原多甲藻的培养基与培养方法与流程

文档序号:11144713阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种原多甲藻培养基,其特征在于,包括下列重量的组分:

NH4NO3,20-100mg;CO(NH2)2(尿素),20-60mg;KH2PO4,1-10mg;碳酸氢盐,100-800mg;MnCl2·4H2O,15-50g; FeC6H5O7·5H2O(柠檬酸铁),10-30mg;VB12,1×10-5-1×10-3mg;VB1,50-200mg;KCl,0.5-5mg;Na2EDTA 10-15g;壳寡糖0.2-5g(分子量1500-2000Da)海水1000mL。

2.根据权利要求1所述的原多甲藻培养基,其特征在于,包括下列重量的组分:

NH4NO3,30mg;CO(NH2)2(尿素),40mg;KH2PO4,5mg;碳酸氢盐,500mg; MnCl2·4H2O 26g、FeC6H5O7·5H2O(柠檬酸铁) 20g;VB12,1×10-4mg;VB1,100mg;KCl,3mg;Na2EDTA 12.4g,壳寡糖1g(分子量1500-2000Da),海水1000mL。

3.根据权利要求1或2所述的原多甲藻培养基,其特征在于,所述的碳酸氢盐选自碳酸氢钠、

碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢铵中的一种或多种的组合。

4.根据权利要求1或2所述的原多甲藻培养基,其特征在于,所述的碳酸氢盐选自碳酸氢钠。

5.原多甲藻培养基的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

1) 将海水灭菌待用;

2)按照权利要求1中的培养基配方中的顺序和剂量依次加入到灭菌的海水中,加入后再充分搅5分钟,即可接种使用。

6.产毒原多甲藻的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:

第一阶段:三角烧瓶培养;海水为经0.45μm纤维膜过滤后高温灭菌的海水,盐度为30-35;添加培养基组分后,调节pH为7.9±0.3;室内培养,空调控温,20±3℃;日光灯管照明,光强 5000-7000lux,光暗比12h:12h;

用 3000-5000mL 三角烧瓶培养,工作体积占瓶体积的 3/5,取对数生长期藻种接种;接种密度 2×104cell/mL-5×104cell/mL ;每天摇瓶6次;藻细胞密度达2×105cell/mL-3×105cell/mL,转入下一阶段培养;

第二阶段:矿泉水桶培养;使用18L矿泉水桶培养,用次氯酸钠消毒海水的方法消毒矿泉水桶;消毒方法为每立方米海水中加入含有效氯 20 毫克/千克的次氯酸钠,将添加次氯酸钠后的灭菌海水加入矿泉水桶中,充气 30分钟,停气,经 3-5 小时消毒后,用灭菌后的海水润洗3遍,测定无余氯存在即可使用;

海水为经0.45μm纤维膜过滤后灭菌的海水,盐度为30-35,添加8L培养基组分后,瓶口用灭菌封口膜封口;导入气石充含5%二氧化碳的压缩空气保持pH为7.9±0.3,室内培养,空调控温20±3℃,双侧连续光照6000±1000LUX,光照时间15h:9h;接种密度 2×103cell/mL-3×103cell/mL;每隔三天添加5L培养液,培养7-9天,藻液呈棕黄色,收集5L左右培养液;并继续每隔三天添加5L培养液,保持密封,即可循环培养,不断收集。

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