本发明属于多肽合成技术领域，具体涉及一种铜肽的合成方法。
背景技术：
ark-cu是一种新型铜肽，是由丙氨酸、精氨酸和赖氨酸组成的三肽与铜形成的络合物，具有深层修复疤痕，修复老损细胞，灭菌以及深层美白等功效。ark-cu是基于ghk-cu的一种改构，用丙氨酸替代甘氨酸，用精氨酸替代组氨酸。现在目前针对这种三肽的合成有固相合成和液相合成两种，固相合成的优点在于快速、方便、产率高、纯度好，缺点在于成本高，以及将肽从固相树脂上切割下来经常用三氟乙酸，因此非常依赖反向色谱纯化以及离子交换。液相合成的优点是成本低，但是合成的纯度较差，每步中间体都需要处理，纯化，周期太长。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种低成本、大量合成ark-cu的方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案由下述步骤组成：
1、合成cbz-ala-arg(no2)-oh
以n,n'-二甲基甲酰胺为溶剂，将cbz-ala-oh与n-羟基琥珀酰亚胺、n,n'-二异丙基碳二亚胺、h-arg(no2)-oh、n,n'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节ph＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，得到cbz-ala-arg(no2)-oh。
2、合成cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh
以n,n'-二甲基甲酰胺为溶剂，将cbz-ala-arg(no2)-oh与n-羟基琥珀酰亚胺、n,n'-二异丙基碳二亚胺、lys(cbz)-oh、n,n'-二异丙基乙胺在室温条件下反应，反应完后将反应液倒入水中，用柠檬酸调节ph＝3～4，室温搅拌析出固体，过滤，水洗，干燥，用乙酸乙酯重结晶，得到纯度97％以上的cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh。
3、合成h-ala-arg-lys-oh
将cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh溶解于甲醇和水的混合溶剂中，加入钯碳，通氢气脱保护，生成h-ala-arg-lys-oh，即ark。
4、合成ark-cu
将h-ala-arg-lys-oh与醋酸铜在水中络合，经冷冻干燥，得到ark-cu。
上述步骤1中，优选cbz-ala-oh与n-羟基琥珀酰亚胺、n,n'-二异丙基碳二亚胺、h-arg(no2)-oh、n,n'-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1～1.1:1～1.1，室温反应时间优选4～7小时。
上述步骤2中，优选cbz-ala-arg(no2)-oh与n-羟基琥珀酰亚胺、n,n'-二异丙基碳二亚胺、lys(cbz)-oh、n,n'-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5:1～1.1:1～1.1，室温反应时间优选2～5小时。
上述步骤4中，优选h-ala-arg-lys-oh与醋酸铜的摩尔比为1:1。
本发明的创新点和有益效果：
1、本发明以cbz-ala-oh、h-arg(no2)-oh、h-lys(cbz)-oh为起始原料，最后合成的全保护三肽cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh，在脱除保护的时候，用氢气/钯碳还原即可得到三肽h-ala-arg-lys-oh，避免了传统意义上常用三氟乙酸脱除保护，避免了用三氟乙酸脱保护时带来的副产物，以及避免了用三氟乙酸脱完保护后必须用反相色谱纯化除杂质，以及再用离子交换除三氟乙酸的繁琐过程。
2、本发明用液相法直接合成全保护三肽cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh的粗品，无需柱色谱纯化，用乙酸乙酯重结晶就可以到达97％以上的纯度，克服了常规液相合成中每步中间体都需要柱色谱纯化，操作非常繁琐的技术问题。
3、本发明用n,n'-二异丙基乙胺(dic)代替n,n'‐二环己基碳酰亚胺(dcc)作为缩合剂，dcc的副产物dcu很难除去，即使柱色谱纯化都很难去除干净，但是用dic就很好的解决了这个问题，在用乙酸乙酯重结晶的过程中，就可以完全除去。
4、本发明ark在与铜的络合中，用水作为溶剂，用醋酸铜为铜的供体，在等摩尔条件下生成ark-cu，反应完后，无需处理，直接将水冻干，就得到ark-cu，简单方便。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实例。
实施例1
1、合成cbz-ala-arg(no2)-oh
将44.6g(0.2mol)cbz-ala-oh搅拌溶解于600mln,n'-二甲基甲酰胺中，然后加入27.6g(0.24mol)n-羟基琥珀酰亚胺、37.8g(0.30mol)n,n'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入44g(0.2mol)h-arg(no2)-oh、26g(0.2mol)n,n'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入3l水中，用柠檬酸调节ph＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到76gcbz-ala-arg(no2)-oh，产率90％。
2、合成cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh
将63.75g(0.15mol)cbz-ala-arg(no2)-oh搅拌溶解于750mln,n'-二甲基甲酰胺中，然后加入20.7g(0.18mol)n-羟基琥珀酰亚胺、28.35g(0.225mol)n,n'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入42g(0.15mol)lys(cbz)-oh、19.5g(0.15mol)n,n'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入3l水中，用柠檬酸调节ph＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到82.5gcbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh粗品，用乙酸乙酯重结晶，得到68.7g纯度97％的cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh，产率67％。
3、合成h-ala-arg-lys-oh
将68.7gcbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh搅拌溶解于600ml水与甲醇体积比为1:1的混合溶剂中，加入5g10％钯碳，常温常压下通入氢气，搅拌5小时，反应完全，减压蒸干甲醇，加入300ml乙酯，搅拌，分层，取水层，将水层冻干，得到35gh-ala-arg-lys-oh，产率95％。
4、合成ark-cu
将35g(0.093mol)h-ala-arg-lys-oh搅拌溶解于200ml水中，加入18.6g(0.093mol)醋酸铜，室温搅拌2小时，将反应液冷冻干燥，得到40gark-cu产率99％。
实施例2
1、合成cbz-ala-arg(no2)-oh
将89.2g(0.4mol)cbz-ala-oh搅拌溶解于1200mln,n'-二甲基甲酰胺中，然后加入50.6g(0.44mol)n-羟基琥珀酰亚胺、65.52g(0.52mol)n,n'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入96.8g(0.44mol)h-arg(no2)-oh、57.2g(0.44mol)n,n'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入6l水中，用柠檬酸调节ph＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到147gcbz-ala-arg(no2)-oh，产率87％。
2、合成cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh
将127.5g(0.3mol)cbz-ala-arg(no2)-oh搅拌溶解于1500mln,n'-二甲基甲酰胺中，然后加入37.95g(0.33mol)n-羟基琥珀酰亚胺、49.14g(0.39mol)n,n'-二异丙基碳二亚胺，室温搅拌3小时，再加入92.4g(0.33mol)lys(cbz)-oh、42.9g(0.33mol)n,n'-二异丙基乙胺，室温搅拌2小时，将反应液倒入3l水中，用柠檬酸调节ph＝3～4，室温搅拌30分钟，析出大量固体，过滤，水洗2遍，40℃烘干，得到163gcbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh粗品，用乙酸乙酯重结晶，得到133g纯度96.5％的cbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh，产率65％。
3、合成h-ala-arg-lys-oh
将133gcbz-ala-arg(no2)-lys(cbz)-oh搅拌溶解于1200ml水与甲醇体积比为1:1的混合溶剂中，加入10g10％钯碳，常温常压下通入氢气，搅拌5小时，反应完全，减压蒸干甲醇，加入600ml乙酯，搅拌，分层，取水层，将水层冻干，得到68gh-ala-arg-lys-oh，产率96％。
4、合成ark-cu
将68g(0.18mol)h-ala-arg-lys-oh搅拌溶解于400ml水中，加入36g(0.18mol)醋酸铜，室温搅拌3小时，将反应液冷冻干燥，得到77gark-cu，产率98％。