中，其中测试板中的每孔中含有pbs，然后在孔中加入流感病毒na与化合物混匀；
3)底物与na及药物作用：将底物加入到含有nb与化合物的孔中混匀并孵育；其中测试的最高浓度为1μm；
4)实验设置na活性对照，空白对照，以及神经氨酸酶(na)阳性抑制剂奥司他韦羧酸盐对照。
5)37℃下反应40分钟后，多标记分析仪上荧光检测。
抑制率(％)＝100-(样品孔-空白对照)/(na对照-空白对照)*100％
本发明化合物对流感病毒神经氨酸酶活性，如表2
表2奥司他韦胍基羧酸衍生物体外na(h1n1，h3n2和h259y(h1n1))的抑制活性
由表2可知，本发明的化合物对野生型和突变型流感病毒的神经氨酸酶显示了良好的抑制活性。其中化合物a4，a9和a12与阳性药羧酸奥司他韦相比，对野生型流感病毒的神经氨酸酶抑制活性稍弱，但对突变型流感病毒的神经氨酸酶抑制活性更高。其它化合物对突变型流感病毒的神经氨酸酶抑制活性优于或与阳性药相当。本发明的化合物可以用于制备预防与治疗流感病毒引起的疾病的药物。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。