技术领域：
本发明属于植物提取
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，具体涉及橙皮苷的提取方法及其在护肝药物中的应用。
背景技术：
：橙皮苷中文别名：橙皮甙；二氢黄酮甙；陈皮甙；二氢黄酮苷；柑果甙；桔皮甙；橘皮苷；柑果甙。橙皮苷是陈皮的主要活性成分之一，纯品为白色针状晶体，分子式C28H34O15。研究表明，橙皮苷具有抗氧化、抗过敏、抑菌消炎、抗病毒和抗癌，预防心血管病症，降低血压、降低低密度胆固醇等生理功能，具有很高的药用价值。此外，橙皮苷还作为天然氧化剂用于食品和化妆品行业。目前，提取橙皮苷的来源主要包括陈皮和橙皮。提取工艺主要有索氏提取法、碱提酸沉法、微波萃取法和超声提取法。其中索氏提取法具有提取工艺过程简单的优点，但实验反应进度慢，需多次重结晶提取，而且溶剂消耗较大。碱提酸沉法拥有节约经济，工艺简单等优点，但其反应时间较长且容易污染环境，不适合工业化生产。微波萃取法对环境危害较小，然而在微波萃取过程中温度变化不易控制，不太适宜工业化大批量生产。技术实现要素：为了克服现有技术的缺陷，本发明提出了橙皮苷的提取方法，采用多因子正交试验，优化了工艺参数，提高了产率和纯度，并且减少了醇类等化学物质的使用。本发明还公开了上述提取方法获得的橙皮苷在制备护肝药物中的用途。本发明是通过如下技术方案来实现的：橙皮苷的提取方法，其包括如下步骤：步骤1）浸泡、风干以及粉碎，步骤2）保温保压处理，步骤3）氢氧化钙和酶解处理，步骤4）加热、调pH以及收集沉淀，步骤5）吸附、洗脱以及蒸发干燥。具体地，所述提取方法包括如下步骤：步骤1）浸泡、风干以及粉碎：取新鲜无霉变的橙皮，浸泡在蔗糖水溶液中12小时，取出，自然风干，然后粉碎成100目的橙皮粉；步骤2）保温保压处理：将步骤1）所得橙皮粉置于反应釜中，控制反应釜中压强为1.2-1.6MPa，温度为120-130℃，保温保压3-5min，然后取出，冷却至室温；步骤3）氢氧化钙和酶解处理：再添加占步骤1）所得橙皮粉10-15倍重量的浓度为0.6g/L的氢氧化钙水溶液以及占步骤1）所得橙皮粉0.05-0.08wt%的纤维素酶，200rpm搅拌5h，再静置1-2h；步骤4）加热、调pH以及收集沉淀：加热升温至80℃，保温30min，降至室温，同时加入盐酸调pH为5.8，静置10h，过滤，收集沉淀；步骤5）吸附、洗脱以及蒸发干燥：往步骤4）所得沉淀中添加10倍重量的70℃的去离子水，搅拌溶解，大孔树脂吸附，乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸发干燥即得橙皮苷。优选地，所述蔗糖水溶液的浓度为50g/L。优选地，所述纤维素酶的酶活力为20000U/g。本发明还提供了按照上述述的提取方法获得的产品。本发明还提供了上述产品在制备护肝药物中的用途。本发明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下几个方面：本发明采用多因子正交试验，优化了提取工艺，提高了产率和纯度，并且减少了醇类等化学物质的使用，避免了对环境造成影响，节能减排；蔗糖溶液渗透压的作用可以引起细胞快速膨胀，有助于细胞壁破裂；较小的粒径能够提高细胞壁的破碎效率并且提高有效物质的浸出率；本发明通过提高温度和压强，可增加分子扩散的速度，使得细胞壁的受压膨胀变薄，加快细胞壁的破裂，加速有效成分的溶出速度，提高活性组分的提取效率；配合氢氧化钙溶液以及纤维素酶，有效破碎了细胞壁，橙皮苷浸出率大大提高；提高温度可以提高橙皮苷的溶解率，但是会降低氢氧化钙的饱和度，会产生沉淀，本发明避免采用饱和氢氧化钙溶液，从而避免加热产生氢氧化钙沉淀；弱酸条件下可降低橙皮苷的溶解度，配合温度条件变化，提高了产品的沉淀率；通过去离子水重溶以及树脂吸附，有效去除了杂质，提高了橙皮苷的纯度；本发明提取工艺简单可行、环保无污染，其制备的产品纯度高，可应用于制备护肝药物，动物试验提示效果好。具体实施方式为了使本
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的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请具体实施例，对本发明进行更加清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。实施例1橙皮苷的提取方法，其包括如下步骤：取新鲜无霉变的橙皮，浸泡在50g/L的蔗糖水溶液中12小时，取出，自然风干，然后粉碎成100目的橙皮粉，置于反应釜中，控制反应釜中压强为1.2MPa，温度为130℃，保温保压5min，然后取出，冷却至室温，再添加占橙皮粉10倍重量的浓度为0.6g/L的氢氧化钙水溶液以及占橙皮粉0.08wt%的纤维素酶（20000u/g），200rpm搅拌5h，再静置2h；加热升温至80℃，保温30min，降至室温，同时加入盐酸调pH为5.8，静置10h，过滤，收集沉淀，然后添加10倍重量的70℃的去离子水，搅拌溶解，上大孔吸附树脂柱，静置20min后，用50％（v/v）乙醇洗脱，洗脱液流速1.8ml/min，收集洗脱液，蒸发干燥即得橙皮苷。实施例2橙皮苷的提取方法，其包括如下步骤：取新鲜无霉变的橙皮，浸泡在50g/L的蔗糖水溶液中12小时，取出，自然风干，然后粉碎成100目的橙皮粉，置于反应釜中，控制反应釜中压强为1.6MPa，温度为120℃，保温保压3min，然后取出，冷却至室温，再添加占橙皮粉10-15倍重量的浓度为0.6g/L的氢氧化钙水溶液以及占橙皮粉0.05wt%的纤维素酶（20000u/g），200rpm搅拌5h，再静置1h；加热升温至80℃，保温30min，降至室温，同时加入盐酸调pH为5.8，静置10h，过滤，收集沉淀，然后添加10倍重量的70℃的去离子水，搅拌溶解，上大孔吸附树脂柱，静置30min后，用50％（v/v）乙醇洗脱，洗脱液流速1.8ml/min，收集洗脱液，蒸发干燥即得橙皮苷。实施例3本发明实施例1-2提取方法获得产品纯度和得率检测：以赣南脐橙为例，HPLC法测定产品中橙皮苷的纯度以及橙皮苷的收率；橙皮苷的得率的计算：橙皮苷的得率＝（(橙皮苷产品的质量×纯度)/橙皮粉质量）×100％；具体结果见表1：表1指标实施例1实施例2收率%2.962.77纯度%97.998.3实施例4正交试验检测多因子因素对收率的影响：以实施例1为例。一）粒径因素：对照组1采用50目，对照组2采用10目，其余同实施例1；具体结果见表2：表2指标对照组1对照组2收率%2.382.07二）压强温度因素：对照组1采用常压，对照组2采用室温，其余同实施例1；具体结果见表3：表3指标对照组1对照组2收率%1.982.41三）纤维素酶因素：对照组1不采用纤维素酶处理，其余同实施例1；具体结果见表4：表4指标对照组1实施例1收率%2.152.96四）不同碱液因素：对照组1采用氢氧化钠溶液，对照组2采用碳酸钠溶液，其余步骤同实施例1，使用的碱液中溶质的质量相同；具体结果见表5：表5指标对照组1对照组2收率%2.261.81纯度%94.893.4实施例5动物学试验试验动物：昆明小鼠，雄性，22-24g，健康清洁型，饲养一周后进行试验，试验前18小时禁食，自由饮水。随机分为三组，分别为正常对照组、模型对照组、试验组（实施例1提取的橙皮苷产品），每组10只。正常对照组、模型对照组灌胃给予0.05%CMC-Na，试验组给予实施例1产品，剂量均为200mg/kg；末次灌胃两小时后，除正常对照组外，其他均腹部注射D-GalN400mg/kg，禁食18小时后，摘眼球取血，检测ALT、AST含量。具体结果见表6：表6组别空白对照组模型对照组试验组ALT（U/L）77.2±8.6206.5±29.4243.7±31.9AST（U/L）114.9±12.7168.2±20.1195.3±24.5上述数据对本发明的具体实施方式进行了详尽描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。当前第1页1 2 3