新的化合物及其生产方法

专利名称：：新的化合物及其生产方法
技术领域：
：本发明涉及安莎霉素(ansamycin)类似物，其可用于例如癌症、B细胞恶性病、痴疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病的治疗或者作为癌症的预防性预处理。本发明还提供了生产这些化合物的方法以及它们在医疗中的用途。
背景技术：
：研发具有低毒性和有利药代动力学特征的高特异性抗癌药物构成了抗癌治疗的主要挑战。90kDa热休克蛋白(Hsp卯)是一种参与蛋白质折叠和装配的丰富的分子伴倡，在这些蛋白质中有许多参与信号转导通路(综述参见Neckers，2002;Sreedhar等，2004a;Wegele等，2004及其中的参考文献)。迄今已有近50种这些所谓的客户蛋白(clientprotein)得以鉴定，包括类固醇受体、非受体酪氨酸激酶如S/T家族、细胞周期素依赖性激酶如cdk4和cdk6、嚢性跨膜调控因子、一氧化氮合酶等等(Donz6和Picard,1999;McLaughlin等，2002;Chiosis等，2004;Wegele等，2004;http:〃www.pieard.ch/downloads/Hsp90interactors.pdf)。ot匕夕卜，Hsp90在应激响应和保护细胞对抗突变效应方面起着关键作用(Bagatell和Whitesell,2004;Chiosis等，2004)。Hsp卯功能复杂，参与动态多酶复合物的形成(Bohen，1998;Liu等，1999;Young等，2001;Takahashi等，2003;Sreedhar等，2004;Wegele等，2004)。Hsp90为抑制剂(Fang等，1998;Liu等，1999;Blagosklonny，2002;Neckers,2003;Takahashi等，2003;Beliakoff和Whitesell,2004;Wegele等，2004)的靶点，引起客户蛋白降解、细胞周期失调/或正常化及细胞凋亡。最近，Hsp90已被鉴定为肺瘤侵袭的重要胞外介质(Eustace等，2004)。Hsp卯被鉴定为癌症治疗的新的主要治疗靶点，这反映在对Hsp90功能所进行的深入详尽研究(Blagosklonny等，1996;Neckers，2002;Workman和Kaye，2002;Beliakoff和Whitesell，2004;Harris等，2004;Jez等，2003;Lee等，2004)和对高通量篩选测定所进行的研发(Carreras等，2003;Rowlands等，2004)。Hsp90抑制剂包括诸如安莎霉素类、大环内酯类、噤呤类、吡唑类、香豆素抗生素类等类型的化合物(综述参见Bagatdl和Whitesell，2004;Chiosis等，2004及其中的参考文献)。苯型安莎霉素类为一类范围广泛的化学结构，其特征在于与芳香环结构两侧连接的长度不等的脂族环。天然存在的安莎霉素类包括大贝菌素(macbecin)和18，21-二氬大贝菌素(也分别称为大贝菌素I和大贝菌素II)(1&2;Tanida等，1980)、格尔德霉素(geldanamycin)(3;DeBoer等，1970;DeBoer和Dietz，1976;WO03/106653及其中的参考文献)和除草霉素(herbimycin)家族(4;5，6，Omura等，1979，Iwai等，1980和Shibata等，1986a，WO03/106653及其中的参考文献)。大贝菌素.118,21-二氢大贝菌素(大贝菌素ll)，2格尔德霉素，3除草霉素A4R尸0CH3，R2=CH3除草霉素B，5R^H，R2=H除草霉余C,6RfOCH3,R2-H安莎霉素类最初因其抗细菌和抗病毒活性而得以鉴定，然而，近来其作为抗癌剂的潜在效用已经变得更令人感兴趣(Beliakoff和Whitesell，2004)。许多Hsp卯抑制剂目前正在临床试验中进行评估(Csermely和Soti，2003;Workman,2003)。特别是格尔德霉素具有纳摩尔级的效力，并对异常蛋白激酶依赖性肿瘤细胞具有明显的特异性(Chiosis等，2003;Workman,2003)。业已表明用Hsp90抑制剂治疗增强放射诱导的肿瘤细胞死亡，并且也已证明Hsp卯抑制剂组合细胞毒剂提高了细胞杀伤能力(如乳腺癌、慢性髓细胞性白血病和非小细胞肺癌)(Neckers，2002;Beliakoff和Whitesell，2004)。抗血管生成活性潜力也令人感兴趣Hsp90客户蛋白HIF-la在实体瘤的发展中起着关键作用(Hur等，2002;Workman和Kaye,2002;Kaur等，2004)。Hsp卯抑制剂还作为免疫抑制剂发挥功能，参与Hsp90抑制后补体诱导的数类肿瘤细胞的裂解(Sreedhar等，2004)。用Hsp90抑制剂治疗还能够引起诱导的超氧化物生成(Sreedhar等，2004a)，后者与免疫细胞介导的裂解相关(Sreedhar等，2004)。Hsp卯抑制剂作为潜在抗疟疾药物的用途也已经进行过讨论(Kumar等，2003)。此外，业已表明格尔德霉素干扰复杂糖基化的哺乳动物阮蛋白Prpe的形成(Winklhofer等，2003)。如上所述，安莎霉素类作为潜在的抗癌和抗B细胞恶性病化合物而令人感兴趣，然而现有的安莎霉素类呈现出不良的药理学或药物特性，例如，它们表现出差的水溶性、差的代谢稳定性、差的生物利用度或差的配制性能(Goetz等，2003;Workman2003;Chiosis2004)。除草霉素A和格尔德霉素均由于其强烈的肝毒性而被鉴定为临床试验的不良候选药(参阅Workman,2003)，且格尔德霉素由于肝毒性已撤出I期临床试验(Supko等，1995;WO03/106653)。格尔德霉素分离自吸水链霉菌(A^/7^附w"/^gm^o//cws)培养物滤液，表现出强的体外抗原生动物活性以及弱的抗细菌和真菌活性。在1994年表明了格尔德霉素与Hsp卯间的締合(Whitesell等，1994)。格尔德霉素的生物合成基因簇已被克隆并测序(Allen和Ritchie,1994;Rascher等，2003;WO03/106653)。其DNA序列可依据NCBI登录号AY179507获得。最近描述了个汙生自吸水链霉菌二重霉素亚种(S.^^*MCO/7/cw:ysubsp.J""附W^c^)JCM4427的遗传工程格尔德霉素生产菌林的分离，以及4,5-二氢-7-O-脱氨基甲酰基-7-羟基格尔德霉素和4，5-二氢-7-0-脱氨基甲酰基-7-羟基-17-0-脱甲基格尔德霉素的分离(Hong等，2004)。通过向除草霉素生产菌林吸水链霉菌AM-3672供给格尔德霉素，分离到化合物15-羟基格尔德霉素、三环格尔德霉素类似物KOSN-1633和格尔德霉素甲酯(methyl-geldanamycinate)(Hu等，2004)。两种化合物17-甲酰基-17-脱曱氧基-18力-21力-二氩格尔德霉素和17-羟甲基-17-脱甲氧基格尔德霉素分离自吸水链霉菌K279-78。吸水链霉菌K279-78为含有粘粒pKOS279-78的吸水链霉菌NRRL3602,所述粘粒具有44kbp的插入片段，含有来自除草霉素生产菌抹吸水链霉菌AM-3672的多个基因(Hu等，2004)。已对格尔德霉素生物合成簇聚酮合酶(polyketidesynthase)中四个模块的酰基转移酶结构域进行了取代(substitution)(Patel等，2004)。对模块l、4和5进行AT取代，产生完全加工的类似物14-脱曱基-格尔德霉素、8-脱甲基-格尔德霉素和6-脱甲氧基-格尔德霉素，以及非完全加工的类似物4，5-二氢-6-脱甲氧基-格尔德霉素。模块7中的AT取代导致产生三种2-脱甲基化合物即K()SN1619、KOSN1558和KOSN1559，其中之一(KOSN1559)是格尔德霉素的2-脱甲基-4，5-二氢-17-脱甲氧基-21-去氧基衍生物，以比格尔德霉素大4倍的结合亲和力、而比17-AAG大8倍的结合亲和力与Hsp90结合。不过这并不反映为利用SKBr3所测量的ICso的改进。另一类似物即命名为KOS-1806的新的非苯醌型格尔德霉素具有单苯酚结构(Rascher等，2005)。未给出KOS-1806的活性数据。在1979年从吸水链霉菌菌抹No.AM-3672的发酵液中分离到安莎霉素类抗生素除草霉素A，并据其强效除草活性而得名。其抗肿瘤活性通过使用感染了劳斯肉瘤病毒(RSV)温度敏感型突变抹的大鼠肾细胞系细胞来筛选使这些细胞的转化形态逆转的药物而得以确立(综述参见Uehara,2003)。推定除草霉素A主要通过与Hsp90伴侣蛋白结合而起作用，除此也讨论了其与保守半胱氨酸残基的直接结合以及随后的激酶失活作用(Uehara，2003)。已经分离到许多化学衍生物，且苯醌母核C19位取代基改变的化合物以及柄型链闺化化合物表现出比除草霉素A更低的毒性和更高的抗肿瘤活性(()mura等，1984;Shibata等，1986b)。除草霉素生物合成基因簇的序列在WO03/106653和最近的论文中得以鉴定(Rascher等，2005)。安莎霉素类化合物大贝菌素(l)和18，21-二氢大贝菌素(2)(C-14919E-1和C-14919E-1)因其抗真菌和抗原生动物活性而得以鉴定，分离自诺卡氏菌属(tVocw^Vi)物种No.C-l4919(珍贵束丝放线菌珍贵亚种(H/"，/m柳"/rC》5^附sw力s//7/*CVw/)ATCC31280)的培养物上清液(Tanida等，1980;Muroi等，1980;Muroi等，1981;US4,315,989和US4,187,292)。18，21-二氢大贝菌素的特征在于含有二氢醌形式的母核。大贝菌素和18,21-二氢大贝菌素均显示拥有相似的抗细菌和抗癌细胞系如鼠白血病P388细胞系的抗肿瘤活性(Ono等，1982)。逆转录酶和末端脱氧核苷酸转移酶活性不受大贝菌素抑制(Ono等，1982)。大贝菌素的Hsp90抑制功能在文献中已有报道(Bohen，1998;Liu等，1999)。在将大贝菌素和18,21-二氢大贝菌素加至微生物培养液后转化为在某一位置或某些位置上带有羟基而非曱氧基的化合物，这描述在专利US4,421,687和US4,512,975中。在大量多种土壤微生物的筛选中，从属于链霉菌属的生产菌林中鉴定到了化合物TAN-420A至E(7-11，EP0110710)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>在2000年描述了从链霉菌属菌种S6699的细胞培养物中分离的格尔德霉素相关的非苯醌型安莎霉素类代谢物利布拉霉素(reblastatin)及其在类风湿性关节炎治疗中的潜在治疗价值(Stead等，2000)。另一Hsp90抑制剂与该化学上不相千的苯醌型安莎霉素类截然不同，其为根赤壳菌素(RadicicoI)(单胞菌素(monorden)),最初是因其抗真菌活性而从真菌MwiM/w/"附^朋n/柳中发现的(综述参见Uehara，20(B),并且发现其结构与从A^"/v'tfnw/i"Vw/"中分离的14元大环内酯完全相同。除其抗真菌、抗细菌、抗原生动物和细胞毒活性之外，后来它还被鉴定为Hsp卯伴侣蛋白的抑制剂(综述参见Uehara，2003;Schulte等，1999)。根赤壳菌素的抗血管生成活性(Hur等，2002)及其半合成衍生物(Kurebayashi等，2001)也已有描述。近来的研究兴趣集中在作为新一代安莎霉素类抗癌化合物的格尔德霉素的17-氨基衍生物上(Bagatell和Whitesell，2004)，例如17-(締丙基氨基)-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AAG，12)(Hostein等，2001;Neckers，2002;Nimmanapalli等，2003;Vasileyskaya等，2003;Smith-Jones等，2004)和17-脱甲氧基-17-N，N-二甲基氨基乙基氨基-格尔德霉素(17-DMAG，13)(Egorin等，2002;Jez等，2003)。最近，对格尔德霉素的17位进行衍生，以生成17-格尔德霉素酰胺、氨基曱酸酯、脲和17-芳基格尔德霉素(LeBrazidec等，2003)。现已报道了具有超过六十个17-烷基M-17-脱甲氧基格尔德霉素类似物的库，并测试了它们对Hsp卯的亲和力以及水溶性(Tian等，2004)。另一减小格尔德霉素毒性的方法是通过与肿瘤靶向单克隆抗体缀合而进行选择性寻靼，将活性格尔德霉素化合物递送至恶性细胞中(Mandler等，2000)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>许多这些衍生物呈现出降低的肝毒性，但它们仍仅具有有限的水溶性。例如，17-AAG需要使用增溶栽体(如Cremophore,DMSO-卵卵磷脂)，而增溶载体本身可能会在一些患者中产生副作用(Hu等，2004)。大多数安莎霉素类Hsp卯抑制剂带有共同的结构部分苯醌，其为Michael受体，能够容易地与亲核试剂如蛋白质、谷胱甘肽(glutithion)等形成共价键。所述苯醌部分还经历与二氢醌的氧化还原平衡，在此期间形成氧自由基，这引起其它非特异性毒性(Dikalov等，2002)。因此，仍需要鉴定新的在癌症和/或B细胞恶性病的治疗中有用的安莎霉素衍生物，优选这样的安莎霉素类对于给药而言，具有改善的水溶性、改善的药理学性质和减少的副作用。本发明公开了通过生物转化和任选的亲本生产菌林的遗传工程而产生新的安莎霉素类似物。特别地，本发明公开了新的18，21-二脱氧-安莎霉素类似物及其他安莎霉素类似物，并且与目前可用的安莎霉素类相比，它们通常具有改善的药物性质；特别是，它们预期在如下的一种或多种性能方面表现出改善抗不同癌症亚型的活性、毒性、水溶性、代谢稳定性、生物利用度和配制性能。优选安莎霉素类似物(如18,21-二脱氧-安莎霉素类似物)表现出改善的生物利用度。发明概述在本发明中，向格尔德霉素生产菌林供给非天然起始单位(starterunit)，任选地组合寻靶失活或缺失负责格尔德霉素后PKS修饰(post-PKSmodification)的基因，和任选地引入适宜的后PKS基因以实现后PKS修饰，以便生产通过掺入非天然起始单位而形成的新的安莎霉素类似物，所述非天然起始单位可以例如导致产生可任选地被氟或其他取代基所取代的18，21-二脱氧-安莎霉素化合物。任选地，可以通过寻靶失活或缺失操纵负责起始单位(起始酸)生物合成的基因或调节因子，或以其他方式进行修饰，例如使细胞接触紫外辐射，选择指示起始单位生物合成已被破坏的表型。所述方法可适用于其他安莎霉素类，如除草霉素和利布拉霉素以及自溶霉素(autolytimycin)。对后PKS基因的任选打靶可以介由多种机制进行，26例如通过整合，寻靶缺失格尔德霉素簇中包括所有或一些后PKS基因的区域，任选地接着插入基因；或者通过其他方法使后PKS基因或其所编码的酶无功能，例如化学抑制、定点诱变或例如通过紫外光辐射突变细胞。另外，可以重新引入来自格尔德霉素簇或者其他安莎霉素簇例如但不限于大贝菌素、除草霉素、利布拉霉素或者TAN簇的后PKS基因以实现特异的后PKS修饰。所以本发明提供了安莎霉素类似物如18,21-二脱氧-安莎霉素类似物，制备这些化合物的方法，以及在医疗中使用这些化合物的方法或利用它们作为中间体生产更多化合物的方法。因此，本发明的第一方面提供了格尔德霉素或其他安莎霉素类的类似物，它们缺乏常见的起始单位，相反却掺入了例如可导致产生可任选地被氟或其他取代基所取代的18，21-二脱氧-安莎霉素化合物的起始单位。因此，本发明的一个方面提供了式(I)的化合物或其可药用盐(i)其中R,代表H、()H、OMe;Rz代表H或Me;R3代表H或CONH2;R4和Rs或者均代表H,或者它们一起代表键(即C4至C5为双键)；R6代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或R7代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或27]\R10bRllb;Rs代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或!NRiocRiic;R9代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或Rl0a、R"a、Rl0b、R"b、Rl0c、R"c、Rl0d、R"d独立地代表H、CH3或CH2CH3;但是，前提是(i)当R6代表H，R7代表OH而Rs代表OH时，则R9不代表H;(ii)当R代表OH，Rs代表H而&代表H时，则不代表H、OH或OMe;和(iii)当R7代表OMe，R8代表H而R9代表H时，则R6不代表OMe。前提(i)的化合物为18,21-二氢格尔德霉素，一种已知的化合物。前提(ii)和(iii)的化合物在WO2005/061461中公开。适宜地(iv)当&代表H、OH或OMe,R代表H而Rs代表H时，则R9不4戈表()H、C1或NH2;和(v)当R6代表H、OH或OMe，Rs代表H而119代表H时，则R7不代表NH2。适宜地(vi)当R6代表H或OH时，则R7、Rs和R9不都代表H。前提(vi)的化合物在Kim等ChemBioChem(2007)8,1491-1494中公在一个更具体的方面，本发明提供了根据下式(IA)的18,21-二脱氧-安莎霉素类似物或其可药用盐28(IA)其中R代表H、OH、OMe;Rz代表H或Me;R3代表H或CONH2;R4和R5或者均代表H，或者它们一起代表键(即C4至C5之间为双键)；R()代表H、OH、()Me或F;R7代表H或F;Rs代表H或F。安莎霉素类似物如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物在文中也称为"本发明的化合物"，这样的术语在文中可互换使用。上面的结构显示了代表性的互变异构体，本发明涵盖式(I)化合物的所有互变异构体，例如当用烯醇式化合物进行举例说明时，还涵盖其酮式化合物，反之亦然。本发明涵盖上文所示式(I)所定义化合物的所有立体异构体。另一方面，本发明提供了用作药物的安莎霉素类似物，例如式(I)的化合物或其可药用盐。定义冠词"一"、"一个"、"一种，，在文中是指一个/种或一个/种以上(即至少29一个/种)冠词的语法对象。例如"一类似物"指一个类似物或一个以上的类<以物。如本文所用，术语"类似物"指结构上与另一个化合物相似但在组成上稍有不同(例如一个原子被另一个原子所代替，或者存在或缺失特定的官能团)的化合物。如在本申请中所用，术语"18，21-二脱氧-安莎霉素类似物"是指根据式(IA)的化合物。如本文所用，术语"同源物"是指本文所公开基因或基因所编码蛋白质的同源物，它们来自不同大贝菌素生产菌林的可选大贝菌素生物合成簇，或为来自可选安莎霉素(例如格尔德霉素、除草霉素、自溶霉素或利布拉霉素)生物合成基因簇的同源物。这样的同源物编码与所述基因或蛋白质在大贝菌素或相关安莎霉素聚酮化合物合成中执行相同功能的蛋白质，或者所述同源物自身能够执行相同的功能。优选这样的同源物与本文公开的具体基因的序歹'j(表3，SEQIDNO:ll，为簇中所有基因的序列，从中可以推断出具体基因的序歹ij)具有至少40。/。的序列同一性，优选至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的序列同一性。同一性百分比可以利用本领域技术人员公知的任何程序进行计算，例如可自NCBI网站获得的BLASTn或BLASTp。如本文所用，术语"癌症，，是指皮肤或身体器官例如但不限于乳腺、前列腺、肺、肾、胰腺、脑、胃或肠中良性或恶性的细胞新生长。癌症倾向于浸润至邻近组织并扩散(转移)至远距离器官例如骨骼、肝脏、肺或脑。如本文所用，术语癌症既包括转移性肺瘤细胞类型，例如但不限于黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横紋肌肉瘤和肥大细胞瘤；又包括组织癌类型，例如但不限于结直肠癌、前列腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、成胶质细胞瘤、原发性肝癌和卵巢癌。如本文所用，术语"B细胞恶性病"包括如下一组紊乱'I"曼性淋巴细胞性白血病(CLL)、多发性骨髓瘤和非何杰金淋巴瘤(NHL)。它们是血液和30血液生成器官的胂瘤性疾病。它们引起骨髓和免疫系统功能障碍，这致使宿主对感染和出血有高易感性。如本文所用，术语"生物利用度"是指药物或其它物质在给药后在生物活性位点被吸收或可用的程度或速率。该性质取决于许多因素，包括化合物的溶解性、在肠中的吸收速率、蛋白质结合和代谢的程度等。本领域技术人员应当熟知的多种生物利用度测试法描述在Egorin等(2002)中。如在本申请中所用，术语"水溶性"是指在水性介质例如pH7.3的磷酸緩沖盐溶液(PBS)中的溶解度。如在本申请中所用，术语"安莎霉素生产菌林"是指这样的菌林，例如以链霉菌为例的野生型菌林，例如格尔德霉素生产菌林、除草霉素生产菌抹、利布拉霉素生产菌林和自溶霉素生产菌林。这样的实例包括当在合适的条件下、例如供给天然起子物料(starterfeed)3-氨基-5-羟基苯甲酸进行培养时，生产诸如格尔德霉素或除草霉素(如除草霉素A、B或C)的安莎霉素类的吸7K链霉菌格尔德亚种(S^77&附yc^/^gmsco尸/cws^Wflrt"s)NRRL3602或链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌(5V丰歸戸sv她(丽w^w)DSM40699，以及生产诸如利布拉霉素或自溶霉素的安莎霉素类的链霉菌属菌种S6699或自溶链霉菌(A/r/7似附^M"wZ一f7dv)JX-47。因此，如在本申请中所用，术语"格尔德霉素生产菌株"是指这样的菌林，例如以链霉菌为例的野生型菌抹，例如当在合适的条件下、例如供给天然起子物料3-氨基-5-羟基苯甲酸进行培养时，生产格尔德霉素的吸7jc链霉菌格尔德亚种NRRL3602或链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌DSM40699。如在本申请中所用，术语"除草霉素生产菌林"是指这样的菌林，例如以吸水链霉菌AM-3672为例的野生型菌林，当在合适的条件下、例如供给天然起子物料3-氨基-5-羟基苯曱酸进行培养时，其生产除草霉素如除草霉素A、B或C。如本文所用，术语"后PKS基因"是指聚酮化合物的后聚酮合酶修饰所需的基因，例如但不限于单加氧酶、O-甲基转移酶和氨基甲酰基转移酶(carbamoyltransferase)。具体而言，在大贝菌素系统中，这些修饰基因包如本文所用，术语"起始单位生物合成基因，，是指生产天然掺入的起始单位即3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)所需的基因。具体而言，在大贝菌素系统中，这些起始单位生物合成基因包括爿/^(AHBA激酶)、^Z/i(aDHQ脱氢酶)、^/^(AHBA合酶)、OY(氧化还原酶)、/W(磷酸酶)。具体而言，在格尔德霉素系统中，推测基因^/附0编码AHBA合成所需的氨基脱氢奎尼酸(aminodehydr叫uinate)合酶(Rascher等，2003),而在除草霉素系统中，已经鉴定到/!/>附(9(Rascher等，2005)。其他生产AHBA的菌4朱也含有AHBA生物合成基因。本发明化合物如式(I)化合物的可药用盐包括由可药用的无机或有机酸或碱形成的常规盐以及季铵酸加成盐。合适的酸更具体的实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、曱酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、棕榈酸(palmoic)、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、7jC杨酸、富马酸、甲^t酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、类固醇酸(steroic)、鞣酸等。其它酸例如草酸尽管其本身不是可药用的，但是可用于制备用作中间体的盐，以获得本发明的化合物及其可药用盐。合适的碱盐的更加具体的实例包括钠盐、锂盐、钾盐、镁盐、铝盐、钙盐、锌盐、N',1V-二节基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、胆碱盐、二乙醇胺盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐和普鲁卡因盐。下文述及的根据本发明的化合物包括式(I)的化合物及其可药用盐。附图的简短说明图1:格尔德霉素生物合成的示意图，显示了第一个推断的酶游离中间体原格尔德霉素(progeldanamycin)以及后PKS加工为格尔德霉素。图中所列的PKS加工步骤并非旨在表示事件顺序。簇中具体32基因使用如下缩写ALO-AHBA荷载结构域；ACP-酰基载体蛋白；KS-(5-酮基合酶(p-ketosynthase);AT-酰基转移酶；DH-脱水酶；ER-烯醇还原酶(enoylreductase);KR-Ji-酮基还原酶(p-ketoreductase)。图2:由原格尔德霉素产生格尔德霉素的后PKS加工位点的示意图。图3:实施例中所述化合物(14-25)的结构。图4:实施例中所述化合物(26-37)的结构。
发明内容本发明提供了如上文所述的安莎霉素类似物，制备这些化合物的方法，在医疗中使用这些化合物的方法，以及利用这些化合物作为中间体或模板进行进一步的半合成衍生化的方法。适宜地R,代表H或OH。在一个实施方案中，R,代表H。在另一个实施方案中，R!代表OH。适宜地R2代表H。适宜地R3代表CONH2.在一个实施方案中，适宜地R4和Rs—起代表键。在另一个实施方案中，适宜地R4和Rs各自代表H。在一个实施方案中，适宜地R,代表H，R2代表H，R3代表CONH2，而R4和Rs各自代表H。在一个实施方案中，适宜地R,代表OH，R2代表H，R3代表CONH2，而H和Rs各自^表H。在一个实施方案中，适宜地R,代表H，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H，而R6代表OH。适宜地R6代表H、F、Me、Br、Cl、OH、OMe、NH2,更适宜地代表H、F、Me、Br、Cl、OH或OMe，还更适宜地代表H或F。可选地，适宜地R6代表CF3或CH2CH3。适宜地Ry代表H、F、OH、OMe、Br、Cl或NH2，更适宜地代表H、F、OH、OMe、Br或Cl,还更适宜地代表H、F、OH或OMe，尤其是()H(或H或F)。适宜地Rs代表H、F、Me、Cl、Br、OH或NH2，更适宜地代表H、F、Me、Cl、Br或OH，还更适宜地代表H或F。适宜地R9代表H、F、Me、Cl、Br、OH或NH2,更适宜地代表H、F、Me、Cl、Br或OH，还更适宜地^R表H或F,尤其是H。适宜地R,oa、Rlla、R10b、Rllb、R10c、Rllc、R10d、R^d代表H。适宜地当R7代表OH时，则R6、Rs或R9中的一个或多个代表F、Br、Me或NH2，其余的代表H。适宜地如果R6代表Me，则Rz代表OH、H或F，而Rs和R9代表H。适宜地如果R6代表CF3，则R7代表OH、H或F，而Rs和R9代表H。适宜地如果R6代表CH2CH3，则R7代表OH、H或F，而Rs和R9代表H。在本发明一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H,&代表CONH2，R4、R5、R^、R7和Rs各自代表H，例如如下列结构所示18、oO-CONH.在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，议3代表C()NH"R4和Rs各自代表H，R6代表OH，而R7和Rs各自代表H，例如如下列结构所示34<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表OH,R2代表H，R3代表CONH2,R4和Rs各自代表H，R6代表F，而R7和Rs各自代表H，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R!代表H，R2代表H，R3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表F,而R7和Rs各自代表H,例如如下列结构所示18CONK在本发明另一个适宜的实施方案中，R、代表H,R2代表H,&代表CONH2,R4和Rs各自代表H，R6代表H,R/代表F，而Rs代表H,例如如下列结构所示在本发明另一个适宜的实施方案中，R，代表H，R2代表H，R3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表OH，R7代表F，而Rs代表H，例如如下列结构所示0-CONH.在本发明另一个适宜的实施方案中，R，代表OH,R2代表H，议3代表CONH2,R4和Rs各自代表H，R6代表H,R代表F，而Rs代表H，例如如下列结构所示在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H,R6和R;各自代表F，而Rg代表H，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表OH，R2代表H，A代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6和R/各自代表F，而Rs代表H，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H，R^、R7和Rs各自代表F,例如如下列结构所示在本发明的一个实施方案中，R6、R7和Rs不都代表H，特别是R6、R7和R8中至少一个代表F。在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表OH，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H，R6代表F，R7代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示OH18在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表OH，R2代表H,&代表C()NH2,R4和Rs各自代表H，R6代表Me，R;代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示H,C、、H3CO0-CONH2在本发明另一个适宜的实施方案中，R代表OH,R2代表H，R3代表C()NH2，Rt和Rs各自代表H，Re代表CF3，R7代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示H3CO-CONH2在本发明另一个适宜的实施方案中，Ri代表OH，R2代表H，R3代表C()NH2,R4和Rs各自代表H，R6代表CH2CH3，R7代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示40<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H,R3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H,R6代表F，R7代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，R3代表(:()NH2,R4和Rs各自代表H，R6代表Me，R7代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R!代表H，R2代表H，&代表CONH2，R4和Rs各自代表H，R6代表CF3，R7代表OH,而Rs代表H,例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H,R2代表H，R3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表CH2CH3，R7代表OH，而Rs代表H，例如如下列结构所示H3COO-CONH2在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，&代表CONH2，R4和Rs各自代表H,R6代表OMe，Rz代表H，而Rs代表OH，例如如下列结构所示H3CO，0"-CONH2在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，113代表C()NH2,R4和Rs各自代表H，R6代表OH，R;代表H,而Rs代表OH,例如如下列结构所示0-CONH,在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，R3代表C()NH"R4和Rs各自代表H，R6代表H，R/代表H，而Rs代表OH,例如如下列结构所示0-CONH2在本发明另一个适宜的实施方案中，R，代表H，R2代表H，&代表CONH2，R4和Rs各自代表H,R6代表H，Ry代表F，而R8代表OH，例如如下列结构所示在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H，R3代表C()NH"R4和Rs各自代表H，R6代表H，R7代表C1，而Rs代表OH，例如如下列结构所示在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H,R2代表H，R3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表H，R7代表OH,而Rs代表F，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R,代表H，R2代表H,&代表CONH2，R4和Rs各自代表H，Rfi代表H，R7代表OH，而Rs代表Cl，例如如下列结构所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>在本发明另一个适宜的实施方案中，R，代表H，R2代表H,议3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表OMe，R代表F，而Rs代表OH，例如如下列结构所示在本发明的另一个实施方案中，R6、R7和Rs均代表H。在另一个实施方案中，R7和Rs不代表OH，R9代表H，而R。R/和R8中的一个或多个代表F。在本发明的另一个实施方案中，当Ri代表H，R2代表H,R3代表CONH2，R4和Rs代表H，R6代表H,而R7代表H时，则Rs不代表H。更多适宜的实施方案描述在实施例中，并图示于图3和4。非氢侧链相对于柄型环的优选的立体化学如下图1和2所示(也就是说，优选的立体化学遵循格尔德霉素的立体化学)。本发明还提供了安莎霉素类似物作为底物通过生物转化或通过合成化学用于进一步修饰的用途。在一方面本发明提供了用作药物的安莎霉素类似物。在具体的实施方案中，本发明提供了用于治疗癌症、B细胞恶性病、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病和/或用于预防性预处理癌症的安莎霉素类似物。在另一方面，本发明提供了安莎霉素类似物在制备药物中的用途。在具体的实施方案中，本发明提供了安莎霉素类似物在制备用于治疗癌症、B细胞恶性病、疾疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病和/或用于预防性预处理癌症的药物中的用途。在另一实施方案中，本发明提供了治疗癌症、B细胞恶性病、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病或预防性预处理癌症的方法，所述方法包括向需要的患者给药治疗有效量的安莎霉素类似物。如上文所指出的那样，本发明的化合物预期可用于治疗癌症和B细胞恶性病。本发明的化合物、尤其是对Hsp90具有改善的选择性和/或毒理性质改善和/或药代动力学文善的那些化合物也可以有效治疗其他适应症，例如但不限于痴疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病如类风湿性关节炎，或用于预防性预处理癌症。中枢神经系统疾病及神经变性疾病包括但不限于阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症、朊病毒病、脊髓性和延髓性肌萎缩(SBMA)和肌萎缩性侧索硬化(ALS)。有赖于血管生成的疾病包括但不限于年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病和多种其他眼病、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎。自身免疫疾病包括但不限于类风湿性关节炎、多发性硬化症、I型糖尿病、系统性红斑狼瘉和银屑病。"患者"包括人类和其他动物(尤其是哺乳动物)受试者，优选人类受试者。相应地，本发明的方法及安莎霉素类似物的用途为人类和兽医医疗用途，优选为人类医疗用途。本发明前述化合物或其制剂可以通过任何常规方法施用，例如但不限于其可以胃肠外(包括静脉内给药)、口服、局部(包括口腔、舌下或经皮)、经医疗装置(例如斯滕特(stent))、经吸入或注射(皮下或肌内)给药。治疗可以是单剂给药或历经一段时间的多剂量的治疗。尽管本发明的化合物可以单独给药，但是优选将它与一种或多种可接受的稀释剂或载体一起作为药物制剂提供。因此，本文提供了包含本发明化合物和一种或多种可药用稀释剂或载体的药物组合物。就与本发明化合物可配伍且对其受试者无害的意义而言，稀释剂或栽体必须是"可接受的"。适宜的栽体的实例在下面有更详细的说明。本发明化合物可以单独给药或与其它治疗药物组合给药。两种(或多种)药物共施用(co-administration)可以使所使用的每种药物的剂量显著降低，由此减少可见的副作用。还提供了包含本发明化合物和另外的治疗剂以及一种或多种可药用稀释剂或栽体的药物组合物。在另一方面，本发明提供了本发明化合物与第二药剂的治疗组合在例如治疗癌症或B细胞恶性病中的用途。在一个实施方案中，本发明化合物与另一种治疗剂、例如治疗癌症或B细胞恶性病的治疗剂共同给药。优选的药剂包括但不限于常规的化疗剂，如博来霉素、卡培他滨、顺铂、阿糖胞苷、环磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、亚叶酸、甲氨蝶呤、米托蒽醌(mitoxantone)、紫杉烷类[包括紫杉醇和多西他赛j、长春新碱、长春碱和长春瑞滨；激素疗法，阿那曲唑、戈舍瑞林、醋酸甲地孕酮、prenisone、他莫昔芬和托瑞米芬；单克隆抗体疗法，如曲妥珠单抗(trastuzumab，抗Her2)、西妥昔单抗(cetuximab,抗EGFR)和贝伐珠单抗(bevacizumab，抗VEGF);以及蛋白激酶抑制剂，如伊马替尼(imatinib)、达沙替尼(dasatinib)、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erl()tinib)、拉巾自替尼(lapatinib)、坦罗莫司(temsirolimus);蛋白酶体抑制剂，如硼替佐米(bortezomib);组蛋白脱酰基酶(HDAC)抑制剂，如伏林司他(vorinostat);血管生成抑制剂，如舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、来那度胺(lenalidomide)。另外，可以与其它治疗[包括但不限于放疗或手术l组合施用本发明的化合物。制剂可以方便地以单位剂型提供，并可以通过药学领域众所周知的任何方法制备。这类方法包括将活性成分(本发明化合物)与由一种或多种助剂组成的载体混合的步骤。通常这样制备制剂将活性成分与液体载体或微粉化固体栽体或两者均匀并紧密地混合，然后，如果需要的话，使产品成形。本发明化合物通常以在可药用剂型中包含活性成分的药物制剂形式口服或经任何胃肠外途径给药，所述活性成分任选地为无毒有机或无机的酸或碱加成盐的形式。根据待治疗的紊乱和患者以及给药途径的不同，所述组合物可以以不同的剂量给药。例如，本发明化合物可以以片剂、胶嚢剂、印形剂(ovules)、酏剂、溶液剂或混悬剂形式口服、口腔或舌下给药，上述制剂可以含有矫味剂或着色剂并可用于速释、緩释或控释使用。这样的片剂可以包含赋形剂，如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钓、磷酸氢钙和甘氨酸；崩解剂，如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐类；以及制粒粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。此外，还可以包含润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石粉。相似类型的固体组合物也可以作为明胶胶嚢中的填充物使用。就此而言，优选的赋形剂包括乳糖(lactose)、淀粉、纤维素、乳糖(milksugar)或高分子量的聚乙二醇类。对于水性混悬剂和/或酏剂而言，本发明化合物可以与多种这样的物质混合甜味剂或矫味剂、着色剂或色素；乳化剂和/或助悬剂；稀释剂，如水、乙醇、丙二醇和甘油；以及它们的组合。通过压制或才莫制可以任选用一种或多种助剂制备片剂。可以这样制备压制片剂在适当的机器中将自由流动形式l如粉末或颗粒j的活性成分压片，其中活性成分^f壬选与这样的物质混合粘合剂(如聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(如羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或^ft剂。通过在适备模制片剂。片剂可以任选地进行包衣或压痕，并可以例如使用提供期望释放模式的不等比例的羟丙基甲基纤维素进行配制，以实现其中的活性成分的緩释或控释释放。根据本发明的适于口服给药的制剂可以以离散单位的形式提供，如胶嚢、扁嚢剂(cachet)或片剂，所述每种含有预定量的活性成分；粉剂或颗粒剂；在水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；或水包油的液体50乳剂或油包水的液体乳剂。活性成分还可以提供为大丸剂(bolus)、煎膏剂(electuary)或糊剂的形式。适于口腔局部给药的制剂包括锭剂，其包含处于矫味基质[通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶I中的活性成分；软锭剂(pastilles)，其包含处于惰性基质l如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶l中的活性成分；和漱口药，其包含处于适宜的液体载体中的活性成分。应当理解，除了上面特别提到的成分外，本发明制剂还可以包含本领域中与所讨论制剂类型相关的其它常规物质，例如那些适于口服给药的制剂可以包含矫味剂。适于局部给药的药物组合物可以配制成膏剂、霜剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、浸药的敷料(impregnateddressings),喷雾剂、气雾剂或油剂、经皮给药装置(transdermaldevices)、朴粉剂(dustingpowders)等等。这些组合物可以经常规方法制备从而含有活性剂。因此，它们还可以包含可配伍的常规栽体和添加剂，例如防腐剂、辅助药物渗透的溶剂、霜剂或膏剂中的软化剂(emollient)以及洗剂所用的乙醇或油醇。这样的载体可以占组合物的约1%至约98%。更通常地，它们将至多占组合物的约80%。仅用于举例说明，这样制备霜剂或膏剂将足量的亲水材料与足量的含有约5-10%(重量)化合物的水混合，以制备具有期望稠度的霜剂或膏剂。适于经皮给药的药物组合物可以提供为离散的贴剂，旨在与受试者的表皮保持长时间紧密接触。例如，可以通过电离子透入疗法从贴剂中递送活性剂。对于外部组织应用，例如口腔和皮肤，组合物优选以局部膏剂或霜剂施用。当配制在膏剂中时，活性成分可以与石蜡或水可混;容的软膏基质一起使用。可选地，可以将活性剂配制在含有水包油型乳膏基质或油包水型基质的霜剂中。对于胃肠外给药而言，用活性成分和无菌溶i某(vehicle)制备液体单位剂型，所述溶媒例如为[但不限于j水、醇类、多元醇类、甘油和植物油类，优选水。4艮据所用的溶媒和浓度的不同，活性成分可以混悬或者溶解在该溶媒中。在制备溶液剂时，可以将活性成分溶解在注射用水中并过滤除菌，然后装入适当的小瓶或安瓿中并封装。可以将诸如局麻药、防腐剂和緩冲剂等物质溶解在溶媒中，这是有利的。为了提高稳定性，在装入小瓶中后可以将組合物冷冻，并在真空下除去水。然后将干燥的冷冻粉末密封在小瓶中，并可以附随提供装有注射用水的小齐瓦，以在4吏用前重构(reconstitute)上述液体。除了活性成分混悬而非溶解在溶*某中且不能实行过滤除菌外，用与溶液剂基本相同的方法制备胃肠外混悬剂。可以在混悬于无菌溶媒中之前，通过接触环氧乙烷而对活性成分进行灭菌。有利地，在组合物中纳入表面活性剂或润湿剂，以使活性成分易于分布均匀。本发明化合物还可以利用本领域公知的医疗装置给药。例如，在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以用无针头皮下注射装置给药，例如在U.S.5,399,163、U.S.5,383,851、U.S.5,312,335、U,S.5,064,413、U.S.4,941,880、U.S.4，7卯，824或U.S.4,596,556中所公开的装置。可在本发明中使用的众所周知的植入物(implants)和组件的实例包括US4,487,603，其公开了以可控速度分配药物的植入式微量输注泵；US4,486,194，其公开了通过皮肤给药药物的治疗装置；US4,447,233，其公开了以精确输注速率递送药物的药物输注泵；US4,447,224，其/>开了用于连续药物递送的流速可变的植入式输注装置；US4,439,196,其公开了具有多腔区室的渗透型药物递送系统；和US4,475,196，其公开了渗透型药物递送系统。许多其它此类植入物、递送系统和组件对本领域技术人而言是/>知的。本发明化合物的施用剂量将根据具体化合物、所涉及的疾病、受试者、疾病的性质及严重程度、受试者的身体条件以及所选的给药途径而变化。本领域技术人员能够很容易地确定适宜的剂量。组合物可以含有以重量计(U%、优选5-60%、更优选以重量计10-30%的本发明化合物，这取决给药的方法。本领域技术人员应当明白，本发明化合物个体剂量的最佳量和范围将由这样的因素决定所治疗的疾病的性质和程度；给药的剂型、途径和位置；以及所治疗的具体受试者的年龄和状况，医师将最终确定适宜的使用剂量。只要适当，可以经常重复给予该剂量。如果副作用出现，可以根据正常临床实践改变或减少该剂量的量和/或频率。在另一方面，本发明提供了制备安莎霉素类似物的方法。安莎霉素类聚酮化合钩，例如格尔德霉素和除草霉素，是由本领域众所周知的聚酮生物合成簇合成的。格尔德霉素可^L为是以两个阶段进行生物合成的。在第一阶段，核心PKS基因装配大环内酯母核，其中重复组装简单的羧酸前体，以产生聚酮链，聚酮链随之环化以形成第一个酶游离的中间体"原格尔德霉素"，参见图l。在第二阶段，一系列的"后PKS，，裁剪(tailoring)酶(如细胞色素P450单加氧酶、曱基转移酶、FAD依赖性加氧酶和氨基甲酰基转移酶)发挥作用，向原格尔德霉素模板添加多种另外的基团，得到最终的亲本化合物结构，参见图2。安莎霉素类似物可以以相似的方式进行生物合成。可以利用这种生物合成生产，通过生物转化，任选地组合适当的生产菌抹的遗传工程，产生新的化合物。本发明人已经令人惊讶地发现，向安莎霉素生产菌株供给非天然起始单位(起始酸或其类似物如酯)，则这些起始单位可以掺入到安莎霉素结构中，产生新的安莎霉素类似物。因此，本发明提供了制备安莎霉素类似物的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产安莎霉素例如格尔德霉素、除草霉素(除草霉素A、B或C)或其类似物的菌林；b)向所述菌林供给并非AHBA的起始单位，以便所述起始单位掺入到所述安莎霉素类似物中；c)在适宜条件下培养所述菌抹，进行安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。适宜地a)中菌林的特征在于一个或多个AHBA生物合成基因已被缺失或失活。这可以避免AHBA与非天然起始单位竟争掺入导致产率下降。可选地，可以突变a)中的菌林以降低AHBA生物合成效率。适宜地步骤c)的条件使AHBA生物合成效率为亚最佳水平。因此期望地菌林以仍然允许掺入供给的非天然起始单位的水平生产AHBA。通常，所掺入的供给的非天然起始单位的量大于起始单位总掺入量的20%，优选大于50%。适宜地起始单位选自式(II)的化合物或其酸部分进行衍生化后的类似物，例如酉旨(如甲基酯或乙基酯)其中R6、R7、Rs和R9如上文所定义。适宜地起始单位不是3，5-二氨基苯甲酸、3-氨基-4-鞋基苯甲酸或3-氨基-4-氯苯曱酸。在一个实施方案中，起始单位是式(II)的化合物，其中R6、R7、Rs和R(,均代表H。在另一个实施方案中，起始单位是式(n)的化合物，其中R6、R7、R8和R9不都代表H。更多例示性起始单位包括但不限于下表4和5中第二栏所示的那些化合物以及它们适宜的衍生物(例如盐和酯等等)。在一个实施方案中，菌林为安莎霉素生产菌林(如格尔德霉素或除草霉素生产菌林)，且选择起始单位以便菌林生产18，21-二脱氧-安莎霉素类似物。在一个实施方案中，选择起始单位，从而菌抹生产任选被氟取代的18，21-二脱氧-安莎霉素类似物。在一个实施方案中，选择起始单位，从而菌林生产被氟取代的18,21-二脱氧-安莎霉素类似物。在另一个实施方案中，菌林为大贝菌素生产菌株，且选择起始单位，从而菌林生产苯环的18或21位不被取代的大贝菌素类似物。54适宜地所述方法(i)还包括对步骤(d)的产物进行化学^f务饰或生物转化的步骤，任选地之后分离所得化合物的步骤；或者(ii)还包括在步骤(d)之前对步骤(c)的产物进行化学修饰或生物转化的步骤。本发明另一方面提供了产生类似物如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产安莎霉素或其类似物的第一宿主菌林，其中任选地已缺失或失活一个或多个后PKS基因，和/或已缺失或失活一个或多个起始单位生物合成基因；b)向所述菌抹供给非天然起始单位；c)在适宜条件下培养所述经修饰的宿主菌林，进行安莎霉素类似物如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。适宜地所供给的起始单位为起始酸。特别地，本发明提供了生产18,21-二脱氧-安莎霉素类似物的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产安莎霉素例如格尔德霉素、除草霉素(如除草霉素A、B或C)或其类似物的第一宿主菌林；b)向所述菌抹供给非天然起始酸；c)在适宜条件下培养所述菌林，进行18，21-二脱氧-安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。适宜地所述方法还包括步骤e)缺失或失活一个或多个起始单位生物合成基因或其同源物，所述步骤通常在步骤c)之前进行。适宜地所述方法另外地或者替代性地包括步骤f)缺失或失活一个或多个后PKS基因，所述步骤通常在步骤c)之前进行。在步骤(a)中，"生产安莎霉素例如格尔德霉素、除草霉素(如除草霉素A、B或C)或其类似物的宿主菌林"包括在合适条件下培养时生产安莎霉素例如格尔德霉素、除草霉素(如除草霉素A、B或C)或被Rl-Rll的定义所涵盖的安莎霉素类化合物的菌林。合适条件(以及步骤(c)中的适宜条件)是公知的，或者可以通过本身已知的方法予以确定)。例如，在步骤(a)中，第一宿主菌林在合适条件下培养时可以生产格尔德霉素或其类似物。适宜地非天然起子物料是取代的苯甲酸(不是3-氨基-5-羟基-笨甲酸，其为天然起始酸)，最适为任选在环周围进一步取代的3-氨基-苯甲酸。适宜地非天然起子物料是未被、或被一个、两个或三个氟原子取代的3-氨基-苯甲酸。在适宜的实施方案中，非天然起始酸物料为3-氨基苯曱酸。在另一适宜的实施方案中，非天然起始酸物料为5-氨基-2-氟苯甲酸。在另一适宜的实施方案中，非天然起始酸物料为5-氨基-3-氟苯甲酸。在另一适宜的实施方案中，非天然起始酸物料为5-氨基-2，3-二氟苯甲酸。在另一适宜的实施方案中，非天然起始酸物料为5-氮基-2，3，6-三氟苯曱酸。本领域技术人员将会理解，存在可以向宿主菌抹供给以生产相同化合物的其他可选的非天然起始单位，例如但不限于取代的苯甲酸的甲基酯、乙基酯、N-乙酰-半胱胺硫酯以及该生物合成中间体的二酮类似物(适当地活化，例如作为N-乙酰-半胱胺硫酯而行掺入)。酸化合物也可以以相应的盐形式供给。宿主菌林可以是例如，安莎霉素生产菌林，如格尔德霉素生产菌株或除草霉素生产菌株。可选地，宿主菌抹为基于安莎霉素生产菌抹如格尔德霉素生产菌林(或除草霉素生产菌林)的工程菌林，其中一个或多个起始单位生物合成基因已^皮缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于安莎霉素生产菌林的工程菌株，其中一个或多个后PKS基因已被缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于安莎霉素生产菌林的工程菌林，其中^/附M已^皮缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于安莎霉素生产菌株的工程菌林，其中同源物和任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。在本发明的一个实施方案中，宿主菌林为格尔德霉素生产菌林。在可选的实施方案中，宿主菌林为基于格尔德霉素生产菌林的工程菌株，其中一个或多个起始单位生物合成基因已被缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于格尔德霉素生产菌抹的工程菌林，其中一个或多个后PKS基因已被缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于格尔德霉素生产菌株的工程菌抹，其中已被缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于格尔德霉素生产菌林的工程菌抹，其中g"附M和任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于格尔德霉素生产菌林的工程菌株，其中一个或多个后PKS基因已被缺失或失活，随后重新引入后PKS基因以实现特异的后PKS修饰。可以利用来自格尔德霉素簇或另外的安莎霉素簇例如但不限于大贝菌素或除草霉素簇的后PKS基因。在另一实施方案中，宿主菌林为除草霉素(如除草霉素A、B或C)生产菌林。在另一实施方案中，宿主菌林为自溶霉素生产菌林。在另一实施方案中，宿主菌林为利布拉霉素产菌林。在另一实施方案中，宿主菌林为基于除草霉素生产菌林的工程菌林，其中同源物已被缺失或失活。在另一实施方案中，宿主菌林为基于格尔德霉素生产菌抹的工程菌林，其中^/附M同源物和任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。例如，可-皮缺失或失活的起始单位生物合成基因包括格尔德霉素生产菌抹吸水链霉菌AM3602(参见Rascher等2005)之ahba-B簇中称为57ahba-3、ahba-lc、ahba-4、ahba-b、ahba-la、ahba-lb的基因，或者大贝菌素生产菌抹珍贵束丝放线菌ATCC31280(参见表3)中的PH、OX、Ahs、Adh和AHk基因，以及其他菌林中具有相似功能的那些同源物。例如，格尔德霉素生产菌林吸水链霉菌AM3602之ahba-B簇中的所有基因均可被缺失或失活。前述的种种缺失可以进行组合，例如，宿主菌林可以是基于安莎霉素生产菌抹(如格尔德霉素或除草霉素生产菌抹)的工程菌林，其中^/附M或其同源物和一个或多个起始单位生物合成基因以及任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。适宜地选择性地缺失或失活所述一个或多个起始单位生物合成基因或后PKS基因。在另一实施方案中，通过在基因中整合DNA从而不生产功能蛋白质而使所述工程菌林中的一个或多个起始单位生物合成基因或后PKS基因失活。在可选的实施方案中，通过一处或多处寻革巴缺失而对所述工程菌抹中的一个或多个所述起始单位生物合成基因或后PKS基因进行缺失。在另一实施方案中，通过定点诱变而使所述工程菌林中的一个或多个起始单位生物合成基因或后PKS基因失活。在另一实施方案中，对格尔德霉素生产宿主菌林进行化学或紫外诱变，并选择其中一个或多个起始单位生物合成酶或后PKS酶无功能的修饰菌林。本发明也嚢括对控制一个或多个后PKS基因表达的调控因子进行突变，本领域技术人员将会理解调控因子的缺失或失活可以与所述基因的缺失或失活具有相同的结果。后PKS基因可在合适的启动子下被引入所述宿主细胞中。在优选的实施方案中，可以将一个或多个所述缺失的基因引入到链霉菌噬菌体phiBTl(Gregory等，2003)的染色体嗟菌体附着位点(chromosomalphageattachmentsite)。本领域才支术人员将会理解，反式互补作用并不局限于此噬菌体附着位点，或者并不真正局限于附着位点的使用。因此，还可以通过但不限于例如利用pSET152(Bierman等，1992)衍生物，将一个或多个辅助基因在合适的启动子下引入到其他噬菌体附着位点，例如链霉菌噬菌体phiC31的附着位点，实现对缺失的辅助基因的互补。本领域技术人员将会意识到，有更多早已公知的噬菌体，且预期有更多的噬菌体可以含有整合功能，该功能能够与适宜的启动子一起转移给递送载体，从而产生能够用于将基因引入宿主菌林的其它系统(Smovkina等，1990，Matsuura等，1996，VanMellaert等，1998,Lee等，1991)。随着更多的噬菌体得以表征，人们预期将会有更多可利用的整合酶，可以类似地进行使用。通过但不限于同源重组至染色体的中性位置、同源重组至染色体的非中性位置(例如破坏所选的基因)，也能够实现在合适启动子下的后PKS基因的引入。也可使用自主复制型栽体，例如但不限于含有来自pSG5(如pKC1139，Bierman等，1992)、pIJ101(如pIJ487，Kieser等，2000)和SCP2*(如pIJ698，Kieser等，2000)的链霉菌复制起点的栽体。在另一实施方案中，在一个或多个后PKS基因如上述已,皮缺失或失活的工程菌抹中，重新引入了一个或多个相同的后PKS基因或其来自另一可选格尔德霉素生产菌林的同源物。在另一实施方案中，一个或多个基因已被缺失或失活的工程菌林通过来自异源PKS簇l包括但不限于指导利福霉素(rifamycin)、柄型菌素(ansamitocin)、大贝菌素或除草霉素生物合成的蔟的一个或多个后PKS基因互补。选择性地缺失或失活后PKS基因的方法包括(i)设计基于目的基因序列的特异性寡聚物，利用PCR从适宜的格尔德霉素生产菌株中分离目的基因的内部片段；(ii)将含有此片段的质粒整合到相同或不同的格尔德霉素生产菌林中，接着进行同源重组，导致破坏粑基因；(iii)在适于生产安莎霉素类似物的条件下培养这样产生的菌林。本领域技术人员将会理解，利用上述方法的替代方法可以获得等同的菌才朱，例如■可以设计基于目的基因同源物的简并寡聚物(例如来自利福霉素、大贝菌素或除草霉素生物合成簇和/或其他可利用序列)，并利用PCR从适宜的格尔德霉素生产菌林中分离目的基因的内部片段。可以设计不同的简并寡聚物，以成功扩增格尔德霉素生产菌或其同源物生产菌抹的后PKS基因或该基因的同源物的合适区域。,可以利用吸水链霉菌格尔德亚种NRRL3602菌林的基因序列产生可以特异于吸水链霉菌格尔德亚种NRRL3602基因的寡聚物，然后可以从任何格尔德霉素生产菌林例如吸水链霉菌格尔德亚种NRRL3602或链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌DSM40699中扩增内部片段。國吸水链霉菌格尔德亚种NRRL3602菌林的基因序列可以与同源基因序列(例如来自链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌DSM40699的格尔德霉素生物合成簇)一起用来产生针对吸水链霉菌格尔德亚种NRRL3602基因的简并寡聚物，然后可以从任何格尔德霉素生产菌林例如吸水链霉菌格尔德亚种NRRL3602或链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌DSM40699中扩增内部片段。图2显示了格尔德霉素生物合成簇中后PKS基因的活性。因而本领域技术人员能够鉴定哪些另外的后PKS基因需要进行缺失或失活，以获得生产目的化合物的菌抹。在这些系统中可能观察到，当由于所述方法之一[包括失活或缺失产生了其中一个或多个后PKS基因不再发挥功能的菌林时，可以生产不止一种安莎霉素类似物。本领域技术人员将会理解，这有很多可能的原因。例如，可能存在一个优选的后PKS步骤次序，而除去单个活性将导致所有后续步骤在对于所涉及酶而言非天然的底物上进行。这可能导致中间体在培养液中累积，这是因为针对呈递给后PKS酶的新底物的效率降低，或者是因为可能由于步骤次序已#1改变而不再是剩余酶的底物的支路产物。本领域技术人员将会理解，在混合物中所观察到的化合物比率可以运用生长条件方面的变化进行操纵。本领域技术人员将会理解，在生物合成簇中有些基因是以操纵子的形式组织的，破坏一个基因通常会对同一操纵子中后续基因的表达有影响。当观察到化合物的混合物时，这些化合物能够利用标准技术容易地进60行分离，其中一些技术在如下实施例中予以说明。如本文所述，安莎霉素类似物可以通过许多方法进行筛选，在单个化合物表现出有利特性的情况下，可以改造菌林使之优先生产此化合物。在不可能这样进行的不常见情况下，可以产生中间体，随之对其进行生物转化，以生产期望化合物。本发明提供了新的安莎霉素类似物，其通过培养生产安莎霉素聚酮化合物或其类似物、例如格尔德霉素或其类似物的菌抹，并提供用作起始单位而掺入的酸物料而产生，所述菌林任选地被选择性地缺失或失活一个或多个来自PKS基因簇的后PKS基因。特别地，本发明涉及新的安莎霉素类似物，通过向格尔德霉素生产菌林供给非天然起始单位而生产，任选地与选择性缺失或失活一个或多个来自格尔德霉素PKS基因簇的后PKS基因相组合。另外，还可以重新引入一个或多个来自安莎霉素生物合成簇的后PKS基因。本领域技术人员将会理解，为使基因产物无功能，无需完*失基因，因此如本文所用的术语"缺失的或失活的"涵盖4吏基因产物无功能的任何方法，包括但不限于缺失全部基因、缺失部分基因、靶基因的插入失活、导致基因不表达或虽表达但生产失活蛋白质的定点诱变、导致基因不表达或虽表达但生产失活蛋白质的宿主菌林诱变(例如通过辐射或接触致突变化学品、原生质体融合或转座子诱变)。可选地，活性基因产物的功能可以利用抑制剂进行化学削弱，例如甲基双吡啶丙酮(metapyrone)(别名2-曱基-1，2-二(3-吡咬基-1-丙酮)，EP0627009)和嘧啶醇(ancymidol)为加氧酶抑制剂，这些化合物可以添加到生产介质中以产生类似物。另外，西奈芬净(sinefungin)为曱基转移酶抑制剂，可以类似地加以利用，不过是用于抑制体内甲基转移酶活性(McCammon和Parks,1981)。在可选的实施方案中，可以缺失或失活所有的后PKS基因，然后可以通过互补重新引入一个或多个所述基因(例如，于附着位点(attachmentsite)处，位于自主复制型质粒上，或插入到染色体同源区)。因此，在具体实施方案中，本发明涉及产生安莎霉素类似物(如18,21-二脱氧安莎霉素类似物)的方法，所述方法包括a)提供当在合适条件下培养时生产格尔德霉素的第一宿主菌林；b)任选选择性地缺失或失活所有的后PKS基因；c)向所述菌抹供给非天然起始单位；d)在适宜条件下培养所迷经修饰的宿主菌林，以生产安莎霉素类似物；和e)任选地分离所产生的化合物。在可选的实施方案中，重新引入一个或多个缺失的后PKS基因。在另一实施方案中，重新引入来自不同生产菌林的格尔德霉素簇中的一个或多个后PKS基因。在另一实施方案中，引入选自大贝菌素生物合成簇的一个或多个后PKS基因，重新引入的基因选自包括附Adkf、wAdV,附k户，,m&'MT7、附&'Af72和附&'/^50的组。在另一实施方案中，重新引入选自/w6c/Vf、柳6ciV、m&P、附6cA/T7、附6cA/T2和附6ciV5C的2个或更多个后PKS基因。在另一实施方案中，重新引入选自w办cAT、附6dV、附6cP、附力c'yVf77、附&A/T2和附6c/M50的3个或更多个后PKS基因。在另一实施方案中，重新引入选自附6cM、附&'7V、附&尸、附&'A/T7、附6cM77和附6c/^/50的4个或更多个后PKS基因。在另一可选的实施方案中，重新引入选自/w/j('A/,附/jcA^、柳Ac户、附kAf77、附AcA/T2和柳k/V50的5个或更多个后PKS基因。另夕卜，对本领域技术人员显而易见的是，可以缺失或失活一个后PKS基因亚组，且任选地可以重新引入一个所述后PKS基因的更小亚组，以得到当供给非天然起始单位时生产安莎霉素类似物如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物的菌林。因此，在优选的实施方案中，本发明涉及产生安莎霉素类似物(如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物)的方法，所述方法包括a)提供当在合适条件下培养时生产格尔德霉素的第一宿主菌林；b)选择性地缺失或失活^/wM;c)向所述菌林供给非天然起始单位；d)在适宜条件下培养所述经修饰的宿主菌林，以生产安莎霉素类似物(如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物)；和e)任选地分离所产生的化合物。在另一优选的实施方案中，本发明涉及产生安莎霉素类似物(如18,21-二脱氧-安莎霉素类似物)的方法，所述方法包括a)提供当在合适条件下培养时生产格尔德霉素的第一宿主菌抹；b)选择性地缺失或失活gJmAf;c)任选地选择性缺失或失活其它后PKS基因；(1)向所述菌抹供给非天然起始单位；e)在适宜条件下培养所述经修饰的宿主菌林，以生产安莎霉素类似物(如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物)；和f)任选地分离所产生的化合物。本领域^L术人员众所周知，聚酮化合物基因簇可以在异源宿主中进行表达(Pfeifer和Khosla，2001)。相应地，本发明包括安莎霉素聚酮化合物生物合成簇、例如格尔德霉素生物合成基因簇带或不带抗性及调控基因，或完整的或含有缺失l向异源宿主的转移。可选地，完整的安莎霉素聚酮化合物生物合成簇、例如完整的格尔德霉素生物合成簇可以转移到异源宿主中，带或不带抗性及调控基因，然后可以通过本文描述的方法进行操纵，以缺失或失活一个或多个后PKS基因或起始单位生物合成基因。进行上文所定义的如此大片段DNA转移的方法和载体是本领域众所周知的(Rawlings，2001;Staunton和Weissman,2001)，或在本文所公开的方法中提供。在此上下文中优选的宿主细胞菌林为原核生物，更优选放射菌类或大肠杆菌(Esc/ien'c/1^1还更优选包括但不限于奇迹束丝放线菌(爿"/rt仍j;朋e附fl附/rw附，A附/rw附)、珍贵束丝放线菌珍贵亚种(y4"/"6^/IWe附ft/7,W/asw附s/>s/>./7re,/仍w附，A/7rC/ayw附」、吸水链霉菌、吸水链霉菌物种(5"./y;g/mcop/c船乎)、吸水链霉菌子嚢霉素变种(51./膽mv(。/7/cwsvorr.a5X'o附yc"/c"5")、5^p"附yces^A:w6"^i57's、紫黑链霉菌、天蓝色链霉菌(S&印tomycMcoe/《'cotor)、变铅青链霉菌(5^f印to附j;"s//v,V/"".s)、红色糖多孑包菌(<y"ccAtfra/7o/y5/7ome/j幼r"e")、弗氏链霉菌(S&e/7to附j;ces/md/fle)、除虫链霉菌(S^r/7似附j;ces"ver/mY"/s)、肉桂地链霉菌(5V/^尸to附ycey"Vmfl附owews/5)、龟裂链霉菌(iSy"/7,o附j^esr/附os"51)、白色链霉菌(5Y^/7to/wj;cMfl幼ws)、灰褐链霉菌(A/^/7似附j;c^gn、^/i^c附)、黄色长孢链霉菌(5^印to附j;"s/owg/s/70/Zavws)、委内瑞拉链霉菌(5^^pto附^c^VeWMWe/fl^)、白色链霉菌、小单孢菌属菌种(^//(^0/"0"05/70^5/.)、灰略红'J、单孑包菌(AfZtro附開05/;omgWsfw6,Wfl)、地中海拟无枝酸菌(v4附^c^"^/w^附^/,^,""^)或游动放线菌属菌种(^"'"°/7/做^5/7.)7V卯2-/跌在一个实施方案中，转移完整的生物合成簇。在可选的实施方案中，转移完整的PKS，而不转移任何相关的起始单位生物合成基因和/或后PKS基因。在另一实施方案中，转移完整的格尔德霉素生物合成簇，然后按照本文的说明进行操作。在另一实施方案中，转移完整的PKS，而不转移任何相关的起始单位生物合成基因和/或后PKS基因，并向新宿主中引入选择的后PKS基因，例^口1旦不卩艮于grf附A^、附6c7V、/^附7V、gd附丄和/或附6c尸450。在本发明可选的方面，本发明的安莎霉素类似物可以通过用合适菌林进行生物转化而进一步加工。合适的菌林可以是可得的野生型菌林，例如但不限于奇迹束丝放线菌、珍贵束丝放线菌珍贵亚种、吸水链霉菌、吸水链霉菌物种、紫黑链霉菌。可选地，可以改造合适的菌林，以允许利用特定的后PKS酶[例如但不限于由附&M、附AdV、附&P、柳6dWT7、附&'/^5〃(如本文所定义)、^/附7V、^/附M、^/附l、gd附户(Rascher等，2003)所编码的那些酶，格尔德霉素O-甲基转移酶，hbmN、hbmL、hbmP(Rascher等，2005)，除草霉素O-曱基转移酶和其它的除草霉素单加氧酶，《w附7、"5"附70、"5"附//、"s附72、"5"附/9和(Cassady等，2004，Spiteller等，2003)j进行生物转化。在基因仍有待鉴定或者序列未公开的情况下，通过标准方法获取这样的序列对于本领域技术人员而言是常规的。例如，编码格尔德霉素O-甲基转移酶的基因的序列不在公众域，但本领域技术人员能够生成探针对格尔德霉素生产菌林进行Southern印迹，从而获取该基因以生成生物转化系统，其中探针可以是利用相似O-甲基转移酶生成的异源探针，或可以是根据可得的同源基因通过设计简并引物而生成的同源探针。在具体的实施方案中，菌林可以全部或部分地缺失其一个或多个天然聚酮化合物簇，或以其他方式失活，从而防止由所述天然聚酮化合物簇生产的聚酮化合物。所述工程菌林可以选自例如但不限于奇迹束丝放线菌、珍贵束丝放线菌珍贵亚种、吸水链霉菌、吸水链霉菌物种、吸水链霉菌子嚢霉素变种、5^e/7&附j;wfewA:"Zfl^i^s、紫黑链霉菌、天蓝色链霉菌、变铅青链霉菌、红色糖多孢菌、弗氏链霉菌、除虫链霉菌、肉桂地链霉菌、龟裂链霉菌、白色链霉菌、灰褐链霉菌、黄色长孢链霉菌、委内瑞拉链霉菌、小单孢菌属菌种、灰略红小单孢菌、地中海拟无枝酸菌或游动放线菌属菌种7￥9^-/^。本领域技术人员将会认可，其他安莎霉素聚酮化合物生物合成簇，例如除草霉素、利布拉霉素或TAN簇能够等同地用于产生本发明的化合物利用除草霉素生产菌林f例如但不限于吸水链霉菌AM3672(Rascher等，2005)1，或者生产除草霉素类似物的菌林[例如但不限于工程化的吸水链霉菌AM-3672j，其中一个或多个后PKS基因或起始单位生物合成基因已被失活或缺失，任选地重新引入了一个或多个同源或异源后PKS基因，并供给如本文所述的起始酸。除草霉素PKS簇的序列存储在GenBank(登录号AY947889)(Rascher等，2005)中。在需要的基因不位于此序列中的情况下，通过利用同源或异源探针来定位之，所述探针如本文所述通过利用同源序列设计简并寡聚物而生成。本领域技术人员将会认可，利布拉霉素簇能够等同地用于产生本发明的化合物，其中利用利布拉霉素生产菌林[例如但不限于链霉菌属菌种S6699(Stead等，2000)]，或者生产利布拉霉素类似物的菌林[例如但不限于工程化的链霉菌属菌种S6699j,其中一个或多个后PKS基因或起始单位生物合成基因已被失活或缺失，任选地重新引入了一个或多个同源或异源后PKS基因，并供给如本文所述的起始酸。本领域技术人员将会认可，当适用本发明的方法时，有多种其他生产天然产物的菌林可用于生产本发明的化合物。尽管如上文所述的本发明制备安莎霉素类似物的方法基本上或完全是生物合成法，但并不排除通过包括标准合成化学方法的方法来生产或相与转换安莎霉素类似物。为了能够遗传操纵格尔德霉素PKS基因簇，利用了存储在GenBank(登录号AY179507)中的基因簇序列(Rascher等，2003)。在需要的基因不位于此序列中的情况下，可以通过利用同源或异源探针来定位之，所述探针如本文所述通过利用同源序列设计简并寡聚物而生成。为了利用大贝菌素簇的后PKS基因，对来自珍贵束丝放线菌珍贵亚种的大贝菌素基因簇进行了测序，这在实施例l中予以说明。本领域技术人员将会理解，存在生产大贝菌素的替代菌林，例如但不限于奇迹束丝放线菌。可以如本文所述用于珍贵束丝放线菌珍贵亚种的方法来测序来自这些菌林的大贝菌素PKS基因簇，并利用所述信息生成等同菌抹。本发明更多的方面包括-基于安莎霉素生产菌林(如格尔德霉素或除草霉素(如除草霉素A、B或C)生产菌株)的工程菌抹，其中^ZwAf同源物和任选地其它后PKS基因已被缺失或失活，特别是这样的工程菌林，其中^/wM同源物已被缺失或失活。适宜地所述安莎霉素生产菌林为链霉菌，如吸水链霉菌格尔德亚种1VRRL3602或链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌DSM40699。-基于安莎霉素生产菌林的工程菌林，其中一个或多个引起单元生物合成基因已^皮缺失或失活，例如格尔德霉素生产菌林，例如其中grfmO缺失或失活，或者除草霉素生产菌林，例如其中；^附o缺失或失活。-基于安莎霉素生产菌林(如格尔德霉素或除草霉素生产菌林)的工程菌抹，其中g"wM或其同源物和一个或多个引起单元生物合成基因和任选地其它后PKS基因已被缺失或失活。例如，格尔德霉素生产菌林吸水链霉菌AM3M2之ahba-B蔟中的所有基因(或其他菌林中的同源物)均可被缺66失或失活。或者，格尔德霉素生产菌抹吸水链霉菌AM3602之ahba-B簇中的一些(或其他菌林中的同源物)可被缺失或失活，得到其中AHBA生物合成下降或消除的菌林，这可以通过实验证实当对这样的菌抹供给AHBA时，恢复格尔德霉素或其他安莎霉素的良好生产。-这样的工程菌抹在制备安莎霉素类似物(如18，21-二脱氧-安莎霉素类似物)中的用途。-通过任何上述方法获得或可获得的安莎霉素类似物。本发明化合物的优势在于预期具有一种或多种如下性质与Hsp90紧密结合，与Hsp90的快速结合速率(faston-rateofbinding),良好溶解性、良好稳定性、良好配制性能、良好口服利用度、良好药代动力学性能，包括但不限于低葡糖醛酸化作用，良好细胞吸收，良好脑药代动力学，与红细胞低结合，良好毒理性质，良好肝毒性，良好肾毒性，低副作用和低心脏副作用。实施例培养基1-MAM在1L蒸馏水中<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>于121。C高压灭菌20分钟。培养基2_R6向700mL蒸馏水中添加蔗糖譜g糊精粉10g酪蛋白氨基酸lgMgSO4.7H200.05g*微量元素1mLK2S040.1g琼脂20g*微量元素FeS04.7H20、MnCl2.4H20和ZnS04.7H20各lg/L。于121。C高压灭菌20分钟。灭菌后添加如下无菌溶液(注意谷氨酸过滤除菌)L-谷氨酸单钠盐(O.MM)100mLCaCl2.2H20(0.48M)100mLMOPS(pH7.2)(0.1M)100mL爽承培#濕以迷/,丄CM51为、浙将培养液(lmL)和乙酸乙酯(lmL)剧烈混合15-30分钟，然后离心10分钟。收集0.5mL有机层，蒸发至干，然后重溶于0.25mL甲醇中。丄CM^为、^f才法分析性LCMS是在与BrukerDaltonicsEsquire3000+电喷雾质i普仪|以正和/或负离子模式运行j联用的AgilentHPllOOHPLC系统上利用LCMS方法1进4亍的。LCMS方法1:层才斤在PhenomenexHyperclone冲主(C18BI)S,粒径3nm,150x4.6mm)上完成，利用如下梯度洗脱程序，以流速为1mL/min进行洗脱T=0，10%B;T=2，10%B;T=20,100%B;T=22，100%B;T=22.05，10%B;T=25，10%B。流动相A"K+0.1%甲酸；流动相B二乙腈+0.1。/。曱酸。记录l卯和400nm之间的紫外光谦，取210、254和276nm处的提取层析语(extractedchromatogram)。记录100和1500amu之间的质语。;v慮錄潜7#才法记录NMR语，在BrukerAdvance500分光光度计上298K处对'H和13C而言分别以500MHz和125MHz运行。利用标准Bruker脉冲顺序获取'H-'HCOSY、APT、HMBC和HMQC谱。NMR镨参照运行溶剂中残留质子或标准碳原子的共振。纯化的化合物利用所述的LCMS方法2进行分析。LCMS方法2:层析在PhenomenexHypercloneC18-BDS柱(4.6xl50mm，粒径3,)上完成，利用水+0.1%曱酸乙腈+0.1%甲酸(卯:10)至(0:100)的梯度以1mL/min洗脱20分钟。通过MS于多个波长(210、254和276nm)下对纯度进行评估。所有化合物在所有波长下的纯度大于95%。最后通过检查'H和"CNMR谱来验证纯度。^症话'^參都定在弗莱堡市肿瘤测试有限公司实验胂瘤学研究所的肿瘤测试实验室(OncotestTestingFacility,InstituteforExperimentalOncology,OncotestGmbH,Freiburg),以单层增殖测定法进行化合物对于一组人肿瘤细胞系的抗癌活性的体外评价。所选择的细胞系的特征总结于表1。表l-测试细胞系#细胞系特征1CNXF4謂LCNSCXFHT29结肠癌3LXF1121L肺癌，大细胞癌4MCF-7乳腺癌，NCI标准5MEXF394NL黑色素瘤6DU145前列腺癌-PTEN阳性所述Oncotest细胞系按Roth等(1999)所述由人肿瘤异种移植物建立。供体异种移植物的来源见Fiebig等(1999)说明。其他细胞系获自NCI(DU145,MCF-7)或购自德国布伦瑞克(Braunschweig)的DSMZ。除非另有说明，所有细胞系于37。C在潮湿空气(95。/。空气，5%C02)中在含RPMI1640培养基、10。/。胎牛血清和0.1mg/mL庆大霉素的"即混"培养基中(PAA，C61be，德国)培养。利用改良的碘化丙锭(propidiumiodide)测定法评估测试化合物对人肺瘤细胞系生长的影响(Dengler等，(1995)。简言之，通过胰蛋白酶消化收集指数生长期的细胞，计数并铺在96孔平底微孔板中，细胞密度取决于细胞系(5-10.000存活细胞/孔)。在24小时恢复使细胞重新开始指数生长后，向孔中加入0.01mL培养基(每板6个对照孔)或含有安莎霉素类似物的培养基。每个浓度一式三份进行铺板。化合物以五种浓度使用(100;10;1;0,1和O，OlpM)。在4天连续接触后，将含有或不含测试化合物的细胞培养基替换为0.2mL硪化丙锭(PI)水溶液(7mg/L)。为了测定活细胞的比例，可以冷冻微孔板，对细胞进行透化处理。在解冻微孔板后，用Cytofluor4000微孔板读板仪测量荧光(激发光530nm，发射光620nm),给出与存活细胞总数的直接关系。生长抑制表达为处理/对照x100(%T/C)。实施例1-大贝菌素PKS基因簇的测序利用Kieser等(2000)所述的标准方案从珍贵束丝放线菌(ATCC31280)和奇迹束丝放线菌(DSM43827，ATCC29888)中分离基因组DNA。利用标准方法通过位于剑桥CB21QW网J求场路的剑桥大学生物化学系(BiochemistryDepartment,UniversityofCambridge,TennisCourtRoad,CambridgeCB21QW)的测序实验室进行DNA测序。采用引物BIOSG1045'-GGTCTAGAGGTCAGTGCCCCCGCGTA(CGTCGT-3，(SEQIDNO:l)和BIOSG1055,-GGCATATGCTTGTGCTCGGGCTCAAC-3，(SEQIDNO:2)利用标准才支术扩增了来自吸水链霉菌NRRL3602格尔德霉素生物合成基因簇(序列登录号AY179507)的氨基曱酰基转移酶编码基因^/附见根据厂商的说明利用DIG试剂和非放射性核酸标记和检测试剂盒(罗氏，Roche)进行Southern印迹实验。利用DIG标记的^/附7VDNA片段作为异源探针。利用^Z附iV生成的探针和分离自珍贵束丝^L线菌2112的基因组DNA，在Southern印迹分析中鉴定到大约8kb的EcoRI片段。利用标准方法将所述片段克隆到Litmus28中，并通过菌落杂交鉴定转化林。分离到克隆p3，并对大约7.7kb的插入片段进行了测序。利用五"RI和￡coRIA9acI消化从克隆p3中分离的DNA，分别分离7.7kb左右和大约1.2kb处的条带。按照厂商的方案进行标记反应。按照厂商的说明，利用载体S叩erCos1和GigapackIIIXL包装试剂盒(Stratagene)建立上文所指的两个菌4朱的粘粒文库。这两个文库利用标准方案进行筛选，利用源自克隆p3的7.7kbERI片段的DIG标记片段作为探针。从珍贵束丝放线菌的粘粒文库中鉴定到粘粒52，并递交剑桥大学生物化学系的测序实验室进行序列分析。与此类似，从奇迹束丝放线菌的粘粒文库中鉴定到粘粒43和粘粒46。如Southern印迹分析所示，所有三个粘粒都含有7.7kb的E"RI片段。利用引物BIOSG1245，-CCCGCCCGCGCGAGCGGCGCGTGGCCGCCCGAGGGC-3，(SEQIDNO:3)和BIOSG1255，-GCGTCCTCGCGCAGCCACGCCACCAGCAGCTCCAGC陽3，(SEQIDNO:4)运用标准方案扩增了粘粒43中PKS区大约0.7kbp的片段，克隆，并用作为探针来筛选珍贵束丝放线菌粘粒文库以寻找重叠克隆。还利用粘粒52的序列信息生成了衍生自如下I)NA片段的探针，所述DNA片段利用引物,SGU05，-CCAACCCCGCCGCGTCCCCGGCCGCGCCGAACACG-3，(SEQIDNO:5)和BIOSG1315,-GTCGTCGGCTACGGGCCGGTGGGGCAGCTGCTGT-5，(SEQIDNO:6)以及BIOSG1325，國GTCGGTGGACTGCCCTGCGCCTGATCGCCCTGCGC-3'(SEQIDNO:7)和BIOSG1335，-GGCCGGTGGTGCTGCCCGAGGACGGGGAGCTGCGG-3，(SEQIDNO:8)扩增产生，所述探针用于筛选珍贵束丝放线菌粘粒文库。分离到粘粒311和352,并将粘粒352送交测序。粘津立352与粘粒52含有大约2.7kb的重叠。为筛选更多的粘粒，利用引物BIOSG1365-CACCGCTCGCGGGGGTGGCGCGGCGCACGACGTGGCTGC-3，(SEQIDNO:9)和BIOSG1375，-CCTCCTCGGACAGCGCGATCAGCGCCGCGCACAGCGAG-3，(SEQIDNO:10)，以粘粒311作为模板，运用标准方案，扩增了大约0.6kb的PCR片段。对珍贵束丝放线菌的粘粒文库进行了筛选，并分离到粘粒410。它与粘粒352重叠大约17kb，并送交测序。对三个重叠粘粒(粘粒52、粘粒352和粘粒410)的序列进行了装配。测序区域跨度大约100kbp，筌定到23个开放读框潜在地构成大贝菌素生物合成基因簇。各开放读框在SEQIDNO:11内的定位示于表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>注1:c表示基因由互补DNA链编码；注2:有时候情况是可以鉴定到不止一个潜在的候选起始密码子。本领域技术人员将会意识到这种情况，并能够鉴定替代的可能起始密码子。我们已对具有不止一个可能的起始密码子的那些基因标上了'*，号。我们始终都标出了我们认为的起始密码子，不过，本领域技术人员将会理解，利用替代的起始密码子有可能产生活性蛋白质。1实施例2_产生^/附Af失活菌林如下进行^/附Af的符合读框的缺失2.1克隆与j^/mM上游侧翼区域同源的DNA利用寡聚物gdmlfor(SEQIDNO:12)和gdmlrev(SEQIDNO:13)在标准PCR反应中，以基因组DNA为模板，利用PfuDNA聚合酶，扩增了吸水链霉菌格尔德亚种(NRRL3602)DNA中2268bp的区域。各寡聚物中的5，延伸引入了限制性位点，以辅助克隆扩增的片段。所述PCR产物(PCRgdml)覆盖^/mM上游的同源区域直到包括gdmA/的头两个氨基酸。此2268bp的片段克隆到以S附fll线性化且脱磷酸化的pUC18中，得到pUC18gdml。gdmlforTTAAGCTTGGACCGGCGCGAACTCGCGGACACCCACCTJfind工工工(SEQIDNO:12)幼a工(SEQIDNO:13)质粒pUC18gdml经M/el和5VmzI限制性酶消化鉴定，产生439bp、1687bp和2828bp的三个片段。2.2克隆与ffdmM下游側翼区域同源的DNA利用寡聚物gdm2for(SEQIDNO:14)和gdm2rev(SEQIDNO:15)在标准PCR反应中，以基因组DNA为才莫板，利用PfuDNA聚合酶，扩增了吸水链霉菌格尔德亚种(NRRL3602)DNA中2267bp的区域。各寡聚物中的5，延伸设计为引入限制性位点，以辅助克隆扩增的片段。所扩增的PCR产物(PCRgdm2)覆盖的区域从^/附AT處后两个氨基酸、终止密码子到^/附M下游的同源区域。此2267bp的片段克隆到以S附fll线性化的pUC18中，得到质粒pUC18gdm2。gdm2forTTTCTAGACCTTCGTAAGGCTCCCCTGCCTGGGCATGG劝al(SEQIDNO:14)丑coR工(SEQIDNO:15)质粒pUC18gdm2经yv&I和5"附"I限制性酶消化鉴定，产生440bp、1594bp和2919bp的三个片段。2.3产生用于实现g^iM的符合读框缺失的质粒所述产物PCRgdml和PCRgdm2如下一步克隆到pKC1139中。pKC1139以好/"dl11和￡coRI消化，所产生的骨架片段与//i'"din/A7>aI片段上的PCRgdml以及XMI/五coRI片段上的PCRgdm2在单个的三部分连接反应中进行连接。利用限制性酶消化来验证最终的质粒pKC1139gdmlgdm2。2.4转化吸水链霉菌格尔德亚种(NRRL3602)并选择jgJwM缺失突变抹用pKC1139gdmlgdm2通过电穿孔来转化持有质粒pUZ8002的大肠杆菌ET12567,以产生大肠杆菌供体菌林用于接合(conjugation)。此菌林用于通过标准方法利用接合作用来转化吸水链霉菌格尔德亚种(NRRL3602)(Kieser等(2000)PracticalStreptomycesGenetics)。接合后体铺板于培养基2中，并于28°。孵育。24小时后用50mg/L阿泊拉霉素(apramycin)和25mg/L萘啶酮酸铺覆平板。基于pKC1139的栽体于28°C自主复制，因此转化林预期含有自主复制型质粒pKC1139gdmlgdm2。4-7天后，将菌落斑转接(patch)至含阿泊拉霉素(50mg/L)和萘咬酮酸(25mg/L)的培养基2板中。然后平板在37。C孵育3-4天一一温度升高使基于pKC1139的游离质粒停止复制(其复制子在37。C不发挥功能)，因此用阿泊拉霉素进行继续选择可以筛选出借助同源区域之一整合到染色体中的事件。然后将菌落斑重新转接至含阿泊拉霉素和萘啶酮酸的培养基2板中，并在37。C孵育3-4天，以确保不再有大肠杆菌细胞传代。用于继代重组株的传代培养进一步孵育3-4天后，利用不含抗生素的培养基2板进行传代培养步骤。为此，刮下各菌斑材料，涂布到培养基2琼脂板上，并于37。C孵育，直到良好生长可见，这通常是在第三天。利用相同的技术进行第二、第三和第四传代培养步骤。第四传代培养步骤于28。C进行孵育，以允许孢子形成。当若干天后孢子形成可见时(通常是7-10天)，利用标准技术对孢子悬液进行分离和系列稀释。系列稀释液等分试样铺在培养基l板上，并于28。C进行孵育，直至菌落可见。挑取单个菌落，并平行转接至含有以及不含有阿泊拉霉素的培养基1板上。在无抗生素板上生长、但不在阿泊拉霉素板上生长的菌斑重新转接至+/-阿泊拉霉素板上，以验证抗生素标记的丟失。突变菌林编码失活的GdmM蛋白，其中543个氨基酸以符合读框方式缺失。grf附AT缺失突变抹转接在培养基l中，并于28。C培养四天。来自各菌斑的6mm圆柱状物分别用来接种单个50mLfalcon管，各管含有10mL种子培养基(每升葡萄糖40g,甜菜糖蜜10g，酵母提取物2.5g，蛋白胨2.5g，胰蛋白胨2.5g，燕麦片5g)。这些种子培养物于28。C以300rpm、1英寸的偏心距(throw)孵育36-72小时。这些随之用于接种(0.5mL接种至10mL)生产培养基(与种子培养勤目同)，并于28。C培养6天。提取次生代谢物，并如"通用方法"所述通过LCMS分析格尔德霉素类似物的生产。一个突变抹命名为吸水链霉菌gdmM.,其将生产化合物1，预期与KOS-1806不能区分(Rascher等，2005)。本领域技术人员能够容易地设计可选的^/mAT失活策略，例如通过整合，或通过插入抗性基因而生成破坏突变抹，如Rascher(2005)所公开的那样。实施例3-通过向^/附Af敲除菌林吸水链霉菌gdmM—供给AHBA类似物而产生新的格尔德霉素类似物3.1利用吸水链霉菌gdm!Vr进行生物转化吸水链霉菌gdmM-的产生如上文实施例2所述，将其菌斑转接到MAM板(培养基1)上，并于28。C培养三天。利用6mm圆柱状物分别接种单个的50mLfalcon管，各管含有10mL种子培养基(每升葡萄糖40g,甜菜糖蜜10g，酵母提取物2.5g，蛋白胨2.5g，胰蛋白胨2.5g，燕麦片5g)。这些种子培养物于28。C以300rpm、1英寸的偏心距孵育36-72小时。这些随之用于接种(0.5mL接种至10mL)生产培养基(与种子培养勤目同)，并于28。C培养24小时。向各falcon管中添加0.1mL200mM的物料母液(溶于甲醇-见表4清单)，以得到2mM的终物料浓度。各管于28。C再孵育6天。3.2通过LCMS在培养物提取物中鉴定新的格尔德霉素类似物如"通用方法"所述产生实施例3.1中所述发酵的提取物，并通过LCMS进行测定。在所有情况下，预期观察到的主要安莎霉素类在表4中进行了说明。该表说明了向菌林供给的取代的苯甲酸类似物，主要的LCMS质量，和主要化合物的质量。图3和4显示了预期生产的化合物的结构。表4-通过LCMS鉴定的化合物实验编号供给的AHBA类似物H〇2CNH2生产的化合物1415质量6A155255015026BH〇2C^^^NH216545175186C175435195206D1854351952084<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>实验编号供给的AHBA类似物生产的化合物[M+Na+质量6SH02C^^^^NH2〇H335415175186TOH345595355366UCI〇H355755515526VOH365595355366WfTYc'〇H37575551552本申请述及的包括专利和专利申请在内的所有参考文献在最大可能的程度上并入本文作为参考。在整个说明书和如下权利要求书中，除非上下文另有需求，措辞"包含/包括"('comprise，及其变形如'comprises，和'comprising，)应当理解为，意指内含所述的整体或者步骤或一组整体，但不排除任何其它整体或者步骤或者整体或步骤的组。87参考文献Allen,I.W.和Ritchie,D.A.(1994)克隆和分析来自吸水链霉菌的编码格尔德霉素生物合成的DNA序歹'J.Mol.Gen.Genet.243:593-599.Bagatell，R.和Whitesell，L.(2004)癌症中改变的Hsp卯功能独特的治疗机会.MolecularCancerTherapeutics3:1021-1030.Beliakoff，,J.和Whitesell,L.(2004)Hsp90:乳腺癌治疗的新兴靶标.Anti-CancerDrugs15:651-662.Bierman，M.，Logan,R.，O'Brien,K.,Seno，ET.,NagarajaRao，R.和Schoner，BE.(1992)"用于自大肠杆菌向链霉菌物种接合转移DNA的质粒克隆载体"Gene116:43-49.Blagosklonny，M.V.(2002)Hsp-90-相关癌蛋白格尔德霉素及其类似物的多个靼点.Leukemia16:455-462.Blagosklonny,M.V.,Toretsky，J"Bohen，S.和Neckers，L.(1996)体外或体内翻译的p53的突变体构象需要功能性HSP90.Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8379-8383.Bohen，S.P.(1998)，对p23和安莎霉素抗生素在Hsp卯-依赖性信号传导蛋白的功能中的遗传和生物化学分析.MolCellBiol18:3330-3339.Carreras,C.W,Schirmer,A.，Zhong，Z.和SantiD.V.(2003)用于格尔德霉素-热休克蛋白卯相互作用的过滤结合试验.AnalyticalBiochemistry317:40-46.Cassady，，I旦，Chan,Floss，H.G，和LeistnerE.(2004)maytansinoid抗肺瘤剂的近期发展.Chem.Pharm.Bull,52(1)1-26.Chiosis，G.,Huezo，H.，Rosen,N.，Mimnaugh,E.，Whitesell,J.和Neckers，L.(2003)17AAG:低靶结合亲和性和有力的细胞活性-发现一个解释.MolecularCancerTherapeutics2:123-129.Chiosis,G.,Vilenchik，M"Kim,丄和Solit，D.(2004)，Hsp卯易受攻击的分子4半4吕.DrugDiscoveryToday9:881-888.Csermdy，P.和Soti,C.(2003)，抑制Hsp卯是一种抑制蛋白激酶的特殊途径.Cell.Mol.Biol丄ett.8:514-515.l)eBoer，C和Dietz，A.(1976)，吸水链霉菌格尔德变种的描述和抗生素生产.丄Antibiot.29:1182-1188.I)eBoer，C.,Meulman，P.A.，Wnuk，R丄,和Peterson,D.H.(1970)格尔德霉素，一种新抗生素.丄Antibiot.23:442-447.l)englerW.A.,SchulteJ.，BergerD.P.,MertelsmannR.和FiebigHH.(1995)开发碘化丙锭荧光试验用于增殖和细胞毒性测定.」wri-OmcwZ)rMgs，6:522-532.l)ikalov,s.，Landmesser，U.，Harrison，DG.，2002，格尔德審素导致通过酵促和非酶促氧化还原循环形成超氧化物，TheJournalofBiologicalChemistry,277(28)，pp25480-25485Donz6O.和Picard，D.(1999)Hsp卯结合和调节真核翻译起始因子激酶Gcn2的配体诱导型a亚基.MolCellBiol19:8422-8432.Eg()rinMJ，LagattutaTF，HamburgerDR，CoveyJM,WhiteKD，MusserSM,EisemanJL.(2002)"17-(二甲基tt乙基氨基)-17-脱甲氧基格尔德霉素(NSC707545)在CD2F1小鼠和Fischer344大鼠中的药代动力学、组织分布和代谢."CancerChemotherPharmacol,49(1)，pp7-19.Eustace,B.K.,Sakurai，T.，Stewart,丄K.等(2004)功能性蛋白组学筛选揭示hsp90a在癌细胞侵袭中的重要细胞外作用.NatureCellBiology6:507-514.Fang，Y.,Fliss，A.E.，Rao，丄和CaplanA丄(1998)5^4/编石马与脊推动物p23蛋白同源的酵母Hsp90共分子伴侣.MolCellBiol18:3727-3734.FiebigH.H.，DenglerW.A.和RothT.人肺瘤异种移才直物新抗癌剂的预见、表征和发现.In:FiebigHH,BurgerAM(eds).RelevanceofT證orModelsforAnticancerDrugDevelopment.Owco/.1999，54:29-50.Gregory,M.A.，TillR，和SmithM.C.M.(2003)链霉菌嗟菌体0>BT1的整合位点和定点整合载体的开发./owr""/o/Jfl"enW^y185:5320-5323.(;()etz，M.P.，Toft,D.().,Ames,M.M.和Ehrlich，C.(2003)Hsp卯分子伴倡复合物是癌症治疗的新革巴点.AnnalsofOncology14:1169-1176.Harris,S,F.，ShiauA.K.和AgardD.A.(2004)/i伊G，大肠杆菌Hsp卯，的羧基端二聚化结构域的晶体结构揭示潜在的底物结合位点.Structure12:901087-1097.Hong，Y.-S.，Lee，D.，Kim，W.，Jeong，J.-K.等(2004)失活氨基甲酰基转移酶可以改进抗肿瘤剂格尔德霉素生物合成中后聚酮合酶的修饰步骤.J.Am.Chem,Soc.126:11142-11143.H()stein，I.，Robertson,D.,DiStefano,F.，Workman,P.和Clarke,P,A.(2001)通过Hsp90抑制剂17-埽丙基氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素抑制信号转导导致细胞生长抑制和细胞凋亡.CancerResearch61:4003-4009.Hu，Z.，Liu，Y.,Tian，Z,Q.，Ma，W"Starks，C.M,等(2004)分离和表征新的格尔德霉素类似物.丄Andbiot.57:421-428.Hur，E.，Kim,H.-H.，Choi，S.M.等(2002)通过利用90kDa热休克蛋白抑制剂radicicol阻抑低氧诱导型因子la/芳基烃受体核易位物的DNA结合来减少低氧诱导的转录.MolecularPharmacology62:975-982.lwaiY，Nakagawa,A.,Sadakane，N.，Omura,S.，Oiwa，H.，Matsumoto，S,，Takahashi,M.，Ikai，T.，Ochiai，Y.(1980)除草霉素B，一种具有抗TMV活性和除草剂活性的新苯琨型安莎霉素.TheJournalofAntibiotics,33(10).ppiii4-ni9.,Jez，雄.，Chen,J.C.國H.，Rastelli,G.，St削d，R.M.和Santi，D.V.(2003)17-DMAG与人Hsp90的复合物的晶体结构和分子模建.ChemistryandBiology10:361-368.Kaur，G.，Belotti，1)，Burger,A.M.,Fisher-Nielson，K.，Borsotti，P.等(2004)17-(二曱基氨基乙基氨基)-17-脱甲氧基格尔德霉素的抗血管生成性质口月良的可生物利用热休克蛋白90调节剂.ClinicalCancerResearch10:4813-4821.Kieser，T.,Bibb,M丄，Buttner，M.J"Chater，K.F"和Hopwood，D.A.(2000)实践链霉菌遗传学(PracticalStreptomycesGenetics),JohnlimesFoundation,NorwichKumar,R.，Musiyenko，A.和BarikS.(2003)Plasmodiumfalciparum的热休克蛋白卯和其抑制剂格尔德霉素的抗疟疾活性.JMalar2:30.Kurebayashi,J.，Otsuke，T.，Kurosumi,M.，Soga，S.，Akinaga，S.和Sonoo，H.(2001)radicicol衍生物，KF58333，抑制人乳腺癌异种移植物的低氧诱导型因子la和内皮生长因子的表达、血管发生和生长.Jpn.丄CancerRes.92:1342-1351.LcBrazidec，丄-Y.，Kamal,A"Busch,D.，Thao,L.，Zhang,L.等(2003)—类作为hsp90的有效抑制剂的新格尔德霉素衍生物的合成和生物学评价，丄Med.Chem.47:3865-3873.LeeMH，PascopellaL，JacobsWRJr，HatfullGF.(1991)，分斗支杆菌嗟菌体L5的定点整合用于耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌和卡介苗的整合载体./W淘/颠""'(7SA;88:3111-5.Lee，Y.-S.，Marcu，M.G.和Neckers，L.(2004)量子化学计算和突变分析提示热休克蛋白卯催化-格尔德霉素的顺反异构化.Chem.Biol.11:991-998，Liu，X,I).，Mor謹，K.A.和ThieleD丄(1999);酵母Hspl10家族成员，Ssel，是Hsp卯的共分子伴倡.JBiolChem274:26654-26660.Mandler,R.，Wu，C.，SausviHe，E.A.，Roettinger,A.J"Newman,D丄，Ho,D.K.,King,R.，Yang,D.，Lippman，M.E.，Landolfi,N.F.，Dadachova，E.，Brechbiel，M.W.和Waldman，T.A.(2000)格尔德霉素和抗HER2单克隆抗体的免疫缀合物对人乳腺癌细胞系的抗增殖活性.JournaloftheNationalCancerInstitute92:1573-1581.Matsushima，P.，M.C.Broughton等(1994).粘粒DNA自大肠杆菌向刺糖多孢菌的接合转移染色体插入对大环内酯A83543生产的影响.Gene146(1):39-45.Matsuura，M.，Noguchi,T.，Yamaguchi，D.,Aida,T.，Asayama，M.,Takahashi，H.和Shirai，M.(1996).Sre基因(ORF469)编码负责R4噬菌体基因组整合的位点特异性重组酶./Bfl".178(ll):3374-3376.McLaughlinS.H.，Smith,H.W.和JacksonS.E.(2002)客户蛋白对人hsp90的弱ATPase活性的刺激.J.Mol.Biol.315:787-798.McCammon，M.T.和L.W.Parks(1981).S-腺苷高半胱氨酸类俗物对类固醇转甲基4匕作用的抑制.JBacteriol145(1):106-12.MuroiM，IzawaM，KosaiY，AsaiM.(1981)"大贝菌素I和II的结构"Tetrahedron,37,ppl123-1130.Muroi，M.，IzawaM.，Kosai，Y.，和Asai，M.(1980)大贝菌素I和II，新的抗肿瘤抗生素.II.分离和表征.JAntibiotics33:205-212.Neckers,L(2003)开发小分子Hsp卯抑制剂利用正向和反向化学基因组93学用于药物鉴定.CurrentMedicinalChemistry9:733-739.Neckers,L.(2002)Hsp卯抑制剂作为新的癌症化疗剂.TrendsinMolecularMedicine8:S55-S61.Nimmanapalli，R.，O，Bryan，E.，Kuhn，D.，Yamaguchi，H.，Wang,H.-G.和Bhalla，K.N.(2003)对17-AAG-诱导的细胞凋亡的调节位于17-AAG-介导的Akt，Raf-l，和Src激酶下调之下游的Bcl-2，Bcl-x"和Bax的作用.Neoplasia102:269-275.Omura，S.，Iwai，Y.，Takahashi,Y.，Sadakane，N.,Nakagawa，A.，Oiwa，H.，Hasegawa，Y.,Ikai，T.，(1979)，除草霉素，由链霉菌产生的一种新的抗生素，TheJournalofAntibiotics,32(4)，pp255-261.Omura，S.，Miyano，K.，Nakagawa，A.，Sano，H.,Komiyama，K.,Umezawa，1"Shibata,K，Satsumabayashi,S.，(1984)，"除草霉素A的化学修饰和抗肿瘤活性，8，9-环氧化物，7，9-氨基甲酸酯，和17或19-氨基衍生物".TheJournalofAntibiotics,37(10)，ppl264-1267.()no，Y.,Kozai，Y.和Ootsu,K.(1982)新分离的苯型安莎霉素大贝菌素I的抗肺瘤和杀细胞活性，Gann.73:938-44.Patel，K.，M.Piagentini，Rascher,A.，Tian，Z.Q.，Buchanan,G.O.，Regentin，R.,Hu，Z"Hutchinson,C.R.和McDaniel，R.(2004).'，用于hsp卯抑制的4^尔德霉素类似物的工程化生物合成."ChemBiol11(12):1625-33.Pfeifer，B.A.和C.Khosla(2001)."在异源宿主中生物合成聚酮化合物"MicrobiologyandMolecularBiologyReviews65(1》106-118.Rascher，A.，Hu，Z.，Viswanathan，N.，Schirmer，A.等(2003)克隆和表征用于吸水链霉菌NRRL3602中格尔德霉素产生的基因簇.FEMSMicrobiologyLetters218:223-230.Rascher,A.，Z.Hu,Buchanan,G.O.,Reid，R.和Hutchinson,C.R.(2005).通过基因测序和破坏获得的对苯琨型安莎霉素格尔德霉素和除草霉素生物合成的i人识.ApplEnvironMicrobiol71(8):4862-71.Rawlings，B.丄(2001)."细菌中I型聚酮化合物的生物合成(部分B)."NaturalProductR印orts18(3):231-281.RothT,BurgerA.M.,DenglerW.，WillmannH.和FiebigH.H.表现出患者胂瘤特征的人肿瘤细胞系是用于抗癌药物筛选的有用模型.In:FiebigHH，BurgerAM(eds).肿瘤才莫型对于抗癌药物开发的适用性.1999，54:145-156,Rowlands,M.G.，Newbatt，Y.M.,Prodromou,C.，Pearl,LH.，Workman,P.和Aherne，W.(2004)用于寻找热休克蛋白90ATPase活性的抑制剂的高通量筛选试验.AnalyticalBiochemistry327:176-183Schulte,T.W.，Akinaga,S.，Murakata,T.，Agatsuma，T.等(1999)radicicol与分子伴侣热休克蛋白90家族成员的相互作用.MolecularEndocrinology13:1435-1488.Shibata,K.,Satsumabayashi，S.，Nakagawa，A"Omura，S.(1986a)除草霉素C的结构和杀细胞活性.TheJournalofAntibiotics,39(11)，ppl630-1633.Shibata,K.，Satsumabayashi，S.，Sano，H.，Komiyama,K.，Nakagawa,A.，()mura，S.(1986b)对除草霉素A的化学修饰除草霉素A的卣化的和其它相关的f厅生物的合成和体内抗肿瘤活性.TheJournalofAntibiotics,39(3)，pp415-423.Shirling,E.B.和Gottlieb,D.(1966)国际系统细菌学杂志(InternationalJournalofSystematicBacteriology)16:313-340Smith-Jones,P.M.,Solit，D.B.，Akhurst，T.，Afroze，F.，Rosen,N.和Larson,S.M.(2004)成^f象分析响应于Hsp90抑制剂的HER2降解的药代动力学.NatureBiotechnology22:701-706.Smovkina,T.，Mazodier,P.，Boccard，F.，Thompson,C.J.和Guerineau，M.(19卯)构建一系列用于i文线菌的基于pSAM2的整合载体.Gewe94:53-59.Spiteller，P"Bai，L"Shang，G"Carroll,B.J"Yu，T,W.和Floss,H.G.(2003).在珍贵束丝放线菌生物合成抗肿瘤剂ansamitocin的过程中后聚酮合酶修饰步骤.JAmChemSoc125(47):14236-7SreedharA.S.,Nardai,G.和Csermely,P.(2004)增强补体诱导的细胞裂解Hsp卯抑制剂的抗癌作用的新才凡制.Immunologyletters92:157-161.Srcedhar,A.S.，S6ti,C.和Csermely,P.(2004a)Hsp90的抑制:抑制蛋白激酶的一种新策略，BiochimicaBiophysicaActa1697:233-242.Staunton,J.和K.丄Weissman(2001)."聚酮生物合成千年回顾."96NaturalProductReports18(4):380-416.Stead,P.，Latif，S.，Blackaby，A.P.等(2000)在基于细胞的制癌蛋白M信号传导试验中开发具有有利的抑制活性的新安莎霉素JAntibiotics53:657-663.Supko,丄G.，Hickman,R丄.，Grever，M.R.和Malspeis，L(1995)格尔德霉素作为抗胂瘤剂的临床前药理学评价.CancerChemother.Pharmacol.36:305-315.Takahashi，A.,Casais，C.，IchimuraK.和Shirasu，K.(2003)拟南芥属才直物中HSP卯与RAR1和SGTl相互作用且是RPS2-介导的疾病抗性所必需的.Proc.Natl.Acad.Sci.USA20:11777-11782.Tanida，S.，Hasegawa，T.和HigashideE.(1980)大贝菌素I和II，新的抗肝瘤抗生素，1.生产生物、发酵和抗孩l生物活性.JAntibiotics33:199-204.Tian，Z.-Q.，Liu，Y"Zhang，D.,Wang,Z.等(2004)新17-氨基格尔德霉素衍生物的合成和生物学活性.BioorganicandMedicinalChemistry12:5317-5329.Uehara，Y.(2003)Hsp90抑制剂的天然产物源.CurrentCancerDrugTargets3:325-330.VanMellaert,L.，Mei,L，Lammertyn，E.，Schacht,S.，和Ann6，J.(1998)噬菌体VWB基因组在委内瑞拉链霉菌中的位点特异性整合和基于VWB的整合栽体的构建.MZcrW^/ogy144:3351-3358.Vasilevskaya，I.A.，Rakitina，T.V.和O，Dwyer，P.J.(2003)格尔德霉素及其17-烯丙基氨基-17-脱甲氧基类似物拮抗顺铂在人结肠腺癌细胞中的作用差异caspase激活是相互作用的基J出.CancerResearch63:3241-3246.Watanabe，K.，Okuda,T.，Yokose,K.，Furumai，T.和Mamyama，H.H.(1982)奇异束丝i文线菌，nocardicin抗生素的新生产者.丄Antibiot.3:321-324.Weber，丄M.，Losick，R.(1988)使用染色体整合载体对红色糖多孢菌中的红霉素抗性和生产基因作图G^we68(2)，173-180Wegek，H.，Miiller，L.和Buchner，丄(2004)Hsp70和Hsp卯-蛋白质折叠的接力队.RevPhysiolBioehemPharmacol151:1-44.Wenzd，S.C.，Gross,F，Zhang,Y.，Fu，J"Stewart,A.F.和Miiller，R(2005)通过Red/ET重组在假单胞菌中异源表达粘细菌天然产物装配线.Chemistry&Biology12:249-356.Whitesell，L.，Mimnaugh，E.G.,DeCosta,B.，Myers,C.E.和Neckers，L.M.(1994)通过苯琨安莎霉素抑制热休克蛋白HSP卯-pp6(T『杂种蛋白复合物形成应激蛋白在致癌转化中的重要作用.Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:8324-8328.Winklhofer,K.F"Heller,U.，Reintjes,A.和TatzeltJ.(2003)抑制复杂糖基化可以增加PrP"形成.Traffic4:313-322.WorkmanP.(2003)稽核Hsp90分子伴侣抑制剂的药理学帐簿拆解药代动力学和药效学之间的关系.MolecularCancerTherapeutics2:131-138.Workman,P.和Kaye，S.B.(2002)基础癌研究向新癌症疗法的转化.TrendsinMolecularMedicine8:S1-S9.Young,丄C.;Moarefi,I.和Hartl，U.(2001)Hsp90:—种专化但必需的蛋白4斤叠工具.丄Cell.Biol.154:267-273.权利要求1.式(I)的化合物或其可药用盐其中R1代表H、OH、OMe；R2代表H或Me；R3代表H或CONH2；R4和R5或者均代表H，或者它们一起代表键(即C4至C5之间为双键)；R6代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或NR10aR11a；R7代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或NR10bR11b；R8代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或NR10cR11c；R9代表H、F、OH、OMe、Br、Cl、CF3、CH3、SH、CH2CH3或NR10dR11d；R10a、R11a、R10b、R11b、R10c、R11c、R10d、R11d独立地代表H、CH3或CH2CH3；但是，前提是(i)当R6代表H，R7代表OH，而R8代表OH时，则R9不代表H；(ii)当R7代表OH，R8代表H，而R9代表H时，则R6不代表H、OH或OMe；和(iii)当R7代表OMe，R8代表H，而R9代表H时，则R6不代表OMe。2.根据权利要求l的化合物，其中(iv)当R6代表H、OH或OMe，R代表H，而Rs代表H时，则R9不^R表OH、C1或NH2;和(v)当R6代表H、OH或OMe，Rs代表H，而R9代表H时，则R7不代表NH2。3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中(vi)当R6代表H或OH时，则R7、Rs和R9不都代表H。4.根据权利要求l的化合物，其为式(IA)的化合物或其可药用盐其中R,代表H、()H、OMe;R2代表H或Me;R3代表H或CONH2;R4和Rs或者均代表H，或者它们一起代表键(即C4至C5之间为双键);R6代表H、OH、OMe或F;R;代表H或F;R8代表H或F;R9代表H。5.根据权利要求l-4中任一项的化合物，其中R,代表H。6.根据权利要求1-4中任一项的化合物，其中R，代表OH。7.根据权利要求1-6中任一项的化合物，其中R2代表H。8.根据权利要求1-7中任一项的化合物，其中R3代表CONH2。9.根据权利要求1-8中任一项的化合物，其中R4和Rs—起代表键。10.根据权利要求1-8中任一项的化合物，其中R4和Rs各自代表H。11.根据权利要求1-10中任一项的化合物，其中R^、Rz和Rs不都代表H。12.根据权利要求1-10中任一项的化合物，其中R6、R7和Rs均代表H。13.根据权利要求1-11中任一项的化合物，其中当R,代表H，议2代表H，R;5代表C()NH2，R4和Rs代表H,R6代表H，而R"、表H时，则1^不代表H。14.根据权利要求1-4中任一项的化合物，其中！^代表H,R2代表H，R3代表CONH"而R4和Rs各自代表H。15.根据权利要求l-4中任一项的化合物，其中R，代表OH,&代表H，R3代表CONH2，而R4和Rs各自代表H。16.根据权利要求1-10中任一项的化合物，其中R6代表H或F。17.根据权利要求1-10和16中任一项的化合物，其中R;代表H或F。18.根据权利要求1-10和16中任一项的化合物，其中R7代表OH。19.根据权利要求1-10和16-18中任一项的化合物，其中Rs代表H或F。20.根据权利要求1-10和16-19中任一项的化合物，其中R9代表H。21.根据权利要求1-10和16-20中任一项的化合物，其中R,oa、Rna、Riob、Riib、Rioc、'Ruc、Riod、R"d代表H。22.根据权利要求1-4中任一项的化合物，其中R，代表H，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H，而Re代表OH。23.根据权利要求4的化合物，其中R代表H，R2代表H，议3代表C()NH2，R4、R5、R^、R7和Rs各自代表H。24.根据权利要求4的化合物，其中R,代表H，R2代表H，&代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表OH，而R7和Rs各自代表H。25.根据权利要求4的化合物，其中R,代表H,R2代表H，！^代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表F,而R7和Rs各自代表H。26.根据权利要求4的化合物，其中R，代表OH，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H,R6代表F,而R7和Rs各自代表H。27.根据权利要求4的化合物，其中R代表H，R2代表H，R3代表CONH2，R4和Rs各自代表H,R6代表H，R7代表F，而Rs代表H。28.根据权利要求4的化合物，其中R,代表H,&代表H，R;代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6代表OH，R7代表F,而Rs代表H。29.根据权利要求4的化合物，其中R，代表OH，R2代表H，&代表CONH2，R4和Rs各自代表H,R6代表H，R/代表F，而Rs代表H。30.根据权利要求4的化合物，其中R,代表H，R2代表H，&代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6和R7各自代表F，而Rs代表H。31.根据权利要求4的化合物，其中R,代表OH，R2代表H，&代表C()NH2，R4和Rs各自代表H，R6和R7各自代表F,而Rs代表H。32.根据权利要求4的化合物，其中R,代表H，R2代表H，议3代表C()NH2，R4和Rs各自代表H,R6、R7和Rs各自代表F。33.根据权利要求4的化合物，其为如下化合物或其可药用盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>34.根据权利要求4的化合物，其选自如下的化合物和其任一个的可药用盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>35.<image>imageseeoriginaldocumentpage12</image>36.<image>imageseeoriginaldocumentpage12</image>37.根据权利要求1的化合物，选自如图4所示的化合物28、29、30、31、32、36和37及其任一个的可药用盐。38.制备安莎霉素类似物的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产安莎霉素或其类似物的菌林；b)向所述菌林供给并非AHBA的起始单位，以便所述起始单位掺入到所述安莎霉素类似物中；c)在适宜条件下培养所述菌林，进行安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。39.根据权利要求38的方法，其中步骤(b)中供给的起始单位不是3-氨基苯甲酸。40.根据权利要求38或39的方法，其中步骤(b)中供给的起始单位不是3，5-二氨基苯甲酸、3-氨基-4-羟基苯曱酸或3-氨基-4-氯苯甲酸。41.根据权利要求38至权利要求40中任一项的方法，其中a)中菌抹的特征在于一个或多个AHBA生物合成基因已被缺失或失活。42.根据权利要求38至权利要求40中任一项的方法，其中突变a)中的菌4朱以降〗氐AHBA生物合成效率。43.根据权利要求38-40或权利要求42中任一项的方法，其中步骤c)的条件使AHBA生物合成效率为亚最佳水平。44.根据权利要求43的方法，其中菌林以仍然允许掺入供给的非天然起始单位的水平生产AHBA。45.根据权利要求44的方法，其中掺入的供给的非天然起始单位的量大于起始单位总掺入量的20%,优选大于50%。46.根据权利要求38-45中任一项的方法，其中起始单位选自如下化合物或其酸部分进行衍生化的类似物其中R6、R7、Rs和R9如^又利要求1-37中任一项所定义。47.根据权利要求46的方法，其中R6、R7、Rs和R9不都代表H。48.根据权利要求46的方法，其中R。R7、Rs和R9均代表H。49.根据权利要求38-48中任一项的方法，其中菌抹为安莎霉素生产菌抹，且选择起始单位，从而菌林生产18，21-二脱氧-安莎霉素类似物。50.根据权利要求49的方法，其中选择起始单位，从而菌林生产任选被氟取代的18,21-二脱氧-安莎霉素类似物。51.根据权利要求50的方法，其中选择起始单位，从而菌林生产被氟取代的18，21-二脱氧-安莎霉素类似物。52.根据权利要求49-51中任一项的方法，其中菌林为安莎霉素生产菌株，且选择起始单位，从而菌林生产苯环的18或21位不被取代的安莎霉素类似物。53.根据权利要求38-52中任一项的方法，所述方法(i)还包括对步骤(d)的产物进行化学修饰或生物转化的步骤，任选地之后分离所得化合物的步骤；或者(ii)还包括在步骤(d)之前对步骤(c)的产物进行化学修饰或生物转化的步骤。54.产生安莎霉素类似物的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产安莎霉素或其类似物的第一宿主菌林，其中任选地已缺失或失活一个或多个后PKS基因，和/或已缺失或失活一个或多个起始单位生物合成基因；b)向所述菌林供给非天然起始单位；c)在适宜条件下培养所述经修饰的宿主菌林，进行安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。55.根据权利要求54的方法，其中起始单位不是3，5-二氨基苯曱酸、3-氨基-4-羟基苯甲酸或3-氨基-4-氯苯曱酸。56.根据权利要求54或权利要求55的方法，其中起始单位不是3-氨基苯曱酸。57.根据权利要求38-56中任一项的方法，其中供给的起始单位为起始酸。58.可通过权利要求38-57中任一项的方法获得的安莎霉素类似物。59，药物組合物，包含根据权利要求1-37和58中任一项的安莎霉素类似物或其可药用盐，和一种或多种可药用稀释剂或载体。60.根据权利要求1-37和58中任一项的安莎霉素类似物或其可药用盐，用作为药物。61.根据权利要求1-37和58中任一项的安莎霉素类似物或其可药用盐在制备用于治疗癌症、B细胞恶性病、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病和/或用于预防性预处理癌症的药物中的用途。62.根据权利要求1-37和58中任一项的安莎霉素类似物或其可药用盐用作为药物的用途，所述药物用于治疗癌症、B细胞恶性病、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病和/或用于预防性预处理癌症。63.治疗癌症、B细胞恶性病、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病或预防性预处理癌症的方法，所述方法包括向需要的患者施用有效量的根据权利要求1-37和58中任一项的安莎霉素类似物或其可药用盐。64.根据权利要求1-63中任一项的安莎霉素类似物或其可药用盐、组合物、用途或方法，其中与其他治疗组合施用安莎霉素类似物或其可药用盐。65.根据权利要求64的安莎霉素类似物或其可药用盐、组合物、用途或方法，其中其他治疗从如下组成的组中选择博来霉素、卡培他滨、顺铂、阿糖胞苷、环磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、亚叶酸、甲氨蝶呤、米托蒽醌、包括紫杉醇和多西他赛的紫杉烷类、长春新碱、长春碱和长春瑞滨；激素疗法，阿那曲唑、戈舍瑞林、醋酸曱地孕酮、prenisone、他莫昔芬和托瑞米芬；单克隆抗体疗法，如曲妥珠单抗(抗Her2)、西妥昔单抗(抗EGFR)和贝伐珠单抗(抗VEGF);以及蛋白激酶抑制剂，如伊马替尼、达沙替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、坦罗莫司；蛋白酶体抑制剂，如硼替佐米；组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，如伏林司他；血管生成抑制剂，如舒尼替尼、索拉非尼、来那度胺；放疗和手术。66.生产根据权利要求1-37和58中任一项的18，21-二脱氧-安莎霉素类似物或其可药用盐的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产安莎霉素或其类似物的第一宿主菌株，b)向所述菌林供给非天然起始单位；c)在适宜条件下培养所述宿主菌林，进行18，21-二脱氧-安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。67.根据权利要求66的生产18，21-二脱氧-安莎霉素类似物或其可药用盐的方法，所述方法包括a)提供在合适条件下培养时生产格尔德霉素或其类似物的第一宿主菌抹，b)向所述菌林供给非天然起始单位；c)在适宜条件下培养所述宿主菌林，进行18，21-二脱氧-安莎霉素类似物的生产；和d)任选地分离所产生的化合物。68.根据权利要求66或67的方法，其中所述方法另外包括步骤c)缺失或失活一个或多个起始单位生物合成基因或其同源物，所述步骤通常在步骤c)之前进^f亍。69.根据权利要求66-68中任一项的方法，其中所述方法另外包括步骤f)缺失或失活一个或多个后PKS基因，所述步骤通常在步骤c)之前进行。70.根据权利要求66-69中任一项的方法，其中步骤b)的非天然起始单位为3-氨基苯甲酸。71.根据权利要求66-69中任一项的方法，其中步骤b)的非天然起始单位为5-氨基-2-氟苯甲酸。72.根据权利要求66-69中任一项的方法，其中步骤b)的非天然起始单位为5-氨基-3-氟苯甲酸。73.根据权利要求66-69中任一项的方法，其中步骤b)的非天然起始单位为5-氨基-2，3-二氟苯甲酸。74.根据权利要求66-69中任一项的方法，其中步骤b)的非天然起始单位为5-氨基-2，3，6-三氟苯甲酸。75.根据权利要求66-74中任一项的方法，其中步骤(a)的菌抹为安莎霉素生产菌林。76.根据权利要求75的方法，其中步骤(a)的菌林为格尔德霉素生产菌林。77.根据权利要求75的方法，其中步骤(a)的菌林为除草霉素生产菌林。78.根据权利要求66-77中任一项的方法，其中步骤(a)的菌林为基于安莎霉素生产菌林的工程菌林，其中一个或多个起始单位生物合成基因已被缺失或失活。79.根据权利要求78的方法，其中步骤(a)的菌林为基于格尔德霉素生产菌林的工程菌林，其中一个或多个起始单位生物合成基因已被缺失或失活。80.根据权利要求66-79中任一项的方法，其中步骤(a)的菌株为基于安莎霉素生产菌林的工程菌林，其中一个或多个后PKS基因已被缺失或失活。81.根据权利要求80的方法，其中步骤(a)的菌林为基于格尔德霉素生产菌株的工程菌林，其中一个或多个后PKS基因已被缺失或失活。82.根据权利要求80的方法，其中步骤(a)的菌林为基于除草霉素生产菌林的工程菌林，其中一个或多个后PKS基因已被缺失或失活。83.根据权利要求66-82中任一项的方法，其中步骤(a)的菌林为基于安莎霉素生产菌林的工程菌林，其中^/附M同源物和任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。84.根据权利要求83的方法，其中步骤(a)的菌林为基于格尔德霉素生产菌林的工程菌林，其中^/wM和任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。85.根据权利要求83的方法，其中步骤(a)的菌株为基于除草霉素生产菌抹的工程菌林，其中^/附Af同源物和任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。86.根据权利要求83的方法，其中步骤(a)的菌林为基于安莎霉素生产菌林的工程菌林，其中^/附M同源物已被缺失或失活。87.根据权利要求86的方法，其中步骤(a)的菌抹为基于格尔德霉素生产菌林的工程菌林，其中^/附Af已被缺失或失活。88.根据权利要求86的方法，其中步骤(a)的菌林为基于除草霉素生产菌才朱的工程菌4朱，其中^/附M同源物已被缺失或失活。89.基于安莎霉素生产菌林的工程菌抹，其中^/附Af或其同源物和一个或多个起始单位生物合成基因以及任选地其他后PKS基因已被缺失或失活。90.b根据权利要求89的菌林，其中吸水链霉菌AM3602之ahba-B簇中的所有基因或其他菌林中的同源物已被缺失或失活。91.根据权利要求89或权利要求90的菌抹，其为格尔德霉素生产菌株。92.根据权利要求89或权利要求90的菌林，其为除草霉素生产菌抹。93.根据权利要求91的菌抹，其中^/附0缺失或失活。94.根据权利要求92的菌林，其中M附O缺失或失活。95.根据权利要求89-94中任一项的工程菌林，其中安莎霉素生产菌株为链霉菌。96.根据权利要求95的工程菌林，其中菌林为格尔德霉素生产菌林吸7JC链霉菌格尔德亚种NRRL3602或链霉菌属菌种DSM4137或紫黑链霉菌DSM40699。97.根据权利要求89-96中任一项的工程菌林在制备安莎霉素类似物或其可药用盐中的用途。98.根据权利要求97的工程菌株用途，其中安莎霉素类似物是18,21-二脱氧安莎霉素类似物。99.根据权利要求98的用途，其中18,21-二脱氧安莎霉素类似物由权利要求1-37中4壬一项所定义。全文摘要本发明涉及安莎霉素类似物，其可用于例如癌症、B细胞恶性病、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病及神经变性疾病、有赖于血管生成的疾病、自身免疫疾病的治疗或者癌症的预防性预处理。本发明还提供了生产这些化合物的方法以及它们的医学用途。文档编号C07D225/00GK101578268SQ200780041913公开日2009年11月11日申请日期2007年11月9日优先权日2006年11月9日发明者C·马丁申请人:百奥帝卡技术有限公司