本发明涉及酿酒技术领域，具体而言，涉及一种分枝横梗霉及其 应用。
背景技术：
双乙酰，常温下为浅黄色至黄绿色液体有苯醌气味，稀溶液有奶 油气味，存在于茴香油和奶油中。溶于水，能与乙醇、乙醚混溶。主 要用作奶油、人造奶油、干酪和糖果的增香剂、明胶的硬化剂等。一 种影响酒类风味的物质,其分子式为CH3·COCOCH3，是发酵过程中 酵母和细菌的代谢产物。它在白酒中是白酒香味成分之一。目前，浓 香型大曲中双乙酰成分不足或不稳定而导致酒品和酒质有所差异。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种分枝横梗霉，其能够增加使基酒 成分保持基本稳定，提高出酒率和优品率。
本发明的第二目的在于提供一种分枝横梗霉在酿酒中的应用。
本发明的第三目的在于提供一种酒曲，其能够提高出酒率和优品 率，酿造出富含酒香的酒。
本发明的第四目的在于提供上述酒曲的制备方法，其能够制作出 能够提高出酒率和优品率的酒曲。
本发明的第五目的在于提供上述酒曲在酿酒中的应用。
本发明的第六目的在于提供一种酿酒方法，其能够酿造出醇甜净 爽，富含酒香的酒。
本发明的第七目的在于提供一种就，其具有醇甜净爽，酒质高的 优点。
本发明是这样实现的：
一种分枝横梗霉，其保藏号为：CCTCC NO：2017696。
上述分枝横梗霉在酿酒中的应用。
一种酒曲，其含有上述分枝横梗霉。
上述酒曲的制备方法，其包括：将制曲原料与上述分枝横梗霉混 合。
酒曲在酿酒中的应用，其包括下列任一步骤：
(1)在酿酒过程中，将酒曲与酿酒原料混合；
(2)在窖泥的培植与老熟过程中，将酒曲与窖泥混合。
一种酿酒方法，其包括将上述分枝横梗霉与用于酿酒的原料进行 混合以及发酵。
一种酒，其由上述酿酒方法制得。
本发明具有以下有益效果：
本发明的提供一种分枝横梗霉，其保藏号为：CCTCC NO： 2017696。该分枝横梗霉与酿造酒的酒曲混合，能够提高基酒的双乙 酰含量，增进香味，以提高出酒率和优品率。此外，本发明还提供该 一种其能够酿造出醇甜净爽、浓厚酒香酒曲及其应用，以及一种醇甜 净爽、浓厚酒香的酒和其制造方法。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中 所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发 明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通 技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图 获得其他相关的附图。
图1为本发明提供的分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2在40 倍物镜下的菌丝体形态。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对 本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明 具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的分枝横梗霉进行具体说明。
本发明实施例提供一种分枝横梗霉，具体为分枝横梗霉 Lichtheimia ramosa 7C2菌株，该菌株于已于2017年11月15日保藏 于湖北武汉武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号 为：CCTCC NO：2017696。
本发明的分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2可采用液氮CTAB 法提取基因组DNA，采用通用引物ITS1/ITS4扩增分枝横梗霉的18S rDNA保守序列，扩增片段为750bp，采用克隆测序法，用3730测序 仪，得到该分枝横梗霉的18S rDNA保守序列，本发明提供的分枝横 梗霉的18S rDNA的序列如SEQ ID No.1所示。在NCBI(National Center for Biotechnology Information)美国国立生物技术信息中心核 酸数据库比对，与Lichtheimia ramosa分枝横梗霉一致性达到99％以 上。
其中，引物的序列如下所示：
ITS1的序列为：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’(如SEQ ID No.2所示)；
ITS4的序列为：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’(如SEQ ID No.3所示)。
分枝横梗霉的培养特征如下：在酵母粉蛋白胨葡萄糖琼脂培养基 (YPD培养基：酵母粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％， pH6.5-7.0)表面接种，30℃培养3d。菌落气丝丰富，蔓延性强，覆 盖9cm直径平板。请参照附图1，白色菌落中部呈现灰绿色。
分枝横梗霉的培养特征如下：请参照附图1，在40倍物镜下观 察，该菌具无隔菌丝和圆形孢囊孢子。
分枝横梗霉的生理生化特性如下：在高粱米培养基试管中的培养 显示生长旺盛，说明具有产淀粉酶能力。采用磷酸缓冲液提取酶，酶 液水解可溶性淀粉后加入碘液，使蓝色消失，说明具有α淀粉酶及葡 萄糖淀粉酶活力。
分枝横梗霉的生物学特性如下：分枝横梗霉(Lichtheimia ramosa 7C2)的生长温度为20℃～45℃，最适生长温度为30℃～35℃，在 pH4.0～7.0的范围内均能生长，高粱米培养基中的耐乙醇浓度小于等 于6.2％。
本发明的分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2的在YPD琼脂培养 基30℃培养7d，连续传代数代培养，其培养特征及形态特征均无明 显变化，产双乙酰水平在30mg/L～100mg/L。该菌株的生物学性状基 本稳定。
本发明提供分枝横梗霉在酿酒中的应用，本发明提供的分枝横梗 霉产双乙酰能力较强，其能够赋予浓香型白酒醇甜净爽，并有增进香 味的作用，提高出酒率和优品率。
进一步地，本发明提供的分枝横梗霉在酿酒中应用，包括下列任 一步骤：
(1)在酿酒过程中，将分枝横梗霉与酿酒原料混合；
(2)在酒曲生产过程中，将分枝横梗霉与制曲原料混合；
(3)在窖泥的培植与老熟过程中，将分枝横梗霉与窖泥混合。
具体地，在酒曲生产过程中，将分枝横梗霉与制曲原料混合，通 过强化曲的方式，使基酒成分保持基本稳定，保持双乙酰的高产出， 提高出酒率和优品率。
窖泥是浓香型好酒的基础，窖泥的好坏决定酒质的优劣。因为窖 泥是乙酸菌、甲烷菌、丁酸菌等各种有益物的载体和栖息场所，也是 繁衍温床，这些有益微生物的种类和数量是衡量窖泥质量的一个标 准，加入了本发明提供的分枝横梗霉，能够提高双乙酰的产出，继而 提高酒质。
本发明还提供一种酒曲，其含有上述分枝横梗霉。
本发明提供上述酒曲的制备方法，其包括：将制曲原料与上述分 枝横梗霉混合。上述制曲原料具体为制作酒曲的原料，制曲原料可以 为麸皮、大麦、小麦以及粮谷中的任意一种或多种的组合。
本发明提供上述酒曲在酿酒中的应用，其包括下列任一步骤：
(1)在酿酒过程中，将酒曲与酿酒原料混合；
(2)在窖泥的培植与老熟过程中，将酒曲与窖泥混合。
本发明还提供一种酿酒方法，其包括上述分枝横梗霉与用于酿酒 的原料进行混合以及发酵。
本发明还提供一种酒，其由上述酿酒方法制得。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
第一实施例
本实施例提供的分枝横梗霉的分离方法。
本发明的分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2菌株，分离于湖北 浓香型中温大曲，分离方法如下：
准确称取大曲粉样品10g放至含玻珠的90mL无菌水中分散，梯 度稀释至10-1～10-4，实际使用3个梯度，取100mL涂布各种培养基 平板各2皿，30℃培养5d，每天挑取菌落至YEPD(Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，也称酵母浸出粉胨葡萄糖培养基)平板纯 化得到分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2菌株。该YEPD培养基组 成为：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，水1000mL， pH自然。
第二实施例
本实施例提供包含第一实施例提供的分枝横梗霉的酒曲。
取分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2菌种，在无菌条件下，挑 取少许菌丝体/孢子，转接于无菌YPD(酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基) 斜面培养基中，在28℃～32℃培养48h～52h，即为一级试管斜面种子。
将大米50％(质量百分比)、高粱米瓣30％、小麦瓣20％混合、 浸泡24h，沥干，500mL三角瓶装100g，121℃灭菌30min，接种一 级斜面孢子。在28℃～32℃培养48h～52h，菌丝长满后，摇动三角瓶 使固态培养物脱离瓶底，将三角瓶放倒，继续培养两天。50℃～60℃ 通风烘干24h获得二级种子。
本实施例提供的包含分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2的酒曲 生产采用原料：大米50％(质量百分比)、高粱米瓣30％、小麦瓣20％ 混合，将上述原料混合、浸泡24h，沥干，无菌风冷却至28℃～32℃ 后，接种二级种子，在通风槽里保湿通风培养3天左右，至孢子形成。 50℃-60℃通风烘干24h后用于生产。
需要说明的是，在其他实施例中，制曲生产采用的制曲原料可以 为麸皮或其他粮谷，如红薯等。
本实施例提供的酒曲(块曲)的水分含量可达到8.7％，其糖化 力可达到2100单位(依据中华人民共和国轻工行业标准QB/T 4257-2011：酿酒大曲通用分析方法)。需要说明的是，酒曲合格后应 尽快使用，防止活力衰退。
第三实施例
验证本发明提供的分枝横梗霉Lichtheimia ramosa 7C2的产双乙 酰的能力。
1.实验方法
五粮经润粮后拌糟，上甑吊酒打量水。出甑摊凉后的粮糟下曲时 加入20％大曲和大曲数量的1％的第二实施例提供的酒曲，入窖料温 照常，发酵期不需特殊维护。起窖后堆糟拌糟，上甑吊酒，掐头去尾， 取酒心(酒精含量60％)。采用气相色谱分析，双乙酰含量较对照窖 池(加大曲，但第二实施例提供的酒曲)。
2.实验结果如表1所示
表1为双乙酰含量的对照结果
(备注：处理窖池为加入了本发明第二实施例提供的包含横梗霉 的酒曲的窖池)。
由表1可知，处理窖池的酒心的双乙酰含量1153.5mg/L，对照 窖池酒心的双乙酰含量640.2mg/L，加入了可提升本发明第二实施例 提供的包含横梗霉的酒曲的窖池的双乙酰含量增加了80％。
增上所述，本发明的提供一种分枝横梗霉，其保藏号为：CCTCC NO：2017696。该分枝横梗霉与酿造酒的酒曲混合，能够提高基酒的 双乙酰含量，增进香味，以提高出酒率和优品率。此外，本发明还提 供该一种其能够酿造出醇甜净爽、浓厚酒香酒曲及其应用，以及一种 醇甜净爽、浓厚酒香的酒和其制造方法。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明， 对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本 发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应 包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 天龙黄鹤楼酒业咸宁有限公司
<120> 一种分枝横梗霉及其应用
<130> 250
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 785
<212> DNA
<213> 分枝横梗霉
<400> 1
cgcgactagt tgatttcaga tctagatgtg agtttgttca agagaagacc caagttagat 60
cctctcacta gtccgtaaag attaagacct agttcaagaa gagactgatt gacttggaat 120
tatgaactca ctaaccaagt cgttgctctt caggcactct agagtctaca tccggcaaat 180
gactaaagcc aattgcctag gactaaatgt atttaaggcc atgacagcaa ctgaatgcca 240
tcaacacaag cccatttcca gctcgcttag gttcaaagaa ccaagttgaa ctgattggta 300
gttgcagata ctgaaacaac tgtgcctagt agattgacta ctaggcgcaa gatgcgttcg 360
agaactcgat gattcgctat gaatgcaagt cgcaataatt atcgcacttt gctacgctct 420
tcatcgatgc gagaaccaag agatccattg ccaagagttg tttttaagtt aacaactaac 480
tttttcgtac atcatggttt acacgagaag aataaacacc tttggggata gttaatacta 540
gagccccaaa ggcttgcctt gcttgctttg acttcaaaga cgtaggtctc ctgaaagaag 600
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taact 785
<210> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
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