本发明属于蕨麻多糖的提取纯化领域，具体涉及一种抗氧化的蕨麻多糖提取纯化方法。
背景技术：
：蕨麻(potentillaanserinel.)为蔷薇科委陵菜属植物鹅绒委陵菜的根，又名人参果、延寿果和仙人果等。广泛分布于我国吉林、青海、辽宁、西藏、宁夏等省区。具有健脾益肾、生津止渴、益气补血等功效。蕨麻作为藏药使用历史悠久，现代药理研究表明，蕨麻多糖具有明显的降血糖血脂减肥、提高机体免疫力、抗疲劳、耐缺氧和止泻抑菌等作用，是一种极具发展前途的生物调节剂，人们已经开始致力于对蕨麻保健功能的研究，比如对蕨麻多糖的研究引起了越来越多的关注。因此如何得到高纯的蕨麻多糖成为了蕨麻的开发应用中的一个关键因素。专利cn1872883a公开了一种抗辐射的蕨麻多糖的制备方法，得到了能增强动物抗辐射能力的多糖，纯化后多糖得率为6.32%；专利cn101619108a公开了一种超声波提取抗辐射蕨麻多糖的制备方法，纯化后多糖得率为9.86%，用于治疗x射线引起的辐射损伤；专利cn103356691a公开了一种以蕨麻为原料制备蕨麻粗多糖的方法，得到的多糖具有镇咳的作用；专利cn104892784a公开了一种以蕨麻为原料制备蕨麻多糖的方法，利用超滤手段得到了具有抗氧化作用的蕨麻粗多糖。在以上专利所述的提取方法中，均采用水提醇沉提取蕨麻多糖（见表1），但从文献报道来看，由于多糖结构的复杂性，不同的提取纯化方法得到的多糖，结构和理化性质都不尽相同，而多糖的生物活性恰恰与此相关。例如专利cn104892791a公开了一种香菇多糖及其提取纯化方法，利用碱提手段得到了产率为1.32%、重均分子量为60万da左右的具有活性三螺旋结构香菇多糖；专利cn1613876a公开了一种以香菇为原料采用碱提手段制备得到了重均分子量从1.87×105~1.84×106da不等的具有抗肿瘤活性三螺旋香菇多糖；也有文献报道采用酸提制备多糖样品，例如华中农业大学硕士论文《酸提香菇多糖的提取分离、结构鉴定及抗氧化活性研究》采用酸提制备的香菇多糖收率可达13.56%，且具有较好的抗氧化活性。由此可知，研究不同的提取工艺，特别是采用碱提或酸提工艺以期获得不同活性的多糖，是多糖研究的一个热点和难点问题。现有的水提蕨麻多糖制备工艺中，多停留在粗多糖阶段，对其结构、性质和活性还有待进一步深入，此外采用酸提或碱方法获得蕨麻多糖的相关研究还未见文献报道，因此其研究将更利于蕨麻的综合开发利用。表1蕨麻多糖制备专利汇总表专利号提取工艺是否纯化收率重均分子量红外cn1872883a水提是6.32%无无cn101619108a水提是9.86%无无cn103356691a水提否无无无cn104892784a水提否无无无技术实现要素：针对现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种蕨麻多糖的提取纯化方法，其特征在于，所述方法包括步骤：1）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过筛，得到蕨麻粉；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚第一次回流；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入乙醇第二次回流，挥干溶媒；3）提取：将步骤2）所得到的蕨麻粉放入碱水或酸水中进行浸提，离心得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入α淀粉酶，加热下搅拌酶解，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的提取液浓缩后加入无水乙醇进行沉淀，得到粗多糖；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入水中溶解，离心，弃去不溶物；用氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，收集水层溶液；7）脱色：将步骤6)所得到的水层溶液加入h2o2，调节ph，搅拌脱色，至溶液颜色为淡黄色，离心，弃去不溶物，得到上清液；8）将步骤7）所得到的上清液浓缩，加入无水乙醇进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液进行超滤，超滤膜截留分子量为3000~50000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。其中，步骤3）中的碱水为氢氧化钠水溶液，优选浓度为0.3~0.7mol/l。其中，步骤3）中酸水为盐酸水溶液，优选浓度为0.2~0.6mol/l。其中，步骤3）中蕨麻粉与溶液的料液比为1:10~1:30g/ml。其中，步骤3）所述的浸提是在40~80℃条件下搅拌2~4h，然后调ph为中性。其中，步骤3）所述的离心转速为7000~10000转/分，时间为2~5分钟。其中，步骤2）中的第一次回流时间为2~4h，第二次回流时间为2~4h。其中，步骤2）中乙醇浓度为70~95%。其中，步骤4）中α淀粉酶为蕨麻粉重量的0.05~0.1%。其中，步骤4）中加热温度为50~70℃，酶解时间为1~5h。其中，步骤5）加入无水乙醇至乙醇终浓度为50%~90%（v/v）。其中，步骤6）中水为蕨麻粉的10~30倍重量。其中，步骤6）中离心转速为3500~10000转/分，离心时间为2~5分钟。其中，步骤6）中氯仿与正丁醇的体积比为4:1。其中，步骤6）中上清液与萃取液的体积比为3~5:1。其中，步骤7）中脱色条件为55℃，h2o2浓度为30%的，将ph调为9。其中，步骤7）中离心转速为3500~5000转/分，离心时间为2~5分钟。其中，步骤8）中加入无水乙醇至乙醇终浓度为50%~90%（v/v）。其中，步骤9）中水为蕨麻粉的10~30倍重量。其中，步骤10）中超滤时间为10~20小时，超滤膜截留分子量为3000~50000。其中步骤4）中所述α淀粉酶的酶活不少于2000u/g。其中在步骤7）中还包括上deae-52纤维素柱洗脱脱色，具体为：将步骤6）所得到的水层溶液上样于deae-52纤维素柱，利用纯化水、不同浓度nacl溶液洗脱，收集洗脱液，超滤除去大部分盐，得到脱色溶液。本发明的另一个目的在于提供上述方法制备得到的蕨麻多糖，其含量大于96%，红外光谱为α构型特征吸收峰；碱提多糖重均分子量为40~80万da，对dpph自由基清除率较好；酸提多糖重均分子量为5~10万da，螯合率较好。附图说明图1为本发明水提所得蕨麻多糖的红外光谱图。图2为本发明酸提所得蕨麻多糖的红外光谱图。图3为本发明碱提提所得蕨麻多糖的红外光谱图。图4为本发明所得蕨麻多糖的体外超氧自由基清除结果。图5为本发明所得蕨麻多糖的体外dpph自由基清除结果。图6为本发明所得蕨麻多糖的体外螯合结果。具体实施方式下面通过实例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实例只是用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例11）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过40目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流2h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入85%乙醇，回流2h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重20倍（ml/g）的浓度为0.5mol/l的氢氧化钠水溶液，在60℃条件下搅拌2h，调ph为中性，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.1%的α淀粉酶，于65℃下搅拌酶解4h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为25.06%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到重量为蕨麻干重20倍的水中溶解，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4:1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为4:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：在55℃的条件下，将步骤6)所得到的水层溶液加入30%的h2o2，将ph调为9，搅拌脱色，至溶液颜色为淡黄色为止，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物，得到上清液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤15小时，超滤膜截留分子量为5000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例21）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过60目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流3h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入90%乙醇，回流3h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重10倍（ml/g）的浓度为0.6mol/l的氢氧化钠水溶液，在70℃条件下搅拌3h，调ph为中性，在转速为8000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.05%的α淀粉酶，于70℃下搅拌酶解3h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为50%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为23.74%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，在转速为8000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4:1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为5:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：在55℃的条件下，将步骤6)所得到的水层溶液加入30%的h2o2，将ph调为9，搅拌脱色，至溶液颜色为淡黄色为止，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物，得到上清液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为50%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到重量为蕨麻干重10倍的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤20小时，超滤膜截留分子量为10000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例31）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过80目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流4h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入95%乙醇，回流4h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重30倍（ml/g）的浓度为0.7mol/l的氢氧化钠水溶液，在40℃条件下搅拌4h，调ph为中性，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.08%的α淀粉酶，于50℃下搅拌酶解5h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为60%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为24.54%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4:1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为3:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：将步骤6）所得到的水层溶液上样于deae-52纤维素柱，利用纯化水、不同浓度nacl溶液洗脱，收集洗脱液，超滤除去大部分盐，得到脱色溶液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为60%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤10小时，超滤膜截留分子量为50000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例41）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过80目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流2h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入95%乙醇，回流2h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重20倍（ml/g）的浓度为0.3mol/l的盐酸水溶液，在80℃条件下搅拌2h，调ph为中性，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.1%的α淀粉酶，于65℃下搅拌酶解4h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为60%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为26.88%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4：1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为5:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：将步骤6）所得到的水层溶液上样于deae-52纤维素柱，利用纯化水、不同浓度nacl溶液洗脱，收集洗脱液，超滤除去大部分盐，得到脱色溶液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为60%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤10小时，超滤膜截留分子量为3000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例51）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过60目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流3h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入90%乙醇，回流3h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重30倍（ml/g）的浓度为0.4mol/l的盐酸水溶液，在70℃条件下搅拌3h，调ph为中性，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.05%的α淀粉酶，于60℃下搅拌酶解4h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为50%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为27.88%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到重量为蕨麻干重15倍的水中溶解，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4:1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为4:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：在55℃的条件下，将步骤6)所得到的水层溶液加入30%的h2o2，将ph调为9，搅拌脱色，至溶液颜色为淡黄色为止，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物，得到上清液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为50%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到重量为蕨麻干重10倍的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤15小时，超滤膜截留分子量为10000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例61）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过40目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流4h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入85%乙醇，回流4h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重10倍（ml/g）的浓度为0.2mol/l的盐酸水溶液，在60℃条件下搅拌4h，调ph为中性，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.08%的α淀粉酶，于70℃下搅拌酶解4h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为22.85%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到20倍重量的水中溶解，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4:1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为3:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：在55℃的条件下，将步骤6)所得到的水层溶液加入30%的h2o2，将ph调为9，搅拌脱色，至溶液颜色为淡黄色为止，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物，得到上清液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到15倍重量的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤20小时，超滤膜截留分子量为5000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例71）将蕨麻洗净、烘干、粉碎、过40目筛；2）脱脂：取步骤1）中的蕨麻粉包于滤纸桶中，放入索氏提取器中，加入石油醚，回流3h以脱去表面脂肪；将滤纸包晾干后，向索氏提取器中加入85%乙醇，回流3h以除去部分小分子和色素，挥干溶媒，备用；3）提取：加入体积为蕨麻干重20倍（ml/g）的蒸馏水溶液，在90℃条件下搅拌2h，在转速为10000转/分的条件下，离心5分钟，残渣重复提取一次，得到提取液；4）脱淀粉：将步骤3）所得到的提取液加入蕨麻粉重量的0.1%的α淀粉酶，于65℃下搅拌酶解4h，灭活，得到脱淀粉的提取液；5）醇沉得到粗多糖：将步骤4）所得到的脱淀粉溶液浓缩后中加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%（v/v），进行沉淀，得到粗多糖，提取率为9.07%；6）脱蛋白：将步骤5）所得到的粗多糖加入到20倍重量的水中溶解，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物；用体积比为4:1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为5:1，脱去残留蛋白，收集水层溶液；7）脱色：在55℃的条件下，将步骤6)所得到的水层溶液加入30%的h2o2，将ph调为9，搅拌脱色，至溶液颜色为淡黄色为止，在转速为5000转/分的条件下，离心5分钟，弃去不溶物，得到上清液；8）将步骤7）所得到的脱色溶液浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%（v/v），进行沉淀，得到中间体多糖；9）将步骤8）所得到的中间体多糖加入到15倍重量的水中溶解，上sephdex柱收集洗脱液；10）将洗脱液放入超滤装置中超滤15小时，超滤膜截留分子量为5000；截留液冷冻干燥得到精制蕨麻多糖。实施例8多糖含量测定用苯酚-硫酸法测定实施例中的蕨麻多糖含量均大于96%。相对分子质量测定色谱柱为tskgelgmpwxl（300mm×7.80mm）；流动相为ph=7.0的磷酸盐缓冲液[0.05n磷酸氢二钠溶液-0.05n磷酸二氢钠溶液（2:1）]溶液；体积流量0.5ml/min；柱温30℃；检测器为示差折光检测器，采用凝胶色谱法检测。其结果为碱提重均分子量为40~80万da，酸提重均分子量为5~10万da。红外光谱分析选取实施例中获得的蕨麻多糖以溴化钾为分散剂，压片压力20mpa，压片时间2min，压片扫描分辨率4cm-1，采用ftir-7600型傅立叶红外测定仪在波数4000～400cm-1范围内进行红外光谱扫描，扫描次数16次。几种蕨麻多糖样品经红外光谱分析，如图1、图2和图3所示：可以看出几种蕨麻多糖样品都具有典型多糖物质的吸收峰，在3400cm-1附近有一个强的吸收峰，是多糖分子间或分子内的o-h的伸缩振动引起的；在2900cm-1附近有一个吸收峰，是c-h键的伸缩震动引起的；1637cm-1附近处的吸收峰，为c＝o不对称伸缩振动峰；在1417cm-1附近的峰是糖类c-h变角振动吸收峰，在845cm-1附近的吸收为α-吡喃型糖的的特征吸收，而890cm-1附近无吸收，说明蕨麻多糖成苷的半缩醛羟基主要为α构型的吡喃糖，而没有β构型。蕨麻多糖抗氧化能力以实施例1、4、7所制备蕨麻多糖为原料，测定其体外抗氧化活性。（a）超氧阴离子清除能力的测定试剂：tris（三羟甲基氨基甲烷，cas：77-86-1）、nadh（beta-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠，cas：606-68-8）、pms（5-甲基吩嗪疏酸甲酯，cas：299-11-6）、nbt（氯化硝基四氢唑兰，cas：298-83-9）、vc（cas：50-81-7）；方法：将样品配制成浓度为0、25、50、70、100和120mg/ml的水溶液,取0.1ml分别加入1ml含557μmnadh的16mmtris-hcl(ph8.0)、1ml含45μmpms的16mmtris-hcl(ph8.0)以及1ml含108μmnbt的16mmtris-hcl(ph8.0)。25℃温浴5min，取出在560nm下测吸光值。用0.1ml水和3mltris-hcl混合调零。方法：①配制16mmtris-hcl，ph8.0；②用上述tris-hcl配制557μmnadh、45μmpms和108μmnbt；③用上述tris-hcl将样品和vc配成不同浓度；④取样品1.6ml（tris-hcl代替样品作对照），加入1mlnadh，再加入1mlnbt，最后加入1mlpms；⑤加入pms后，25℃水浴5min，560nm下测吸光值，tris-hcl调零。清除率=(1-样品管a560/对照管a560)×100%（b）dpph自由基清除率的测定试剂：dpph（1，1-二苯基b苦基肼基游离基，cas：1898-66-4）、vc、bha（叔丁基对羟基茴香醚，cas：25013-16-5）方法：①将多糖样品配成不同浓度，在10ml的比色管中依次加入2ml不同浓度的样品；②向管中加入0.2mm的dpph乙醇溶液2ml，摇匀，室温下暗置30min；③在517nm下测定吸光度(as)，同时测定2mldpph与2ml水混合后的吸光度(ac)及2ml多糖样品与2ml无水乙醇混合后的吸光度(ab)。用2ml水和2ml乙醇混合调零。清除率=［1－(as－ab)/ac×100%（c）多糖鳌合能力试剂：氯化亚铁、菲洛嗪（5,6-二苯基-3-(2-吡啶基)-1,2,4-三嗪-4’,4”-二磺酸钠盐，cas：69898-45-9）、edta方法：①将多糖样品配成不同浓度；②取不同浓度样品溶液（以相同浓度edta溶液做对照，以同体积去离子水作空白对照）lml，加入去离子水3.7ml；③再加入2mm氯化亚铁溶液0.1ml；④30s后，再加入0.2ml5mm菲洛嗪，摇匀后静置10min；⑤于562nm处测定吸光值，用水调零。鳌合率(%)=（1-样品吸光值/空白吸光值）x100%其结果见表2~4、图4~6。从表及图中可以看出：碱提、酸提蕨麻多糖对dpph自由基清除率明显高于水提蕨麻多糖；碱提蕨麻多糖在高浓度下（4mg/ml以上）超氧自由基清除率高于水提蕨麻多糖；酸提蕨麻在高浓度下（1mg/ml以上）多糖鳌合率高于水提蕨麻多糖，明显高于碱提多糖。表2三种多糖对超氧自由基清除率试验结果表3三种多糖对dpph自由基清除率试验结果表4三种多糖对多糖螯合率试验结果当前第1页12