本发明属于有机合成领域，具体而言涉及一种利用衍生化的方法纯化依维莫司。
背景技术：
依维莫司(everolimus，商品名：afinitor)为新一代大环内酯类雷帕霉素衍生物药物，由诺华开发，用于舒尼替尼或索拉非尼治疗失败的晚期肾细胞癌；可增补神经钙蛋白抑制剂环孢素的免疫抑制作用，用于预防心脏或肾脏移植的排异反应；同时也是目前药物洗脱支架最常用的药物之一，具有结构式如下：
现有技术制备得到依维莫司粗品中，原料雷帕霉素及依维莫司7-环异构体(结构式如下)为主要杂质且硅胶柱层析也难以除去这两种杂质，现有技术中大多利用制备液相方法进行纯化，且需要通过多次制备液相纯化，才能得到产品，而多次利用制备液相纯化成本较高，不利于工业化生产。因此，寻找一种新的依维莫司纯化方法是十分必要的。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种依维莫司的纯化方法，包括：
(1)在溶剂和碱作用下，依维莫司7和硅基化试剂反应，分离得到化合物7-ⅰ；
(2)在溶剂中，化合物7-ⅰ在脱硅基试剂作用下，反应得到依维莫司7-ⅱ粗品；
其中，r选自tms、tes、tips、ipdms、deips、tbs、tbdps、tps或dpms，优选自tms、tes、tips、ipdms、deips、tbs、tbdps或tps，进一步优选为tms、tes、tbs或tbdps。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(1)中，依维莫司7、硅基化试剂、碱的投料摩尔比为1：1～3：1～3，优选为1：1.5～2：1.5～2，进一步优选为1：1.6～1.8：1.6～1.8；进一步优选为1：1.6：1.6。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(1)中，溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、四氢呋喃、乙腈、dmf或吡啶，优选为二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、dmf或吡啶；进一步优选为二氯甲烷。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(1)中，碱选自咪唑、吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺、dmap或dbu，优选为咪唑、吡啶或三乙胺。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(1)中，硅基化试剂选自tms-cl、tms-otf、hmds、tes-cl、tes-otf、tips-cl、tips-otf、ipdms-cl、deips-cl、deips-otf、tbs-cl、tbs-otf、tbdps-cl、tps-cl或dpms-cl，优选为tms-cl、tms-otf、hmds、tes-cl、tes-otf、tips-cl、tips-otf、ipdms-cl、deips-cl、deips-otf、tbs-cl、tbs-otf、tbdps-cl或tps-cl，进一步优选为tms-cl、tms-otf、hmds、tes-cl、tes-otf、tbs-cl、tbs-otf或tbdps-cl，进一步优选为tms-cl、tes-cl、tbs-cl或tbdps-cl。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(1)中，将依维莫司7溶解于溶剂中，加入碱，温度控制在-25～10℃，缓慢加入硅化试剂，其中优选温度控制为-20～5℃，进一步优选温度控制在-10～0℃。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(1)中，所述分离优选硅胶柱层析分离。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(2)中，其中化合物7-ⅰ与脱硅基试剂的投料摩尔比为1：0.1～0.8，优选为1：0.1～0.5，进一步优选为1：0.2。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(2)中，所述脱硅基试剂选自盐酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、四丁基氟化铵、氟化氢吡啶或三乙胺三氟化氢，优选采用盐酸，进一步优选采用浓度为0.4～0.2mol/l的盐酸。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(2)中，其中溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、丙酮、水中的一种或两种以上的混合溶剂，优选乙醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、丙酮中的一种，或其与水的混合溶剂，进一步优选为乙腈或乙腈/水的混合溶剂。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(2)中，将化合物7-ⅰ溶于溶剂中，控制温度为-25～10℃，加入脱硅基试剂，其中优选控制温度为-20～5℃，进一步优选控制温度为-10～0℃。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(2)反应完毕后，还可以进一步包括后处理过程，所述后处理过程包括但不限于控制温度为-25～10℃，加入有机溶剂与水，搅拌分层，水相用有机溶剂反萃，合并有机相，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液中任选地加入bht，减压蒸除溶剂，得到依维莫司7-ⅱ粗品。在本申请一些实施方案中，控制温度为-20～5℃，优选为-10～0℃；在本申请的一些实施方案中，所述有机溶剂选自二氯甲烷或氯仿，优选二氯甲烷；在本申请一些实施方案中，滤液中加入bht，优选bht的质量与依维莫司7的质量的比值为0.5％。
在本申请的一些实施方案中，上述纯化方法制备得到的依维莫司7-ⅱ粗品中，雷帕霉素的含量≤0.3％，进一步优选≤0.2％，更进一步优选≤0.15％。
在本申请一些实施方案中，上述纯化方法，任选地进一步包括后续纯化步骤，包括但不限于制备液相纯化，所述制备液相优选采用c8或c18反相制备柱。
作为本申请的一种实施方式，上述纯化方法中，其中依维莫司7的制备通过以下步骤(a)：化合物6在溶剂中脱硅基试剂作用下反应：
在本申请一些实施方案中，上述步骤(a)中，化合物6与脱硅基试剂的投料摩尔比为1：0.1～0.8，优选为1：0.1～0.5，进一步优选为1：0.2。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(a)，脱硅基试剂选自盐酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、四丁基氟化铵、氟化氢吡啶或三乙胺三氟化氢，优选采用盐酸，进一步优选采用浓度为0.4～0.2mol/l的盐酸。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(a)中，溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、丙酮、水中的一种或两种以上的混合溶剂，优选乙醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、丙酮中的一种，或其与水的混合溶剂，进一步优选为乙腈或乙腈/水的混合溶剂。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(a)中，将化合物6溶于溶剂中，控制温度为-25～10℃，加入脱硅基试剂，其中优选控制温度为-20～5℃，进一步优选控制温度为-10～0℃。
在本申请一些实施方案中，上述步骤(a)中，反应完毕后，控制温度在-25～10℃加入后处理溶剂，优选控制温度为-20～5℃，进一步优选控制温度为-10～0℃。其中后处理溶剂可以为二氯甲烷与水的混合。其中加入后处理溶剂后，进一步包括搅拌分层，其中水相用二氯甲烷萃取。
作为本申请的一种实施方式，上述纯化方法中，其中化合物6的制备通过以下步骤(b)：在溶剂和碱作用下，化合物5和化合物4反应，
在本申请的一些实施方案中，上述步骤(b)中，化合物4、碱、化合物5的投料摩尔比选自8～2：8～2：1，优选为6～3：6～3：1，进一步优选为4：4：1。
在本申请的一些实施方案中，上述步骤(b)中，溶剂选自正己烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、乙苯、二甲苯或氯苯，优选为正己烷、二氯乙烷、甲苯或二甲苯，进一步优选为正己烷。
在本申请的一些实施方案中，上述步骤(b)中，碱选自三乙胺、二异丙基乙基胺、2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶或dbu，优选为二异丙基乙基胺或2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶，进一步优选为2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶。
在本申请的一些实施方案中，上述步骤(b)中，将式4化合物溶于溶剂中，加入碱和式5化合物，35～80℃下反应，优选40～70℃下反应，进一步优选50～60℃下反应。
另一方面，本申请提供了式6化合物：
另一方面，本申请提供了式6化合物在制备依维莫司中的用途。
本申请通过将依维莫司进行衍生化、分离、然后水解，经处理后的得到的依维莫司7-ⅱ粗品中杂质雷帕霉素含量得到大幅度降低，依维莫司7-环异构体含量同时也得到降低，进一步通过一次制备液相纯化就可以较高收率得到纯度较高的产品，从而降低了纯化步骤的工业成本，并有效控制雷帕霉素和依维莫司7-环异构体的含量；本申请还进一步提供了依维莫司的制备方法，该方法收率高、操作简便、适于工业化生产。
本申请中，若无特别说明，以下缩写或术语具有如下所示的含义：
tms：三甲基硅基；
tes：三乙基硅基；
tips：三异丙基硅基；
ipdms：二甲基异丙基硅基；
deips：二乙基异丙基硅基；
tbs：叔丁基二甲基硅基；
tbdps：叔丁基二苯基硅基；
tps：三苯基硅基；
dpms：二苯基甲基硅基；
-otf：cf3so3-；
tms-otf：三氟甲磺酸三甲基硅酯(tes-otf、tips-otf、deips-otf、tbs-otf含义以此类推)；
tms-cl：三甲基氯硅烷(tms-cl、tes-cl、tips-cl、ipdms-cl、deips-cl、tbs-cl、tbdps-cl、tps-cl、dpms-cl以此类推)；
tf2o：三氟甲磺酸酐；
bht：2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚；
hmds：(me3si)2nh(六甲基二硅胺烷)；
dmf：n,n-二甲基甲酰胺；
dmap：4-二甲氨基吡啶；
dbu：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；
tlc：薄层色谱；
h：指小时；
柱层析：指经典液相色谱法中的液-固吸附柱色谱法；
制备液相：指制备型高效液相，包括但不限于正相制备液相和反相制备液相。
本申请中，计算投料摩尔比时，即使原料不纯，仍参照纯品计算方法计算。例如，依维莫司7、硅基化试剂、碱的投料摩尔比计算中，依维莫司7的摩尔数(mol)由(依维莫司7的质量g)除以(依维莫司纯品的摩尔质量g/mol)计算得到。
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1：化合物2的制备
反应瓶依次加入乙酸乙酯(1.7l)和雷帕霉素(140g，化合物1)，搅拌溶解。加入咪唑(47g)，降温至0～5℃，开始滴加tms-cl(66.5g)，滴毕，控制在0～5℃反应0.5h，tlc监控至原料反应完毕。稀硫酸调至ph＝1，继续反应2.5h，用咪唑调至ph＝7，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液，浓缩物经硅胶柱层析(流动相条件：乙酸乙酯/正己烷梯度洗脱)纯化得类白色化合物2(收率：91％)。
实施例2：化合物6的制备
反应瓶中依次加入2,6-二甲基吡啶(72g)、二氯甲烷(320ml)和化合物3(98.7g)，搅拌均匀。控温在-5～5℃滴加tf2o/二氯甲烷溶液(174g/95ml)，滴毕，至化合物3反应完全。水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，浓缩物(化合物4，172.6g)加正己烷(690ml)溶解，搅拌下加入2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(115g)和化合物5(138g)，50～60℃搅拌，反应22h，反应完全。快速硅胶柱纯化，浓缩得类白色化合物6(收率为70％)。
13c-nmr(cdcl3,500mhz)δ:209.1,207.1,198.6,169.1,166.9,139.0,137.8,136.3,132.2,130.3,125.4,126.9,126.8,98.9,85.0,82.6,77.5,73.6,70.7,66.1,62.8,59.6,56.9,55.3,50.9,44.9,43.5,40.6,40.2,40.1,39.0,37.9,35.8,35.0,34.7,33.5,32.4,32.3,31.1,29.7,26.3,26.2,25.7,24.4,21.6,20.5,15.5,15.4,14.9,13.4,13.2,10.5,-0.14,-5.42,-5.45。
ms[m-h]-:m/z1142.7。
实施例3：依维莫司7的制备
500ml反应瓶中依次加入乙腈(220ml)和化合物6(22g)，搅拌溶解。控制温度在-10～0℃缓慢加入0.2mol/l盐酸(19.2ml)，加完反应0.5h，tlc监控至反应完全。控制温度在-10～0℃加入二氯甲烷/纯化水(220ml/220ml)，搅拌分层，水相用二氯甲烷(106ml)萃取。合并有机相，纯化水洗涤(220ml×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干得固体依维莫司7(20.4g)。
实施例4：依维莫司7-ⅱ粗品的制备
其中，r为tbs。
500ml反应瓶中依次加入上述浓缩物(依维莫司7，20.4g)和二氯甲烷(212ml)，搅拌溶解，加入咪唑(2.36g)，搅拌溶解。控制温度在-10～0℃缓慢滴加tbs-cl(5.21g)的二氯甲烷(15ml)溶液，滴毕，反应20min，tlc监控至反应完成。加入纯化水(212ml)，搅拌分层，有机相用纯化水洗涤(238ml×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，过硅胶柱(乙酸乙酯/正己烷＝1/1)，收集所需组分，于25～30℃浓缩至干，得化合物7-ⅰ-a(21.3g)。
500ml反应瓶中依次加入乙腈(220ml)和上步所得化合物7-ⅰ-a(21.3g)，搅拌溶解。控制-10～0℃缓慢加入0.2mol/l盐酸(19.2ml)，加完反应0.5h，tlc监控至反应完毕。控制温度在-10～0℃，加入二氯甲烷/纯化水(220ml/220ml)，搅拌分层，水相用二氯甲烷(106ml)萃取。合并有机相，纯化水洗涤(220ml×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，向滤液中加入bht(bht质量与依维莫司7质量的比值为0.5％)，25～30℃减压蒸干，得到依维莫司7-ⅱ粗品(19.6g)。
实施例5：依维莫司7-ⅱ粗品的纯化
将依维莫司7-ⅱ粗品(19.6g)用乙腈(31.8ml)溶解，过滤。上c18制备柱(填料型号：c18(ii)-ep-dm-10-110a，流动相(v:v):乙腈：水＝50:50(含0.1％乙酸))，得经制备液相纯化的依维莫司7-ⅱ(14.1g)。
实施例6：依维莫司7-ⅱ粗品的制备及其纯化
取依维莫司7(20.4g)(参照实施例3制备得到)和二氯甲烷(200ml)，加入反应瓶中，搅拌溶解，加入三乙胺(3.4g)，搅拌溶解。控制-10～0℃缓慢滴加tms-cl/二氯甲烷(3.7g/10ml)溶液，开始tlc监控，至依维莫司基本反应完毕。加入200ml纯化水，搅拌分层，有机相用纯化水洗涤(220ml×2次)，无水硫酸钠干燥0.5h以上，过滤，过硅胶柱，收集所需组分，于25～30℃浓缩至干。
上述浓缩物参照实施例4方法脱去硅基保护基，进一步参照实施例5方法，上c18制备柱(填料型号：c18(ii)-ep-dm-10-110a，流动相(v:v):乙腈：水＝50:50(含0.1％乙酸))，得经制备液相纯化的依维莫司7-ⅱ。
实施例7：依维莫司7-ⅱ粗品的制备及其纯化
取依维莫司7(20.4g)(参照实施例3制备得到)和二氯甲烷(200ml)，加入反应瓶中，搅拌溶解，加入吡啶(2.7g)，搅拌溶解。控制-10～0℃缓慢滴加tes-cl/二氯甲烷(5.1g/20ml)溶液，滴完反应20min，开始tlc监控，至依维莫司基本反应完毕。加入200ml纯化水，搅拌分层，有机相用纯化水洗涤(215ml×2次)，无水硫酸钠干燥0.5h以上，过滤，过硅胶柱，收集所需组分，于25～30℃浓缩至干。
上述浓缩物参照实施例4方法脱去硅基保护基，进一步参照实施例5方法，上c18制备柱(填料型号：c18(ii)-ep-dm-10-110a，流动相(v:v):乙腈：水＝50:50(含0.1％乙酸))，得经制备液相纯化的依维莫司7-ⅱ。
实施例8：依维莫司7-ⅱ粗品的制备及其纯化
取依维莫司7(20.4g)(参照实施例3制备得到)和二氯甲烷(200ml)，加入反应瓶中，搅拌溶解，加入咪唑(2.3g)，搅拌溶解。控制-10～0℃缓慢滴加tbdps-cl/二氯甲烷(9.4g/25ml)溶液，滴完反应20min，开始tlc监控，至依维莫司基本反应完毕。加入200ml纯化水，搅拌分层，有机相用纯化水洗涤(230ml×2次)，无水硫酸钠干燥0.5h以上，过滤，过硅胶柱，收集所需组分，于25～30℃浓缩至干。
上述浓缩物参照实施例4方法脱去硅基保护基，进一步参照实施例5方法，上c18制备柱(填料型号：c18(ii)-ep-dm-10-110a，流动相(v:v):乙腈：水＝50:50(含0.1％乙酸))，得经制备液相纯化的依维莫司7-ⅱ。
对比例1：
取依维莫司7(36.8g)(参照实施例3制备得到)用0.6l乙腈溶解，过滤。上c18制备柱(填料型号：c18(ii)-ep-dm-10-110a，流动相(v:v):乙腈：水＝50:50(含0.1％乙酸))，得经制备液相纯化的依维莫司7(16.6g)。
实施例9杂质含量分析
hplc检测条件：参照高效液相色谱面积归一化法(2015《中国药典》通则0512)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂[agilentzorbaxsb-c18(150×4.6mm，3.5μm)]。流动相(v:v)：以0.1％甲酸溶液为流动相a，乙腈-甲醇(50：50)为流动相b。流速为每分钟1.6ml，进行梯度洗脱，柱温为45℃，检测波长为277nm，进行依维莫司液相分析。
表1：依维莫司hplc纯度分析