本发明涉及包含浓度至少为3mm的酪氨酸和聚乙烯醇(pva)的细胞培养基。本发明还涉及使用包含浓度至少为3mm的酪氨酸和聚乙烯醇(pva)的细胞培养基的细胞培养方法。发明背景蛋白质作为诊断剂和治疗剂已变得越来越重要。在大多数情况下，用于商业应用的蛋白质在细胞培养物中产生，来自为产生异常高水平的特别感兴趣的蛋白质而已经工程化和/或选择的细胞。细胞培养条件(包括细胞培养基)的优化，对于蛋白质的成功商业生产是重要的。与细胞培养基中的大多数氨基酸一样，酪氨酸(tyr)是细胞团和抗体或蛋白质产生所需的。生产培养物中酪氨酸的消耗能导致细胞生长、存活能力和/或蛋白质产生的减少。由于细胞培养工艺的改进和对高密度和高滴度工艺的需要，细胞培养基必须包含高浓度的氨基酸以确保细胞生长和重组多肽的产生。然而，酪氨酸在用于最大细胞生长或蛋白质产生的期望浓度下具有有限的溶解度，并且在冷藏期间倾向于从溶液中沉淀出来。避免沉淀问题的一种方法是分开补入浓缩的酪氨酸储存物。然而，这种方法增加了操作复杂性，特别是对于大规模制造工艺。此外，浓缩的酪氨酸储存物ph值高，并在补料过程中会引起ph值变化。因此，需要开发改进的细胞培养基，其中酪氨酸的溶解度增加，用于以高密度培养哺乳动物细胞和用于蛋白质的最佳产生。发明简述本发明涉及包含酪氨酸和聚乙烯醇(pva)的细胞培养基，所述酪氨酸的浓度至少为3mm。在一些实施方案中，所述酪氨酸的浓度为至少5mm。在一些实施方案中，所述pva的浓度为至少0.5g/l。在一些实施方案中，所述培养基是无血清和/或无蛋白质的培养基。本发明还涉及细胞培养方法，包括使哺乳动物细胞(优选cho细胞)与包含酪氨酸和聚乙烯醇(pva)的细胞培养基接触，所述酪氨酸的浓度至少为3mm。在一些实施方案中，所述细胞培养是补料分批培养，并且本发明的细胞培养基用作基础培养基和/或补料培养基。在一些实施方案中，细胞培养期间的最大活细胞密度高于1×106个细胞/ml。在一些实施方案中，所述细胞表达重组蛋白。发明详述本发明涉及用于细胞培养和多肽产生的方法和培养基。本发明涉及包含高浓度酪氨酸和聚乙烯醇(pva)的细胞培养基。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中酪氨酸的浓度为至少3mm、至少4mm、至少5mm、至少6mm、至少7mm、至少8mm、至少9mm或至少10mm。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中酪氨酸的浓度为至少4.5mm。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中酪氨酸的浓度为至少5mm。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中酪氨酸的浓度为至少6mm。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中酪氨酸的浓度包含在3mm至50mm之间。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中酪氨酸的浓度包含在5mm至20mm之间。在一些实施方案中，术语酪氨酸包括适合用作细胞培养中(优选在动物细胞培养中，优选在哺乳动物细胞培养中)的营养物的任何形式的酪氨酸。在一些实施方案中，酪氨酸是l-酪氨酸。在一些实施方案中，酪氨酸是酪氨酸游离碱或酪氨酸盐。在一些实施方案中，酪氨酸是选自二钠盐或二钠盐二水合物的酪氨酸盐。在优选的实施方案中，酪氨酸是l-酪氨酸，l-酪氨酸二钠或l-酪氨酸二钠二水合物。pva是式[-ch2ch(oh)-]n的聚合物，其中n是整数并代表聚合度。在一些实施方案中，在本发明的细胞培养基中使用的pva是式[-ch2ch(oh)-]n的聚合物，其中n是包含在100至10000之间、在300至8000之间或在500至5000之间的整数。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中使用的pva具有约85％至约89％的水解度。在一些实施方案中，在本发明的细胞培养基中使用的pva具有10000至100000da之间的分子量。在一些实施方案中，在本发明的培养基中使用的pva具有10000至50000da之间，优选13000至23000da之间的分子量。在一些实施方案中，在本发明的培养基中使用的pva具有1至10厘泊(cp)，优选3.0至4.5cp的粘度。pva的粘度以聚乙烯醇的4％水溶液在20℃的温度下的粘度来报告。在一些实施方案中，在本发明的细胞培养基中使用的pva是selvoltmpva203(sekisui)。适合于防止包含特定浓度(至少3mm)的酪氨酸的细胞培养基沉淀的pva浓度能由本领域技术人员容易地确定，例如使用类似于实施例1中公开的方法。在一些实施方案中，本发明细胞培养基中pva的浓度为至少0.5g/l、至少1g/l、至少2g/l、至少3g/l、至少4g/l或至少5g/l。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中pva的浓度为1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10g/l。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中pva的浓度为2.5g/l。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中pva的浓度包含在0.5g/l至5g/l之间。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基中pva的浓度包含在1g/l至3g/l之间。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基在无光下在4℃储存1、2、3或4周后具有小于5ntu(nephelometricturbidityunit，比浊法浊度单位)的浊度。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基在无光下在4℃储存2周后具有小于5ntu的浊度。在一些实施方案中，如实施例中所公开的测量浊度。在一些实施方案中，使用2100p浊度计(hach)测量浊度。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基在无光下在4℃储存1、2、3或4周后基本上不含沉淀物。在一些实施方案中，本发明的细胞培养基在无光下在4℃储存2周后基本上不含沉淀物。本文所用的术语“培养基(medium)”，“细胞培养基”和“培养基(culturemedium)”是指含有营养物的溶液，所述营养物滋养生长的哺乳动物细胞。通常，此类溶液提供细胞最小生长和/或存活所需的必需和非必需氨基酸、维生素、能量来源、脂质和微量元素。在一个实施方案中，培养基可包含ala、arg、asn、asp、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr、val和胱氨酸和/或cys。这种溶液还可以包含增强生长和/或存活率至高于最小速率的补充组分，包括但不限于激素和/或其他生长因子、特定离子(例如钠、氯、钙、镁和磷酸盐)、缓冲剂、维生素、核苷或核苷酸、微量元素(通常以极低的终浓度存在的无机化合物)、以高终浓度存在的无机化合物(如铁)、氨基酸、脂质和/或葡萄糖或其他能量来源。在一些实施方案中，有利地将培养基配制成对细胞存活和增殖最佳的ph和盐浓度。例如，可以将培养基配制成约7.1至7.3之间的ph和约1000至1300mosm之间的最终渗透度。在一些实施方案中，所述培养基是在细胞培养开始后添加的补料培养基。在一个实施方案中，所述培养基是包含4至10mmala、30至60mmarg、50至90mmasn、10至30mmasp、2至40mmglu、2至15mmgly、8至20mmhis、25至32mmile、35至60mmleu、28至60mmlys、9至25mmmet、10至30mmphe、15至40mmpro、44至80mmser、20至45mmthr、2至10mmtrp和20至50mmval的培养基(优选为补料培养基)。可以通过根据本发明调节使用的酪氨酸和pva水平来修饰多种哺乳动物生长培养基。例如，根据本发明的培养基能够通过修饰已知细胞培养基中的酪氨酸和pva的量来获得，所述已知细胞培养基例如wo06026445、ep2243827、wo02066603或wo06050050中公开的培养基。在一些实施方案中，所述培养基是化学限定(chemicallydefined)培养基，其中培养基的组分是已知的和受控的。在一些实施方案中，所述培养基是复合培养基，其中并非所有培养基组分都是已知的和/或受控的。用于哺乳动物细胞培养的化学限定生长培养基已在过去几十年中得到广泛开发和发表。限定培养基的所有组分都得到很好的表征，并且因此限定培养基不含复合添加剂，如血清或水解产物。开发的早期培养基配方是为了允许细胞生长和维持存活能力，而很少或不关心蛋白质产生。最近，已经开发了培养基制剂，其明确目的是支持高产重组蛋白产生细胞培养物。这种培养基优选用于本发明的方法。此类培养基通常包含大量营养物，且特别是氨基酸，以支持高密度细胞的生长和/或维持。如果需要，本领域技术人员能够修饰这些培养基以用于本发明的方法。例如，本领域技术人员可以在这些培养基中添加pva并增加酪氨酸的量，以用作本文公开的方法中的基础培养基或补料培养基。复合培养基并非所有的组分都得到很好的表征，并且因此复合培养基可能含有添加剂，例如简单和/或复合碳源、简单和/或复合氮源、以及血清等。在一些实施方案中，除了如本文所述的限定培养基的其他组分外，适用于本发明的复合培养基还含有添加剂(例如水解产物)。在一些实施方案中，限定培养基通常包括在水中已知浓度的大约50种化学实体。它们中的大多数还含有一种或多种被很好表征的蛋白质，例如胰岛素、igf-1、转铁蛋白或bsa，但其他不需要蛋白质组分并且因此被称为无蛋白质的限定培养基。该培养基的典型化学组分分为五大类：氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、以及不符合分类的杂类。细胞培养基可任选地补充有补充组分。如本文所用的术语“补充组分”是指增强生长和/或存活至高于最小速率的组分，包括但不限于激素和/或其他生长因子、特定离子(如钠、氯、钙、镁和磷酸盐)、缓冲剂、维生素、核苷或核苷酸、微量元素(通常以极低的终浓度存在的无机化合物)、氨基酸、脂质和/或葡萄糖或其他能量来源。在一些实施方案中，可以将补充组分添加至初始细胞培养物中。在一些实施方案中，可在细胞培养开始后添加补充组分。通常，微量元素是指以微摩尔或更低水平包括的多种无机盐。例如，通常包括的微量元素是锌、硒、铜等。在一些实施方案中，铁(亚铁或三价铁盐)能以微摩尔浓度作为微量元素包含在初始细胞培养基中。锰也经常以二价阳离子(mncl2或mnso4)以纳摩尔至微摩尔浓度的范围包括在微量元素中。通常以纳摩尔浓度添加许多不常见的微量元素。在一些实施方案中，本发明的培养基是适于在细胞培养中支持高活细胞密度的培养基，所述高活细胞密度例如1×106细胞/ml、5×106细胞/ml、1×107细胞/ml、5×107细胞/ml、1×108细胞/ml或5×108细胞/ml。在一些实施方案中，所述细胞培养是哺乳动物细胞补料分批培养，优选cho细胞补料分批培养。如本文所用的术语“活细胞密度”是指给定体积的培养基中存在的细胞数。能通过本领域技术人员已知的任何方法测量活细胞密度。优选地，使用自动细胞计数器如bioprofile测量活细胞密度。如本文所用的术语最大细胞密度是指细胞培养期间达到的最大细胞密度。如本文所用的术语“细胞存活能力”是指培养物中细胞在给定的一组培养条件或实验变化下存活的能力。本领域普通技术人员将理解，用于确定细胞存活能力的许多方法之一包括在本发明中。例如，可以使用不通过活细胞膜但能通过死亡或濒死细胞的破坏的膜的染料(如台盼蓝)，以确定细胞存活能力。细胞培养方法如本文所用的术语“培养物”和“细胞培养物”是指在适于细胞群存活和/或生长的条件下悬浮在培养基中的细胞群。如本领域普通技术人员所清楚的，在一些实施方案中，如本文所用的这些术语是指包含细胞群和其中悬浮着所述群的培养基的组合。在一些实施方案中，所述细胞培养物的细胞是哺乳动物细胞。本发明的培养基可以与任何修正为期望工艺(如重组蛋白(如抗体)的产生)的细胞培养方法一起使用。作为非限制性实例，细胞可以在分批或补料分批培养中生长，其中所述培养在充分表达所述重组蛋白(如抗体)后终止，之后收获所述表达的蛋白质(如抗体)。可选地，作为另一个非限制性实例，细胞可以在分批重补料中生长，其中所述培养不被终止，并且新的营养物和其他组分周期性地或连续地添加到所述培养中，在此期间表达的重组蛋白(如抗体)是周期性或连续收获的。其他合适的方法(如旋转管培养，spin-tubeculture)是本领域已知的并且能用于实施本发明。在一些实施方案中，适合与本发明的培养基一起使用的细胞培养是补料分批培养。如本文所用的术语“补料分批培养”是指培养细胞的方法，其中在培养过程开始后的一个或多个时间向培养物提供另外的组分。这样提供的组分通常包含在培养过程中已经消耗的用于细胞的营养组分。通常在某一时刻停止补料分批培养，并收获培养基中的细胞和/或组分并任选地纯化。在一些实施方案中，补料分批培养包含补充有补料培养基的基础培养基。本发明的培养基能用作基础培养基和/或作为补料培养基。细胞可以在实际工作者选择的任何方便的体积中生长。例如，细胞可以在体积从几毫升到几升的小规模反应容器中生长。可选地，细胞可以在大规模商业生物反应器中生长，其体积范围为约至少500、1000、2500、5000、8000、10000、12000、15000、20000或25000升或更多，或其间的任何体积。在一些实施方案中，所述细胞培养基的体积为至少500l。在一些实施方案中，所述细胞培养基的体积为至少5000l。主要基于细胞培养物保持存活的温度范围和产生高水平的期望产物(如重组蛋白)的范围来选择细胞培养的温度。通常，在约25℃至42℃范围内大多数哺乳动物细胞生长良好并且能产生期望产物(如重组蛋白)，尽管本公开内容教导的方法不限于这些温度。某些哺乳动物细胞在约35℃至40℃范围内生长良好并且能产生所需产物(如重组蛋白或抗体)。在某些实施方案中，在细胞培养过程中细胞培养物一次或多次在20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45℃的温度下生长。本领域普通技术人员将能够根据细胞的特定需要和实际工作者的特定产生要求选择适当的温度或多种温度来生长细胞。细胞可以根据实际工作者的需要和细胞本身的需要生长任何时间量。在一些实施方案中，所述细胞在35℃至40℃之间的温度下生长。在一些实施方案中，所述细胞在37℃下生长。在一些实施方案中，所述细胞在36.5℃下生长。在一些实施方案中，细胞可以根据实际工作者的需要和细胞本身的需要，在初始生长阶段(或生长阶段)期间生长更多或更少的时间量。在一些实施方案中，细胞生长足以达到预定细胞密度的一段时间。在一些实施方案中，细胞生长足以达到约1×106细胞/ml，约5×106细胞/ml，约1×107细胞/ml，约5×107细胞/ml，约1×108细胞/ml，或约5×108细胞/ml的预定细胞密度的一段时间。在一些实施方案中，细胞生长足以达到细胞密度的一段时间，所述细胞密度是如果允许细胞无干扰生长其最终将达到的最大细胞密度的给定百分比。例如，细胞可以生长足以达到期望的活细胞密度的一段时间，期望的活细胞密度是最大细胞密度的1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。在一些实施方案中，细胞生长直至细胞密度每天增加不超过培养物的15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。在一些实施方案中，细胞生长直至细胞密度每天增加不超过培养物的5％。在一些实施方案中，允许细胞生长一段确定的时间。例如，根据细胞培养物的起始浓度、细胞生长的温度和细胞的内在生长速率，细胞可以生长0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多天，优选4至10天。在某些情况下，可允许细胞生长一个月或更长。本发明的实际工作者将能够根据蛋白质产生要求和细胞自身的需要选择初始生长阶段的持续时间。可以在初始培养阶段期间搅拌或摇动细胞培养物，以增加氧合和营养物向细胞的分散。根据本发明，本领域普通技术人员将理解，在初始生长阶段期间控制或调节生物反应器的某些内部条件(包括但不限于ph、温度、氧合等)可以是有益的。在初始生长阶段结束时，可以转变至少一种培养条件，以便应用第二组培养条件并在培养物中发生代谢转变。代谢转变能通过如细胞培养物的温度、dh、渗透度或化学诱导剂水平的变化来实现。在一个非限制性实施方案中，通过降低培养物的温度来转变培养条件。然而，如本领域所知，转变温度不是能实现适当代谢转变的唯一机制。例如，这种代谢转变也能通过改变其他培养条件来实现，包括但不限于dh、渗透度和丁酸钠水平。培养转变的时间将由本发明的实际工作者基于蛋白质产生要求或细胞自身的需要来确定。当转变培养物的温度时，温度转变可以是相对渐进的。例如，完成温度变化可能需要几个小时或几天。可选地，温度变化可以是相对突然的。例如，温度变化可以在少于几个小时内完成。鉴于适当的生产和控制设备(例如商业上大规模生产多肽或蛋白质的标准)，所述温度变化甚至可以在不到1小时内完成。在一些实施方案中，一旦如上所述转变细胞培养物的条件，就在第二组培养条件下维持细胞培养物用于随后的生产阶段，所述第二组培养条件有助于细胞培养物的生存和存活能力并且适于期望的多肽或蛋白质处于商业上适当水平的表达。如上所述，可以通过转变许多培养条件中的一种或多种来转变培养物，所述培养条件包括但不限于温度、ph、渗透度和丁酸钠水平。在一些实施方案中，培养物的温度发生转变。根据该实施方案，在随后的生产阶段期间，将培养物维持在低于初始生长阶段温度或温度范围的温度或温度范围。如上所述，可以采用多个离散的温度转变来增加细胞密度或存活能力或增加重组蛋白的表达。在一些实施方案中，可将细胞维持在随后的生产阶段中，直至达到期望的细胞密度或生产滴度。在本发明的另一个实施方案中，允许细胞在随后的生产阶段期间生长一段确定的时间。例如，根据在随后的生产阶段开始时细胞培养物的浓度、细胞生长的温度和细胞的内在生长速率，所述细胞可以生长1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多天。在某些情况下，可允许细胞生长一个月或更长时间。本发明的实际工作者将能够根据多肽或蛋白质产生要求和细胞自身的需要选择后续生产阶段的持续时间。可以在随后的生产阶段期间搅拌或摇动细胞培养物，以增加氧合和营养物向细胞的分散。根据本发明，本领域普通技术人员将理解，在随后的生产阶段期间控制或调节生物反应器的某些内部条件(包括但不限于ph、温度、氧合等)可以是有益的。在一些实施方案中，所述细胞表达重组蛋白，并且本发明的细胞培养方法包括生长阶段和生产阶段。细胞根据本发明，可以使用对允许细胞培养的任何哺乳动物细胞。可根据本发明使用的哺乳动物细胞的非限制性实例包括balb/c小鼠骨髓瘤细胞系(nso/i，ecaccno：85110503)；人视网膜细胞(per.c6，crucell，leiden，thenetherlands)；由sv40转化的猴肾cv1系(cos-7，atcccrl1651)；人胚肾细胞系(293或亚克隆用于在悬浮培养中生长的293细胞，grahametal.，j.genvirol.，36：59，1977)；小仓鼠肾细胞(bhk，atccccl10)；中国仓鼠卵巢细胞+/-dhfr(cho，urlaub和chasin，proc.natl.acad.sci.usa，77：4216，1980)；小鼠支持细胞(tm4，mather，biol.reprod.，23：243-251，1980)；猴肾细胞(cv1atccccl70)；非洲绿猴肾细胞(vero-76，atcccrl-1587)；人宫颈癌细胞(hela，atccccl2)；犬肾细胞(mdck，atccccl34)；布法罗(buffalo)大鼠肝细胞(brl3a，atcccrl1442)；人肺细胞(w138，atccccl75)；人肝细胞(hepg2，hb8065)；小鼠乳腺肿瘤(mmt060562，atccccl51)；tri细胞(matheretal.，annalsn.y.acad.sci.，383：44-68，1982)；mrc5细胞；fs4细胞和人肝癌细胞系(hepg2)。在一些优选的实施方案中，所述细胞是cho细胞。在一些优选的实施方案中，所述细胞是gs-cho细胞。另外，根据本发明可以使用任何数量的商业和非商业上可获得的杂交瘤细胞系。如本文所用的术语“杂交瘤”是指由永生化细胞和产生抗体的细胞融合产生的细胞或细胞后代。这样得到的杂交瘤是产生抗体的永生化细胞。用于产生杂交瘤的单个细胞可以来自任何哺乳动物来源，包括但不限于大鼠、猪、兔、绵羊、猪、山羊和人。在一些实施方案中，杂交瘤是三源杂交瘤细胞系(triomacellline)，其在异源杂交骨髓瘤融合的后代随后与浆细胞融合时产生，所述异源杂交骨髓瘤融合的后代是人细胞和鼠骨髓瘤细胞系之间融合的产物。在一些实施方案中，杂交瘤是产生抗体的任何永生化杂交细胞系，例如四源杂交瘤(quadromas)(参见如，milsteinetal.，nature，537：3053，1983)。本领域技术人员将理解，杂交瘤细胞系可能具有不同的营养需求和/或可能需要不同的培养条件以实现最佳生长，并且能够根据需要改变条件。蛋白质的表达如上所述，在许多情况下，选择或工程化细胞以产生高水平的期望产物(如重组蛋白或抗体)。通常，细胞将被人工操纵以产生高水平的重组蛋白，例如通过引入编码感兴趣的蛋白的基因和/或通过引入调节该基因(无论是内源的还是引入)表达的遗传控制元件。某些蛋白质可能对细胞生长、细胞存活能力或细胞的某些其他特征产生不利影响，最终以某种方式限制感兴趣的蛋白质的产生。即使在工程化的用于表达特定蛋白质的一种特定类型的细胞群中，也存在细胞群体内的变异性使得某些细胞将更好地生长、产生更多感兴趣的蛋白质、或产生具有更高活性水平(如酶活)的蛋白质。在某些实施方案中，实际工作者根据经验选择细胞系，以在选择用于培养细胞的特定条件下稳健生长。在一些实施方案中，基于细胞生长、最终细胞密度、细胞存活能力百分比、表达的蛋白质的滴度或这些的任何组合或任何其他实际工作者认为重要的条件，选择工程化以表达特定蛋白质的细胞用于大规模生产。在宿主细胞中可表达的任何蛋白质可以根据本教导生产。如本文所用的术语“宿主细胞”是指根据本发明操纵以产生如本文所述的感兴趣的蛋白质的细胞。蛋白质可以从细胞内源的基因或从引入细胞的异源基因表达。蛋白质可以是天然存在的蛋白质，可以可选地具有由人工工程化或选择的序列。通常可以根据感兴趣的或有用的生物或化学活性选择可以根据本发明符合期望地表达的蛋白质。例如，本发明可用于表达任何药学或商业相关的酶、受体、抗体、激素、调节因子、抗原、结合剂等。在一些实施方案中，培养物中由细胞表达的蛋白质选自抗体或其片段、纳米抗体、单结构域抗体、糖蛋白、治疗性蛋白质、生长因子、凝血因子、细胞因子、融合蛋白、制药药物物质、疫苗、酶或小模块免疫药物(smallmodularimmunopharmaceuticalstm，smips)。本领域普通技术人员将理解，可以根据本发明表达任何蛋白质，并且能够基于他或她的特定需要选择待产生的特定蛋白质。抗体鉴于目前使用或正在研究的大量抗体作为制药或其他商业试剂，根据本发明，抗体的产生是特别令人感兴趣的。抗体是具有特异性结合特定抗原的能力的蛋白质。能在宿主细胞中表达的任何抗体可以根据本发明产生。在一些实施方案中，待表达的抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是嵌合抗体。嵌合抗体含有衍生自一种以上生物体的氨基酸片段。嵌合抗体分子能包括，例如，具有人恒定区的来自小鼠、大鼠或其他物种抗体的抗原结合结构域。已经描述了多种制备嵌合抗体的方法。参见如，morrisonetal.，proc.natl.acad.sci.u.s.a.81，6851(1985)；takedaetal.，nature314，452(1985)，cabillyetal.，美国专利号4,816,567；bossetal.，美国专利号4,816,397；tanaguchietal.，欧洲专利公开ep171496；欧洲专利公开0173494，英国专利gb2177096b。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是人抗体，其衍生自例如核糖体展示或噬菌体展示文库(参见如，winteretal.，美国专利号6,291,159以及kawasaki，美国专利号5,658,754)或异种物种，所述异种物种中的天然抗体基因被灭活并在功能上被人抗体基因取代同时使天然免疫系统的其他组分保持完整(参见如，kucherlapatietal.，美国专利号6,657,103)。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是人源化抗体。人源化抗体是嵌合抗体，其中大部分氨基酸残基衍生自人抗体，因此当递送至人类对象时使任何潜在的免疫反应最小化。在人源化抗体中，互补决定区中的氨基酸残基至少部分地被来自赋予期望的抗原特异性或亲和力的非人类物种的残基取代。这种改变的免疫球蛋白分子能通过本领域已知的几种技术中的任何所制备(例如tengetal.，proc.natl.acad.sci.u.s.a.，80，7308-7312(1983)；kozboretal.，immunologytoday，4，7279(1983)；olssonetal.，meth.enzymol.，92，3-16(1982))，并且优选根据pct公开wo92/06193或ep0239400的教导所制备，所有这些都通过引用并入本文)。人源化抗体能通过例如scotgenlimited，2hollyroad，twickenham，middlesex，greatbritain商业生产。进一步参考，参见jonesetal.，nature321：522-525(1986)；riechmannetal.，nature332：323-329(1988)；和presta，curr.op.struct.biol.2：593-596(1992)，所有这些文献都通过引用并入本文。在一些实施方案中，上述单克隆、嵌合或人源化抗体可含有不存在于天然存在的任何物种的任何抗体中的氨基酸残基。这些外来残基能用于例如赋予单克隆、嵌合或人源化抗体新的或修饰的特异性、亲和力或效应子功能。在一些实施方案中，上述抗体可以与用于全身药物疗法的药物缀合，例如毒素、低分子量细胞毒性药物、生物反应调节剂和放射性核素(参见如kunzetal.，calicheamicinderivative-carrierconiugates，us20040082764a1)。通常，本发明的实际工作者将选择感兴趣的蛋白质，并且将知道其精确的氨基酸序列。根据本发明表达的任何给定蛋白质可以具有其自身的特定特征并且可以影响培养细胞的细胞密度或存活能力，可以比相同培养条件下生长的另一种蛋白质在更低的水平表达，并且可以根据进行的确切培养条件和步骤而具有不同的生物活性。本领域普通技术人员将能够根据本发明的教导适当地修改用于产生特定蛋白质的步骤和组合物，以优化细胞生长和任何给定表达蛋白质的产生和/或活性水平。向宿主细胞引入用于蛋白表达的基因通常，引入细胞的核酸分子编码期望根据本发明表达的蛋白质。可选地，核酸分子可以编码诱导细胞表达期望蛋白质的基因产物。例如，引入的遗传物质可以编码激活内源或异源蛋白质转录的转录因子。可选地或另外地，引入的核酸分子可增加细胞表达的蛋白质的翻译或稳定性。适合于引入足以实现在哺乳动物宿主细胞中表达感兴趣的蛋白质的核酸的方法是本领域已知的。参见如，gethingetal.，nature，293：620-625，1981；manteietal.，nature，281：40-46，1979；levinsonetal.ep117,060；以及ep117,058，它们中的每一个都通过引用并入本文。对于哺乳动物细胞，将遗传物质引入哺乳动物细胞的常用方法包括graham和vandererb的磷酸钙沉淀法(virology，52：456-457，1978)或者hawley-nelson的lipofectaminetm(gibcobrl)法(focus15：73，1993)。哺乳动物细胞宿主系统转化的一般方面已由axel在美国专利号4,522,587中描述。对于将遗传物质引入哺乳动物细胞的多种技术，参见keownetal.，methodsinenzymology，1989，keownetal.，methodsinenzymology，185：527-537，1990，和mansouretal.，nature，336：348-352，1988。在一些实施方案中，待引入的核酸是裸核酸分子的形式。例如，引入细胞的核酸分子可仅由编码蛋白质的核酸和必需的遗传控制元件组成。可选地，编码蛋白质的核酸(包括必需的调节元件)可以包含在质粒载体中。用于在哺乳动物细胞中表达蛋白质的合适载体的非限制性代表性实例包括pcdna1；pcd，参见okayama，etal.mol.cellbiol.5：1136-1142，1985；pmclneopoly-a，参见thomas，etal.cell51：503-512，1987；杆状病毒载体，如pac373或pac610；cdm8，参见seed，b.nature329：840，1987；和pmt2pc，参见kaufman，etal.emboj.6：187-195，1987，其各自通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，待引入细胞的核酸分子包含在病毒载体中。例如，可以将编码蛋白质的核酸插入病毒基因组(或部分病毒基因组)中。指导蛋白质表达的调节元件可以包括在插入病毒基因组中的核酸(即，与插入病毒基因组的基因连接)中，或者能由病毒基因组本身提供。可以通过形成含有dna和磷酸钙的沉淀物将裸dna引入细胞中。可选地，也能通过形成所述dna和deae-葡聚糖的混合物并将混合物与细胞一起孵育，或通过在合适的缓冲剂中将细胞和所述dna一起孵育并使细胞经受高压电脉冲(如通过电穿孔)，来将裸dna引入细胞中。引入裸dna细胞的另一种方法是将dna与含有阳离子脂质的脂质体悬浮液混合。然后将dna/脂质体复合物与细胞一起孵育。也能通过例如显微注射将裸dna直接注射到细胞中。可选地，也能通过将dna与阳离子(例如聚赖氨酸)复合而将裸dna导入细胞中，所述阳离子与细胞表面受体的配体偶联(参见例如wu，g.andwu，c.h.j.biol.chem.263：14621，1988；wilsonetal.j.biol.chem.267：963-967，1992；和美国专利号5,166,320，其各自通过引用整体并入本文)。dna-配体复合物与受体的结合促进了受体介导的内吞作用对dna的摄取。使用含有特定核酸序列(如编码蛋白质的cdna)的病毒载体，是将核酸序列引入细胞的常用方法。用病毒载体感染细胞具有以下优点：大部分细胞接受所述核酸，这能消除选择已接受核酸的细胞的需要。另外，所述病毒载体内编码的分子(如由病毒载体中含有的cdna编码)通常在摄取病毒载体核酸的细胞中有效表达。有缺陷的逆转录病毒在用于基因治疗目的的基因转移中被很好地表征(综述见miller，a.d.blood76：271，1990)。能构建重组逆转录病毒使其具有插入所述逆转录病毒基因组中的编码感兴趣的蛋白质的核酸。另外，能去除部分逆转录病毒基因组以使逆转录病毒复制具有缺陷。然后将这种复制缺陷型逆转录病毒包装到病毒体中，该病毒体能通过以标准技术使用辅助病毒以用于感染靶细胞。能操纵腺病毒的基因组使其编码和表达感兴趣的蛋白质，但失活其在正常裂解病毒生命周期中复制的能力。参见，例如，berkneretal.biotechniques6：616，1988；rosenfeldetal.science252：431-434，1991；和rosenfeldetal.cell68：143-155，1992。衍生自腺病毒株adtype5dl324或其他腺病毒株(如ad2、ad3、ad7等)的合适的腺病毒载体是本领域技术人员已知的。重组腺病毒的优点在于它们不需要分裂中的细胞作为有效的基因递送载体并且能用于感染多种细胞类型，包括气道上皮细胞(rosenfeldetal.，1992，引自上文)、内皮细胞(lemarchandetal.，proc.natl.acad.sci.usa89：6482-6486，1992)、肝细胞(herzandgerard，proc.natl.acad.sci.usa90：2812-2816，1993)和肌细胞(quantinetal.，proc.natl.acad.sci.usa89：2581-2584，1992)。另外，引入的腺病毒dna(和其中包含的外源dna)没有整合到宿主细胞的基因组中而仍然是游离的，从而避免在引入的dna整合到宿主基因组(如逆转录病毒dna)中的情况下由于插入诱变而可能发生的潜在问题。此外，相对于其他基因递送载体，腺病毒基因组对外源dna的携带能力很大(高达8千碱基)(berkneretal.citedsupra；haj-ahmandandgraham，j.virol.57：267，1986)。目前使用的大多数复制缺陷型腺病毒载体对于病毒e1和e3基因的全部或部分缺失，但保留多达80％的腺病毒遗传物质。腺相关病毒(aav)是一种天然存在的缺陷型病毒，需要另一种病毒(如腺病毒或疱疹病毒)作为有效复制和生产生命周期的辅助病毒。(综述参见muzyczkaetal.curr.topicsinmicro.andimmunol.，158：97-129，1992)。它也是可以将其dna整合到非分裂细胞中的少数病毒之一，并且表现出高频率的稳定整合(参见例如flotteetal.，am.j.respir.cell.mol.biol.7：349-356，1992；samulskietal.，j.virol.63：3822-3828，1989；和mclaughlinetal.，j.virol.62：1963-1973，1989)。含有少至300个aav碱基对的载体能被包装并能够整合。外源dna的空间限制在约4.5kb。aav载体，例如tratschin等人所述的载体(mol.cell.biol.5：3251-3260，1985)能用于将dna引入细胞。已经使用aav载体将多种核酸引入不同细胞类型中(参见例如hermonatetal.，proc.natl.acad.sci.usa81：6466-6470，1984；tratschinetal.，mol.cell.biol.4：2072-2081，1985；wondisfordetal.，mol.endocrinol.2：32-39，1988；tratschinetal.，j.virol.51：611-619，1984；以及flotteetal.，j.biol.chem.268：3781-3790，1993)。当用于将核酸分子引入细胞群的方法引起大部分细胞的修饰和细胞有效表达蛋白时，可以使用所述经修饰的细胞群而无需在所述群中进一步分离或亚克隆单种细胞。也就是说，所述细胞群可以充分产生蛋白质，使得不需要进一步的细胞分离并且所述群能立即用于接种细胞培养物以生产蛋白质。可选地，可以期望从有效生产蛋白质的少数细胞或单个细胞中分离和扩大同源细胞群。除了将核酸分子引入编码感兴趣的蛋白质的细胞中之外，所述引入的核酸可编码另一种多肽或蛋白质，所述多肽或蛋白质诱导或增加细胞内源性产生的蛋白质的表达水平。例如，细胞可能能够表达特定的蛋白质，但若没有对细胞的额外处理则可能不行。类似地，所述细胞可以表达不足量的用于期望目的的蛋白质。因此，刺激感兴趣的蛋白质表达的试剂能用于诱导或增加细胞对该蛋白质的表达。例如，所受引入的核酸分子可以编码激活或上调感兴趣的蛋白质转录的转录因子。这种转录因子的表达反过来导致感兴趣的蛋白质的表达或更稳健的表达。在某些实施方案中，将指导蛋白质表达的核酸稳定引入宿主细胞中。在某些实施方案中，将指导蛋白质表达的核酸瞬时引入宿主细胞中。本领域普通技术人员将能够基于他或她的实验需要选择将核酸稳定地或瞬时地引入细胞中。编码感兴趣的蛋白质的基因可任选地与一种或多种调节遗传控制元件连接。在某些实施方案中，遗传控制元件指导所述蛋白质的组成型表达。在某些实施方案中，能够使用提供编码感兴趣的蛋白质的基因的诱导型表达的遗传控制元件。诱导型遗传控制元件(如诱导型启动子)的使用允许调节细胞中蛋白质的产生。用于真核细胞的潜在有用的诱导型遗传控制元件的非限制性实例包括激素调节元件(如参见mader，s.andwhite，j.h.，proc.natl.acad.sci.usa90：5603-5607，1993)、合成配体调节元件(参见如sspencer，d.m.etal.，science262：1019-1024，1993)和电离辐射调节元件(如参见manome，y.etal.，biochemistry32：10607-10613，1993；datta，r.etal.，proc.natl.acad.sci.usa89：10149-10153，1992)。可以根据本发明使用本领域已知的另外的细胞特异性或其他调节系统。根据本发明的教导，本领域普通技术人员将能够选择并任选地适当修改引入引起细胞表达感兴趣的蛋白质的基因的方法。分离表达的蛋白质通常，一般期望分离和/或纯化根据本发明表达的蛋白质。在某些实施方案中，所述表达的蛋白质分泌到培养基中，并因此作为纯化过程的第一步，可以通过例如离心或过滤除去细胞和其他固体。可选地，所述表达的蛋白质可以与宿主细胞的表面结合。例如，作为纯化过程的第一步，可以除去培养基并且裂解表达蛋白质的宿主细胞。哺乳动物宿主细胞的裂解能通过本领域普通技术人员熟知的许多方法实现，包括通过玻璃珠的物理破坏和暴露于高ph条件。所述表达的蛋白质可以通过标准方法分离和纯化，所述标准方法包括但不限于层析法(如离子交换、亲和力、尺寸排阻和羟基磷灰石层析法)、凝胶过滤、离心或差异溶解度、乙醇沉淀和/或通过用于纯化蛋白质的任何其他可用技术(参见如，scopes，proteinpurificationprinciplesandpractice2ndedition，springer-verlag，newyork，1987；higgins，sjandhames，bd(eds.)，proteinexpression：apracticalapproach，oxfordunivpress，1999；和deutscher，mp，simon，mi，abelson，jn(eds.)，guidetoproteinpurification：methodsinenzymology(methodsinenzymologyseries，vol.182)，academicpress，1997，其中每一个通过引用并入本文)。特别是对于免疫亲和层析，可以通过将所述蛋白质与包含针对该蛋白质产生的抗体的亲和柱结合，并附着在固定支持物上来分离所述蛋白质。可选地，能通过标准重组技术将亲和标签(如流感病毒外壳序列、聚组氨酸或谷胱甘肽-s-转移酶)连接到所述蛋白质上，以允许使其通过适当的亲和柱进行简单纯化。蛋白酶抑制剂如苯甲基磺酰氟(pmsf)、亮抑酶肽、胃蛋白酶抑制素或抑肽酶可以在任何或所有阶段加入，以减少或消除纯化过程中蛋白质的降解。当必须裂解细胞以分离和纯化所述表达的蛋白质时，蛋白酶抑制剂是特别有利的。本领域普通技术人员将理解，精确的纯化技术将根据待纯化的蛋白质的特征、表达蛋白质的细胞的特征和/或细胞生长的培养基的组成而变化。药物制剂在本发明的某些实施方案中，产生的多肽或蛋白质具有药理学活性，并可用于制备药物。这样产生的多肽或蛋白质可以施用于对象或可以首先被配制用于任何可用途径(包括但不限于肠胃外(如静脉内)、皮内、皮下、口服、鼻、支气管、眼、透皮(局部)、透粘膜、直肠和阴道途径)的递送。药物组合物通常包括从哺乳动物细胞系表达的纯化多肽或蛋白质、递送剂(即如上所述的阳离子聚合物、肽分子转运子、表面活性剂等)与药学上可接受的载体的组合。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。补充的活性化合物也能掺入所述组合物中。配制药物组合物以与其预期的施用途径相适应。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液能包括以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，和调节渗透压的试剂如氯化钠或葡萄糖。能用酸或碱调节ph，如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂能封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。适于注射使用的药物组合物通常包括无菌水溶液(如果是水溶性的)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、cremophoreltm(basf，parsippany，nj)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在所有情况下，所述组合物应该是无菌的并且应该是具有简单可注射性程度的流体。优选的药物制剂在制造和储存条件下是稳定的，并且必须防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。通常，相关的载体能够是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣、通过在分散的情况下保持所需的颗粒大小和通过使用表面活性剂，能够保持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等，能达到微生物作用的防止。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)，能实现可注射组合物的延长吸收。无菌可注射溶液能根据需要通过将纯化的多肽或蛋白质以所需的量与上面列举的成分中的一种或组合掺入适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备。通常，通过将从哺乳动物细胞系表达的纯化多肽或蛋白质掺入无菌载体中来制备分散液，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面列举的那些所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分的粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他期望组分。口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。为了口服治疗施用的目的，能将纯化的多肽或蛋白质与赋形剂混合并以片剂、锭剂或胶囊(如明胶胶囊)的形式使用。口服组合物也能使用流体载体制备用作漱口水。能包含药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等能含有任何下列成分或类似性质的化合物：粘合剂(如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶)；赋形剂(如淀粉或乳糖)，崩解剂如(海藻酸、primogel或玉米淀粉)；润滑剂(如硬脂酸镁或sterotes)；助滑剂(如胶体二氧化硅)；甜味剂(如蔗糖或糖精)；或调味剂(如薄荷、水杨酸甲酯或橙子调味剂)。用于口服递送的制剂可有利地掺入物质以改善胃肠道内的稳定性和/或增强吸收。对于通过吸入施用，包含从哺乳动物细胞系表达的纯化多肽或蛋白质和递送剂的本发明组合物优选以气雾剂喷雾的形式从含有合适推进剂(如气体例如二氧化碳)的加压容器或分配器、或喷雾器递送。本发明特别考虑使用鼻喷雾剂、吸入器或其他至上呼吸道和/或下呼吸道的直接递送来递送组合物。已经显示鼻内施用针对流感病毒的dna疫苗诱导cd8t细胞应答，表明呼吸道中的至少一些细胞在通过该途径递送时能吸收dna，并且本发明的递送剂将增强细胞摄取。根据本发明的某些实施方案，将包含从哺乳动物细胞系表达的纯化多肽和递送剂的组合物配制成用于气雾剂施用的大孔颗粒。全身施用也能通过透粘膜或透皮方式。对于透粘膜或透皮施用，在制剂中使用适合于要渗透的屏障的渗透剂。这些渗透剂通常是本领域已知的，并且包括例如用于透粘膜施用的去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。透粘膜施用能通过使用鼻喷雾剂或栓剂来完成。对于透皮施用，将所述纯化的多肽或蛋白质和递送剂配制成本领域公知的软膏、油膏、凝胶或乳膏。所述组合物还可以以栓剂的形式制备(如用常规的栓剂基质例如可可脂和其它甘油酯)或用于直肠递送的保留灌肠剂。在一些实施方案中，用载体制备所述组合物，所述载体将保护所述多肽或蛋白质免于从体内快速清除，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。能够使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这种制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。所述材料也能从alzacorporation和novapharmaceuticals，inc商购获得。脂质体悬浮液(包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向感染细胞的脂质体)也能用作药学上可接受的载体。这些能根据本领域技术人员已知的方法制备，例如如美国专利号4,522,811中所述。以剂量单位形式配制口服或肠胃外组合物以便于施用和剂量均匀是有利的。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单元含有预定量的活性多肽或蛋白质，经计算可产生与所需药物载体相关的所需治疗效果。根据本发明表达的多肽或蛋白质能根据需要以不同的间隔和在不同的时间段施用，如每周一次施用约1至10周、2至8周、约3至7周、约4、5、6周等。本领域技术人员将理解，某些因素能影响有效治疗对象所需的剂量和时间，包括但不限于疾病或病症的严重程度、之前的治疗、对象的一般健康状况和/或年龄以及存在的其他疾病。通常，用本文所述的多肽或蛋白质治疗对象能包括单次治疗，或者在许多情况下能包括一系列治疗。还应理解，适当的剂量可取决于所述多肽或蛋白质的效力，并且可任选地适合于特定的受体，例如通过施用递增剂量直至达到预选的期望反应。应理解，任何特定动物对象的具体剂量水平可取决于多种因素，包括所用特定多肽或蛋白质的活性、受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、施用时间、施用途径、排泄率、任何药物组合以及待调节的表达或活性程度。本发明包括组合物用于治疗非人类动物的用途。因此，可根据兽医药理学和医学的已知原理选择剂量和施用方法。例如，可以在adams，r.(ed.)，veterinarypharmacologyandtherapeutics，8thedition，iowastateuniversitypress；isbn：0813817439；2001中找到指导。药物组合物能与施用说明一起包括在容器、包装或分配器中。实施例实施例1使用补料培养基a作为起始材料制备包含多种浓度的l-酪氨酸(酪氨酸2na2h2o))、pva(sekisuichemicalco，selvoltm203)和pluronicf68(kolliphorp188，sigma)和固定浓度的ala、arg、asn、asp、胱氨酸、glu、gly、his、ile，leu、lys，met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr和val的培养基。根据表1中描述的方法制备包含5g/lpva和3或12mmtyr的培养基，表2描述的方法制备不含pva、含5g/lpluronicf68和3或12mmtyr的培养基，以及表3描述的方法制备不含pva、不含pluronicf68和含3或12mmtyr的培养基。通过混合上述6种培养基制备其余培养基以获得相应的pva、pluronicf68和tyr浓度。所有培养基的最终渗透压为1000-1300mosm，并且ph为7.1-7.3。将所有培养基通过0.2μm过滤单元无菌过滤，并在0.2μmnalgen过滤瓶中冷(2-8℃)储存并避光。表1含有5g/lpva、3mm或12mmtyr的培养基表2含有5g/lpluronicf68、3mmtyr或12mmtyr的培养基补料培养基a(粉末)139.17g/lpluronicf685g/ltyrosine2na2h2o(预溶解)0.785或3.14g/l于18-22℃ph调节至9.0+/-0.1酸性胱氨酸(400mm)11.7ml/l于18-22℃ph调节至7.2+/-0.1表3不含pva、pluronicf68，含有3mmtyr或12mmtyr的培养基补料培养基a(粉末)139.17g/ltyrosine2na2h2o(预溶解)0.785或3.14g/l于18-22℃ph调节至9.0+/-0.1酸性胱氨酸(400mm)11.7ml/l于18-22℃ph调节至7.2+/-0.1在表4中所示的天数取样用于以2100p浊度计(hach)根据制造商的说明进行浊度测量。d0是所有条件下培养基存储的开始日期。在沉淀后的剩余取样时间内没有对具有沉淀的培养基取样进行浊度测量，而是继续在冷(2至8℃)和黑暗下储存。浊度为50ntu及以上的培养基能看到沉淀。表4t：浊度(ntu)，p：沉淀，＞lim：高于上限浊度低于5ntu是正常的。不含pva且酪氨酸浓度高于6mm的培养基在4天内形成沉淀(参见样品3和4)。具有pluronicf68的所有培养基在储存期间(4周)沉淀，其中酪氨酸浓度较高的培养基比具有较低酪氨酸浓度的培养基更早沉淀。在pva存在下，即使在储存27天后，浊度仍然很低并且没有观察到沉淀物。权利要求书(按照条约第19条的修改)1.一种细胞培养基，其包含酪氨酸和聚乙烯醇(pva)，酪氨酸的浓度至少为4mm。2.根据权利要求1的细胞培养基，其中酪氨酸的浓度至少为5mm。3.根据权利要求1的细胞培养基，其中酪氨酸的浓度至少为10mm。4.根据权利要求1的细胞培养基，其中酪氨酸的浓度在5-20mm之间。5.根据权利要求1至4中任一项的细胞培养基，其中pva的浓度为至少0.5g/l.6.根据权利要求1至4中任一项的细胞培养基，其中pva的浓度在0.5至5g/l之间。7.根据权利要求1至4中任一项的细胞培养基，其中pva的浓度为2.5g/l。8.根据权利要求1-7中任一项的细胞培养基，其中所述培养基不含血清。9.根据权利要求1-8中任一项的细胞培养基，其中所述培养基不含蛋白质。10.根据权利要求1-9中任一项的细胞培养基，其中在无光下在4℃储存两周后浊度小于5ntu。11.根据权利要求1-9中任一项的细胞培养基，其中在无光下在4℃储存两周后基本上没有观察到沉淀。12.根据权利要求1-11中任一项的细胞培养基，其中所述培养基包含4至10mmala、30至60mmarg、50至90mmasn、10至30mmasp、2至40mmglu、2至15mmgly、8至20mmhis、25至32mmile、35至60mmleu、28至60mmlys、9至25mmmet、10至30mmphe、15至40mmpro、44至80mmser、20至45mmthr、2至10mmtrp和20至50mmval。13.一种细胞培养方法，包括使哺乳动物细胞与根据权利要求1至12中任一项的细胞培养基接触。14.权利要求13的方法，其中所述哺乳动物细胞选自balb/c小鼠骨髓瘤细胞系、人视网膜细胞(per.c6)、猴肾细胞、人胚肾细胞系(293)、幼仓鼠肾细胞(bhk)、中国仓鼠卵巢细胞(cho)、小鼠支持细胞、非洲绿猴肾细胞(vero-76)、人宫颈癌细胞(hela细胞)、犬肾细胞、布法罗大鼠肝细胞、人肺细胞、人肝细胞、小鼠乳腺肿瘤细胞、tri细胞、mrc5细胞、fs4细胞或人肝癌细胞系(hepg2)。15.权利要求14的方法，其中所述哺乳动物细胞是cho细胞。16.权利要求15的方法，其中所述哺乳动物细胞是gs-cho细胞。17.权利要求13-16中任一项的方法，其中所述细胞培养是补料分批培养。18.权利要求17的方法，其中所述补料分批培养包含补充有补料培养基的基础培养基。19.权利要求18的方法，其中仅所述基础培养基是根据权利要求1至12中任一项的培养基。20.权利要求18的方法，其中仅所述补料培养基是根据权利要求1至12中任一项的培养基。21.根据权利要求18所述的方法，其中所述基础培养基和所述补料培养基是根据权利要求1至12中任一项的培养基。22.权利要求13-21中任一项的方法，其中细胞培养期间的最大活细胞密度高于1×106个细胞/ml。23.权利要求22的方法，其中所述最大活细胞密度高于5×106细胞/ml、1×107细胞/ml、5×107细胞/ml、1×108细胞/ml或5×108细胞/ml。24.权利要求13-23中任一项的方法，其中所述细胞培养基的体积为至少500l。25.权利要求24的方法，其中所述细胞培养基的体积至少为5000l。26.权利要求13-25中任一项的方法，其中所述细胞表达重组蛋白。27.权利要求26的方法，其中所述重组蛋白选自包含以下的组：抗体或其片段、纳米抗体、单结构域抗体、小模块免疫药物tm(smallmodularimmunopharmaceuticalstm，smips)、vhh抗体、骆驼抗体、鲨鱼单结构域多肽(ignar)、单结构域支架(如纤连蛋白支架)、scorpiontm治疗剂(包含n末端结合结构域、效应结构域和c-末端结合结构域的单链多肽)、生长因子、凝血因子、细胞因子、融合蛋白、制药药物物质、疫苗、酶及其组合。28.权利要求26或27的方法，还包括获得由所述细胞产生的重组蛋白。29.权利要求28的方法，还包括纯化所述重组蛋白。30.药物组合物，其包含与药学上可接受的载体组合的根据权利要求29的方法获得的纯化的重组蛋白。当前第1页12