本发明涉及nav1.9的靶点(多肽)，特异性识别上述靶点(多肽)的抗体和/或抗体片段，以及包括上述抗体和/或抗体片段的药物组合物，用于治疗疼痛、瘙痒和咳嗽。
背景技术：
：疼痛起源于周围神经系统的伤害感受器，而作为一种游离的神经末梢，广泛分布于全身的皮肤、肌肉、关节和内脏组织中，它可以将感受到热的、机械的或化学刺激转化为动作电位，通过神经纤维传递到其位于背根神经节(dorsalrootganglia,drg)的胞体部分，最终传递到高级神经中枢，从而引起痛觉。而神经元中动作电位的产生和传导又依赖于位于细胞膜上的电压门控钠离子通道(voltage-gatedsodiumchannels,vgscs)。当细胞膜去极化时，钠离子通道激活，通道打开，引起钠离子内流，使细胞膜进一步去极化，导致动作电位的产生，由于异常的动作点位而产生疼痛感。因此，抑制异常的钠离子通道活动有助于疼痛的治疗、缓解。电压门控钠离子通道广泛存在于如神经元、骨骼肌细胞的细胞膜上，是一类跨膜糖蛋白复合体，由一个α亚基和数个β亚基构成。其中α亚基是钠离子通道的功能载体，由1700～2000个氨基酸组成，形成了4个结构域(domain，ⅰ-ⅳ)，每个结构域又包含6个跨膜片段(s1～s6)(图1)。结构域之间由一些大的胞内环连接起来，而各片段之间则由一些小的胞外或胞内环相连接。其中，s4上含有丰富的碱性氨基酸残基，被认为是电压门控钠离子通道的电压敏感元件。当细胞膜去极化时，s4上的正电荷可以沿着s4的轴线做顺时针旋转往外迁移，改变钠离子通道构象，使通道打开。s5和s6之间的发夹环(poreloop，p-loop)形成了微孔外部，与对钠离子的选择性有关，微孔的胞内部分则由s6围成。连接结构域ⅲ和ⅳ的胞内环起着失活阀门的作用，它可以折叠进入微孔的胞内开口，阻塞微孔，使电压门控钠离子通道失活。在结构域ii的l2内膜区域进行突变，可以造成失去疼痛的表型(naturegenetics，2013，45(11)：1399－1404)根据不同可以对进行分类，目前，已经在哺乳动物中鉴定了9种电压门控钠离子通道α亚基，由于其氨基酸序列相似度均大于50％，。因此，被认为来自同一家族，命名位nav1(nav1.1～nav1.9)。实验表明它们在神经元中大量特异性表达。其中nav1.9存在于周围神经系统(peripheralnervoussystem,pns)。最近研究表明nav1与疼痛相关的亚型主要是nav1.3、nav1.7、nav1.8和nav1.9。其中nav1.9是主要负责疼痛的重要成员。nav1.9为ttx-r型，编码基因为scn11a，主要分布在感受伤害的drg神经元、三叉神经节和肠肌层神经元。nav1.9的激活电压接近神经元的静息膜电位(-60～-70mv)，具有缓慢激活、缓慢失活的动力学特征，因此可以产生持续较久的ttx-r电流，这表明nav1.9可以放大和延长神经元对阈下去极化的反应，引发动作电位。在人体内，nav1.9的激活电压为-80mv。最近在人体无疼痛的病人中发生在nav1.9的811位氨基酸突变后，产生了不痛的症状，对该基因进一步研究表明，该基因是主要负责疼痛的钠离子通道之一。但是临床上普遍应用化学小分子作用(如卡马西平、利多卡因、美西律等)为电压门控钠离子通道抑制剂治疗疼痛，但是它们对电压门控钠离子通道亚型缺乏足够的选择性，因而会产生心脏毒性和中枢神经副作用的弱点。技术实现要素：本发明的第一个目的是提供nav1.9中结构域ⅲ的电压传感器桨区域作为靶点，利用该区域的靶点设计多肽作为抗原获得单克隆抗体，通过特异性抗体与其靶点结合，可以关闭vgscs离子通道，从而抑制疼痛。所述多肽具有seqidno:9所示的序列，也可以是与该多肽具有80％，80～85％，85～90％,90～95％或95～99％同源的结构类似的衍生序列。本发明的第二个目的是提供特异性识别靶点的抗体及其抗体片段，其重链可变区(vh)具有如seqidno:7所示的序列，或者与seqidno:7所示的序列具有80％，80～85％，85～90％,90～95％或95～99％同源的结构类似的衍生序列；其轻链可变区(vl)具有如seqidno:8所示的序列，或者与seqidno:8所示的序列具有80％，80～85％，85～90％,90～95％或95～99％同源的结构类似的衍生序列；还可以将重链可变区(seqidno:7)所含有的3个cdr序列和/或轻链可变区(seqidno:8)所包含的3个cdr序列，进行优化，获得cdr嵌合抗体及其抗体片段。所述重链可变区包含的cdr序列为，如seqidno.1所示的cdrh1、如seqidno.2所示的cdrh2和如seqidno.3所示的cdrh3；所述轻链可变区包含的cdr序列为，如seqidno.7所示的cdrl1、如seqidno.5所示的cdrl2和如seqidno.6所示的cdrl3。所述抗体及其抗体片段轻链恒定区可以选自于κ链或λ链，其重链恒定区可以选自于igm、igd、iggi-4、iga、ige等等；所述轻链恒定区和重链恒定区物种来源可以选自于：人源抗体恒定区、牛源抗体恒定区、羊源抗体恒定区、犬源抗体恒定区、猪源抗体恒定区、猫源抗体恒定区、马源抗体恒定区、驴源抗体恒定区。所述抗体及其抗体片段结构形式可以是：全抗体、fab、f(ab’)2、dsfv、scfv、双链抗体、微抗体、双特异抗体、多特异抗体、嵌合抗体、cdr移植抗体。所述抗体及其抗体片段优选为单克隆抗体或抗体片段。所述抗体更优选为人源化单克隆抗体。本发明的第三个目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物含有上述的抗体或其抗体片段作为活性成份，所述药物组合物有镇痛和提高疼痛阈值效果，能治疗疼痛、瘙痒和咳嗽。根据本发明的第一个方面，根据nav1.9的晶体结构模型，在nav1.9的电压传感器阀门的结构域iii的电压传感器桨区域筛选合适靶点区域的多肽作为抗原，经过亲水性和抗原性的分析，选择一个具有亲水性好、抗原性高的多肽，其氨基酸序列为dvefsgednaqrit(seqidno.9)。根据本发明的第二个方面，第一步是制备分泌抗体的单克隆细胞株。化学合成上述多肽，将该合成多肽编号为c2363bb030-1(seqidno.9)，将其偶联到载体蛋白klh上，然后免疫balb/c小鼠，多次接种免疫刺激机体产生免疫应答从而产生多克隆抗体，采血测试、elisa检测和评价。通过抗原抗体反应，通过elisa来评价免疫动物产生的多克隆抗体效价，根据免疫的动物抗体效价和人神经组织的特异性，最终确定符合要求的两只动物#1942,#1943进行细胞融合，取两只动物的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(sp2/0)进行细胞电融合，融合后进行细胞培养，在筛选培养基上筛选阳性细胞株，对分泌的抗体效价和组织特异性进行检测，利用多肽c2363bb030-1作为抗原筛选杂交瘤细胞株，根据elisa检测结果，选择阳性细胞株进行亚克隆。所得亚克隆再次进行elisa检测和特异性检测后，选择对神经组织具有特异性和阳性的亚克隆，进行细胞冻存。第二步是对天然抗体的可变区测序，提取细胞株总rna，合成cdna，建立cdna文库，进行可变区测序。扩增编码抗体可变区的多核苷酸序列，可将编码vh和vl的dna序列(也可用编码可变区的rna序列来操作)整合到同一个载体，也可将它们分别整合到载体上，用上述载体转染合适的宿主细胞；然后对其进行测序分析。测序结果显示，其vh的dna序列如seqidno:10所示，其vl的dna序列如seqidno:11所示。第三步是构建基因工程抗体，根据不同需要，将上述编码vh和vl(也可以是编码vh中cdr和编码vl中cdr)的dna序列导入合适的宿主进行抗体表达，并验证抗体效果。本发明的第三个方面是检测单克隆抗体的生物活性，首先在nd7/23细胞瞬时表达人nav1.9基因，从瞬时表达nd7/23细胞系提取总蛋白质，采用westernblotting方法，分析该抗体结合的特异性，如图4所示，该抗体能特异性识别nav1.9蛋白。第二步是采用小鼠用5％福尔马林诱导急性炎症疼痛造模，经尾静脉注射适量抗体，检测抗体对疼痛模型小鼠镇痛的效果。结果如图5所示，注射10mg/kg抗体后，比对照具有显著的镇痛作用。有益效果：采用抗体这种生物大分子针对nav1.9电压门控钠离子通道的电压传感器的靶向的特异性结合，来失活电压传感器阀门，导致不能正常钠离子进入神经细胞，从而达到治疗和缓解疼痛的效果，由于而其具有很好的靶向性，可以克服由于化学小分子药物产生的副作用。附图说明图1：钠离子通道nav1.9的结构图图2：钠离子通道nav1.9靶点设计图图3：单克隆抗体的人神经组织特异性分析a、42h10；b、51h10；c、52f11；d、55e9图4：单克隆抗体的westernblotting免疫原性分析图5：51h10d12抗体对野生型小鼠5％福尔马林诱导的急性炎症疼痛的镇痛效果具体实施方式下面以下通过对本发明较佳实施方式的详细描述，说明但不限制本发明。材料来源：下述使用的材料和试剂如无特别说明均为商业购买。实施例1【抗原合成】根据nav1.9的氨基酸序列(genbankno.np_001274152)和晶体结构模型，进行亲水性和抗原性的分析，筛选出dvefsgednaqrit序列，其亲水性和抗原性符合抗原的要求，采用全自动合成仪人工合成了dvefsgednaqrit(seqidno.9)多肽。具体步骤如下：(1)将第一个aa的-cooh用diea连接到cl-resin,然后将树脂上未反应完的功能团用meoh封闭；(2)用dmf洗涤；(3)用pip去除第一个aa中-nh2的保护基团fmoc，使-nh2裸露；(4)用dmf洗涤；(5)将第二个aa的-cooh用dic+hobt活化，然后缩合至第一个aa中的-nh2上，形成酰胺键；(6)用dmf洗涤；(7)用pip去除第二个aa中-nh2的保护基团fmoc，使-nh2裸露；(8)用dmf洗涤；(9)重复5-8直到最后一个aa的-nh2裸露；(10)将多肽从树脂上切割，并切除所有氨基酸的侧链保护基团，切割试剂为：三氟乙酸+乙二硫醇+苯酚+茴香硫醚+水；(11)将切割液加入乙醚中，使多肽沉淀，离心即得到多肽粗品(c2363bb030-1)；(12)多肽hplc的c18制备/分析柱进行纯化，编号为c2363bb030-1，获得纯化的多肽用于免疫动物。注：为方便多肽偶联，可在此多肽末端额外添加半胱氨酸。实施例2【单克隆细胞株制备】2.1动物免疫准备弗氏完全佐剂sigma,f5881和弗氏不完全佐剂(sigma,f5506)。利用多肽c2363bb030-1的末端-sh将多肽偶联到载体蛋白klh上，作为免疫原。选取5只8周龄的雌性balb/c(动物编号：#1939,#1940,#1941,#1942,#1943)进行3次腹腔免疫，刺激机体产生免疫应答从而产生抗体。初免：50μg/只，三周后进行二次免疫，剂量为50μg/只；在第二次免疫后的2周后进行第三次免疫，剂量为50μg/只，在第三次免疫的1周后进行采血进行抗体检测。2.2动物血清elisa检测2.2.1仪器与设备：洗板机：北京楠华zdmx酶标仪：thermomultiskanascent2.2.2使用的试剂：包被抗原为多肽c2363bb030-1；包被液为1*pbs(ph7.4)；洗涤缓冲液：1*pbs(ph7.4)，0.05％pbs；采用一抗为3免后抗血清；酶标二抗：peroxidase-affinipuregoatanti-mouseigg,fcγfragmentspecific(minxhu,bov,hrssrprot)；tmb显色液；终止液：1m盐酸。具体方法如下：(1)包被：用包被液将抗原稀释成1μg/ml，混匀后每孔100μl加入板条中，盖上盖板膜，放置4℃过夜。(2)封闭：取出板子弃去包被液，加入封闭液，盖上盖板膜，37℃恒温箱0.5h。(3)加一抗：3免抗血清首孔1/1000稀释，然后倍比稀释9个梯度，盖上盖板膜，37℃恒温箱1h。(4)加二抗：取出酶标板，弃去内液，加入稀释后的酶标二抗，浓度为0.033μg/ml，盖上盖板膜，37℃恒温箱半小时。(5)显色：取出酶标板，弃去内液，加入显色液，25℃显色13min。(6)终止反应:加入终止液，终止反应。(7)加入终止液后，即刻在酶标仪上450nm读数，将od值大于设定的阴性对照od值的2.1倍的孔对应的最大稀释度，定为该样品的效价，检测结果如表1所示，nc是未免疫血清的阴性对照，起始稀释倍数是1:1,000。经对三次免疫后的抗血清进行检测，动物编号为#1940的抗血清滴度在1:128,000；动物编号为#1939的抗血清滴度在1:512,000；其余3只动物(#1941,#1942,#1943)的抗血清滴度在1:256,000。表1.第三次免疫后的血清elisa检测结果:动物编号稀释倍数no.1939no.1940no.1941no.1942no.1943阴性对照1:1,0000.0870.0900.0930.1430.101稀释11:1,0002.7982.3502.4042.5462.706稀释21:2,0002.6071.9802.0362.1472.339稀释31:4,0002.5571.7501.9701.8301.986稀释41:8,0002.2641.4731.5221.3811.463稀释51:16,0001.9080.9561.1050.9531.024稀释61:32,0001.4530.7540.7250.5950.659稀释71:64,0001.0710.4270.5130.3660.407稀释81:128,0000.6250.2740.2780.2160.261稀释91:256,0000.3680.1380.1940.1640.175稀释101:512,0000.2290.1060.1280.1090.146稀释11空白对照0.0770.0770.0770.0770.077滴度1:512,0001:128,0001:256,0001:256,0001:256,0002.3细胞融合及杂交瘤细胞株筛选2.3.1细胞融合：根据实施例2.2的elisa检测结果，结合组织特异性的结果，选择两只动物#1942,#1943进行终免，三天后取该两只动物的脾细胞和瘤细胞融合，小鼠骨髓瘤细胞(sp2/0)与脾脏细胞按照1：3比例，利用电融合的方式进行细胞融合，将融合后的细胞用hat培养基铺入到15块饲养细胞板中，放入co2培养箱培养。2.3.2杂交瘤细胞株筛选:融合后的细胞培养7-10d后，进行整板更换培养液，在换液4h后采用elisa进行检测。elisa具体材料和步骤与2.2动物血清elisa检测相同。第一次elisa筛选：一共有15个(编号从板41到板55)96孔板，以孔55h12(板55的孔h12)设置为阳性对照，加入融合动物血清1：1000稀释液，其od值检测为2.215；将孔55g12(板55的孔g12)设置为阴性对照，加入空白培养基，其od值检测为0.088；找出od>0.5的克隆。第二次elisa筛选：将第一次筛选的68个单孔细胞的od>0.5的克隆进行第二次检测(检测方法同上)，实验结果结果如表2所示，从中找出od值大于1.0的10株克隆，即41c12、47a11、42a3、42h10、48d6、51h10、52f11、52h5、55e9、55h7。表2.杂交瘤细胞的第二次elisa筛选12345678910111241c1241f442a342d842h1043b143b744d146a647a1148b1248d61.9420.7480.9660.6601.2540.5240.6380.5400.6291.1020.7911.36250c651d1051h951h1051h1152b452c552f652f1152h552h653d90.5640.4590.8341.9620.0840.5880.7130.8641.1181.7770.1090.80853e255e955g555h255h7ncpc0.5581.2940.7570.7161.1480.0841.985第三次elisa筛选：从第二次筛选的选择的10株进行阳性确认检测(检测方法同上)，实验结果如表3所示，将上述10个细胞株扩大到24孔板中，每株收集2ml上清进行下一步确认。表3.杂交瘤细胞的第三次elisa筛选12345678910111241c1247a1142a342h1048d651h1052f1152h555e955h7pcnc2.2591.4541.3791.5621.5741.8331.3261.7481.3851.3252.0250.0722.3.3.细胞学特异性确认为了确认这些细胞株的是否具有神经组织的特异性，对2.3.2杂交瘤细胞株筛选过程中第三次elisa筛选的上清进行免疫组织化学检查。具体实验方法如下：2.3.3.1组织脱水处理：取人神经组织进行脱水处理，脱水处理采用徕卡asp300s，具体流程如下：采用70％、85％、90％，无水乙醇分别脱水各30分钟；再用无水乙醇脱水2次，每次60分钟；然后透明剂处理30分钟，再用透明剂处理2次，每次60分钟；再用石蜡处理3次，分别为60分钟、120分钟和180分钟，采用徕卡eg1150包埋机进行包埋操作，制作成蜡块，进行切片，切片厚度为4μm。2.3.3.2原位杂交：取神经组织切片在85℃烤片20min；脱蜡剂处理3次，每次1分钟；用无水酒精脱蜡3次，每次1分钟；水洗3次，每次1分钟；采用er2(ph＝9缓冲溶液)热修复20分钟，冷却12分钟，再用水洗3次，每次1分钟；然后封闭30分钟；水洗3次，每次1分钟；加入细胞株的上清孵育30分钟，水洗3次，每次1分钟；采用增强剂孵育8分钟，水洗3次，每次2分钟，加入二抗孵育8分钟；水清洗3次，每次2分钟；dab显色8分钟；水洗3次，每次1分钟，苏木素染色10分钟；水洗3次，每次1分钟，酒精脱水后风干封片。在奥林巴斯光学显微镜下进行观察。经光学显微镜观察，42h10,51h10,52f11,55e9细胞株分泌抗体在神经组织的特异性和杂交信号均达到要求。2.3.4亚克隆根据实施例2.3.3的细胞学检测结果，选择42h10,51h10,52f11,55e9进行亚克隆。利用有限稀释法对四株细胞进行亚克隆，将这四株细胞铺入96孔饲养细胞板中，培养7-10d后，每株挑选了12个单克隆进行elisa检测(检测方法同上)，结果显示，42h10e3、42h10e4、42h10f3、42h10g4、51h10d9、51h10d12、51h10e11、51h10f8、52f11b2、52f11h3、52f11h6、52f11h11、55e9a4、55e9c6、55e9d9、55e9e3等16个细胞株为阳性，其余均为阴性。选择这些阳性细胞株进行第二次确认，经确认，其od值均较高(见表4)。然后将这些阳性单克隆扩大到24孔板中，每株收集2ml上清进行细胞学确认。经组织免疫化学再次确认，51h10细胞株为免疫组化阳性(图3)。表4.阳性亚克隆的第二次elisa检测确认42h10e342h10e442h10f342h10g451h10d951h10d1251h10e1151h10f852f11b21.5661.5791.5441.5922.1882.2542.1541.6011.61652f11h352f11h652f11h1155e9a455e9c655e9d955e9e3ncpc2.1581.4881.5041.4851.3481.4391.5420.0732.034选择51h10d9,51h10d12,51h10f8进行第二次亚克隆(亚克隆方法同上)，培养7-10d后，挑选12个单克隆孔进行elisa检测，结果显示均为为阳性，表明这些已经是纯合的单克隆。随机选择5株子克隆，对上清液效价和亚类进行效价检测与亚类鉴定(试剂盒southernbiotech，货号st17)。实验结果显示5株od值一致，效价在1：2430，亚型为igg2b，k型。最终选择51h10d12进行细胞冻存。实施例3【抗体测序】为了确定单克隆抗体序列，选取其中一个单克隆51h10d12进行测序。按照trizol试剂的技术手册从杂交瘤细胞中分离总rna。然后使用同种型特异性反义引物或通用引物将总rna逆转录成cdna，遵循primescripttm第一链cdna合成试剂盒技术手册。根据genscript的快速扩增cdna末端(race)的标准操作程序(sop)方法，扩增vh和vl的抗体片段。分别将扩增的抗体片段克隆入标准克隆载体。进行菌落pcr以筛选具有正确大小的插入片段的克隆。至少对5个具有正确大小的插入片段的菌落进行测序。比对不同克隆的序列，确定这些克隆的共有序列。由此确定vh的dna序列，其如seqidno:10所示；确定vl的dna序列，其如seqidno:11所示。根据vh和vl的dna序列推导出氨基酸序列，vh氨基酸序列如seqidno:7所示，vl氨基酸序列如seqidno:8所示。推测出编码vh的rna序列如seqidno:12所示，编码vl的rna序列如seqidno:13所示。实施例4【抗体的特异性检测】4.1hnav1.9抗原的制备将人nav1.9-ha质粒(7-8μg)转染nd7/23细胞(10cm细胞皿)中，37℃先培养10小时，然后分到细胞皿中在29℃培养20小时后收集细胞。4.2westernblotting分析1.吸去细胞培养基后加入2ml灭菌pbs轻轻旋转细胞皿，洗涤细胞两次。2.加入1mlwestern及ip细胞裂解液，用细胞刮刮取收集细胞置于冰上裂解半小时。3.用超声破碎仪，超声破碎2次，每次3s。4.细胞裂解液在4℃下经12000rpm离心10分钟，收集细胞裂解上清。5.取细胞裂解液上清40微升，经8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳。6.经转膜后，分别用hatag(1:2000)抗体和51h10d12(1:300)抗体在室温下进行孵育1小时。7.经pbs清洗三次，每次5分钟；8.加入地高辛标记的抗鼠抗体抗体(1：20000)在室温先孵育1小时；9.经pbs清洗三次，每次5分钟；10.加上地高辛底物，显影5－10分钟。11.带有进行westernblot杂交。4.3western杂交结果从图4中可以看出，51h10d12抗体与ha标签可以检测到在130-250kd之间杂交信号，在阴性对照中没有检测到对应的信号，其杂交信号与hnav1.9的分子量210kda左右接近，说明该抗体能识别hnav1.9的蛋白。实施例5【51h10d12抗体在野生型小鼠体内镇痛效果】为了检测51h10d12抗体是否具有镇痛效应，我们采用小鼠5％福尔马林的诱导炎症型痛痛，在静脉注射该抗体后，给予刺激，每5分钟内记录小鼠舔爪和缩爪的时间，评价不同处理对福尔马林诱发的自发炎性疼痛的镇痛效果。5.1实验步骤按照lee等(2014，cell157,1393–1404)的方法进行，取12只野生型小鼠，经过2天的适应后进行试验。随机分为2组，一组为对照组，在尾部静脉注射pbs，一组为实验组，在尾静脉注射10mg/kg的51h10d12抗体，半小时后，后爪皮下注射20μl5％福尔马林引起急性炎症引起的疼痛，通过每5分钟内记录小鼠舔爪和缩爪的时间，总共45分钟，分别统计分析i相(0-10分钟)和ii相(10-45分钟)，i相为急性痛，ii相为自发的持续性痛，实验后统计分析这两相以及各时间段内野生型小鼠注射药物与对照组之间的差异。5.2实验结果从图5可知，野生型小鼠尾静脉注射51h10d12抗体后，经5％福尔马林诱导急性炎症疼痛，该抗体可以减少后爪皮下注射5％formalin后10-15分钟和30-35分钟内舔爪的总时间，即ii相小鼠舔爪的总时间，与阴性对照相比达到显著差异。实验结果表明51h10d12抗体可以缓解野生型小鼠5％formalin诱导的ii相炎性疼痛，与文献报道的效果相当。序列清单：sywmn(seqidno:1)mihpsdsetrlnqkfkd(seqidno:2)qgfay(seqidno:3)hasqninvwls(seqidno:4)kasnlrt(seqidno:5)hqgqsypwt(seqidno:6)mgwssiilflvatatgvhsqvqlqqpgaelvrpgasvklsckasgysftsywmnwvkqrpgqglewigmihpsdsetrlnqkfkdkatltvdkssstaymqlssptsedsavyycarqgfaywgqgtlvtvstakttppsvyplapgcgdttgssvtlgclvkgyfpesvtvtwnsgslsssvhtfpallqsglytmsssvtvpsstwpsqtvtcsvahpassttvdkklepsgpistinpcppckechkcpapnleggpsvfifppnikdvlmisltpkvtcvvvdvseddpdvqiswfvnnvevhtaqtqthredynstirvvstlpiqhqdwmsgkefkckvnnkdlpspiertiskikglvrapqvyilpppaeqlsrkdvsltclvvgfnpgdisvewtsnghteenykdtapvldsdgsyfiysklnmktskwektdsfscnvrheglknyylkktisrspgk(seqidno:7)mrvlaellglllfcflgvrcdiqmnqspsslsaslgdtititchasqninvwlswyqqkpgnipklliykasnlrtgvpsrfsgsgsgtgftltisslqpediatyychqgqsypwtfgggtkleikradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec(seqidno:8)dvefsgednaqrit(seqidno:9)atgggatggagctctatcatcctcttcttggtagcaacagctacaggtgtccactcccaggtccaactgcagcagcctggggctgagctggtgaggcctggagcttcagtgaagctgtcctgcaaggcttctggctactccttcaccagttactggatgaactgggtgaagcagaggcctggacaaggccttgagtggattggcatgattcatccttccgatagtgaaactaggttaaatcagaagttcaaggacaaggccacattgactgtagacaaatcctccagcacagcctacatgcaactcagcagcccgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaagacaagggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctacagccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctgggtgtggagatacaactggttcctccgtgactctgggatgcctggtcaagggctacttccctgagtcagtgactgtgacttggaactctggatccctgtccagcagtgtgcacaccttcccagctctcctgcagtctggactctacactatgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggccaagtcagaccgtcacctgcagcgttgctcacccagccagcagcaccacggtggacaaaaaacttgagcccagcgggcccatttcaacaatcaacccctgtcctccatgcaaggagtgtcacaaatgcccagctcctaacctcgagggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaatatcaaggatgtactcatgatctccctgacacccaaggtcacgtgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagacgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacccatagagaggattacaacagtactatccgggtggtcagcaccctccccatccagcaccaggactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaacaaagacctcccatcacccatcgagagaaccatctcaaaaattaaagggctagtcagagctccacaagtatacatcttgccgccaccagcagagcagttgtccaggaaagatgtcagtctcacttgcctggtcgtgggcttcaaccctggagacatcagtgtggagtggaccagcaatgggcatacagaggagaactacaaggacaccgcaccagtcctggactctgacggttcttacttcatatatagcaagctcaatatgaaaacaagcaagtgggagaaaacagattccttctcatgcaacgtgagacacgagggtctgaaaaattactacctgaagaagaccatctcccggtctccgggtaaatga(seqidno:10)atgagggtccttgctgagctcctggggctgctgctgttctgctttttaggtgtgagatgtgacatccagatgaaccagtctccatccagtctgtctgcatcccttggagacacaattaccatcacttgccatgccagtcagaacattaatgtttggttaagctggtaccagcagaaaccaggaaatattcctaaactattgatctataaggcttccaacttgcgcacaggcgtcccatcaaggtttagtggcagtggatctggaacaggtttcacattaaccatcagcagcctgcagcctgaagacattgccacttactactgtcaccagggtcaaagttatccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttgaacaacttctaccccaaagacatcaatgtcaagtggaagattgatggcagtgaacgacaaaatggcgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcacgttgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggccactcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgttag(seqidno:11)augggauggagcucuaucauccucuucuugguagcaacagcuacagguguccacucccagguccaacugcagcagccuggggcugagcuggugaggccuggagcuucagugaagcuguccugcaaggcuucuggcuacuccuucaccaguuacuggaugaacugggugaagcagaggccuggacaaggccuugaguggauuggcaugauucauccuuccgauagugaaacuagguuaaaucagaaguucaaggacaaggccacauugacuguagacaaauccuccagcacagccuacaugcaacucagcagcccgacaucugaggacucugcggucuauuacugugcaagacaaggguuugcuuacuggggccaagggacucuggucacugucucuacagccaaaacaacacccccaucagucuauccacuggccccuggguguggagauacaacugguuccuccgugacucugggaugccuggucaagggcuacuucccugagucagugacugugacuuggaacucuggaucccuguccagcagugugcacaccuucccagcucuccugcagucuggacucuacacuaugagcagcucagugacuguccccuccagcaccuggccaagucagaccgucaccugcagcguugcucacccagccagcagcaccacgguggacaaaaaacuugagcccagcgggcccauuucaacaaucaaccccuguccuccaugcaaggagugucacaaaugcccagcuccuaaccucgaggguggaccauccgucuucaucuucccuccaaauaucaaggauguacucaugaucucccugacacccaaggucacguguguggugguggaugugagcgaggaugacccagacguccagaucagcugguuugugaacaacguggaaguacacacagcucagacacaaacccauagagaggauuacaacaguacuauccggguggucagcacccuccccauccagcaccaggacuggaugaguggcaaggaguucaaaugcaaggucaacaacaaagaccucccaucacccaucgagagaaccaucucaaaaauuaaagggcuagucagagcuccacaaguauacaucuugccgccaccagcagagcaguuguccaggaaagaugucagucucacuugccuggucgugggcuucaacccuggagacaucaguguggaguggaccagcaaugggcauacagaggagaacuacaaggacaccgcaccaguccuggacucugacgguucuuacuucauauauagcaagcucaauaugaaaacaagcaagugggagaaaacagauuccuucucaugcaacgugagacacgagggucugaaaaauuacuaccugaagaagaccaucucccggucuccggguaaauga(seqidno:12)augaggguccuugcugagcuccuggggcugcugcuguucugcuuuuuaggugugagaugugacauccagaugaaccagucuccauccagucugucugcaucccuuggagacacaauuaccaucacuugccaugccagucagaacauuaauguuugguuaagcugguaccagcagaaaccaggaaauauuccuaaacuauugaucuauaaggcuuccaacuugcgcacaggcgucccaucaagguuuaguggcaguggaucuggaacagguuucacauuaaccaucagcagccugcagccugaagacauugccacuuacuacugucaccagggucaaaguuauccguggacguucgguggaggcaccaagcuggaaaucaaacgggcugaugcugcaccaacuguauccaucuucccaccauccagugagcaguuaacaucuggaggugccucagucgugugcuucuugaacaacuucuaccccaaagacaucaaugucaaguggaagauugauggcagugaacgacaaaauggcguccugaacaguuggacugaucaggacagcaaagacagcaccuacagcaugagcagcacccucacguuga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