一种用于提高肝炎患者免疫力的小分子β‑1,3‑葡聚糖的制备方法与流程

文档序号:12777013阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高纯度小分子β-1,3-葡聚糖产品的制备方法,其特征是,包括以下步骤:

(1)以不溶性大分子β-1,3-葡聚糖可得然胶为原料,将其碱溶后进行微波加热,然后利用超声波降解β-1,3-葡聚糖溶液;

其中,所述微波加热的工艺参数为:微波频率900~2000MHz,处理2~5次,间隔3~5min,每次25~45s;超声波降解的工艺参数为:超声波工作频率范围45~200KHz,处理时间为15~30min。

(2)将上述步骤(1)中β-1,3-葡聚糖溶液中和后进行凝胶色谱分级纯化,获得水溶性小分子β-1,3-葡聚糖溶液,分离得到的大分子β-1,3-葡聚糖溶液回到步骤(1)再次降解;

(3)利用纳滤膜过滤步骤(2)所得目的小分子β-1,3-葡聚糖溶液,浓缩脱盐;

(4)乙醇沉淀,向步骤(3)中所得浓缩液中加入1~3倍体积的乙醇,沉淀可溶性小分子β-1,3-葡聚糖,过滤或离心得沉淀后再用1~3倍体积的乙醇洗涤两次,再次通过过滤或离心得到的沉淀即为目标产物;

(5)将步骤(4)中所得沉淀干燥,干燥条件为60~80℃,时间2~4h,干燥后所得固体即为高纯度可溶性小分子β-1,3-葡聚糖。

2.如权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(1)中,所选原料的纯度为85%以上;

3.如权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(1)中,微波频率为950~1800MHz,处理2~3次,间隔3~5min,每次15~30s。

4.如权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(2)中,分级纯化体系为葡聚糖凝胶色谱分级体系,采用水作为流动相,进行洗脱,获得不同的分子量的β-1,3-葡聚糖溶液,收集目的分子量的β-1,3-葡聚糖溶液,并将大分子量的β-1,3-葡聚糖溶液返回超声波降解步骤重复降解。

5.如权利要求4所述的制备方法,其特征是:流动相流速范围是0.025-0.200m/h。

6.如权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(3)中,采用纳滤膜进行脱盐浓缩,纳滤膜截留分子量范围是150~500Da,并控制温度在35℃以下。

7.如权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(3)中,采用目的分子量β-1,3-葡聚糖溶液体积2~4倍体积的蒸馏水对纳滤浓缩的β-1,3-葡聚糖溶液稀释后再浓缩,达到脱盐的目的,控制过程温度在35℃以下。

8.如权利要求1所述的制备方法,其特征是:步骤(4)中,乙醇溶液的体积分数为75~85%(v/v),沉淀30~60min,5000~8000g离心5-15min后,得沉淀再采用体积分数为85~95%(v/v)乙醇溶液洗涤两次,5000~8000g离心5-10min后所得沉淀即为目标小分子β-1,3-葡聚糖。

9.采用权利要求1~8中任一项所述的方法制备得到的高纯度小分子β-1,3-葡聚糖产品,其特征是:所述β-1,3-葡聚糖的重均分子量为8000~12000Da,其分子均一度高,分子量变化范围在500Da以内。

10.权利要求9所述的β-1,3-葡聚糖产品在制备具有提高生物体免疫活性、抗炎活性或抗肿瘤活性功效的药物或食品中的应用。

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