本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种从积雪草苷的提取方法。
背景技术：
积雪草为伞形科植物积雪草(centellaasiatica(l.)urban)的干燥全草，广泛分布于长江流域以南各地，全草入药，常年可采，资源丰富，在许多国家的医药领域中应用已有几千年历史，其始载于《神农本草经》，列为中品，性寒，味苦，辛，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疸、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等。积雪草中的化学成分包括三萜皂苷、三萜酸、多炔烯类和挥发油等。现代研究证明，积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的组织修复方面有中药作用。近年来研究还发现，积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。积雪草中起主要药理作用的成分是三萜类化合物，因此活性成分提取分离研究主要集中在更快更好的分离纯化积雪草苷和羟基积雪草苷。常规皂苷的提取方法种类很多，一般以溶剂提取为主，包括浸提法、回流法、煎煮法等，近年来又新报道了一些提取方法，包括微波法、酶法等，也获得了广泛的关注。在纯化方面，常规的柱层析法纯化皂苷仍占据主流，其他方法如色谱法，但由于耗材较多，成本高而很少利用。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供一种积雪草苷的提取方法，该方法提取得到的积雪草苷收率大，纯度高。
本发明提供的技术方案是提供一种积雪草苷的提取方法，包括以下步骤：
1)将积雪草粉碎加水回流提取，将提取液过滤，得到粗提液；
2)将粗提液上xad-10大孔树脂柱，用ph值为2～4的酸液洗脱，合并流出液和酸洗液；
3)调节合并液ph值至中性，过滤，将滤液再次上xad-3大孔树脂柱，用体积浓度为30～40％的乙醇洗脱，薄层层析跟踪检测，收集含有目标成分的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得积雪草苷。
步骤1)中，水的用量为积雪草重量的5～10倍，在40～50℃下回流提取1～3次，每次0.5～1h。由于积雪草皂苷亲水性强，特别是皂苷由于它们的分子中往往结合有多数糖分子，羟基数目多，能表现出一定的亲水性，水为溶剂即可将其充分提取出来。
xad-10树脂主要吸附的是脂溶性成分，大分子极性强的物质，这些物质对树脂的吸附性更强，大孔树脂优先吸附这些物质而很快达到饱和。xad-10是极性大孔树脂，与积雪草皂苷极性相差较大，无法有效吸附积雪草苷，xad-10树脂平均孔径较大，远远大于积雪草皂苷，也无法起到物理截留积雪草皂苷的作用，因此，积雪草皂苷会随着流出液流出。ph值为2～4的酸液洗脱可进一步将树脂中吸附的少量积雪草皂苷洗脱下来，避免积雪草皂苷的吸附损失。步骤2)中，粗提液上柱速度为3～5bv/h。酸液的洗脱速度为1～2bv/h。
步骤3)中，xad-3型号大孔树脂为非极性树脂，平均孔径为0.44μm，比表面积256m2/g。该树脂对积雪草皂苷有很有的吸附性能，滤液的上柱速度为0.5～1bv/h，可将积雪草皂苷吸附完全。由于积雪草苷和羟基积雪草苷存在极性差异，采用体积浓度为30～40％的乙醇洗脱，可优先洗脱积雪草苷。
与现有技术相比，本方法针对目标成分进行吸附和解吸附，提取的积雪草苷收率高达85％以上，纯度高达95.0％以上。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
以下百分数为体积百分数。
实施例1
1)将积雪草粉碎加水，水的用量为积雪草重量的5倍，在40℃下回流提取1次，每次0.5h，将提取液过滤，得到粗提液；
2)将粗提液上xad-10大孔树脂柱，粗提液上柱速度为3bv/h，用ph值为2的酸液洗脱，酸液的洗脱速度为1bv/h，合并流出液和酸洗液；
3)调节合并液ph值至中性，过滤，将滤液再次上xad-3大孔树脂柱，滤液的上柱速度为为0.5bv/h，用体积浓度为30％的乙醇洗脱，乙醇洗脱速度为2bv/h，薄层层析跟踪检测，收集含有目标成分的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得积雪草苷。
经hlpc分析，积雪草苷的回收率为86.24％以上，纯度高达95.44％。
实施例2
1)将积雪草粉碎加水，水的用量为积雪草重量的10倍，在50℃下回流提取3次，每次1h，将提取液过滤，得到粗提液；
2)将粗提液上xad-10大孔树脂柱，粗提液上柱速度为5bv/h，用ph值为4的酸液洗脱，酸液的洗脱速度为2bv/h，合并流出液和酸洗液；
3)调节合并液ph值至中性，过滤，将滤液再次上xad-3大孔树脂柱，滤液的上柱速度为为1bv/h，用体积浓度为40％的乙醇洗脱，乙醇洗脱速度为3bv/h，薄层层析跟踪检测，收集含有目标成分的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得积雪草苷。
经hlpc分析，积雪草苷的回收率为85.33％以上，纯度高达95.12％。
实施例3
1)将积雪草粉碎加水，水的用量为积雪草重量的8倍，在45℃下回流提取2次，每次0.8h，将提取液过滤，得到粗提液；
2)将粗提液上xad-10大孔树脂柱，粗提液上柱速度为4bv/h，用ph值为3的酸液洗脱，酸液的洗脱速度为1.5bv/h，合并流出液和酸洗液；
3)调节合并液ph值至中性，过滤，将滤液再次上xad-3大孔树脂柱，滤液的上柱速度为为0.8bv/h，用体积浓度为35％的乙醇洗脱，乙醇洗脱速度为2.5bv/h，薄层层析跟踪检测，收集含有目标成分的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得积雪草苷。
经hlpc分析，积雪草苷的回收率为86.26％以上，纯度高达95.88％。
实施例4
1)将积雪草粉碎加水，水的用量为积雪草重量的5倍，在50℃下回流提取3次，每次0.5h，将提取液过滤，得到粗提液；
2)将粗提液上xad-10大孔树脂柱，粗提液上柱速度为5bv/h，用ph值为2～4的酸液洗脱，酸液的洗脱速度为1bv/h，合并流出液和酸洗液；
3)调节合并液ph值至中性，过滤，将滤液再次上xad-3大孔树脂柱，滤液的上柱速度为为1bv/h，用体积浓度为30％的乙醇洗脱，乙醇洗脱速度为3bv/h，薄层层析跟踪检测，收集含有目标成分的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得积雪草苷。
经hlpc分析，积雪草苷的回收率为86.19％以上，纯度高达95.43％以上。