本发明涉及新型化合物以及包含新型化合物的结核病的预防或治疗用组合物。
背景技术
目前，全球1/3的人口感染了具有悠久历史的结核病，这些人感染艾滋病等疾病后免疫功能降低时，随时会成为结核病患者。目前，全球患者估计有1600万人，并且每年新增的结核病患者有800万人。另外，这些人当中，每年有200万人死亡。
发达国家的结核病感染率为0.1％以下，发病率也是25％以下。韩国的活动性肺结核患病率(基于x射线拍摄的患病率)从1965年的5.1％减少为1995年的1.0％，菌阳性患病率从0.94％减少为0.22％，结核病年感染危险率从5.3％减少为0.5％。从结核病导致的死亡率来看，从1991年的10.4人/10万人减小为2001年的6.3人/10万人。
但是，结核病仍然是十大死亡原因之一，治疗原则是，早期治疗以六个月短期疗法为原则。一般，将作为一线抗结核药的rif(rifampin：利福平)、inh(isoniazid：异烟肼)、pza(pyrazinamide：吡嗪酰胺)、emb(ethambutol：乙胺丁醇)四剂并用，两个月后用rif、inh以及emb三剂维持治疗四个月。在早期重症监护治疗的两个月期间，可以用str(streptomycin：链霉素)来代替emb。在这种情况下，维持治疗投以rif以及inh。对于复发患者的再治疗的原则是，由于对首次治疗药大部分留有敏感性，因此再次使用原有药剂，治疗时比规定的初治期间延长三个月。对于初治失败者的再治疗，施行药敏试验，将初治所使用的药剂均予以排除，并用最少三剂、尽量四剂或其以上的过去未曾使用的新敏感性药剂进行治疗，原则上治疗十八个月以上。
肺结核的治疗原则上并用四剂，以预防门诊治疗和产生耐药性。抗结核药剂耐药菌以约每106次细胞分裂中1次的频率出现突变株。因此，需遵守同时使用最少两个以上抗结核药剂的多剂并用疗法的原则。
治疗结核病最大的问题是，对于一线抗结核药剂产生耐药性时没有特别的治疗方法。虽然通过开发出实际有效的抗结核药剂和系统管理，结核病的发病与死亡急剧减少，但是，由于耐多药结核病(multi-drugresistanttuberculosis，mdr-tb)的产生和获得性免疫缺陷综合征(aids)的流行，最近结核病正在趋于增加。mdr-tb是指对包含rif(rifampin：利福平)、inh(isoniazid：异烟肼)在内的至少两种药剂同时产生耐药性。判定标准是，在包含药剂的培养基中培养的结核菌株的数量大于在未包含药剂培养基中培养的菌株数量的1％。
最近，包括耐多药结核病在内的耐药结核病逐渐成为重大的保健问题。近几年，韩国的结核感染率不再减少，这与耐药结核病患者没有减少的事实具有密切的联系。另外，据报道50％的耐药结核病患者会死亡。因此因结核病死亡的原因中，相当多的数量基于耐药结核病。
1995年，韩国结核病实况调查中，对于inh的耐药率为9.2％。对于一种以上药剂的耐药率为9.9％，对于包括inh和rif在内的两种以上药剂的耐药率为5.3％。这些人正在成为向当地社区持续传播耐药菌的根源。
目前，虽然开发了几种二线抗结核剂，但是在效果方面还没有能够替代一线药剂的药剂。因此，开发出作用机理与现有药剂不同的新抗结核剂是非常紧迫的问题。
技术实现要素：
所要解决的技术问题
本发明的目的在于，提供一种由化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐。
本发明的目的在于，提供一种包含由化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐作为有效成分的结核病的预防或治疗用医药组合物。
本发明的目的在于，提供一种包含由化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐作为有效成分的耐药结核病的预防或治疗用医药组合物。
本发明的目的在于，提供一种包含由如下化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐作为有效成分的结核病的预防或改善用食品组合物。
本发明的目的在于，提供一种包含由如下化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐作为有效成分的耐药结核病的预防或改善用食品组合物。
技术方案
在由化学式1表示的菲基类化合物中，改变r1的取代基，并评价了对于h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)的抗结核活性，确认了当r1的取代基为碳原子数为4的丁基时，与碳原子数较少的甲基、乙基、丙基相比，抗结核活性优秀至少2-4倍以上，与碳原子数较多的正戊基、己基、庚基相比，抗结核活性优秀16至32倍，另外，确认了当r1的取代基为
化学式1
在所述化学式1中r1为丁基、r2为甲基时的化学式2的化合物如下所示。
化学式2
为了达成所述目的，本发明提供一种由化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐。
化学式2
本发明中所使用的术语“药学上允许的盐”是指保留所述化合物中所需的生物学和/或生理学活性并且尽量减小不需要的毒理学效应的所有盐。是指在该技术领域根据通常的方法制备的盐，这样的制备方法已被本领域技术人员所公知。具体而言，所述药学上允许的盐包括从药理学或生理学上允许的无机酸、有机酸以及碱衍生的盐，但是并非限定于此。
例如，药学上允许的碱加成盐可以由无机碱以及有机碱制备。由无机碱衍生的盐并非限定于此，但是可以包含钠、钾、锂、铵、钙以及镁盐。由有机碱衍生的盐并非限定于此，但是可以包含伯胺、仲铵、叔胺的盐；包含天然发生的被取代的胺的被取代的胺的盐；以及包含异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基乙醇胺、缓血酸胺(tromethamine)、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱(choline)、甜菜碱(betaine)、乙二胺、葡萄糖胺、n-烷基葡糖酰胺、可可碱(theobromine)、嘌呤、哌嗪、哌啶以及/或n-乙基哌啶的环胺的盐。另外，还可以包含羧酸衍生物，例如，包含甲酰胺(carboxamides)、低级烷基甲酰胺、二(低级烷基)甲酰胺等的甲酰胺。
例如，药学上允许的酸加成盐可以由无机酸以及有机酸制备。由无机酸衍生的盐包含盐酸、溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由无机酸衍生的盐包含醋酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸(malicacid)、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸(cinnamicacid)、扁桃酸(mandelicacid)、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸以及/或水杨酸等，但是并非限定于此。
本发明的另一个实施方式提供一种包含由如下化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐作为有效成分的结核病的预防或治疗用医药组合物。
化学式2
本发明中，结核病的预防或治疗用医药组合物的有效成分可以是由上述化学式2表示的化合物的s型或r型。
所述s型可以具有如下化学式3的结构，可以命名为(s)-甲基-1-((6-丁氧基-2,3-二甲氧基菲-10-基)甲基)-5-氧代吡咯烷-2-羧酸酯，所述r型可以具有如下化学式4的结构，可以命名为(r)-甲基-1-((6-丁氧基-2,3-二甲氧基菲-10-基)甲基)-5-氧代吡咯烷-2-羧酸酯。
化学式3
化学式4
本发明中，所述结核病是因被结核菌感染而产生的，所述结核病包括耐药结核病、肺结核、胆结核、骨结核、咽喉结核、淋巴腺结核、乳房结核、脊椎结核等，作为所述结核病病原菌的结核菌可以是结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis)、结核杆菌(tuberclebacillus)，更加具体而言，可以是结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis)。
在本发明的一实施例中，证实相当于所述化学式2的化合物的s型和r型的化学式3和化学式4的化合物对于结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis)具有抗结核活性。另外，证实相当于s型的化学式3的化合物与相当于r型的化学式4的化合物相比，抗结核活性优秀两倍以上。
对于本发明中所使用的术语“药学上允许的盐”的说明如前所述。
本发明中所使用的术语“预防”可以是指对个体投以本发明涉及的组合物以抑制或延迟结核发病的所有行为。本发明中所使用的术语“治疗”可以是指通过本发明的所述组合物使结核病导致的症状好转或对其有益的所有行为。
本发明的包含由化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐作为有效成分的医药组合物还可以包括：医药组合物的制备中通常所使用的合理的载体、赋形剂或稀释剂。此时，不会特别限制所述组合物包含的由化学式2表示的化合物或其药学上允许的盐，相对于组合物的总重量，可以包含0.001重量％至99重量％，优选0.01重量％至50重量％。
所述医药组合物可以具有选自由片剂、丸剂、粉剂、颗粒、胶囊、悬浮剂、口服液、乳剂、糖浆剂、灭菌水溶液、非水性溶剂、冻干剂以及栓剂所组成的组的任意一种剂型，并且可以是口服或非口服的多种剂型。形成制剂时，使用通常使用的填充剂、增量剂、耦合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来调剂。
用于口服的固态制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒、胶囊等，这样的固态制剂可以混合至少一种例如淀粉、碳酸钙、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等赋形剂来配制。另外，除单纯的赋形剂以外，也可以使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服的液态制剂有悬浮剂、口服液、乳剂、糖浆剂等，除常用的水、液体石蜡等单纯稀释剂以外，可以包括例如湿润剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等多种赋形剂。用于非口服的制剂中包括灭菌水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干剂、栓剂。非水性溶剂、悬浮溶剂可以使用诸如丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇、橄榄油的植物油、诸如油酸乙酯的可注射的酯等。栓剂的基材可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明胶等。
本发明的医药组合物可以以药学上有效的量进行给药。
本发明中术语“药学上有效的量”是指按照可适用于医学治疗的合理的利益/危险比值足够治疗疾病的量，有效用量水准可以根据包含个体种类、重症度、年龄、性别、疾病种类、药物活性、药物敏感度、给药时间、给药途径、排出比率、治疗期间、同时使用的药物的因素以及其他医药领域周知的因素来确定。本发明的组合物可以以个别治疗剂给药或与其他治疗剂一并给药，可以与现有的治疗剂依次或同时给药。并且，可以单一或多重给药。通过全面考虑所述因素，按照无副作用、以最小量能够获得最大效果的量进行给药是很重要的，可以由本领域技术人员容易确定。
并非特别限定个体，只要以治疗或预防结核为目的，任意一类均可适用本发明的医药组合物。例如，猴子、狗、猫、兔子、土拨鼠、小白鼠、老鼠、牛、羊、猪、山羊等非人类动物、人类、鸟类以及鱼类等任意一种均可适用，所述医药组合物可以是经非口服、皮下、腹腔内、肺内以及鼻腔内给药，为了局部治疗，必要时可以通过包括经病变内给药的合理的方法进行给药。根据个体的状态、体重、疾病程度、药物形态、给药途径以及期限，本发明的所述医药组合物的优选给药量有所不同，但是可以由本领域技术人员适当选择。例如，可以通过口服、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内颈膜或脑血管内注射进行给药，但是并非限定于此。
在规范的医学判断范围内，由医生确定合理的一日总用量，一般可以将0.001至1000mg/kg的量，优选0.05至200mg/kg，进一步优选0.1至100mg/kg的量，按照一日一次或分为数次给药。
本发明的另一实施方式，提供一种包含由如下化学式2表示的化合物或其医学上允许的盐作为有效成分的耐药结核病的预防或治疗用医药组合物。
化学式2
本发明中，所述耐药结核病可以是选自由广泛耐药结核病(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)、异烟肼耐药结核病(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)、利福平耐药结核病(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)、吡嗪酰胺耐药结核病(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)、链霉素耐药结核病(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)所组成的组中的一种以上。
在本发明的一实施例中，证实相当于由所述化学式2表示的化合物的s型和r型的由化学式3和化学式4表示的化合物对于广泛耐药结核病(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)、异烟肼耐药结核病(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)、利福平耐药结核病(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)、吡嗪酰胺耐药结核病(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)、链霉素耐药结核病(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)具有抗结核活性。
本发明中，对于术语“由化学式2表示的化合物”、“药学上允许的盐”、“预防”、“治疗”的说明如前面所述。
本发明的另一实施方式，提供一种包含由如下化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐作为有效成分的结核病的预防或改善用食品组合物。
化学式2
本发明中，对于术语“由化学式2表示的化合物”、“结核”、“预防”的说明如前面所述。
本发明中的术语“改善”可以是指对于个体投以包含由化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐作为有效成分的食品组合物，使结核的症状好转或对其有益的所有行为。
具体而言，为了预防或改善结核病，可以将本发明的由化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐添加到食品组合物中。
本发明的食品组合物可以包括丸剂、粉末、颗粒、冲剂、片剂、胶囊或液体制剂等形式，没有特别限制可以添加本发明的由化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐的食品种类，具有例如各种饮料、口香糖、茶、维生素复合剂、保健食品类等。
除由化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐以外，所述食品组合物中可以附加其他成分，且没有特别限制其种类。例如，与普通食品一样，可以将多种生药提取物、食品学上允许的食品辅助添加剂或天然碳水化合物等作为附加成分，且并非限定于此。
本发明的食品学上允许的盐可以是，通过食品学上允许的游离酸(freeacid)形成的酸加成盐或通过碱形成的金属盐。所述游离酸可以使用无机酸和有机酸。无机酸可以使用盐酸、硫酸、溴酸、亚硫酸或磷酸等，有机酸可以使用柠檬酸、醋酸、马来酸、富马酸、葡糖酸、甲磺酸等。另外，金属盐可以使用碱金属盐或碱土金属盐、钠盐、钾盐或钙盐。但是，并非必须限定于此。
本发明中的术语“食品辅助添加剂”是指可以辅助性地添加到食品中的构成要素，用于添加到各剂型的保健功能食品的制造中，本领域的技术人员可以适当选择使用。作为食品辅助添加剂的例，包括多种营养剂、维生素、矿物(电解质)、合成调味剂以及天然调味剂等调味剂、着色剂、填充剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增粘剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、碳酸饮料中所使用的碳酸化剂等，但是本发明的食品辅助添加剂的种类并非限定于所述例。
所述天然碳水化合物的例可以举出葡萄糖、果糖等单糖类；麦芽糖、蔗糖等双糖类；糊精、环糊精等多糖类；木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等糖醇，除上述以外，香味剂可以使用天然香味剂(索马甜等)、甜叶菊提取物(莱鲍迪甙a、甘草素等)以及合成香味剂(糖精、阿斯巴甜等)。
本发明的食品组合物可以包含健康功能性食品。本发明中使用的术语“保健功能食品”是指使用具有对人体有用功能的原料或成分制造并加工成片剂、胶囊、粉末、颗粒、液体以及丸等形式的食品。其中，功能是指在人体结构以及功能方面调节营养素或在生理学作用等的保健用途方面获得有用的效果。本发明的保健功能食品可以通过本领域通常使用的方法来制造，在进行所述制造时，可以添加本领域通常添加的原料以及成分来制造。另外，与一般药品不同的是，以食品为原料，没有长期服用药物时会产生的副作用等，便携性突出。
可以根据使用目的(预防、健康或治疗处置)来合理地确定有效成分的混合量。一般而言，在制造食品时，原料组合物中可以以1至50重量％，优选5至10重量％的量添加本发明的由化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐，但是并非限定于此。但是，以健康以及卫生为目的或调节健康为目的长期摄入时，也可以按照所述范围以下的量使用。
不会特别限制所述食品的种类。作为能够添加所述物质的食品的例，具有肉类、香肠、面包、巧克力、糖类、点心类、饼干类、披萨、拉面、其他面条类、口香糖类、包含冰淇淋类的乳制品、各种汤、饮用水、茶、保健饮料、酒精饮料以及维生素复合剂等，通常意思的健康功能食品均包括在内。
本发明的另一实施方式，提供一种包含由如下化学式2表示的化合物或其食品学上允许的盐作为有效成分的耐药结核病的预防或改善用食品组合物。
化学式2
本发明中，对于术语“由化学式2表示的化合物”、“在食品学上允许的”、“耐药结核病”、“预防”、“改善”的说明与前面所述相同。
有益效果
本发明涉及由化学式2表示的化合物以及由化学式2表示的化合物的预防或治疗结核病的用途。所述具有抗结核活性的由化学式2表示的化合物的特征在于，对于结核菌株和耐药结核菌株的活性优秀，细胞毒性低，可以用于结核病的预防或治疗用医药组合物中。
附图说明
图1是示出本发明的sch1702化合物的nmr1h结果的图表。
图2是示出本发明的sch1702化合物的nmr13c结果的图表。
图3是示出利用偏光仪分析本发明的sch1702化合物的s型、r型结果的图表。
图4示出在thp-1、raw264.7、l929以及hek-293细胞中相当于化学式3的化合物的sch1702(s型)的细胞毒性结果。实验重复实施三次，n＝3。值表示平均±标准偏差。
具体实施方式
下面，通过实施例进一步详细说明本发明。但是，如下实施例仅仅是例示本发明的，本发明的内容并非限定于如下实施例。
制备例1：化学式2的化合物(sch1702)的合成
通过如下反应式1示出的方法合成了化学式2的化合物(sch1702)。
反应式1：
在上面的反应式1中，使由化学式a表示的3,4-二甲氧基苯乙酸(homoveratricacid)和由化学式b表示的4-丁氧基苯甲醛(4-butoxybenzaldehyde)与三乙胺(triethylamine，et3n)、乙酸酐(aceticanhydride，ac2o)一同在n2的条件下反应10小时，冷却后用过滤器过滤，然后用etoac提纯，获得了黄色的化合物(工艺1-1)。
在由化学式c表示的化合物中添加亚硫酰氯(thionylchloride，socl2)，使其反应40分钟，真空浓缩，去除溶剂后，再次添加吡啶(pyridine)和甲醇后，再次在冰槽内反应40分钟，获得了由化学式d表示的化合物(工艺1-2)。
在冰槽的条件下，在由化学式d表示的化合物中添加ch2cl2和无水fecl3后，在常温下使其反应12小时，然后添加nahco3，分馏有机层并进行干燥，从而获得了由化学式e表示的黄色化合物(工艺1-3)。
在0℃的条件下，在由化学式e表示的化合物中添加lialh4(lithiumaluminiumhydride：氢化铝锂)和thf(tetrahydrofolicacid：四氢叶酸)，并使其反应50分钟后，添加thf和h2o，使反应停止，在甲醇的条件下再结晶，获得了由化学式f表示的白色的化合物(工艺1-4)。
在由化学式f表示的化合物中添加酒精和nai、乙腈(acetonitril)以及tmscl(chlorotrimethylsilane：三甲基氯硅烷)，使其反应10分钟后，添加谷氨酸二异丙酯(l-diisopropylglutamate或d-diisopropylglutamate)和k2co3，使其反应5小时后，在水和ch2cl2的条件下进行了分馏。对有机层进行真空蒸发，添加乙酸和甲醇，使其在50℃下反应5小时。真空蒸发后，添加1,4-二氧己烷(1,4-dioxane)、甲醇以及koh，在常温下使其反应1小时后，在水和ch2cl2的条件下进行了分馏。添加h3po4，使水层酸性化为ph4.0。用过滤器过滤后，在甲醇的条件下再结晶，获得了白色的化合物sch1702(化学式2)(工艺1-5)。在工艺1-5反应中，采用l-谷氨酸二异丙酯(l-diisopropylglutamate)时，获得了(s)-甲基-1-((6-丁氧基-2,3-二甲氧基菲-10-基)甲基)-5-氧代吡咯烷-2-羧酸酯((s)-methyl1-((6-butoxy-2,3-dimethoxyphenanthren-10-yl)methyl)-5-oxopyrrolidine-2-carboxylate)，采用d-谷氨酸二异丙酯(d-diisopropylglutamate)时，获得了(r)-甲基-1-((6-丁氧基-2,3-二甲氧基菲-10-基)甲基)-5-氧代吡咯烷-2-羧酸酯((r)-methyl1-((6-butoxy-2,3-dimethoxyphenanthren-10-yl)methyl)-5-oxopyrrolidine-2-carboxylate)(工艺1-5)。
所述sch1702化合物为由本发明的化学式2表示的化合物，分别在图1和图2中示出了nmr分析结果(1h、13c)。另外，在图3中示出了利用偏光仪分析sch1702的s型、r型的结果。
比较例1：化学式5的化合物(sch1701)
为了与在制备例1制备的sch1702化合物比较活性，将化学式5的化合物(sch1701)使用为比较例。
化学式5
所述sch1701化合物相当于，在如下化学式1中r1的取代基为甲基(-ch3)，sch1702化合物相当于r1的取代基为丁基(-butyl)。
化学式1
实施例1：抗结核功能评价
利用rema(resazurinmicrotiterassay：刃天青微量滴定法)和mgit法，双重确认了抗结核功能。
1)刃天青(resazurin)溶液的准备
在40ml的灭菌水中放入4mg的刃天青钠盐(resazurinsodiumsalt，sigma-aldrich)，制备0.01％的刃天青溶液后，用0.45μm的过滤器过滤，从而制备了刃天青(resazurin)溶液，冷藏保管后使用。
2)结核菌以及耐药结核菌的准备
将h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)、h37rv(mycobacteriumtuberculosish37rv：结核分枝杆菌h37rv)、广泛耐药结核(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)菌、异烟肼耐药结核(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)菌、利福平耐药结核(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)菌、吡嗪酰胺耐药结核(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)菌、链霉素耐药结核(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)菌与7h9培养基(7h9media)稀释至最终菌数浓度为5x105cells/ml以备用。
3)抗结核活性的验证方法
按照如下的方法进行rema。
在分别加入100μl的7h9培养基(7h9media)的96孔(well)内添加100μl的化学式3和化学式4的化合物后，连续稀释(serialdilution，1.5μg/ml至50μg/ml)，然后将结核菌株h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)、h37rv(mycobacteriumtuberculosish37rv：结核分枝杆菌h37rv)、广泛耐药结核(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)菌、异烟肼耐药结核(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)菌、利福平耐药结核(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)菌、吡嗪酰胺耐药结核(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)菌、链霉素耐药结核(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)菌的浓度调节为5x105cells/ml后，分别添加100μl。一周后，分别将30μl的备用的刃天青(resazurin)溶液添加到各孔(well)中，确认了抗结核活性。
作为阳性对照组，使用了异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)、链霉素(streptomycin，str)、吡嗪酰胺(pyrazinamide，pza)、emb(ethambutol：乙胺丁醇)，作为阴性对照群，使用了等量的二甲基亚砜(dmso)。
按照如下的方法进行mgit法。
利用mgit960系统确认了化学式3和化学式4的化合物的结核菌生长抑制能力。在mgit管中放入7ml的7h9培养基(7h9media)后，再添加740至820μl的生长因子(growthsupplement)，然后添加化学式3和化学式4的化合物，调节浓度后进行使用。然后，将结核菌株h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)、h37rv(mycobacteriumtuberculosish37rv：结核分枝杆菌h37rv)、广泛耐药结核(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)菌、异烟肼耐药结核(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)菌、利福平耐药结核(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)菌、吡嗪酰胺耐药结核(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)菌、链霉素耐药结核(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)菌的浓度调节为5x105cells/ml后，加入100μl，用mgit设备每天测定结核菌的生长，从而测定了各化合物的结核菌生长抑制活性。
作为阳性对照组，使用了异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)、链霉素(streptomycin，str)、吡嗪酰胺(pyrazinamide，pza)、emb(ethambutol：乙胺丁醇)，作为阴性对照组，使用了等量的dmso。
4)抗结核活性的验证结果
在下面的表中，按照mic(minimuminhibitoryconcentration：最小抑菌浓度，μg/ml)整理并示出了按照上述实验方法的抗结核功能评价结果。
a、对于结核(ra)菌的抑制效果
表1示出sch1702(s型以及r型)对于h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)的抗结核活性。
下面表1中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，并且将异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)以及链霉素(streptomycin，str)用作阳性对照组。
参照所述表1，其结果显示为，相当于本发明的化学式1的sch1702化合物对于结核菌h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，并且与比较例的sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表1
b、对于结核(rv)菌的抑制效果
表2示出sch1702(s型以及r型)对于h37rv(mycobacteriumtuberculosish37rv：结核分枝杆菌h37rv)的抗结核活性。
下面表2中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)、链霉素(streptomycin，str)、吡嗪酰胺(pyrazinamide，pza)、emb(ethambutol：乙胺丁醇)用作阳性对照组，将等量的dmso用作阴性对照组。
参照所述表2，其结果显示为，相当于本发明的化学式2的sch1702化合物对于结核菌h37rv(mycobacteriumtuberculosish37rv：结核分枝杆菌h37rv)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，并且与比较例的sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表2
c、对于耐药结核(xdr)菌的抑制效果
表3示出sch1702(s型以及r型)对于广泛耐药结核(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)菌的抗结核活性。
下面表3中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)、链霉素(streptomycin，str)、吡嗪酰胺(pyrazinamide，pza)、emb(ethambutol：乙胺丁醇)用作阳性对照组，将等量的dmso用作阴性对照组。
参照所述表3，其结果显示为，相当于本发明的化学式2的sch1702化合物对于作为耐药结核菌的广泛耐药结核菌(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，并且与比较例的sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表3
d、对于耐药结核(inhr)菌的抑制效果
表4示出sch1702(s型以及r型)对于异烟肼耐药结核菌(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)的抗结核活性。
下面表4中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)以及链霉素(streptomycin，str)用作阳性对照组。
参照所述表4，其结果显示为，相当于本发明的化学式2的sch1702化合物对于作为耐药结核菌的异烟肼耐药结核菌(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，并且，与比较例的sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表4
e、对于耐药结核(rifr)菌的抑制效果
表5示出sch1702(s型以及r型)对于利福平耐药结核菌(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)的抗结核活性。
下面表5中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)以及链霉素(streptomycin，str)用作阳性对照组。
参照所述表5，其结果显示为，相当于本发明的化学式2的sch1702化合物对于作为耐药结核菌的利福平耐药结核菌(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，与sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表5
f、对于耐药结核(pzar)菌的抑制效果
表6示出sch1702(s型以及r型)对于吡嗪酰胺耐药结核菌(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)的抗结核活性。
下面表6中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)以及链霉素(streptomycin，str)用作阳性对照组。
参照所述表6，其结果显示为，相当于本发明的化学式2的sch1702化合物对于作为耐药结核菌的吡嗪酰胺耐药结核菌(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，并且，与比较例的sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表6
g、对于耐药结核(strr)菌的抑制效果
表7示出sch1702(s型以及r型)对于链霉素耐药结核菌(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)的抗结核活性。
下面表7中使用的药物为sch1702(s型以及r型)，sch1701(s型)用作比较例，异烟肼(isoniazid，inh)、利福平(rifampin，rif)以及链霉素(streptomycin，str)用作阳性对照组。
参照所述表7，其结果显示为，相当于本发明的化学式2的sch1702化合物对于作为耐药结核菌的链霉素耐药结核菌(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)的抗结核活性优秀。另外，证实sch1702化合物的s型的活性比r型优秀，并且，与比较例的sch1701(s型)相比，抗结核活性优秀两倍以上。
表7
在表8中总结所述sch1702(s型)化合物对于结核以及耐药结核菌株的抑制效果，则结论如下。即，sch1702(s型)化合物对于结核菌株h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)、h37rv(mycobacteriumtuberculosish37rv：结核分枝杆菌h37rv)、作为耐药结核菌株的广泛耐药结核(extensivelydrug-resistanttuberculosis，xdr-tb)菌、异烟肼耐药结核(isoniazid-resistanttuberculosis，inhr-tb)菌、利福平耐药结核(rifampin-resistanttuberculosis，rifr-tb)菌、吡嗪酰胺耐药结核(pyrazinamide-resistanttuberculosis，pzar-tb)菌、链霉素耐药结核(streptomycin-resistanttuberculosis，strr-tb)菌的抗结核活性优秀。
表8
实施例2：细胞毒性评价
在与结核的感染、增殖相关的thp-1、raw264.7、l929以及hek-293细胞中测定了细胞毒性。以10x104细胞/孔(cells/well)，在dmem培养基中处理sch1702(s型)，并培养24小时、48小时。作为新培养基，在24孔板(24wellplate)内加入500μl的培养基和5μl的mtt溶液，使其进一步反应四小时。去除培养基后，在200μl的dmso中溶解甲腊(formazan)，使用微孔板读数仪(microplatereader)，在540nm波长下测定了吸光度，以50％毒性浓度(cc50，50％cytotoxicconcentration)标记细胞毒性，并在图4中示出其结果。测定值均为重复实验三次后的平均值，并示出了其结果。参照所述图4，可以确认sch1702(s型)的化合物几乎没有细胞毒性。
实施例3：不同取代基对于结核菌株的抗结核活性评价
表9示出在化学式1的s型化合物中改变r1的取代基后，其对于h37ra(mycobacteriumtuberculosish37ra：结核分枝杆菌h37ra)的抗结核活性。
其结果如表9所示，当r1的取代基为碳原子数为4的丁基(butyl)时，与碳原子数较少(1-3)的甲基、乙基、丙基相比，抗结核活性优秀至少2-4倍以上。另外，与碳原子数较多(5至7)的正戊基(-n-pentyl)、己基(-hexyl)、庚基(-heptyl)相比，抗结核活性优秀16至32倍。另外，当取代基为
表9
总结化学式1中r1取代基对于抗结核活性和细胞毒性的效果如表10至11。即，sch1702化合物的抗结核活性最为优秀，细胞毒性也优秀。
表10
表11
表12
以上对本发明的优选实施例进行了详细说明，但是本发明的保护范围并非限定于此，本领域技术人员利用权利要求书所定义的本发明的基本概念进行的多种变形以及变更形式也属于本发明的保护范围。