本发明涉及具有药物活性的新型苯并氮杂卓二甲酰胺化合物、它们的制备、含有它们的药物组合物以及它们作为药物的潜在用途。
特别地，本发明涉及具有下式的化合物
其中r1至r4如下文所述；或涉及其药学上可接受的盐。
该化合物是tlr激动剂。更具体地，该化合物是tlr8激动剂，且可用于治疗和预防(例如接种疫苗)癌症、自身免疫疾病、炎症、败血病、过敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。
toll样受体(tlr)是跨膜受体家族，其在免疫系统的细胞(像树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、t细胞、b细胞、nk细胞和肥大细胞)上表达，而且在各种非免疫细胞(如内皮细胞、上皮细胞和甚至肿瘤细胞)上表达(kawai等人,immunity,2011,34,637-650，kawai等人,nat.immunol.,2010,11,373-384)。识别细菌和真菌组分的tlr在细胞表面上表达(即tlr1、2、4、5和6)，而识别病毒或微生物核酸的其他tlr(像tlr3、7、8和9)定位于内溶酶体/吞噬体隔室(henessy等人nat.rev.drugdiscovery2010,9,293-307)，且发现主要由髓系细胞表达。tlr连接导致nf-κb和irf依赖性途径以特定激活序列激活，并响应于特定tlr和细胞类型。虽然tlr7主要在所有树突细胞亚型(dc，且此处在pdc(类浆细胞dc)中高度)中表达，且可在ifnα刺激时在b细胞中诱导(bekeredjian-ding等人j.immunology2005,174:4043-4050)，但tlr8表达仅限于单核细胞、巨噬细胞和骨髓dc。通过myd88进行的tlr8信号传导可以通过细菌单链rna、小分子激动剂和最近发现的microrna激活(chen等人rna2013,19:737-739)。激活tlr8导致产生各种促炎细胞因子，如il-6、il-12和tnf-α；以及增强协同刺激分子(如cd80、cd86和趋化因子受体)表达(cros等人immunity2010,33:375-386)。此外，tlr8激活可在原代人类单核细胞中诱导i型干扰素(ifnβ)(pang等人bmcimmunology2011,12:55)。
已经在许多专利(即wo1992015582、wo2007024612、wo2009111337、wo2010093436、wo2011017611、wo2011068233、wo2011139348、wo2012066336、wo2012167081、wo2013033345、wo2013166110和us2013202629)中鉴定了tlr7和tlr8受体的小分子激动剂以及修饰用作疫苗佐剂或缀合物的类似物。已经获得主要针对tlr7激动剂的临床经验，但聚焦使用高度特异性tlr8激动剂的临床研究极少。迄今为止，fda(美国食品和药物管理局)批准的唯一作为用于治疗生殖器疣、浅表性基底细胞癌和光化性角化病的局部药剂的小分子药物是tlr7激动剂咪喹莫特(imiquimod)(aldaratm)。然而，由于在治疗水平下观察到无法忍受的心脏毒性，已经放弃了全身施用早期tlr7激动剂，像瑞喹莫德(resiquimod)(holldack,drugdiscoverytoday,2013,1-4)。关于tlr8激动剂的知识不太先进，并且主要限于早期混合的tlr7/8激动剂(像瑞喹莫德)的数据。然而，对于瑞喹莫德激动剂，相比于激活tlr8，tlr7的刺激能力更好，所以瑞喹莫德的大多数作用由tlr7活性作用主导。最近，tlr8特异性化合物(像vtx-2337)已经由ventirx制药公司(ventirxpharmaceuticals)(即wo2007024612)描述，这首次允许在没有同时激活tlr7的情况下分析tlr8的特定作用。目前，仍然需要小分子tlr8激动剂，特别是具有改良效力或选择性的那些。
本发明涉及比这种类型的已知tlr8激动剂具有改良的细胞效力的苯并氮杂卓，用于治疗癌症，优选地实体瘤和淋巴瘤；以及用于其他用途，包括治疗某些皮肤病症或疾病(如特应性皮炎)，治疗感染性疾病(优选地病毒性疾病)；以及在配制用于癌症治疗的疫苗中用作佐剂或者在治疗自身免疫疾病时通过连续刺激使受体脱敏而用作佐剂。
与已知的tlr8激动剂如vtx-2337相比，新化合物的特征在于对tlr8的细胞效力有所提高。此外，这些化合物对tlr8具有高度特异性，而对tlr7仅具有低活性或甚至没有活性。因此，与组合的tlr7/8激动剂相比，预期它们具有有利性质，这是因为tlr8的表达模式受限制较大，从而在全身给药时产生较少严重副作用。
发明概述
本发明涉及具有下式的苯并氮杂卓-4-甲酰胺化合物
其中
r1是c3-7-烷基；
r2是c3-7-烷基或c3-7-环烷基-c1-7-烷基；
r3是氢；
r4选自：
c1-7-烷基，所述c1-7-烷基是未取代的或被一个或两个选自以下的基团取代：苯基和杂芳基，所述杂芳基是包含一个、两个或三个选自氮、氧和/或硫的原子的芳族5-或6-元环；
c3-7-环烷基，所述c3-7-环烷基是未取代的或被苯基或苯基氨基-c1-7-烷基取代，和
杂环基，所述杂环基是含有一个选自n或o的杂原子的饱和的3-至7-元环，且是未取代的或被苯基取代，
或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及用于制备具有式i的化合物的方法。
本发明还涉及药物组合物，其包含如上所述的具有式i的化合物和药学上可接受的载体和/或佐剂。
本发明的另一方面是具有式i的化合物作为治疗可用tlr激动剂，特别是tlr8激动剂介导的疾病的治疗活性物质的用途。因此，本发明涉及用于治疗可用tlr激动剂介导的疾病(例如像癌症和自身免疫或感染性疾病)的方法。
发明详述
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。此外，列出以下定义以说明和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。
除非另有说明，否则本申请中使用的命名法基于iupac系统命名法。
术语“本发明的化合物(compound(s)ofthisinvention和compound(s)ofthepresentinvention)”是指具有式i的化合物及其溶剂化物或盐(例如药学上可接受的盐)。
术语“取代基”表示取代母体分子上的氢原子的原子或原子团。
术语“c1-7-烷基”单独或组合地表示具有1至7个碳原子的任选地被取代的直链或支链烷基，特别是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，并且更特别是具有1至4个碳原子的直链或支链烷基。直链和支链c1-7烷基的例子是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、同分异构戊基、同分异构己基和同分异构庚基。甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基是特别优选的。
术语“c2-6-烷基”同样是指如上所述的具有2至6个碳原子的直链或支链烷基。正丙基是特别优选的。
术语“c3-7-环烷基”表示含有一个选自n或o的杂原子且是未取代的或被苯基取代的c3-7-环烷基环。优选的c3-7-环烷基是吡咯烷基、哌啶基、四氢吡喃基和氮杂环丁基。
术语“杂芳基”通常是指包含一个、两个、三个或四个选自氮、氧和/或硫的原子的芳族5-或6-元环。在本发明的上下文中，杂芳基是指吡啶基、噻唑基或异噁唑基。
术语“饱和杂环基”是指含有一个选自n或o的杂原子且是未取代的或被苯基取代的c3-7-环烷基环。在本发明的上下文中，饱和杂环基是指哌啶基、氮杂环丁基、吡咯烷基或四氢吡喃基。
术语“药学上可接受的”表示可用于制备药物组合物的基本上安全无毒，且不是生物学上或其他方面不期望的，而且是兽用和人类药用上可接受的材料的属性。
具有式i的化合物可以形成药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指保留游离碱或游离酸的生物有效性和性质的那些盐，其在生物学上或其他方面不是不期望的。药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。盐是例如具有式i的化合物与生理上相容的无机酸(如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、硫酸、亚硫酸或磷酸)的酸加成盐；或与有机酸(如甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸(oxylicacid)、乳酸、三氟乙酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、丙二酸、酒石酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸、琥珀酸或水杨酸)的酸加成盐。此外，药学上可接受的盐可以通过向游离酸中添加无机碱或有机碱来制备。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、锌盐、铜盐、锰盐和铝盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺、经取代的胺(包括天然存在的经取代的胺)、环胺和碱性离子交换树脂，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、哌嗪、n-乙基哌啶、哌啶和聚胺树脂。具有式i的化合物也能以两性离子的形式存在。特别感兴趣的具有式i的化合物的药学上可接受的盐是钠盐或与叔胺的盐。
具有式i的化合物也可以溶剂化，例如水合。溶剂化可以在制备过程中进行，或者可以例如由于起初无水的具有式i的化合物的吸湿性质(水合作用)而发生。术语“药学上可接受的盐”还包括生理学上可接受的溶剂化物。
术语“激动剂”表示增强另一种化合物或受体位点的活性的化合物，如例如在goodman和gilman的“”“thepharmacologicalbasisoftherapeutics,7thed.”inpage35,macmillanpubl.company,canada,1985中所定义。“完全激动剂”产生完全反应，而“部分激动剂”不及完全激活，即使占据整个受体群体时。“反向激动剂”产生与激动剂相反的作用，但结合至相同的受体结合位点。
术语“半最大有效浓度”(ec50)表示特定化合物在体内获得特定效果的最大值的50％所需的血浆浓度。
术语“治疗有效量”表示本发明化合物在给予受试者时(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作的量。治疗有效量将根据化合物、所治疗的疾病状态、所治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、给药途径和形式、主治医师或兽医的判断和其他因素而变化。
详细地说，本发明涉及具有下式的化合物
其中
r1是c3-7-烷基；
r2是c3-7-烷基或c3-7-环烷基-c1-7-烷基；
r3是氢；
r4选自：
c1-7-烷基，所述c1-7-烷基是未取代的或被一个或两个选自以下的基团取代：苯基和杂芳基，所述杂芳基是包含一个、两个或三个选自氮、氧和/或硫的原子的芳族5-或6-元环；
c3-7-环烷基，所述c3-7-环烷基是未取代的或被苯基或苯基氨基-c1-7-烷基取代，和
杂环基，所述杂环基是含有一个选自n或o的杂原子的饱和的3-至7-元环，且是未取代的或被苯基取代，
或其药学上可接受的盐。
在一个特定方面，本发明涉及具有式i的化合物，其中r1是正丙基。
在另一方面，提供了具有式i的化合物，其中r2是正丙基或环丙基甲基。特别地，本发明涉及具有式i的化合物，其中r1和r2是正丙基。
在另一方面，本发明涉及具有式i的化合物，其中r4选自：
c1-7-烷基，所述c1-7-烷基是未取代的或被一个或两个选自以下的基团取代：苯基和杂芳基，所述杂芳基选自吡啶基、噻唑基或异噁唑基，
c3-6-环烷基，所述c3-6-环烷基是未取代的或被苯基或苯基氨基-c1-7-烷基取代，和
杂环基，所述杂环基是含有一个选自n或o的杂原子的饱和的3-至7-元环，且是未取代的或被苯基取代。
在另一方面，本发明涉及如前文定义的具有式i的化合物，其中r4是c1-7-烷基，所述c1-7-烷基是未取代的或被一个或两个选自以下的基团取代：苯基和杂芳基，所述杂芳基是包含一个、两个或三个选自氮、氧和/或硫的原子的芳族5-或6-元环。特别地，r4是c1-7-烷基，所述c1-7-烷基是未取代的或被一个或两个选自以下的基团取代：苯基和杂芳基，所述杂芳基选自吡啶基、噻唑基或异噁唑基。
更特别地，r4是c1-7-烷基，所述c1-7-烷基被杂芳基取代，所述杂芳基选自吡啶基、噻唑基或异噁唑基。在另一特定方面，c1-7-烷基选自：亚甲基、亚乙基和亚丙基。
在另一个特定方面，r4是c1-7-烷基，所述c1-7-烷基被一个或两个苯基取代。
在另一方面，本发明提供了具有式i的化合物，其中r4是c3-6-环烷基，所述c3-7-环烷基是未取代的或被苯基或苯基氨基-c1-7-烷基取代。在一个特定方面，提供了具有式i的化合物，其中r4是c3-6-环烷基，所述c3-7-环烷基被苯基或苯基氨基甲基取代。更特别地，r4是被苯基取代的c3-7-环烷基。
在另一方面，本发明提供了具有式i的化合物，其中r4是杂环基，所述杂环基是含有一个选自n或o的杂原子的饱和的3-至7-元环，且是未取代的或被苯基取代。在一个特定方面，提供了具有式i的化合物，其中r4是杂环基，所述杂环基是含有一个选自n或o的杂原子的饱和的3-至7-元环，且被苯基取代。在另一特定方面，r4是杂环基，所述杂环基选自哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁基或四氢吡喃基，且是未取代的或被苯基取代。
在另一方面，提供了具有式i的化合物，其中
r1是正丙基，
r2是正丙基；
r3是氢；且
r4选自：
c1-4-烷基，所述c1-4-烷基是未取代的或被一个或两个选自苯基或者选自吡啶基、噻唑基或异噁唑基的基团取代，
c3-7-环烷基，所述c3-7-环烷基是未取代的或被苯基取代，和
杂环基，所述杂环基选自哌啶基、氮杂环丁基、吡咯烷基或四氢吡喃基，且是未取代的或被苯基取代；
或其药学上可接受的盐。
本发明的具体化合物如下：
2-氨基-n8-[(1s,2r)-2-苯基环丙基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-苯基-4-哌啶基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-苯基氮杂环丁-3-基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-环己基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-苯基环丙基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-苯基环丁基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-[(1s)-1-苯基乙基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(异噁唑-3-基甲基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-(噻唑-5-基甲基)-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-二苯甲基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(4-苯基四氢吡喃-4-基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-(噻唑-2-基甲基)-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-甲基-1-苯基-乙基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-[(1r)-1-苯基乙基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-环戊基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-叔丁基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-环丁基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-苄基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-(3-吡啶基甲基)-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-[2-(3-吡啶基)乙基]-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-[3-(3-吡啶基)丙基]-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n4-(环丙基甲基)-n8-[(2s)-2-苯基环丙基]-n4-丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-苯基-3-哌啶基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-(1-苯基吡咯烷-3-基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-[(3s)-1-苯基吡咯烷-3-基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-[4-(苯胺基甲基)环己基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺；
2-氨基-n8-[3-(苯胺基甲基)环丁基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺和
2-氨基-n8-[(3r)-1-苯基吡咯烷-3-基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺。
本发明的另一方面是用于制备如上定义的具有式i的化合物的方法，该方法包括：
使具有式ii的化合物
其中r1和r2如前文所定义，且pg是保护基团；与具有式iii的胺
其中r3和r4如前文所定义；在碱性条件下在偶联剂存在下偶联，并在酸性条件下除去保护基团pg，得到具有式i的化合物
其中r1至r4如前文所定义；且如果需要，将所得化合物转化为药学上可接受的盐。
应当理解，本发明中的具有通式i的化合物可以在官能团处衍生化，以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。能够在体内产生具有通式i的母体化合物的生理学上可接受的且代谢不稳定的衍生物也在本发明的范围内。
特别地，合适的保护基团pg是选自boc(叔丁氧基羰基)、苄基(bz)和苄氧基羰基(cbz)的氨基保护基团。特别地，保护基团是boc。
“在酸性条件下除去保护基团pg”是指在合适的溶剂中用酸处理受保护的化合物，例如可以在溶剂如二氯甲烷(dcm)中使用三氟乙酸(tfa)。
具有式ii的化合物与具有式iii的胺的反应的合适的“偶联剂”选自：n,n’-羰基二咪唑(cdi)、n,n’-二环己基碳二亚胺(dcc)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci)、1-[双(二甲基氨基)-亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸盐(hatu)、1-羟基-1,2,3-苯并三唑(hobt)、o-苯并三唑-n,n,n’,n’-四甲基-脲鎓-六氟磷酸盐(hbtu)或o-苯并三唑-1-基-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(tbtu)。特别地，偶联剂是tbtu。合适的碱包括三乙胺、n-甲基吗啉，特别是二异丙基乙胺。
“在碱性条件下”意指存在碱，特别是选自下组的碱，该组由以下各项组成：三乙胺、n-甲基吗啉，特别是二异丙基乙胺。通常，反应在室温下在惰性溶剂(如二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中进行。
本发明还涉及可根据如上定义的方法获得的如上定义的具有式i的化合物。
本发明的化合物可通过任何常规方式制备。以下方案和实施例中提供了用于合成这些化合物以及它们的起始材料的合适的方法。除非另有说明，否则所有取代基(特别是r1至r4)如上所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号都具有有机化学领域普通技术人员所熟知的含义。
下面的方案1中示出了用于制备具有式i的化合物的一般合成路线。
方案1
具有式i的化合物可根据方案1制备。羧酸a与选择的胺iv之间的偶联反应得到具有式v的酰胺，然后将其用氨基保护基团如boc保护，得到具有式vi的化合物。具有式vi的化合物水解产生具有式ii的羧酸。然后将具有式ii的羧酸与选择的胺iii偶联，得到具有式vii的酰胺。最后，通过氨基保护基团(例如boc)的去保护得到具有式i的化合物。在一些情况下，具有式vii的化合物可含有源自胺iv或胺iii的另外的酸不稳定保护基团像boc或tbs，其也将在最终的去保护步骤中被除去。
在碱像dipea存在下，在溶剂像dcm中，在环境温度或升高的温度下，使用偶联试剂像hbtu将具有式a的羧酸与选择的胺iv偶联，得到具有式v的化合物。
然后，用氨基保护基团(特别是用boc)保护具有式v的化合物，提供具有式vi的化合物。
在环境温度或升高的温度下，在合适的溶剂(例如混合溶剂像thf/meoh/h2o)中，通过碱(特别是lioh)水解具有式vi的化合物，得到具有式ii的羧酸。
然后在合适的偶联试剂(特别是hbtu)的帮助下，在溶剂像dcm中并且在碱(特别是dipea)存在下，在环境温度或升高的温度下，使具有式ii的羧酸与选择的胺iii反应，得到具有式vii的化合物。
最后，通过用tfa在二氯甲烷中使具有式vii的化合物去保护，然后通过制备型hplc纯化，得到具有式i的化合物。在一些情况下，除了脒处的boc保护基团以外，具有式vii的化合物还可含有源自胺iv或iii的另外的酸不稳定保护基团(像boc或tbs)，其也将在这个步骤中被除去。
如果一种起始材料含有一种或多种在一个或多个反应步骤的反应条件下不稳定或具有反应性的官能团，则适当的保护基团(pg)(如例如t.w.greene等人,protectivegroupsinorganicchemistry,johnwileyandsonsinc.newyork1999,第3版中所述)可以在应用本领域熟知的方法的关键步骤之前引入。可以使用本领域已知的标准方法在合成的后期除去这些保护基团。在一些情况下，除了脒处的boc保护基团以外，具有式vii的化合物还可含有源自胺ii或vi的另外的酸不稳定保护基团(像boc或tbs)，其也将在这个步骤中被除去。
如果具有该式的一种或多种化合物含有手性中心，具有式i的化合物可以作为非对映异构体或对映异构体的混合物获得，它们可以通过本领域熟知的方法(例如(手性)hplc或结晶)分离。外消旋化合物可以通过非对映异构体盐，借助结晶或借助特定色谱法使用手性吸附剂或手性洗脱剂分离对映体(antipode)例如分成它们的对映体。
如前文所述，本发明的具有式i的化合物可用作用于治疗由tlr激动剂介导的疾病(特别是用于治疗由tlr8激动剂介导的疾病)的药物。
本发明中定义的化合物在体外细胞测定中是tlr8受体的激动剂。因此，预期本发明的化合物是治疗可受益于通过tlr8激动剂激活免疫系统的疾病或医学病症的潜在有用药剂。它们可用于治疗或预防以下疾病，如癌症、自身免疫疾病、炎症、败血病、过敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。
更详细地说，本发明的具有式i的化合物可用于肿瘤学，即它们可用于治疗常见癌症，包括膀胱癌、头颈癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、肝癌、胰腺癌、肠癌和结肠癌、胃癌、甲状腺癌、黑色素瘤、皮肤和脑肿瘤以及影响骨髓的恶性肿瘤(如白血病)和影响淋巴组织增生系统的恶性肿瘤(如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)；包括预防(例如接种疫苗)和治疗转移性癌症和肿瘤复发以及副肿瘤综合征。
本发明的具有式i的化合物还可用于治疗自身免疫疾病。“自身免疫疾病”是由个体自身组织或器官产生并针对个体自身组织或器官的疾病或障碍，或其共分离(co-segregate)或表现或者由此产生的病症。“自身免疫疾病”可以是器官特异性疾病(即，免疫应答特异性地针对器官系统，如内分泌系统、造血系统、皮肤、心肺系统、胃肠和肝脏系统、肾脏系统、甲状腺、耳朵、神经肌肉系统、中枢神经系统等)或可影响多器官系统的全身性疾病(例如，系统性红斑狼疮(sle)、类风湿性关节炎、多肌炎等)。在一个特定方面，自身免疫疾病与皮肤、肌肉组织和/或结缔组织相关。
具体的自身免疫疾病包括自身免疫性风湿性障碍(例如像类风湿性关节炎、斯耶格伦氏(sjogren's)综合征、硬皮病、狼疮如sle和狼疮性肾炎、多肌炎/皮肌炎、冷球蛋白血症、抗磷脂抗体综合征和银屑病性关节炎)、自身免疫性胃肠和肝脏障碍(例如像炎性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩氏(crohn's)病)、自身免疫性胃炎和恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎和乳糜泻)、血管炎(例如像anca阴性血管炎和anca相关血管炎，包括丘-施二氏(churg-strauss)血管炎、韦格纳(wegener's)肉芽肿病和显微镜下多血管炎)、自身免疫性神经病(例如像多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎、帕金森氏(parkinson's)病、阿尔茨海默(alzheimer's)病和自身免疫性多发性神经病)、肾病(例如像肾小球肾炎、古德帕斯彻氏(goodpasture's)综合征和贝格尔氏(berger's)病)、自身免疫性皮肤病(例如像银屑病、荨麻疹、麻疹、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮和皮肤红斑狼疮)、血液学障碍(例如像血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、输血后紫癜和自身免疫性溶血性贫血)、动脉粥样硬化、葡萄膜炎、自身免疫性听觉疾病(例如像内耳病和听力损失)、贝切特氏(behcet's)病、雷诺氏(raynaud's)综合征、器官移植和自身免疫性内分泌障碍(例如像糖尿病相关自身免疫性疾病，如胰岛素依赖型糖尿病(iddm)、艾迪生(addison's)病和自身免疫性甲状腺疾病(例如格雷夫斯(graves’)病和甲状腺炎))、过敏性病症和反应、食物过敏、药物过敏、昆虫过敏、罕见的过敏性障碍(如肥大细胞增多症)、过敏反应、湿疹(包括过敏性或异位性湿疹)、哮喘(如支气管哮喘和自身免疫性哮喘)、涉及骨髓细胞和t细胞浸润的病症和慢性炎症反应。
本发明的具有式i的化合物还可用于治疗感染性疾病。因此，它们可用于治疗病毒性疾病，特别是用于由感染选下组的病毒引起的疾病，该组由以下各项组成：乳头状瘤病毒如人乳头状瘤病毒(hpv)和引起生殖器疣、常见疣和足底疣的那些、单纯疱疹病毒(hsv)、传染性软疣、乙型肝炎病毒(hbv)、丙型肝炎病毒(hcv)、登革热病毒、天花病毒、人类免疫缺陷病毒(hiv)、巨细胞病毒(cmv)、水痘带状疱疹病毒(vzv)、鼻病毒、肠病毒、腺病毒、冠状病毒(例如sars)、流感病毒、流行性腮腺炎病毒和副流感病毒。
它们还可用于治疗细菌性疾病，特别是用于由感染选自下组的细菌引起的疾病，该组由诸如结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌和麻风分枝杆菌等分枝杆菌属组成。本发明的具有式i的化合物还可用于治疗其他感染性疾病，如衣原体、真菌性疾病，特别是选自下组的真菌性疾病，该组由以下各项组成：念珠菌病、曲霉菌病和隐球菌性脑膜炎；以及寄生虫病，如卡氏肺孢子虫肺炎(pneumocystiscarnii,pneumonia)、隐孢子虫病、组织胞浆菌病、弓形虫病、锥体虫感染和利什曼病。
因此，表达“由tlr激动剂介导的疾病”意指可通过用tlr8激动剂激活免疫系统来治疗的疾病，如癌症、自身免疫疾病、炎症、败血症、过敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。特别地，表达“由tlr激动剂介导的疾病”意指癌症、自身免疫疾病、炎症、败血病、过敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。
在一个特定方面，表达“由tlr激动剂介导”涉及选自下组的癌症，该组由以下各项组成：膀胱癌、头颈癌、肝癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、肠癌和结肠癌、胃癌、甲状腺癌、黑色素瘤、皮肤和脑肿瘤以及影响骨髓的恶性肿瘤(如白血病)和影响淋巴组织增生系统的恶性肿瘤(如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)；包括预防(例如接种疫苗)和治疗转移性癌症和肿瘤复发以及副肿瘤综合征。
本发明还涉及药物组合物，其包含如上定义的具有式i的化合物和药学上可接受的载体和/或佐剂。更具体地，本发明涉及可用于治疗由tlr激动剂介导的疾病的药物组合物。
此外，本发明涉及如上定义的具有式i的化合物，其用作治疗活性物质，特别是用作治疗由tlr激动剂介导的疾病的治疗活性物质。特别地，本发明涉及具有式i的化合物，其用于治疗癌症或自身免疫疾病或选自下组的感染性疾病，该组由以下各项组成：病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫病。
在另一方面，本发明涉及用于治疗由tlr激动剂介导的疾病的方法，该方法包括向人或动物给予治疗有效量的具有式i的化合物。特别地，本发明涉及用于治疗癌症和选自下组的感染性疾病的方法，该组由以下各项组成：病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫病。
本发明还涉及如上定义的具有式i的化合物用于治疗由tlr激动剂介导的疾病的用途。
此外，本发明涉及如上定义的具有式i的化合物制备用于治疗由tlr激动剂介导的疾病的药物的用途。特别地，本发明涉及如上定义的具有式i的化合物制备用于治疗癌症或自身免疫疾病或选自下组的感染性疾病的药物的用途，该组由以下各项组成：病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫病。
在另一方面，具有式i的化合物可以与用于治疗癌症的方案中的一种或多种另外的治疗方式组合。
除了给予本发明的化合物之外，组合疗法涵盖辅助使用一种或多种有效治疗癌症的方式。这些方式包括但不限于化学治疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、细胞因子、激素、抗体、多核苷酸、放射和光动力治疗剂。在一个具体方面，组合疗法可用于预防癌症复发，抑制转移或抑制癌症或转移的生长和/或扩散。如本文所用，“与...组合”是指具有式i的化合物作为治疗方案的一部分给予，该治疗方案包括如上所述的一种或多种另外的治疗方式。因此，本发明还涉及用于治疗癌症的方法，该方法包括向人或动物给予治疗有效量的具有式i的化合物与一种或多种其他药学活性化合物的组合。
具有式i的化合物可单独使用或与一种或多种另外的治疗方式组合使用用于治疗自身免疫疾病。
除了给予本发明的化合物之外，组合疗法涵盖辅助使用一种或多种有助于预防或治疗自体免疫疾病的方式。这些方式包括但不限于化学治疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、细胞因子、激素、抗体、多核苷酸、放射和光动力治疗剂。如本文所用，“与...组合”是指具有式i的化合物作为治疗方案的一部分给予，该治疗方案包括如上所述的一种或多种另外的治疗方式。因此，本发明还涉及用于治疗自体免疫疾病的方法，该方法包括向人或动物给予治疗有效量的具有式i的化合物与一种或多种其他药学活性化合物的组合。
在另一方面，具有式i的化合物可单独使用或与一种或多种另外的治疗方式组合使用用于治疗感染性疾病。
除了给予本发明的化合物之外，组合疗法涵盖辅助使用一种或多种有助于预防或治疗感染性疾病的方式。这些方式包括但不限于抗病毒剂、抗生素和抗真菌剂。如本文所用，“与...组合”是指具有式i的化合物作为治疗方案的一部分给予，该治疗方案包括如上所述的一种或多种另外的治疗方式。因此，本发明还涉及用于治疗感染性疾病的方法，该方法包括向人或动物给予治疗有效量的具有式i的化合物与一种或多种其他药学活性化合物的组合。
药理学测试
进行以下测试以确定具有式i的化合物的活性：
对于tlr8和tlr7活性测试，分别使用hek-blue人tlr8或tlr7细胞(英杰公司(invitrogen)，圣迭哥，加利福尼亚州，美国)。这些细胞被设计用于通过监测nf-κb的激活来研究人tlr8或tlr7的刺激。将seap(分泌型胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与5个nf-κb和ap-1结合位点融合的ifn-b最小启动子的控制下。因此，在刺激人tlr8或tlr7持续20小时后，报告基因表达受nf-κb启动子的调节。使用quantiblue试剂盒(英杰公司，圣迭哥，加利福尼亚州，美国)在640nm的波长下测定细胞培养物上清液seap报告基因活性，一种在碱性磷酸酶存在下变为紫色/蓝色的检测介质。使用活性基础分析(activitybaseanalysis)(id商业解决方案有限公司(idbusinesssolution,limited))确定ec50值。
根据式i的化合物在上文的测定中针对人tlr8具有在0.001μm至0.05μm，更特别地0.001μm至0.03μm范围内的活性(ec50值)，而在上文的测定中针对人tlr7的活性(ec50值)大于5μm，在7μm至>100μm的范围内，意味着该化合物示出针对人tlr8的高选择性。
例如，以下化合物在上述测定中示出以下ec50值：
药物组合物
具有式i的化合物及其药学上可接受的盐可以用作药物，以例如用于肠内、肠胃外或局部给药的药物制剂的形式。具有式i的化合物及其药学上可接受的盐可通过全身(例如，肠胃外)或局部(例如，局部或病灶内注射)给药来给予。在一些情况下，药物制剂是局部、肠胃外、口服、阴道、子宫内、鼻内或通过吸入给予的。如本文所述，某些组织可以是tlr激动剂的优选靶标。因此，将tlr激动剂给予至暴露于病毒的淋巴结、脾、骨髓、血液以及组织是优选的给药部位。
在一个方面，肠胃外给予包含具有式i的化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。肠胃外给药途径包括但不限于透皮、经粘膜、鼻咽、肺部和直接注射。通过注射进行的肠胃外给药可以通过任何肠胃外注射途径，包括但不限于静脉内(iv)(包括推注和输注(例如，快或慢))、腹膜内(ip)、肌肉内(im)、皮下(sc)和皮内(id)途径。透皮和经粘膜给药可以通过例如包含载体(例如二甲基亚砜，dmso)、通过施加电脉冲(例如，离子电渗疗法)或其组合来实现。可以使用的透皮给药可使用各种装置。适于胃肠外给药的具有式i的化合物的制剂通常在usp水或注射用水中配制，并且还可包含ph缓冲剂、盐填充剂、防腐剂和其他药学上可接受的赋形剂。
透皮给药是通过施用能够允许tlr激动剂穿透皮肤并进入血流的乳膏剂、冲洗剂、凝胶剂等完成的。适于透皮给药的组合物包括但不限于直接施用于皮肤或掺入保护性载体如透皮装置(所谓的“贴剂”)中的药学上可接受的悬浮液、油、乳膏剂和软膏剂。合适的乳膏剂、软膏剂等的例子可在例如医师案头参考(physician'sdeskreference)中找到。透皮传递也可以通过离子电渗疗法实现，例如使用可商购的贴剂，其连续地通过未破损的皮肤递送其产品数天或更长时间。使用此方法允许以相对较高的浓度控制传递药物组合物，允许输注组合药物并允许同时使用吸收促进剂。通过透皮和经粘膜途径给药可以是连续的或脉动的。
肺部给药是通过吸入完成，且包括诸如鼻内、经支气管和经肺泡途径等递送途径。提供了适于通过吸入给药的具有式i的化合物的制剂，包括但不限于用于形成气溶胶的液体悬浮液以及用于干粉吸入递送系统的粉末形式。适于通过吸入给药的装置包括但不限于雾化器、汽化器、喷雾器和干粉吸入递送装置。递送至呼吸道粘膜的其他方法包括递送液体制剂，如通过滴鼻剂。吸入给药优选以离散剂量(例如，通过定量吸入器)完成，但可以通过使用喷雾器完成类似于输注的递送。
具有式i的化合物及其药学上可接受的盐也可以口服给药，例如以片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊的形式。
药物制剂的生产能以本领域任何技术人员熟悉的方式，通过将所述具有式i的化合物及其药学上可接受的盐(任选地与其他有治疗价值的物质组合)与合适的无毒惰性、治疗上相容的固体或液体载体材料和(如果需要)常用的药物佐剂一起加入草本给药形式中来实现。
合适的载体材料不仅是无机载体材料，还有有机载体材料。因此，例如，乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐可用作片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬明胶胶囊的载体材料。软明胶胶囊的合适的载体材料是例如植物油、蜡、脂肪和半固体和液体多元醇(然而，根据活性成分的性质，在软明胶胶囊的情况下，可能不需要载体)。用于生产溶液和糖浆的合适的载体材料是例如水、多元醇、蔗糖、转化糖等。注射溶液的合适的载体材料是例如水、醇、多元醇、甘油和植物油。栓剂的合适的载体材料是例如天然或硬化油、蜡、脂肪和半液体或液体多元醇。局部制剂的合适的载体材料是甘油酯、半合成和合成甘油酯、氢化油、液体蜡、液体石蜡、液体脂肪醇、甾醇、聚乙二醇和纤维素衍生物。
常用的稳定剂、防腐剂、润湿剂和乳化剂、稠度改善剂、风味改善剂、用于改变渗透压的盐、缓冲物质、增溶剂、着色剂和掩蔽剂和抗氧化剂被考虑作为药物佐剂。
具有式i的化合物的剂量可以在宽范围内变化，这取决于要控制的疾病、患者的年龄和个体状况以及给药方式，并且当然将适于每个特定案例中的个别需求。对于成年患者，考虑每日剂量为约1至1000mg，尤其是约1至300mg。根据疾病的严重程度和精确的药代动力学特征，该化合物能以一个或几个日剂量单位(例如，以1至3个剂量单位)给药。
药物制剂便利地含有约1-500mg，优选1-100mg的具有式i的化合物。
以下实施例c1至c3说明了本发明的典型组合物，但仅作为其代表。
实施例c1
含有下列成分的薄膜包衣片能以常规方式制备：
将活性成分过筛并与微晶纤维素混合，并用聚乙烯吡咯烷酮的水溶液将混合物制粒。将颗粒与羟基乙酸淀粉钠和硬脂酸镁混合，并分别压缩得到120或350mg内核。用上述薄膜包衣的水溶液/悬浮液涂布内核。
实施例c2
含有下列成分的胶囊能以常规方式制备：
将组分过筛并混合，并填入2号胶囊。
实施例c3
注射溶液可具有以下组成：
将活性成分溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。通过乙酸将ph调节至5.0。通过添加剩余量的水将体积调整为1.0ml。过滤溶液，使用适当overage装入小瓶并灭菌。
以下实施例用于更详细地说明本发明。然而，它们无意以任何方式限制本发明的范围。
实施例
其中使用的缩写：
boc2o＝二碳酸二叔丁酯，boc＝氨基甲酸叔丁酯，calc’d＝计算值，cd3od＝氘代甲醇，d＝天，dipea＝n,n-二异丙基乙胺，dcm＝二氯甲烷，dmf-dma：n,n-二甲基甲酰胺二甲缩醛，ea＝乙酸乙酯或etoac，ec50＝半最大有效浓度，edci＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，h或hr＝小时，hobt＝n-羟基苯并三唑，hbtu＝o-(苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，hatu：(1-[双(二甲基氨基)-亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐)，pa2dba3：三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，dmap＝4-二甲基氨基吡啶，tbai＝n,n,n-三丁基-1-丁铵碘化物，hplc＝高效液相色谱法，hplc-uv＝具有紫外光检测器的高效液相色谱法，hz＝赫兹，mg＝毫克，mhz＝兆赫，min＝分钟，ml＝毫升，mm＝毫米，mm＝mmol/l，mmol＝毫摩尔，ms＝质谱分析法，mw＝分子量，nmr＝核磁共振，pe＝石油醚，prep-hplc＝制备型高效液相色谱法，rt＝室温，sat.＝饱和，tbs＝叔丁基二甲基甲硅烷基，sxt＝六重峰，tea＝三乙胺，tfa＝三氟乙酸，thf＝四氢呋喃，μm＝微摩尔/l，μm＝微米，uv＝紫外光检测器，od＝光密度，pd(dppf)2cl2＝[1,1′-双(二苯基膦基)-二茂铁]二氯化钯(ii)，tlr8＝toll样受体8，tlr7＝toll样受体7，nf-κb＝活化b细胞的核因子κ-轻链增强子，seap＝分泌型胚胎碱性磷酸酶，ifn-β＝干扰素-β。
实施例a–制备关键中间体a
2-氨基-8-甲氧基羰基-3h-1-苯并氮杂卓-4-甲酸
方案2中提供了详细合成路线。
a)制备化合物b
向4-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(100g，0.51mol)在dmf(1l)中的溶液中添加dmf-dma(73g，0.61mol)。将反应混合物加热至105℃持续18hr。然后在真空中除去溶剂，得到4-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-3-硝基苯甲酸甲酯(化合物b，127g，粗品)，将其无需纯化而用于下一步骤。ms：计算值251(m+h)+，测量值251(m+h)+。
方案2
b)制备化合物c
在10℃下向naio4(327g，1.53mol)在thf(1.3l)和水(2.0l)的混合溶剂中的溶液中添加4-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-3-硝基苯甲酸甲酯(化合物a，127g，0.51mol)的thf(0.7l)溶液。在25℃下搅拌反应混合物18hr后，过滤混合物，然后用ea萃取。用盐水洗涤有机层，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩得到粗产物。通过硅胶柱色谱法(pe:ea＝20:1-10:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体的4-甲酰基-3-硝基苯甲酸甲酯(化合物c，84g，79％)。ms：计算值210(m+h)+，测量值210(m+h)+。
c)制备化合物d
在25℃下，向2-(三苯基亚膦基)乙酸叔丁酯(300g，0.797mol)在ea(2l)中的溶液中添加2-溴乙腈(57g，0.479mol)。将反应加热至回流持续18hr。在将其冷却至环境温度后，过滤固体，并浓缩滤液。通过从ea和pe(200ml，2.5:1)中研磨纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物3-氰基-2-(三苯基亚膦基)丙酸叔丁酯(化合物d，125g，63％)。ms：计算值416(m+h)+，测量值416(m+h)+。
d)制备化合物e
在25℃下，向4-甲酰基-3-硝基苯甲酸酯(化合物c，50g，0.24mol)在甲苯(600ml)中的溶液中添加3-氰基-2-(三苯基亚膦基)丙酸叔丁酯(化合物d，109g，0.26mol)。在25℃下搅拌反应混合物18hr后，将其在冰浴中冷却1hr。收集沉淀物，并干燥得到呈白色固体的期望产物。浓缩滤液并用etoh(120ml)处理。过滤未溶解的材料，并浓缩滤液得到另一批次的期望产物。合并这两个批次得到4-(3-(叔丁氧基)-2-(氰基甲基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-硝基苯甲酸甲酯(化合物e，60g，72％)。ms：计算值347(m+h)+，测量值347(m+h)+。
e)制备化合物f
在60℃下，向4-(3-(叔丁氧基)-2-(氰基甲基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-3-硝基苯甲酸甲酯(化合物e，30g，87mmol)在acoh(450ml)中的溶液中添加fe粉(29.1g，520mmol)。在85℃下加热反应混合物3hr后，将其通过硅藻土过滤，并用乙酸洗涤沉淀物。在真空中浓缩滤液，并用饱和nahco3水溶液(300ml)小心使残余物碱化。然后添加ea(600ml)。使混合物通过硅藻土过滤，并用ea(200ml)洗涤沉淀物。然后用水洗涤滤液，经na2so4干燥，并在真空中浓缩得到呈浅黄色固体的4-叔丁基8-甲基2-氨基-3h-苯并[b]氮杂卓-4,8-二甲酸酯(化合物f，25g，93％)。ms：计算值317(m+h)+，测量值317(m+h)+。
f)制备化合物a
在0℃下，向4-叔丁基8-甲基2-氨基-3h-苯并[b]氮杂卓-4,8-二甲酸酯(化合物f，25g，80mmol)在二噁烷(400ml)中的溶液中添加hcl在二噁烷(600ml)中的1m溶液。在25℃下搅拌反应混合物18hr后，将其在真空中浓缩得到2-氨基-8-(甲氧基羰基)-3h-苯并[b]氮杂卓-4-甲酸盐酸盐(化合物a，25g，粗品)，将其无需任何纯化而用于下一步骤。ms：计算值261(m+h)+，测量值261(m+h)+。
实施例b–制备关键中间体j
2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-1-苯并氮杂卓-8-甲酸
方案3中提供了详细合成路线。
g)制备化合物g
在0℃下，向2-氨基-8-(甲氧基羰基)-3h-苯并[b]氮杂卓-4-甲酸盐酸盐(化合物a，19g，64mmol)、hbtu(29g，77mmol)、dipea(33g，257mmol)在dmf(400ml)中的混合物中添加二正丙胺(13g，128mmol)。在20℃下搅拌反应混合物2hr后，将其用饱和nh4cl(500ml)淬灭，用h2o(1l)稀释，并用ea(300ml×3)萃取。用盐水(300ml×2)洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，并浓缩得到粗产物。通过硅胶柱色谱法(pe:ea＝1:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体的2-氨基-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-苯并[b]氮杂卓-8-甲酸甲酯(化合物g，18g，82％)。ms：计算值344(m+h)+，测量值344(m+h)+。
方案3
h)制备化合物h
在0℃下，向2-氨基-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-苯并[b]氮杂卓-8-甲酸甲酯(化合物g，18g，53mmol)和tea(16g，157mmol)在dcm(300ml)中的混合物中添加boc2o(17g，79mmol)。在20℃下搅拌混合物16hr后，将其用饱和nh4cl(300ml)淬灭，用h2o(500ml)稀释，并用dcm(100ml×3)萃取。用盐水(100ml×2)洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，并浓缩得到粗产物。通过硅胶柱色谱法(pe:ea＝3:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-苯并[b]氮杂卓-8-甲酸甲酯(化合物h，21g，产率：91％)。ms：计算值444(m+h)+，测量值444(m+h)+。
i)制备化合物j
在0℃下，向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-苯并[b]氮杂卓-8-甲酸甲酯(化合物h，5.0g，11.3mmol)在thf/h2o(1/1，100ml)中的溶液中添加lioh水溶液(1m，17ml，17mmol)。然后将混合物温热至25℃，并搅拌6hr。将混合物倒入冰水(150ml)中，用柠檬酸水溶液(5％)酸化至ph＝5，并用etoac(100ml×3)萃取。用盐水(100ml×2)洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，并在真空中浓缩得到呈黄色固体的2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-1-苯并氮杂卓-8-甲酸(化合物j，4.0g，83.3％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm＝7.78-7.72(m,1h),7.64(dd,j＝1.5,8.0hz,1h),7.55(d,j＝8.3hz,1h),6.93-6.89(m,1h),3.14(s,6h),1.54(br.s.,4h),1.44(s,9h),0.80(br.s.,6h)。ms：计算值430(m+h)+，测量值430(m+h)+。
实施例1
2-氨基-n8-[(1s,2r)-2-苯基环丙基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
实施例1可根据方案1中的一般程序制备。方案4中提供了详细合成路线。
方案4
制备实施例1：
在室温下，向2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-1-苯并氮杂卓-8-甲酸(化合物j，50mg，116μmol)、dipea(75mg，582μmol)和(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐(20mg，116μmol)在dcm(5ml)中的溶液中添加hatu(88mg，233μmol)。在室温下搅拌混合物过夜。完成反应后，添加水。用dcm萃取混合物。分离有机层，经na2so4干燥，并浓缩得到粗中间体k。将粗中间体k溶解在dcm(3ml)中，然后在室温下添加tfa(0.3ml)。在室温下搅拌反应混合物2hr。在真空中除去溶剂，并通过prep-hplc纯化残余物，得到呈白色固体的产物(实施例1，51mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.66-7.84(m,2h),7.49-7.61(m,1h),7.11-7.35(m,5h),6.93-7.05(m,1h),3.34-3.55(m,4h),3.21(m,2h),2.95-3.14(m,1h),2.22(ddd,j＝9.6,6.3,3.4hz,1h),1.49-1.79(m,4h),1.23-1.43(m,2h),0.60-1.09(m,6h)。ms：计算值445(m+h)+，测量值445(m+h)+。
实施例2
2-氨基-n8-(1-苯基-4-哌啶基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用1-苯基哌啶-4-胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例2(47mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.88-7.85(m,2h),7.65(d,j＝8hz,1h),7.53(m,4h),7.38(br,1h),7.09(s,1h),4.30(br,1h),3.82-3.79(m,2h),3.60-3.58(m,2h),3.46(br,4h),3.35(s,2h),2.29(m,2h),2.10(m,2h),1.74-1.65(m,4h),0.96-0.92(br,6h)。ms：计算值488(m+h)+，测量值488(m+h)+。
实施例3
2-氨基-n8-(1-苯基氮杂环丁-3-基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用1-苯基氮杂环丁-3-胺(化合物3c)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例3(5mg)。1hnmr(甲醇-d4,400mhz):δppm＝7.62(d,j＝1.8hz,1h),7.48-7.53(m,1h),7.39-7.44(m,1h),7.21(t,j＝7.9hz,2h),6.89(s,1h),6.75(t,j＝7.2hz,1h),6.56(d,j＝7.7hz,2h),4.65(br.s.,1h),4.28(t,j＝7.5hz,2h),3.82(t,j＝6.8hz,2h),3.39-3.47(m,4h),2.80-2.90(m,2h),1.69(d,j＝6.5hz,4h),0.80-1.05ppm(m,6h)。ms：计算值460.2(m+h)+，测量值460.2(m+h)+。
制备化合物3c：
在90℃下，在n2气氛下向氮杂环丁-3-基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(化合物3a，1.0g，4.8mmol)、溴苯(750mg，4.8mmol)、cs2co3(4.7g，14.4mmol)、binap(600mg，9.6mmol)在甲苯(60ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(440mg，0.48mmol)。然后在相同温度下搅拌混合物18小时。过滤混合物，并浓缩滤液，得到粗产物。通过硅胶色谱法(pe/ea＝5:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体的(1-苯基氮杂环丁-3-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3b，800mg，66.7％)。ms：计算值249(m+h)+，测量值249(m+h)+。
在0℃下，向(1-苯基氮杂环丁-3-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3b，200mg，0.81mmol)在dcm(6.0ml)中的溶液中逐滴添加tfa(2.0ml)。然后在25℃下搅拌混合物1hr。浓缩溶液，得到呈棕色油状物的粗产物1-苯基氮杂环丁-3-胺(化合物3c，200mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。ms：计算值149(m+h)+，测量值149(m+h)+。
实施例4
2-氨基-n8-环己基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用环己胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例4(28mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.63-7.83(m,2h),7.42-7.61(m,1h),6.87-7.13(m,1h),3.77-4.01(m,1h),3.38-3.65(m,4h),1.57-2.06(m,10h),1.15-1.52(m,6h),0.95(d,j＝17.3hz,6h)。ms：计算值411(m+h)+，测量值411(m+h)+。
实施例5
2-氨基-n8-(1-苯基环丙基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用1-苯基环丙胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例5(5mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.67-7.85(m,2h),7.57(d,j＝8.3hz,1h),7.26-7.37(m,3h),7.19(dq,j＝8.6,4.2hz,1h),7.02(s,1h),3.46(br.s.,4h),3.21(m,2h),1.71(dq,j＝14.9,7.3hz,4h),1.27-1.47(m,4h),0.66-1.12(m,6h)。ms：计算值445(m+h)+，测量值445(m+h)+。
实施例6
2-氨基-n8-(1-苯基环丁基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用1-苯基环丁胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例6(45mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.89-7.84(m,1h),7.79(s,1h),7.67-7.62(m,1h),7.56(d,j＝7.28hz,2h),7.35(s,2h),7.27-7.21(m,1h),7.09(s,1h),3.47(br.s.,4h),3.35(s,2h),2.72(t,j＝7.78hz,4h),2.22-2.08(m,1h),2.06-1.92(m,1h),1.78-1.63(m,4h),0.96(d,j＝16.44hz,6h)。ms：计算值459(m+h)+，测量值459(m+h)+。
实施例7
2-氨基-n8-[(1s)-1-苯基乙基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用(s)-1-苯乙胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例7(7mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.74-7.81(m,2h),7.55-7.65(m,1h),7.39-7.45(m,2h),7.33-7.38(m,2h),7.22-7.31(m,1h),7.05(s,1h),5.28(q,j＝7.0hz,1h),3.46(br.s.,4h),3.21(m,2h),1.71(dq,j＝15.1,7.5hz,4h),1.60(d,j＝7.0hz,3h),0.67-1.13(m,6h)。ms：计算值433(m+h)+，测量值433(m+h)+。
实施例8
2-氨基-n8-(异噁唑-3-基甲基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用异噁唑-3-基甲胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例8(22mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝8.62(s,1h),7.80(s,1h),7.75(d,j＝8hz,1h),7.59(d,j＝8hz,1h),7.06(s,1h),6.50(s,1h),4.69(s,2h),3.45(br,4h),3.31(s,2h),1.73-1.64(m,4h),0.96-0.90(br,6h)。ms：计算值410(m+h)+，测量值410(m+h)+。
实施例9
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-(噻唑-5-基甲基)-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用噻唑-5-基甲胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例9(16mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝9.01(d,j＝2.0hz,1h),7.74-7.89(m,2h),7.54-7.67(m,1h),7.40-7.52(m,1h),6.93-7.12(m,1h),4.78(s,2h),3.34-3.60(m,4h),3.21-3.32(m,2h),1.48-1.83(m,4h),0.67-1.09(m,6h)。ms：计算值426(m+h)+，测量值426(m+h)+。
实施例10
2-氨基-n8-二苯甲基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用二苯基甲胺盐酸盐而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例10(5mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.67-7.83(m,2h),7.49-7.62(m,1h),7.23-7.43(m,10h),6.91-7.06(m,1h),6.48(s,1h),3.36-3.56(m,4h),3.21(m,2h),1.70(sxt,j＝7.3hz,4h),0.69-1.14(m,6h)。ms：计算值495(m+h)+，测量值495(m+h)+。
实施例11
2-氨基-n8-(4-苯基四氢吡喃-4-基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用4-苯基四氢-2h-吡喃-4-胺盐酸盐而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例11(6mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.67-7.79(m,2h),7.55-7.64(m,1h),7.43-7.53(m,2h),7.31-7.40(m,2h),7.20-7.29(m,1h),6.96-7.08(m,1h),3.81-4.01(m,4h),3.35-3.53(m,4h),3.28-3.33(m,2h),2.48-2.68(m,2h),2.06-2.32(m,2h),1.53-1.81(m,4h),0.74-1.12(m,6h)。ms：计算值489(m+h)+，测量值489(m+h)+。
实施例12
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-(噻唑-2-基甲基)-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用噻唑-2-基甲胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例12(12mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.73-7.71(m,2h),7.60(dd,j＝8hz,4hz,1h),7.54-7.53(m,1h),7.49(d,j＝8hz,1h),6.94(s,1h),4.89(s,2h),3.43(t,j＝8hz,4h),3.31(s,2h),1.71-1.65(m,4h),0.95-0.88(br,6h)。ms：计算值426(m+h)+，测量值426(m+h)+。
实施例13
2-氨基-n8-(1-甲基-1-苯基-乙基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用2-苯基丙-2-胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例13(5mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.62-7.77(m,2h),7.51-7.61(m,1h),7.41-7.52(m,2h),7.25-7.40(m,2h),7.14-7.26(m,1h),6.94-7.08(m,1h),3.35-3.59(m,4h),3.21(m,4h),1.54-1.79(m,8h),0.66-1.11(m,6h)。ms：计算值447(m+h)+，测量值447(m+h)+。
实施例14
2-氨基-n8-[(1r)-1-苯基乙基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用(r)-1-苯基乙胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例14(12mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.74-7.89(m,2h),7.61(d,j＝8.8hz,1h),7.41-7.47(m,2h),7.18-7.37(m,3h),7.06(s,1h),5.28(q,j＝7.0hz,1h),3.34-3.56(m,5h),1.71(dq,j＝15.0,7.4hz,4h),1.44-1.64(m,4h),0.72-1.21(m,6h)。ms：计算值433(m+h)+，测量值433(m+h)+。
实施例15
2-氨基-n8-环戊基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用环戊胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例15(19mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.66(s,1h),7.60(d,j＝8hz,1h),7.49(d,j＝8hz,1h),6.96(s,1h),4.36-4.31(m,1h),3.43(t,j＝8hz,4h),3.31(s,2h),2.06-2.00(m,2h),1.80-1.78(m,2h),1.75-1.58(m,8h),0.96-0.89(br,6h)。ms：计算值397(m+h)+，测量值397(m+h)+。
实施例16
2-氨基-n8-叔丁基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用2-甲基丙-2-胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例16(53mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.76-7.74(m,2h),7.60(d,j＝8hz,1h),7.07(s,1h),3.46(m,4h),3.33(s,2h),1.72-1.66(m,4h),1.47(s,9h),0.96-0.92(m,6h)。ms：计算值385(m+h)+，测量值385(m+h)+。
实施例17
2-氨基-n8-环丁基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用环丁胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例17(10mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.78-7.93(m,2h),7.56-7.71(m,1h),7.09(s,1h),4.54(quin,j＝8.3hz,1h),3.47(br.s.,4h),3.33-3.35(m,2h),2.28-2.46(m,2h),2.05-2.22(m,2h),1.54-1.92(m,6h),0.96ppm(d,j＝16.6hz,6h)。ms：计算值383(m+h)+，测量值383(m+h)+。
实施例18
2-氨基-n8-苄基-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用苯基甲胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈黄色固体的实施例18(18mg)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm10.00-9.89(m,1h),9.36-9.26(m,1h),9.18-9.07(m,1h),7.91(s,2h),7.66(d,j＝8.0hz,1h),7.41-7.21(m,5h),7.02(s,1h),4.52(d,j＝5.8hz,2h),3.33(br.s.,6h),1.66-1.47(m,4h),1.01-0.69(m,6h)。ms：计算值419(m+h)+，测量值419(m+h)+。
实施例19
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-(3-吡啶基甲基)-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用吡啶-4-基甲胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈黄色固体的实施例19(7mg)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm＝8.58-8.85(m,1h),8.45(dd,j＝8.3,1.3hz,1h),8.25(d,j＝7.8hz,1h),7.83-7.97(m,2h),7.60-7.82(m,2h),7.10(s,1h),4.74(s,2h),3.47(br.s.,4h),3.25-3.31(m,2h),1.54-1.81(m,4h),0.96(m,6h)。ms：计算值420(m+h)+，测量值420(m+h)+。
实施例20
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-[2-(3-吡啶基)乙基]-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用2-(吡啶-4-基)乙胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈黄色固体的实施例20(8mg)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm＝8.54-8.75(m,2h),8.23(d,j＝7.8hz,1h),7.70-7.85(m,3h),7.55-7.67(m,1h),7.09(s,1h),3.75(t,j＝6.8hz,2h),3.47(br.s.,4h),3.26-3.33(m,2h),3.01-3.17(m,2h),1.71(dq,j＝15.0,7.5hz,4h),0.95(m,6h)。ms：计算值434(m+h)+，测量值434(m+h)+。
实施例21
2-氨基-n4,n4-二丙基-n8-[3-(3-吡啶基)丙基]-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用3-(吡啶-4-基)丙-1-胺而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈黄色固体的实施例21(7mg)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm＝8.56-8.81(m,2h),8.33(d,j＝7.8hz,1h),7.77-7.95(m,3h),7.66(d,j＝8.3hz,1h),7.10(s,1h),3.39-3.57(m,4h),3.33-3.39(m,4h),2.94(t,j＝7.7hz,2h),1.96-2.16(m,2h),1.53-1.81(m,4h),0.96(m,6h)。ms：计算值448(m+h)+，测量值448(m+h)+。
实施例22
2-氨基-n4-(环丙基甲基)-n8-[(2s)-2-苯基环丙基]-n4-丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-[环丙基甲基(丙基)氨基甲酰基]-3h-1-苯并氮杂卓-8-甲酸(化合物22a)而非2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(二丙基氨基甲酰基)-3h-1-苯并氮杂卓-8-甲酸(化合物j)，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例22(8mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.83(s,1h),7.82(d,j＝4hz,1h),7.64(d,j＝8hz,1h),7.30-7.26(m,2h),7.20-7.16(m,3h),7.10(s,1h),3.56(t,j＝8hz,2h),3.40(d,j＝4hz,2h),3.35(s,2h),3.10-3.06(m,1h),2.22-2.18(m,1h),1.77-1.68(m,2h),1.38-1.31(m,2h),1.09(br,1h),0.95(br,3h),0.62-0.60(m,2h),0.3(br,2h)。ms：计算值457(m+h)+，测量值457(m+h)+。
制备化合物22a：
通过使用n-(环丙基甲基)丙-1-胺而非n-丙基丙-1-胺，类似于化合物j制备标题化合物。ms：计算值442(m+h)+，测量值442(m+h)+。
实施例23
2-氨基-n8-(1-苯基-3-哌啶基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用1-苯基哌啶-3-胺；2,2,2-三氟乙酸(化合物23b)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例23(9mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.87(s,1h),7.84(d,j＝8hz,1h),7.64(d,j＝8hz,1h),7.43-7.39(m,2h),7.32-7.30(m,2h),7.15(m,1h),7.08(s,1h),4.36-4.35(br,1h),4.82-4.79(m,1h),3.65-3.61(m,1h),3.46(br,4h),3.34(s,2h),3.23-3.11(m,2h),2.14-2.05(m,2h),1.95-1.91(m,1h),1.77-1.65(m,5h),0.95-0.93(br,6h)。ms：计算值488(m+h)+，测量值488(m+h)+。
制备化合物23b
向管中添加溴苯(314mg，209μl，2mmol)、哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(200mg，999μmol)、碘化铜(i)(19mg，100μmol)、l-脯氨酸(23mg，200μmol)、k2co3(276mg，2mmol)和dmso(4ml)。形成蓝色悬浮液，然后将其用氮气鼓泡5min。将管密封并加热至90℃(油浴)持续约18小时。用50ml水稀释反应混合物，并用ea(25ml×2)萃取。用饱和nh4cl(25ml×2)洗涤有机层，经na2so4干燥，并浓缩得到棕色油状物。然后将其通过硅胶柱色谱法(用ea/pe＝10％至20％洗脱)纯化，得到约83mg呈黄色油状物的n-(1-苯基-3-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(化合物23a)。ms：计算值277(m+h)+，测量值277(m+h)+。
将化合物23a溶解在dcm(2ml)中，并用冰浴冷却。添加tfa(1ml)，然后将其温热至室温，并搅拌14hr。将混合物浓缩，得到呈棕色油状物的1-苯基哌啶-3-胺(化合物23b)。ms：计算值177(m+h)+，测量值177(m+h)+。
实施例24
2-氨基-n8-(1-苯基吡咯烷-3-基)-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用1-苯基吡咯烷-3-胺(化合物24b)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例24(28mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.85-7.83(m,2h),7.64-7.62(m,1h),7.18(t,j＝8hz,2h),7.07(s,1h),6.67-6.61(m,3h),4.76-4.70(m,1h),3.70-3.66(m,1h),3.56-3.37(m,6h),3.34(m,3h),2.47-2.39(m,1h),2.21-2.13(m,1h),1.74-1.64(m,4h),0.94(br,6h)。ms：计算值474(m+h)+，测量值474(m+h)+。
制备化合物24b
通过使用吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯而非哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯，类似于化合物23b制备标题化合物。
实施例25
2-氨基-n8-[(3s)-1-苯基吡咯烷-3-基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用(3s)-1-苯基吡咯烷-3-胺(化合物25b)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例25(15mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.85-7.83(m,2h),7.63(d,j＝8hz,1h),7.18(t,j＝8hz,2h),7.08(s,1h),6.66-6.60(m,3h),4.76-4.72(m,1h),3.70-3.65(m,1h),3.56-3.50(m,1h),3.45(br,4h),3.41-3.34(m,4h),2.47-2.39(m,1h),2.21-2.13(m,1h),1.74-1.64(m,4h),0.94(br,6h)。ms：计算值474(m+h)+，测量值474(m+h)+。
制备化合物25b
通过使用n-[(3s)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯而非哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯，类似于化合物23b制备标题化合物。
实施例26
2-氨基-n8-[4-(苯胺基甲基)环己基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用n-((4-氨基-环己基)甲基)苯胺(化合物26b)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例26(45mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.86-7.77(m,2h),7.62(dd,j＝3.2,8.1hz,1h),7.49-7.37(m,2h),7.31-7.19(m,3h),7.07(d,j＝2.4hz,1h),4.10(br.s.,1h),3.96-3.84(m,1h),3.45(br.s.,4h),3.34(s,2h),3.23(d,j＝6.9hz,1h),2.12-1.93(m,3h),1.86-1.75(m,2h),1.75-1.60(m,6h),1.54-1.38(m,1h),1.34-1.18(m,1h),0.95(d,j＝7.7hz,6h)。ms：计算值516(m+h)+，测量值516(m+h)+。
制备化合物26b
通过使用n-[4-(氨基甲基)环己基]氨基甲酸叔丁酯而非哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯，类似于化合物23b制备标题化合物。
实施例27
2-氨基-n8-[3-(苯胺基甲基)环丁基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用n-((3-氨基环丁基)甲基)苯胺(化合物27b)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例27(83mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.83-7.81(m,2h),7.64-7.63(m,1h),7.51-7.49(m,2h),7.36-7.32(m,3h),7.06(s,1h),4.42-4.36(m,1h),3.58-3.56(d,j＝8.0hz,2h),3.47-3.45(m,4h),3.34(s,2h),2.55-2.50(m,1h),2.37-2.32(m,3h),1.94-1.91(m,1h),1.71-1.66(m,4h),0.96(m,6h)。ms：计算值488(m+h)+，测量值488(m+h)+。
制备化合物27b
通过使用n-[3-(氨基甲基)环丁基]氨基甲酸叔丁酯而非哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯，类似于化合物23b制备标题化合物。
实施例28
2-氨基-n8-[(3r)-1-苯基吡咯烷-3-基]-n4,n4-二丙基-3h-1-苯并氮杂卓-4,8-二甲酰胺
通过使用(3r)-1-苯基吡咯烷-3-胺(化合物28b)而非(1s,2r)-2-苯基环丙胺盐酸盐，类似于实施例1制备标题化合物。获得呈白色固体的实施例28(7mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm＝7.85-7.83(m,2h),7.63(d,j＝8hz,1h),7.18(t,j＝8hz,2h),7.08(s,1h),6.66-6.60(m,3h),4.76-4.72(m,1h),3.70-3.65(m,1h),3.55-3.34(m,7h),3.32(s,2h),2.47-2.39(m,1h),2.21-2.13(m,1h),1.74-1.64(m,4h),0.94-0.92(br,6h)。ms：计算值474(m+h)+，测量值474(m+h)+。
制备化合物28b
通过使用n-[(3r)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯而非哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯，类似于化合物23b制备标题化合物。