本发明涉及生物加工技术领域，尤其是涉及一种促进植物生长的念珠藻蛋白的制备方法。
背景技术：
念普通念珠藻生存范围很广，在我国资源丰富，其生命力极强，即使休眠几十年，一遇水又马上恢复生机，营养价值较高，粗脂肪含量为0.2-4.28％；总糖含量是0.53-23.8％；还含有海藻糖、鼠李糖、果胶多糖类、葡萄糖苷、胡萝卜素、蓝藻素以及胞外多糖等多种营养成分；蛋白质的含量一般占干重的14.6-21.81％，有些种类的蛋白质含量甚至占到干重的22.8-28.7％，比香茹、黑木耳、银耳的都高，同时还含有18种氨基酸，其总氨基酸含量也高于木耳、猴头菇，与发菜、香菇相近，具有很高开发利用前景。目前，有关念珠藻蛋白功能的研究报道较少。
技术实现要素：
本发明的另一目的在于提供一种工艺简单、成本低廉的促进植物生长的念珠藻蛋白的制备方法，制备的念珠藻蛋白具有促进植物生长的作用，应用领域多，且用量小，见效快，无毒副作用。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种促进植物生长的念珠藻蛋白的制备方法，包括蛋白提取，酶解，超滤。工艺方法简单，制备的一种促进植物生长的念珠藻蛋白质量稳定，具有较好的应用效果，且念珠藻资源利用率高，增加了产品的经济效益。
作为优选，蛋白提取过程中，准确称取5-8份念珠藻粉，用液氮充分研磨，加水混合，设置料液比为1/20-1/25，常温下磁力搅拌30-35min，送入均质机，在5000-8000r/min下均质2-3min，以570-580w的功率超声20-25min，将获得的溶液于8000-10000r/min条件下离心25-30min，将蛋白上清液真空冷冻干燥，得念珠藻蛋白，置于-20℃下保存。采用均质和超声对念珠藻进行破壁处理，再以水为溶剂提取念珠藻蛋白，蛋白提取率高，保留了念珠藻的全蛋白，为后续的酶解过程提供了丰富的蛋白质，提高了酶解液中多肽的种类，且水提蛋白的复溶性好，使用方便。
作为优选，酶解过程中，将念珠藻蛋白与超纯水混合，设置料水比为1/8-1/10，加入木瓜蛋白酶300-400u和活性多肽，活性多肽占念珠藻蛋白质量的0.1-0.2％，调ph为6-8，在40-43℃下酶解2.5-3.5h，灭酶活，离心分离得酶解液。该条件下，木瓜蛋白酶的稳定性高，不易变性，底物转变成产物的速度快，酶解效率高，产物主要以低分子的短肽和游离氨基酸为主，使念珠藻资源得到了充分利用。
作为优选，酶解过程中加入的活性多肽的氨基酸序列为：hshacasyscrcrrarryvshrgrcycrclrcrvlhpgklcvcvncsr。在ph为6-8的条件下，活性多肽促进了底物与木瓜蛋白酶活性中心的结合，提高了肽键弯曲变形的程度，增加了肽键的活性，使肽键更易受到水分子的攻击而发生解离，使蛋白的酶解更加彻底。
作为优选，超滤过程中，将酶解液用3k的超滤膜组件进行超滤，超滤压强为0.22-0.25mpa，将滤液冷冻干燥，得一种促进植物生长的念珠藻蛋白。该条件下，制备的念珠藻蛋白具有促进植物生长的作用，应用领域多，且用量小，见效快，无毒副作用。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明公开的一种促进植物生长的念珠藻蛋白具有促进植物生长的作用，应用领域多，且用量小，见效快，无毒副作用；制备工艺方法简单，产品质量稳定性好，应用效果好，具有良好的经济，是一种绿色环保工艺；加入的活性多肽促进了底物与木瓜蛋白酶活性中心的结合，提高了肽键弯曲变形的程度，增加了肽键的活性，使肽键更易受到水分子的攻击而发生解离，使蛋白的酶解更加彻底。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明：
实施例1：
一种促进植物生长的念珠藻蛋白的制备方法包括：
1)蛋白提取：准确称取5份念珠藻粉，用液氮充分研磨，加水混合，设置料液比为1/20，常温下磁力搅拌30min，送入均质机，在5000r/min下均质2min，以570w的功率超声20min，将获得的溶液于8000r/min条件下离心25min，将蛋白上清液真空冷冻干燥，得念珠藻蛋白，置于-20℃下保存。采用均质和超声对念珠藻进行破壁处理，再以水为溶剂提取念珠藻蛋白，蛋白提取率高，保留了念珠藻的全蛋白，为后续的酶解过程提供了丰富的蛋白质，提高了酶解液中多肽的种类，且水提蛋白的复溶性好，使用方便；
2)酶解：将念珠藻蛋白与超纯水混合，设置料水比为1/8，加入木瓜蛋白酶300u和活性多肽，活性多肽占念珠藻蛋白质量的0.1％，调ph为6，在40℃下酶解2.5h，灭酶活，离心分离得酶解液。活性多肽的氨基酸序列为：hshacasyscrcrrarryvshrgrcycrclrcrvlhpgklcvcvncsr。该条件下，木瓜蛋白酶的稳定性高，不易变性，底物转变成产物的速度快，酶解效率高，产物主要以低分子的短肽和游离氨基酸为主，使念珠藻资源得到了充分利用；
3)超滤：将酶解液用3k的超滤膜组件进行超滤，超滤压强为0.22mpa，将滤液冷冻干燥，得一种促进植物生长的念珠藻蛋白。该条件下，所制备的念珠藻蛋白具有促进植物生长的作用，应用领域多，且用量小，见效快，无毒副作用。
实施例2：
一种促进植物生长的念珠藻蛋白的制备方法包括：首先是蛋白提取：准确称取8份念珠藻粉，用液氮充分研磨，加水混合，设置料液比为1/25，常温下磁力搅拌35min，送入均质机，在8000r/min下均质3min，以580w的功率超声25min，将获得的溶液于10000r/min条件下离心30min，将蛋白上清液真空冷冻干燥，得念珠藻蛋白，置于-20℃下保存；接着是酶解：将念珠藻蛋白与超纯水混合，设置料水比为1/10，加入木瓜蛋白酶400u和活性多肽，活性多肽占念珠藻蛋白质量的0.2％，活性多肽的氨基酸序列为：hshacasyscrcrrarryvshrgrcycrclrcrvlhpgklcvcvncsr。调ph为8，在43℃下酶解3.5h，灭酶活，离心分离得酶解液；最后是超滤：将酶解液用3k的超滤膜组件进行超滤，超滤压强为0.25mpa，将滤液冷冻干燥，得一种促进植物生长的念珠藻蛋白。该条件下，所制备的念珠藻蛋白具有促进植物生长的作用，应用领域多，且用量小，见效快，无毒副作用。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110>兰溪市哥特生物技术有限公司
<120>一种促进植物生长的念珠藻蛋白的制备方法
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>48
<212>prt
<213>人工合成(saccharum)
<400>1
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151015
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354045