本发明属于分子生物学和生物技术领域，涉及一个燕麦基因oppdi(aoatphotoperiodinsensitivegene)的克隆及其功能验证，具体涉及的燕麦oppdi基因克隆、生物信息学分析及转基因拟南芥在光周期方面的分析与功能验证。
背景技术：
燕麦(avenasatival.)是禾本科(granmineae)燕麦属(avena)一年生植物，广泛分布于世界各地42个国家。一般分为皮燕麦和裸燕麦两种，我国主要种植裸燕麦，主要用作粮食食用，茎和叶作为牲畜饲料，所以裸燕麦是我国重要的粮草兼用型作物，具有极高的营养价值和较强的抗逆性，适用性较强，耐严寒、干旱、瘠薄及适度盐碱，种植风险小。燕麦是典型的长日照作物，必须经过长日照阶段才能正常开花结实，但是在短日照条件下会延迟抽穗甚至无法抽穗开花，这一特性不仅使其在地理分布和播种时间上受到限制，甚至导致产量下降[1-2]。如需在原有遗传资源基础上培育新品种，必须通过传统育种手段引入新的遗传资源，然而由于各地的光照、温度、地理环境和气候条件差异很大，所以引种工作受到很大的限制[3]，因此深入研究燕麦光周期的分子作用机制，利用分子育种有针对性的调节燕麦光周期反应，使其成为光周期迟钝型，提高适应性，可能有效地扩大引种和种植范围。
许多光周期诱导开花的基因已被报道，prr(pseudo-responseregulator)是其中一类调控光周期的蛋白家族，进化保守，它们蛋白质的c端都包含一个cct区域，含有cct区域的基因在dna水平上非常保守，都在植物感受日照长度的开花调控中起着非常重要的作用。cct区域也是开花调控关键因子co(constans)家族蛋白的保守区[4]。小麦的光周期反应主要受到小麦2d、2b和2a染色体短臂上的photoperiod1(ppd)位点，分别称ppd-d1、ppd-b1和ppd-a1[5-6]。小麦ppd1基因上游片段缺失会降低光周期的敏感性[7]。光钝基因ppd-d1a在编码序列上游区域缺失2089bp核苷酸，改变了基因的表达模式及下游基因co(constans)和ft(floweringlocust)的表达，在小麦表型上呈现出，无论在长日或短日照条件下均提前开花[8-9]。光周期基因ppd-dla已经被应用于小麦育种，使得小麦获得更广泛的适应性[10]。ppd-b1也对小麦抽穗有影响，在ppd-dla遗传背景下，ppd-b1a比ppd-b1b小麦的抽穗期提前6.7day[11-12]。ppd-b1位点拷贝数的多样性也会对小麦开花性状产生影响，导致小麦出现早花性状[13]。不仅ppd基因对小麦光周期反应会产生影响，在普通小麦中与ppd-1同源的基因taprr73，该基因在转基因水稻中高水平表达时促进水稻在长日照条件下早开花[14]。
利用比较遗传学和图位克隆法在二倍体大麦中获得两个控制光周期反应的重要位点。第一个是位于2h染色体短臂上的ppd-h1，与拟南芥生物钟pseudo-responseregulator基因同源[15]。ppd-h1基因普遍存在于冬大麦中，在长日照条件下通过上调hvft1基因(与拟南芥中的ft基因同源)的表达量促进早开花[15,16]，但是ppd-h1基因在保守的cct区域发生突变后，在长日照条件下开花延迟，这种表型变化在春季小麦的种植区域中表现的尤为显著[15,17-19]。第二个位点是位于1h染色体长臂的ppd-h2，它控制短日照下开花，光敏感等位基因在短日照下延迟开花[20]。
燕麦光周期不敏感基因的研究从1972年sampson和burrows发现了燕麦光周期不敏感品种就已经开始了[21]。burrows[22]在加拿大光照不敏感品种中发现了一个单显性光照不敏感基因dil。wight[23]找到了与单显性dil基因相关的rapd分子标记，但是没有成功克隆该基因。由于六倍体燕麦基因图谱绘制困难，在图谱中定位这些qtl位置非常复杂。通过分子标记技术，已经在第3,6,7,8,11,12,17和24连锁群上定位到一些与开花时间相关的qtl[24-26]。胡斯攀等[27]采用aflp标记对22份燕麦材料进行了dna指纹分析及光周期不敏感基因的分子标记研究，统计分析aflp图谱获得光周期不敏感燕麦品种特异条带2条，可作为燕麦光周期不敏感基因的相关分子标记。在以亲本光照敏感品种白燕1号与光照不敏感品种voa-8及杂交得到的f2代群体对306对ssr引物进行了筛选，9对引物在亲本和群体群体间存在多态性，可用于群体筛选，为进一步构建燕麦ssr遗传连锁图谱和进行光照不敏感基因qtl定位提供了帮助[28]。2016年elizavetagrigoreva[29]从燕麦品种“chihuahua”דanatolisher”的重组自交系(ril)中,发现了影响光周期反应的ppd位点。虽然prr家族的基因在植物感受日照长度的开花调控中起着非常重要的作用，但是还没有报道成功克隆燕麦光周期相关基因，因此本研究通过cdna-aflp技术筛选得到了一个燕麦光不敏感基因oppdi。采用荧光定量pcr进行基因表达量分析。该基因在长日照条件下，在燕麦光照不敏感品种voa-8和光照敏感品种白燕1号的基因表达量差异不大，但是在短日照条件下，相比于白燕1号，该基因在品种voa-8中的表达量明显升高。采用race方法克隆到了oppdi基因的3’末端和5’末端，并完成了基因拼接与生物信息学分析，并通过农杆菌介导的遗传转化方法转化拟南芥进而验证其生物学功能。
技术实现要素：
本发明对不同来源的11个燕麦品种进行长短日照光周期模拟实验，筛选获得燕麦光照不敏感品种voa-8，因此voa-8的基因组中可能携带光不敏感基因。将voa-8和白燕1号燕麦品种种植在长、短日照条件下，利用cdna-aflp技术对燕麦光周期相关基因表达差异进行研究分析，筛选获得了1个与光周期相关的基因。采用race方法克隆获得了1个光周期相关的基因cdna全长序列，名称为oppdi，其核苷酸序列如seqidno：1所示。。该基因由2749个碱基组成，完整的开放阅读框含有1983bp，同时还含有5’非翻译区和3’非翻译区序列，开放阅读框的起始密码子为atg，终止密码子为taa。oppdi编码660个氨基酸，其氨基酸序列如seqidno：2所示。利用rt-pcr技术检测该基因在不同光照处理条件下在白燕1号和voa-8品种的表达量情况。对oppdi基因进行生物信息学分析，表明这个基因的蛋白属于prr基因家族。对oppdi基因进行载体构建，一种重组载体以及重组载体转化得到的重组基因工程菌，含有燕麦光照不敏感基因oppdi的核苷酸序列。含有重组载体的农杆菌转化拟南芥进行功能鉴定，表明燕麦光周期相关基因oppdi与小麦和大麦、高粱的光周期基因ppd-h1,ppd-d1和sbprr37，以及与玉米zmcct具有类似的功能和作用，降低了拟南芥对光周期的敏感性，促使开花时间提前，出现了明显早花现象。
本发明首次在燕麦品种voa-8中利用race方法克隆了一个光照不敏感基因oppdi的全长cdna序列和蛋白序列，并通过农杆菌介导的遗传转化方法转化拟南芥进而验证其生物学功能。所述的燕麦光照不敏感基因oppdi应用在燕麦育种中，不仅能够深入研究燕麦的光周期反应的分子机理，弱化燕麦的光周期敏感性，不但有利于燕麦品种的创新，而且有利于提高燕麦品种对不同地理纬度和播种季节的适应性，使燕麦由原来的一年一熟变为一年双熟，这将对燕麦产量提高具有重要的经济与社会效益。
附图说明
图1.燕麦光照不敏感品种voa-8和敏感品种白燕1号中在长日照和短日照条件下oppdi基因的表达分析
图2.燕麦oppdi基因开放阅读框(orf)分析
图3.燕麦基因oppdi与不同植物中同源的prr氨基酸序列的同源性分析
图4.oppdi与其他植物prr氨基酸多重序列比对
图5.燕麦oppdi蛋白的系统进化树分析
图6.oppdi蛋白的保守结构域预测
图7.oppdi蛋白疏水性预测
图8.为燕麦oppdi开放阅读框重组质粒pcr扩增凝胶电泳图
m：dl2000dnamarker；m：2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp；1，2：扩增片段
图9.野生型拟南芥和t3代转基因拟南芥长日照功能鉴定
图10.野生型拟南芥短日照功能鉴定
具体实施方式
以下结合具体实例，对本发明进行详细说明。
实例一：燕麦oppdi基因的克隆
1.rna的提取
利用rnaisoreagent(takara,japan)提取燕麦品种voa-8叶片的总rna。
(1)取在光照培养箱中进行短日照处理(10hlight/14hdark)的燕麦光照不敏感品种voa-8的第七叶幼嫩叶片作为实验材料，分别取3株混合放入1.5ml离心管中，每管约40mg，迅速放入液氮中。
(2)研磨后迅速每管加入1mlrnaisoreagent(takara)，振荡混匀，使粉末均匀散布在试剂中，室温静止10min。
(3)12,000×g，4℃，离心15min。
(4)吸取上清液，加入200μl氯仿，剧烈震荡，室温静止5min。
(5)12,000×g，4℃，离心10min。
(6)上清液转入另一新的1.5ml离心管中，加入等体积预冷的异丙醇。-20℃醇沉1h。
(7)12,000×g，4℃，离心15min。
(8)倒掉上清，沉淀加入1ml75％无水乙醇冲洗。12,000×g，4℃，离心5min。
(9)再次加入75％无水乙醇冲洗。12,000×g，4℃，离心5min。
(10)放入超净工作台，吹干(大约10min，不能太干，否则不易溶解)。
(11)加入20μldepc处理水溶解。待完全溶解，-80℃保存。
(12)取1μl总rna，稀释100倍，分光光度计测od值。a260/a280值在1.6-1.8。取2μlrna1％琼脂糖凝胶电泳进行检测，eb染色。
2.cdna第一链的合成
第一链cdna合成混合液包含：
microtube管中配制下列模板rna/引物混合液，体系10μl。
70℃保温10min后，迅速在冰上急冷2min以上。离心数秒钟使模板rna/引物的变性溶液聚集于microtube管底部。
在上述microtube管中配制下列反转录反应液。
42℃1h，70℃15min，冰上急冷，-20℃保存。取5μlcdna第一链产物1％琼脂糖凝胶电泳检测。
3.燕麦oppdi基因3'端的扩增
上游引物设计利用cdna-aflp分析得到的一段转录衍生片段序列(transcript-derivedfragment,tdfs)进行设计特异引物sp。下游引物根据真核生物mrna3'末端具有ploya尾结构的特性，设计了锚定反转录引物3'p1和pcr下游引物3'p2。
第一轮pcr：用实例一得到的rna反转录成cdna，引物3'p1进行cdna第一链的合成。pcr反应程序：70℃保温10min后，迅速在冰上急冷2min以上；第二轮模板为第一轮的pcr产物，引物为spprimer和3'p2primer。pcr反应程序：94℃预变性3min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存。
sp：5'-aagggaagcagttggaaataggc-3'
3'p1：5'-tgcgtggaggacattgtggtagtgtttttttttttttttttt-3'
3'p2：5'-tgcgtggaggacattgtggtagtg-3'
第二轮pcr反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳，回收，测序，分析3'端测序结果。
4.燕麦oppdi基因5’端的扩增
由cdna-aflp获得的片段，设计巢式pcr引物(ap1和ap2)和通用引物5'p。第一轮pcr：用实例一得到的rna反转录成cdna，引物5'p1进行cdna第一链的合成。pcr反应程序：70℃保温10min后，迅速在冰上急冷2min以上；cdna第一链合成后采用rnasea降解单链rna，30℃1h，37℃1h；采用超薄dna产物纯化试剂盒纯化cdna第一链；对cdna第一链3'末端加polyg，37℃30min；采用超薄dna产物纯化试剂盒纯化已经加polyg的cdna第一链；
以已加尾的cdna第一链为模板，进行pcr扩增，引物为5'pprimer和ap2primer。pcr反应程序：94℃预变性3min，94℃变性30s，58℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存。
5'p5'-ttaaattaatccccccccccccccc-3'
ap15'-cccatgtcgttgttgttgctactgccg-3'
ap25'-gaaccctgctccgccttgattgg-3'
pcr反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳，回收，测序，分析5'端测序结果。
5.燕麦oppdi基因拼接
以得到oppdi3'端和5'端的序列，利用dnaman软件对5'端和3'端的序列进行拼接，成功获得oppdi基因全长的cdna,。根据拼接结果，设计基因cds特异性引物(oppdif/oppdir)，以反转录的cdna为模板，成功获得预期大小的cdna全长。pcr反应程序：94℃预变性3min，94℃变性30s，58℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存。
oppdif:5'-cccgcaccactcctcctc-3'
oppdir:5'-atcaaggaacgccacgatataa-3'
反应结束后，进行电泳，产物回收，测序，从而获得cdna全长，其核苷酸序列如2(1d),氨基酸序列为2(2b)。
实例二：燕麦oppdi基因的生物信息学分析
利用ncbi的orffinder，对测序的序列进行orf分析。燕麦oppdi基因包含1983bp完整的开放阅读框，同时含有274bp的5'非翻译区(5'utr)和492bp的3'非翻译区(3'utr)。用dnaman软件进行分析，推测编码660个氨基酸。
利用ncbi的conserveddomains预测基因保守区发现，oppdi基因包含类蛋白接收信号(rec)超家族的保守区(26-140)，接受调节反应(response_reg)保守区(28-141)和cct超家族保守区(608-652)。
利用expasy-protparam工具进行分析，oppdi蛋白推测的分子量为70806.5da，等电点为8.97。将这660个氨基酸分为20类，其中有71个是带正电荷的酸性氨基酸(asp+glu)，85个是带负电荷的酸性氨基酸(arg+lys)(表1)。
表1oppdi蛋白的各个氨基酸的数量和百分比
利用ncbi数据库的blast功能，对这个oppdi基因进行同源性分析。表明oppdi氨基酸序列与小麦、大麦、山羊草、短柄草、高粱和水稻的prr蛋白(pseudo-responseregulator)的氨基酸具有很高同源性，e值(expectvalue)为0.0，一致性达到72％-76％，因此该基因属于prr蛋白(pseudo-responseregulator)家族成员之一。
ncbi数据库搜索出不同植物中同源的prr氨基酸序列，其中包括：大麦(aay42109.1)、小麦(bal63696.1)、山羊草(abl09481.1)、短柄草(xp003562393.1)、高粱(aeg90655.1)和水稻(bad38855.1)。通过系统进化树分析，此基因与大麦、小麦、山羊草和短柄草中的同源基因亲缘关系比很近，与高粱、水稻亲缘关系较远。
实例三：燕麦oppdi基因对光周期的反应
提取长日照(14hlight/10hdark)条件下处理的白燕1号和voa-8，短日照(10hlight/14hdark)条件下处理的白燕1号和voa-8第7片叶片的总rna。利用abi7500realtimepcrsystem(appliedbiosystems)和7500systemsoftwareversion1.3.1进行real-timert-pcr分析。rna提取与cdna第一链的合成同实例一。按照试剂盒sybrgreenrealmastermixwithrox说明进行real-timepcr。real-timert-pcr反应体系为：95℃30s预变性，95℃5s，51℃30s，68℃30s，40个循环。所用引物如下：
gapdh-f5'-tgtccatgccatgactgcaa-3'
gapdh-r5'-ccagtgctgcttggaatgatg-3
18srrna-f5'-gtgacgggtgacggagaatt-3
18srrna-r5'-gacactaatgcgcccggtat-3
oppdi-f5'-accgtgacgacactatgc-3'
oppdi-r5'-ctgctccgccttgatt-3'
qrt-pcr的结果显示日照长度诱导该基因的表达，与长日照(14hlight/10hdark)条件相比，在短日照(10hlight/14hdark)条件下该基因在voa-8品种中的表达量显著提高。
实例四：过表达载体的构建
(1)用高保真酶扩增出oppdi基因的cds序列。引物设计时加入相应酶切位点。
(2)把高保真扩增的pcr产物回收、加a、连接pgm-t载体、转化大肠杆菌感受态dh5α、pcr酶切鉴定、测序等一系列步骤，确定基因的正确性，有完整的开放阅读框、无错配、无移码。
(3)把测序正确的基因利用其设计的酶切位点酶切，回收小片段(基因)。
(4)把表达载体pcambia3301以相同酶切位点酶切，回收大片段(载体)。
(5)把回收的载体大片段与基因小片段连接。
(6)转化大肠杆菌感受态dh5α，提取质粒进行pcr和酶切鉴定。
(7)将连有目的基因oppdi基因的pcambia3301表达载体转化农杆菌感受态eha105，提取质粒进行pcr鉴定，完成oppdi基因的克隆与载体的构建。
实例五：转oppdi基因拟南芥的获得及分子检测
利用蘸花法对基因进行拟南芥转化，具体如下：
(1)将未开花的拟南芥倒置使花蕾朝下，侵入含有oppdi基因农杆菌菌液的重悬液中2min。
(2)将转化后的拟南芥植株平放，盖好保鲜膜，黑暗条件下生长24h后置于正常光照条件下培养生长，一周后同上再侵染一次。
(3)转化后植株可正常地开花生长，待角果完全枯黄、欲开裂时，即可收获种子。
(4)收获的部分t0代种子经basta筛选，pcr鉴定，获得t1代转基因植株，经过两次加代，获得t3代纯和拟南芥植株，用于后续的表型鉴定。
实例六：t3代转oppdi基因拟南芥的光周期反应鉴定
为了验证oppdi基因的生物学功能，将野生型与转oppdi基因的拟南芥种子播种在营养土上。然后将野生型和t3代转基因拟南芥分别置于光照培养箱中进行长日照(14hlight/10hdark)和短日照(10hlight/14hdark)处理，21℃，记录开花时间。结果表明在长日照处理下，野生型和t3代转基因拟南芥开花时间没有明显差别，植株经过34day-35day都开花了，转基因拟南芥比野生型延迟1day。但是在短日照条件下，与野生型拟南芥相比，t3代转基因拟南芥在65day-70day后开花了，开花时间要快于野生型植株，野生型植株还未抽薹(表2)。由此说明，oppdi基因降低了拟南芥对光照的敏感性，促使开花时间提前，出现了明显早花现象，可推断oppdi基因可能与燕麦的光照不敏感性有关。如将该基因导入燕麦品种中，对选育燕麦光照不敏感品种、利用分子标记辅助手段创造材料，提高燕麦的适应性以及有效扩大燕麦的种植范围都具有重要的经济效益和实践意义。
表2.野生型和转基因拟南芥株系line1、line2和line3中在不同光照处理下的开花时间的差异
seqidno.1的序列
(i)序列特征：(a)长度：2749bp；(b)类型：核苷酸；(c)链性：单链；(d)1-274::5’-utr
(e)2258-2749：3’-utr。
(ii)分子类型：核苷酸
(iii)序列描述：seqidno.1
(i)序列特征：(a)长度：660个氨基酸；(b)类型：氨基酸；(c)链性：单链。
(ii)分子类型：多肽
(iii)序列描述：seqidno.2
序列表
seqidno.1的序列
（i）序列特征：（a）长度：2749bp；（b）类型：核苷酸；（c）链性：单链；（d）1-274::5’-utr（e）2258-2749：3’-utr。
（ii）分子类型：核苷酸
（iii）序列描述：seqidno.1
1cccgcaccactcctcctcctcagacatcagcggcctcctctccctccggtccggtgtcgc
61gccatgccgccgccttcctcctcccgctgaaaccaagcgatacagatactgctgctgcta
121tactagcgctctcctttttgttcccaatctgttcggtttgctgtgcacgacgcggagttc
181ggccgatttcgtggcctgctatgtgcgcgcctccctcctctcctccagaaaatctcgtcg
241gcagcccccacctcccgcacagccacaccacctgatggagcagccgcagccgccgccgcc
301cgcgcaggcccagccgctctgctgggagcagttcctgcacaagaagaccatcagggtcct
361gctcgtggagaccgatgactccaccaggcagatcgtcaccgccctgcttcgacactgcat
421gtaccaagttatccctgccgagaatggccagcaagcatgggcttgcctccaaagcgcgca
481gagcaacatcgacatcgtcctcaccgagatcgtgccttgcgcatctgggaattctctgct
541cgacaagatcatgacccacagcgtctgcaaggacatcccagtcatcatgatgtcttccaa
601cgactccatgagcacggtcttcgaatgcctgtcaaagggtgccgccgacttcttagtcaa
661gcccatacgtaagaacgagctcaagaacctttggcagcatgtgtggagacggtgccacag
721ctccagtggcagtggaagtggaggtggaagtgaaatccagacgcagaagtgtaccaaatc
781aaagagtggggatgaatccaataacaacagtggcagcaatgatcgcaacggtgatacgag
841catggggcttaacgcaagggatggcagcgataatggcagtggcactcaagcgcagagctc
901ttggacgaagcgtgctgtggaaatcgacagcccacaggctatgtctccaaatcagtcaaa
961tgacccccctgatagcacttgtgctcatgtgatctacccgaagtcaggcatatgcagcaa
1021tgggcggttacaaggtacagacaacaaaaaatgcaagaacaaagaaactaatgacgaatt
1081caaagggaagcagttggaaataggcgcccctagtaatttgaatacaaaagaccaatcttc
1141tccaaacgggagttccgtcaaaccaacagatacacggtgtgagtatccgccacagaacaa
1201ctccgagggtaaaattgtggaaaatttggaggatcgaatggttcgagctgctgacctcat
1261tggttcaatggcgaaaaacatggacgctcaacaggcggcaagagccaaagctgctcctaa
1321ttgctcctccaaagtgccggaagggaaagaaacggaccgtgacgacactatgccatcgct
1381tgagctgagcttgaagaggacaaggtcaaccggagacggtgaaaatgcaatccaagagga
1441acagaggaacgtcttcagacggtcggacctgtcggcattcacgaggtacaatacgtgcat
1501ggtttccaatcaaggcggagcagggttcatggggagctgttcgccagatggtaacagctc
1561cgaggccgcgaaagcggactacaacatgaagtcaggctcggacgctgctctgatgaagca
1621aggctcaaacggcagtagcaacaacaacgacatgggttctactacgatgaacatggcgac
1681aaagcctgtttgcaacaaggtttcccctattaacggaagaacgcacacatcggcgttcca
1741tcgcgtgcagcagtggacaccagcagcagcagccggtaaagacaaggccgatgaagtggg
1801caagaagaatgccgcagcagcagcagcaggagggaacgacaaggctggcgaagcagagag
1861caaacgtccctgtggggtccatgatgggaatggtggatctgcaggggtccctcagtccaa
1921tgttagtgatccttcggctccggtcgaaggtcatgcggccaactacggtagcaactcggg
1981cagtaacaacaatactaacaacgggagcaccgctgctactgctgctgctgcaaatgtgga
2041gaccggtggcatcgacaagagaagtggacacgccatgtatttgaaacgggagcgtcgagt
2101ggccgccgtgaacaagttcagagagaagaggaaagagcggaacttcgggaagaaggtgag
2161gtaccagagcaggaagcggctggcggagcagcgcccacgggtgcgcgggcagtttgtgaa
2221gcagccgcccccgccgccggcggtggtggagagataacctcccgccacacacctagcccc
2281tctcctagcttgagctccgactccaccttcgcctctagcaagattgctttggactccaaa
2341cagttgacaattagacggtgatgattcttccttggtttgtgtgatccgatacgtttcatc
2401attgatttcttcatatctaggatctactacctaaattaaccaggaaagaataaacgagga
2461actcctatatatatatatataacatacatgcatgtatgcattccaaagcatgtagaagaa
2521tgtgtgtcttgactctagatgggctgtaatcctaggtggagtcatgctcggtcctactag
2581taactaaactactattgtgtgctgtcatgtatggttggatcaactgtcagtagaattgaa
2641ctgaacagcatttgtgttagcttacggcggagttgctgctagtgccgtgtgtcagtttca
2701gtcaatatattatatcgtggcgttccttgataaaaaaaaaaaaaaaaaa
seqidno.2的序列
（i）序列特征：（a）长度：660个氨基酸；(b)类型：氨基酸；（c）链性：单链。
（ii）分子类型：多肽
（iii）序列描述：seqidno.2
1meqpqppppaqaqplcweqflhkktirvllvetddstrqivtallrhcmyqvipaengqq
61awaclqsaqsnidivlteivpcasgnslldkimthsvckdipvimmssndsmstvfecls
121kgaadflvkpirknelknlwqhvwrrchsssgsgsgggseiqtqkctksksgdesnnnsg
181sndrngdtsmglnardgsdngsgtqaqsswtkraveidspqamspnqsndppdstcahvi
241ypksgicsngrlqgtdnkkcknketndefkgkqleigapsnlntkdqsspngssvkptdt
301rceyppqnnsegkivenledrmvraadligsmaknmdaqqaarakaapncsskvpegket
361drddtmpslelslkrtrstgdgenaiqeeqrnvfrrsdlsaftryntcmvsnqggagfmg
421scspdgnsseaakadynmksgsdaalmkqgsngssnnndmgsttmnmatkpvcnkvspin
481grthtsafhrvqqwtpaaaagkdkadevgkknaaaaaaggndkageaeskrpcgvhdgng
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