本发明涉及酶解蛋白提取领域，特别是一种鸡骨双酶解方法。
背景技术：
骨蛋白肽的酶解产物为多肽，其包括氨基酸同时富含k，na，ca，mg，p，cu，zn，fe等元素，作为一种增强骨骼健康的保健品其市场前景广泛。现有技术中，通过酶解进行骨蛋白水解操作是非常多的，但是，由于骨骼不易分解破坏的特性，其水解效率并不高。
cn200910309876.3公开了一种鸡骨蛋白酶解物及其制备的鸡肉香精基料，其采用胰酶和flavourzyme复合风味蛋白酶通过特定的酶解工艺达到生产蛋白酶解产物的目的。
该方案的优点是充分利用了鸡骨，降低了调味品的生产成品。但是起存在的问题是，酶解效率偏低。
cn200710059629.3公开了一种骨蛋白肽钙的生产工艺,依照下列步骤进行:①将畜禽骨制成骨糜作为水解底物；②调ph至5-7后,先使用骨胶原酶,然后再使用普通蛋白酶进行水解,水解后升温灭酶；③对骨蛋白水解液进行过滤,滤液经过膜过滤后干燥,即可得到骨蛋白肽粉；将滤渣加酸溶解后,然后经过过滤处理后,将滤液进行干燥,即可得到骨质磷酸钙粉；最后将骨蛋白肽粉和骨质磷酸钙粉混合,即可得到骨蛋白肽钙粉。该方案具有如下的优点和积极效果:1.人体易于吸收,并且钙磷比合理。其钙磷比为2∶1左右,是良好的补钙制品。2.营养丰富。该方案产品骨蛋白肽钙中总蛋白质的含量在10.83％,骨蛋白肽8.56％,钙的含量为6.16％,磷的含量为2.73％。
cn201610943245.7公开了一种制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法。所述制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法包括如下步骤：步骤一、软骨预处理；步骤二、软骨粉的制备；步骤三、脱脂处理；步骤四、脱钙处理；步骤五、除杂沉淀；步骤六、胶原蛋白的制备；步骤七：测定胶原蛋白含量；步骤八：配制胶原蛋白液；步骤九：胶原蛋白多肽液半成品的制备；步骤十：胶原蛋白多肽的制备。该制备工艺不仅很好的开发和利用了动物骨骼，增加了对动物副产物的开发价值和空间，而且深化和丰富了胶原蛋白和胶原蛋白肽提取的方法，为胶原蛋白多肽应用范围的研究奠定了理论基础。
cn201510556199.0公开了一种牛骨胶原蛋白肽的制备方法，它涉及一种蛋白肽的制备方法。本发明的主要目的是通过对牛骨先后采用两次破碎、二次复煮、高温蒸煮和超滤膜浓缩技术并结合特定的复合酶制剂，解决现有生产工艺制备牛骨胶原蛋白肽提取率低下，易褐变，能耗大，生产周期长的问题。方法：一、筛选；二、一次破碎；三、二次破碎；四、清洗；五、高温提取；六、二次复煮；七、过滤分离；八、液液分离；九、酶解；十、杀菌灭酶；十一、固液分离；十二、超滤膜浓缩，十三、喷雾干燥；十四、包装，即得到牛骨胶原蛋白肽。
上述的技术方案存在的共同的问题在于，水解效率低，并未明确如何进一步提高酶解效果以达到充分水解的目的。
cn201310271584.1公开了一种牦牛骨胶原蛋白肽的制备方法，工艺过程包括原料前处理，明胶提取，分离胶原蛋白提取液，复合酶解，灭酶灭菌，分离肽液，脱色脱腥，浓缩干燥。其复合酶解时所采用的复合酶是由蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶组成。其优点是，明胶提取过程简单，利用混合液的流动，将油脂和明胶完全分离；酶解温度为48-52℃，时间为4-6小时，较一般酶解温度为低，缩短了产品制备时间；有灭酶、灭菌工序，有脱色、脱腥工序，使得产品食用口味更佳。适用于牦牛骨胶原蛋白肽的制备。
该方案采用多种酶来提高水解性能，并且采用了纤维素酶和木聚糖酶来提高酶解效果，但是其并不适用于对于鸡骨的高度酶解操作。
《酶解鸭骨制取ace抑制肽工艺条件的优化》中国酿造2011年第8期记载了通过木瓜蛋白酶水解鸭骨，考察了酶解过程中，底物浓度、酶底比、水解温度、水解时间对水解程度影响。
但是该文章同样没有考虑到是否可以通过引进外界物质达到提高酶解效果。
通过上述的记载可以发现，传统的技术将主要的研究方向集中在温度、底物浓度、水解时间等工艺参数上，并没有在前处理以及水解促进剂方面进行过多的研究。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种酶解效率高的鸡骨双酶解方法。
其具体方案为：一种鸡骨双酶解方法，包括如下步骤：
步骤1：将鸡骨碾碎，加水混合制备成为鸡骨泥悬浮液；加入naoh调节体系ph为8-10；搅拌混合30-60min；
步骤2：将步骤1得到的混合物过滤后加入适量的水，然后加入盐酸调节体系ph为4-5；反应一段时间使骨粉溶解；
步骤3：将步骤2得到的混合物过滤后加入适量的水，加入少量的柠檬酸调节体系ph为5-6，加热到80-85℃，加热时间为30-60min；
步骤4：将步骤3的混合物、胃蛋白酶、组织蛋白酶以及占鸡骨重量1-2％的多糖混合，形成浆状混合物，以36.5-37.5℃的温度进行酶解2-3h；浆状混合物在酶解过程中控制ph为5-6；
步骤5：将步骤4得到的混合物灭酶、降温、离心后得到上清液，干燥得到鸡骨蛋白酶解物；
所述的多糖由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：1-2：1-2。
在上述的鸡骨双酶解方法中，胃蛋白酶的用量为3000u/g骨粉，组织蛋白酶的用量为3000u/g骨粉。
在上述的鸡骨双酶解方法中，所述的步骤4中通过沸水水浴灭酶，然后通过减压进行干燥。
在上述的鸡骨双酶解方法中，步骤1中，所述的鸡骨和水的重量比为1:2-4；鸡骨泥悬浮液中鸡骨粒度为80-100目；
步骤2中，所述的鸡骨和水的重量比为1：1；
步骤3中，所述的鸡骨和水的重量比为1：2-3。
在上述的鸡骨双酶解方法中，步骤1中，鸡骨泥悬浮液的制备方法为：将所述的鸡骨加入适量的水后加入到粉碎机中进行间歇粉碎得到鸡骨泥悬浮液。
在上述的鸡骨双酶解方法中，所述的步骤1中，体系ph调节至8.5-9.5。
在上述的鸡骨双酶解方法中，在步骤1中，碱环境下的搅拌温度为40-45℃。
在上述的鸡骨双酶解方法中，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：1.5：2。
在上述的鸡骨双酶解方法中，所述的步骤1中，经过naoh处理后，鸡骨泥悬浮液中的油脂部分皂化，在步骤1处理结束后，除去液体表面的泡沫杂质。
本发明的有益效果在于：
本发明针对于多骨溶液的蛋白肽的提取方法，通过前期的酸碱处理，可以提高蛋白从骨头中分离的效果，并且通过无机酸分解骨粉，通过有机酸使蛋白质有效的分散；采用胃蛋白酶和组织蛋白酶结合在36.5-37.5℃条件下，控制酶解时间，可以达到高效的酶解效率。同时，本发明中由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成的多糖添加剂，可以提高蛋白酶的酶解活性，提高水解效率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
为了更加清楚的对本发明进行说明，列举如下实施例来说明本发明的优越性。
实施例1
一种鸡骨双酶解方法，包括如下步骤：
步骤1：将鸡骨以0.5倍的水量混合，通过药用粉碎机碾碎，然后加3倍鸡骨重量的水混合制备成为鸡骨泥悬浮液，加入naoh调节体系ph为8-10；40-45℃的条件下搅拌混合40min并拂去表面皂化的油脂；鸡骨泥悬浮液中鸡骨粒度为80-100目；
步骤2：将步骤1得到的混合物过滤后加入1倍鸡骨重量的水，然后加入盐酸调节体系ph为4-5；反应一段时间使骨粉溶解；
步骤3：将步骤2得到的混合物过滤后加入2倍鸡骨重量的水，加入少量的柠檬酸调节体系ph为5-6，加热80-85℃，加热时间为0.5h；
步骤4：将鸡骨泥悬浮液、胃蛋白酶、组织蛋白酶以及占鸡骨重量2％的多糖混合，形成浆状混合物，以36.5-37.5℃的温度进行酶解2-3h；浆状混合物在酶解过程中控制ph为5-6；胃蛋白酶的用量为3000u/g骨粉，组织蛋白酶的用量为3000u/g骨粉；所述的多糖由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：1：1；
步骤5：将步骤4得到的混合物沸水水浴灭酶、降温、离心后得到上清液，减压干燥得到鸡骨蛋白酶解物。
实施例2
一种鸡骨双酶解方法，包括如下步骤：
步骤1：将鸡骨通过药用粉碎机碾碎，加4倍鸡骨重量的水混合制备成为鸡骨泥悬浮液，加入naoh调节体系ph为8-10；40-45℃的条件下搅拌混合60min并拂去表面的皂化的油脂；鸡骨泥悬浮液中鸡骨粒度为80-100目；
步骤2：将步骤1得到的混合物过滤后加入1倍鸡骨重量的水，然后加入盐酸调节体系ph为4-5；反应一段时间使骨粉溶解；
步骤3：将步骤2得到的混合物过滤后加入3倍鸡骨重量的水，加入少量的柠檬酸调节体系ph为5-6，加热80-85℃，加热时间为0.5h；
步骤4：将鸡骨泥悬浮液、胃蛋白酶、组织蛋白酶及占鸡骨重量1％的多糖混合，形成浆状混合物，以36.5-37.5℃的温度进行酶解2-3h；浆状混合物在酶解过程中控制ph为5-6；胃蛋白酶的用量为3000u/g骨粉，组织蛋白酶的用量为3000u/g骨粉；所述的多糖由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：1.5：2；
步骤5：将步骤4得到的混合物沸水水浴灭酶、降温、离心后得到上清液，减压干燥得到鸡骨蛋白酶解物。
实施例3
一种鸡骨双酶解方法，包括如下步骤：
步骤1：将鸡骨通过药用粉碎机碾碎，加3倍鸡骨重量的水混合制备成为鸡骨泥悬浮液，加入naoh调节体系ph为8.5-9.5；40-45℃的条件下搅拌混合45min并拂去表面的皂化的油脂；鸡骨泥悬浮液中鸡骨粒度为80-100目；
步骤2：将步骤1得到的混合物过滤后加入2倍鸡骨重量的水，然后加入盐酸调节体系ph为4-5；反应一段时间使骨粉完全溶解；
步骤3：将步骤2得到的混合物过滤后加入1倍鸡骨重量的水，加入少量的柠檬酸调节体系ph为5-6，加热80-85℃，加热时间为0.8h；
步骤4：将鸡骨泥悬浮液、胃蛋白酶、组织蛋白酶及占鸡骨重量1％的多糖混合，形成浆状混合物，以36.5-37.5℃的温度进行酶解2-3h；浆状混合物在酶解过程中控制ph为5-6；胃蛋白酶的用量为3000u/g骨粉，组织蛋白酶的用量为3000u/g骨粉；所述的多糖由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：1.5：1.5；
步骤5：将步骤4得到的混合物沸水水浴灭酶、降温、离心后得到上清液，减压干燥得到鸡骨蛋白酶解物。
实施例3
一种鸡骨双酶解方法，包括如下步骤：
步骤1：将鸡骨通过药用粉碎机碾碎，加2.5倍鸡骨重量的水混合制备成为鸡骨泥悬浮液，加入naoh调节体系ph为8.5-9；40-45℃的条件下搅拌混合55min并拂去表面的皂化的油脂；鸡骨泥悬浮液中鸡骨粒度为80-100目；
步骤2：将步骤1得到的混合物过滤后加入1倍鸡骨重量的水，然后加入盐酸调节体系ph为4-5；反应一段时间使骨粉完全溶解；
步骤3：将步骤2得到的混合物过滤后加入3倍鸡骨重量的水，加入少量的柠檬酸调节体系ph为5-6，加热80-85℃，加热时间为0.8h；
步骤4：将鸡骨泥悬浮液、胃蛋白酶、组织蛋白酶及占鸡骨重量1％的多糖混合，形成浆状混合物，以36.5-37.5℃的温度进行酶解2-3h；浆状混合物在酶解过程中控制ph为5-6；胃蛋白酶的用量为3000u/g骨粉，组织蛋白酶的用量为3000u/g骨粉；所述的多糖由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：2：1；
步骤5：将步骤4得到的混合物沸水水浴灭酶、降温、离心后得到上清液，减压干燥得到鸡骨蛋白酶解物。
对比例1：
(1)原料预处理：将鸡骨进行超微粉碎，制成80目的骨泥，加水配制鸡骨泥悬浮液，浓度为25％，90℃加热30分钟；
(2)酶解：控制反应温度为50℃，调整ph为8.5，先后加入胰酶和flavourzyme复合风味蛋白酶，酶用量分别为鸡骨原料(鲜重)的0.98wt％和2.6wt％，反应2小时。
(3)灭酶：升高反应体系温度至90℃保持10分钟；
(4)过滤：采用离心机，4000转/分钟离心10分钟，收集上清液；
(5)干燥：冷冻干燥至淡黄色粉末。
对比例2
与实施例2大体相同，不同的是，不添加多糖组合物。
对比例3
一种鸡骨双酶解方法，包括如下步骤：
步骤1：将鸡骨碾碎，加4倍鸡骨重量的水混合制备成为鸡骨泥悬浮液，加热80-85℃，加热时间为0.5h；
步骤2：将鸡骨泥悬浮液、胃蛋白酶、组织蛋白酶及占鸡骨重量1％的多糖混合，形成浆状混合物，以36.5-37.5℃的温度进行酶解2-3h；浆状混合物在酶解过程中控制ph为7-8；胃蛋白酶的用量为3000u/g骨粉，组织蛋白酶的用量为3000u/g骨粉；所述的多糖由黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖组成，所述的黄芪多糖、菌糠多糖、酵母葡聚糖的重量比为1：1.5：2；
步骤3：将步骤2得到的混合物沸水水浴灭酶、降温、离心后得到上清液，减压干燥得到鸡骨蛋白酶解物。
实施例和对比例的检测项目为水解度的检测。
其检测方法可以参考《酶解鸭骨制取ace抑制肽工艺条件的优化》中第1.3.6水解度(dh)测定。
实施例2的水解度为34.5％，对比例1的水解度为28.3％；对比例2的水解度为29.7％；对比例3的水解度为30.6％。
通过上述的实施例和对比例1-3可以看出，通过对骨悬浮液进行酸碱预处理然后采用双酶进行有效的选择并配合多糖可以有效的促进酶的活性，可以有效提高水解效果。
究其原因，本文认为，促进蛋白质分解的因素主要为：
第一、通过碱处理使纤维组织软化，同时使油脂进行皂化，使骨骼组织充分的暴露在溶液中，提高蛋白质暴露程度；
第二、通过酸处理使骨粉溶解或者进一步的增多多孔结构，其对于蛋白质的进一步分离式非常重要的。
第三、在弱酸性环境下使蛋白质在加热条件下凝胶化，利于后续的酶解反应。
第四，通过加入多糖，提高酶的活性，通过研究发现，在弱酸性环境中多糖的引入会促进胃蛋白酶和组织蛋白酶协同水解的效果，能够有效的提高水解率。
通过上述诸多要点的组合，起到提高水解效果的目的。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。