本发明涉及制药领域，且特别涉及一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法。
背景技术：
：山乌龟，别名地不容，防己科，金藤属。常生长于石山，为云南著名传统中草药。其块根发达，通常浮露地面，同时块根富含生物碱，山乌龟中的生物碱含量高达3-4％，其中主要为异喹啉类生物碱，其中含量最高以及镇痛效果最佳成分为2,3,9,10-四甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6h-二苯并[a，g]喹嗪，又名罗通定。研究表明，罗通定具有镇痛、镇静、催眠及安定作用。其镇痛作用弱于哌替啶，强于一般解热镇痛药。在治疗剂量下无呼吸抑制作用，亦不引起胃肠道平滑肌痉挛。对慢性持续性疼痛及内脏钝痛效果较好，对急性锐痛(如手术后疼痛，创伤性疼痛等)、晚期癌症痛效果较差。在产生镇痛作用的同时，可引起镇静及催眠。但现有的山乌龟提取的罗通定的产品中含有巴马汀和右旋四氢巴马汀，现有工艺纯化工艺提取的产品纯度不够、不能有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀，应用该原料做成制剂存在临床安全风险。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，操作方便，有效提高罗通定的提取率，提高原料的利用率，同时得到的罗通定的纯度高，有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀。本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本发明提出一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，其包括：将山乌龟饮片经1.5～2.5wt％的盐酸冷浸提取至少两次，每次盐酸冷浸提取后第一次过滤，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加强碱溶液调节至ph值为9～10，静置分离，得沉淀。将沉淀经80～95vt％的第一乙醇回流提取至少两次，每次乙醇回流提取后第二次过滤，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。将粗品经80～95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用80～95vt％的第三乙醇洗涤至少两次后，铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，冷却。本发明实施例的罗通定的生产方法的有益效果是：1)本发明提供得方法有效纯化罗通定粗品，该方法对有效成分和杂质的选择性高，使得纯化后罗通定的纯度高达99.8％以上，同时罗通定的提取率0.45％-0.5％，有效提高纯化效率，同时有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀。2)操作简单，适宜工业化生产。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本发明提供的罗通定的核磁共振氢谱图；图2为本发明提供的罗通定的核磁共振氢谱图；图3为本发明提供的罗通定的核磁共振碳谱(13c-nmr)图；图4为本发明提供的罗通定的核磁共振碳谱图。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本发明实施例的罗通定的生产方法进行具体说明。一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，其包括：s1.将山乌龟饮片经1.5～2.5wt％的盐酸冷浸提取至少两次，每次盐酸冷浸提取后第一次过滤，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，得浸提液，于浸提液中缓慢加强碱溶液调节至ph值为9～10，静置分离，得沉淀。可选地，于盐酸冷浸前将山乌龟饮片粉碎，过20-40目筛，得到山乌龟的粗颗粒，有效增大山乌龟的比表面积，使其充分浸润于盐酸，提取效果佳。浓度为1.5-2.5wt％的盐酸有效使罗通定有效溶解，浸出于溶液中，提高浸出效果。优选地，本发明较佳的实施例中，为了使1.5-2.5wt％的盐酸的浸出提取效果更佳，优选地，山乌龟饮片的添加量与盐酸的添加量的体积比为1：5.5-7。为了使上述条件下，进一步提高浸出效果，优选地，盐酸冷浸提取于0.02mpa-0.05mpa，30-35℃的条件下进行，有效使盐酸深入的浸入山乌龟，提高浸出量，同时0.02mpa-0.05mpa，30-35℃互相配合，有效促进浸出的效率，进一步与浓度为1.5-2.5wt％的盐酸进行配合，提高浸出效果。可选地，盐酸冷浸提去后至第一次过滤，还可以包括超声波提取，其中，超声波的强烈振动及空化效应能使溶媒渗透到药材细胞中，从而加速有效成分的溶出，提高提取效率。超声处理使其组织结构更为蓬松，便于后续进行二次冷浸以及过滤，盐酸浸出后超声使浸出效果更佳。优选超声波的功率为1600-1700w，频率38-40khz。第一次过滤过90～100目筛，有效去除大颗粒的杂质以及原料。优选地，强碱为naoh溶液，有效调节ph值，中和盐酸以及一些有机酸物质，同时强碱置换生物碱。同时强碱溶液可以有效避免短时间大量放热造成的安全隐患，中和酸性物质，同时，强碱溶液将罗通定从浸出液中置换出，同时ph值为9-10，提高罗通定在溶液中的稳定性，防止其与酸性物质结合。由于加入强碱的过程放热，因此优选地，缓慢加强碱过程伴随搅拌，以35-45r/min的速度搅拌至少25分钟。有效防止因剧烈放热导致的安全隐患，同时放热促进沉淀的产生。可选地，静置12小时至沉淀完全后，抽取上层澄清液至管式分离机，分离得到第一部分沉淀；下层混悬液放入三足式离心机中，分离得到第二部分沉淀，合并第一部分沉淀与第二部分沉淀，得沉淀。s2.将沉淀经80～95vt％的第一乙醇回流提取至少两次，每次乙醇回流提取后第二次过滤，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。由于回流提取为至少两次后，第一次提取时沉淀的有效物质的含量较高，同时，多次回流提取后，沉淀的有效成分的含量很少，此时再次进行回流提取，成本较高，因此较佳地，第一乙醇回流提取时，于首次回流提取中加热回流1.8～2.5h，于首次后的其余加热回流中加热回流1～1.5h。优选地，沉淀的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4～5，使得第一乙醇回流提取的效果佳，同时减少后续第一次浓缩所消耗的成本。第二次过滤为过110-125目筛，有效去除杂质。第一次浓缩为在-0.05～-0.07mpa的条件下，将合并后的第二滤液浓缩至合并后的第二滤液的体积的0.48～0.52倍，微负压便于浓缩以及便于后续结晶。可选地，趁热将第一次浓缩后的浓缩液放入结晶桶中，放置例如24小时，析出结晶，抽滤，得到粗品。趁热的原因为随着温度的降低，饱和度降低，更易析出晶体。得到的晶体为微黄色至黄色的结晶；无臭，无味。于抽滤后，对于得到的晶体干燥，贴上物料标签，标明品名、批号、数量、生产时间等。照《取样标准管理规程/smp-qc008》进行取样，送检，粗品照《罗通定质量标准/qs-cp220》粗品质量标准检验，检验合格将粗品转移到下一工序。s3.将粗品经80～95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用80～95vt％的第三乙醇洗涤至少两次后，铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，冷却。优选地，第二乙醇回流提取时，每次回流提取1～2h，提取效果佳。晶体铺设为晶体层前，还包括至少两次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第二乙醇回流提取至少两次，每次第二乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用80～95vt％的第三乙醇洗涤至少两次后所得，有效去除杂质。晶体的添加量与第三乙醇的添加量的体积比为1：0.2～0.3，便于去除第三乙醇。第二次浓缩为在-0.05～-0.07mpa的条件下，将合并后的第三滤液浓缩至合并后的第三滤液的体积的0.48～0.52倍。在微负压的条件下快速有效浓缩。例如将合并后的滤液吸入旋转蒸发器中减压浓缩，通过减压，使得滤液在较低的温度保持沸腾状态，提高效率，同时不破坏有效成分的结构。可选地，由于旋转蒸发器中减压浓缩，得到的第二浓缩液温度较高，因此第二次浓缩后将得到的第二浓缩液趁热放入结晶桶中，放置24小时，便于析出结晶，同时有效降低成本。同时为了提高乙醇的利用率，可选地，还包括通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇，以及通过减压回收第三乙醇。铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，充分干燥晶体，干燥效果佳，同时有效去除第三乙醇。由于不锈钢盘中进行铺设以及干燥。冷却至室温，此处的室温为10-25℃。得到的纯化后的罗通定为白色至微黄色的结晶；无臭，无味。可选地，冷却后，将纯化得到的罗通定装于聚乙烯袋中，扎紧，贴物料标示卡，取样按《罗通定质量标准/qs-cp220》干燥品质量标准检验，检验合格后，备用；不合格者按上法继续精制，直至合格为止。按此法将各单元粗品精制，检验合格后，取各单元精制合格品，混合均匀即得成品，进入下一工序。内包装：按《电子天平标准操作规程/sop-sb114》操作，将聚乙烯袋打开放在电子天平上，将罗通定待包装精品装入聚乙烯袋中，调节装量至规定范围，每袋装1000克。按《fr-600连续式印字封口机标准操作规程/sop-sb029》操作，将装好罗通定的聚乙烯袋封口。照《取样标准管理规程/smp-qc008》对成品进行取样，送检。外包装：外包装前，对生产区及设备进行检查，确认生产线已清场，清洁在有效期内。核对待包装产品的产品名称、规格、瓦楞纸箱的产品名称应与外包装指令相符(包装过程中也应对以上产品或物料进行复核)。由qa计数发放产品合格证，每一箱产品附一张合格证。将纸箱放平，用封箱胶带封好底部，放上衬垫。取上述包装好的聚乙烯袋装入瓦楞纸箱中，抽查包装是否完整，封箱，打包。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，包括：s1.于0.05mpa，30℃的条件下，将山乌龟饮片经2wt％的盐酸冷浸提取三次，于每次盐酸冷浸提取后经功率为1700w，频率40khz的超声波提取30min。每次超声波提取后第一次过100目筛，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加naoh溶液调节至ph值为9，加入naoh溶液的过程伴随以40r/min的速度搅拌30分钟。静置分离，得沉淀。s2.先将沉淀经95vt％的第一乙醇浸泡30min后，经第一乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第二次过120目筛，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。其中，沉淀的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。第一乙醇回流提取时，于首次回流提取中加热回流2h，于首次后的其余加热回流中加热回流1h。第一次浓缩为在-0.05mpa的条件下，将合并后的第二滤液浓缩至合并后的第二滤液的体积的0.48倍。s3.将粗品经95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤三次后，铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。其中，粗品的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：5。第二乙醇回流提取时，每次回流提取2h。晶体铺设为晶体层前，还包括两次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第二乙醇回流提取两次，每次第二乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤两次后所得。第二次浓缩为在-0.06mpa的条件下，将合并后的第三滤液浓缩至合并后的第三滤液的体积的0.52倍。实施例2一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，包括：s1.将山乌龟饮片经2wt％的盐酸冷浸提取三次，于每次盐酸冷浸提取后经功率为1700w，频率40khz的超声波提取30min后第一次过100目筛，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加naoh溶液调节至ph值为9，加入naoh溶液的过程伴随以40r/min的速度搅拌30分钟。静置分离，得沉淀。s2.先将沉淀经95vt％的第一乙醇浸泡30min后经第一乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第二次过120目筛，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。其中，沉淀的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。第一乙醇回流提取时，于首次回流提取中加热回流2h，于首次后的其余加热回流中加热回流1h。第一次浓缩为在-0.05mpa的条件下，将合并后的第二滤液浓缩至合并后的第二滤液的体积的0.48倍。s3.将粗品经95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤三次后，铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。其中，粗品的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：5。第二乙醇回流提取时，每次回流提取2h。晶体铺设为晶体层前，还包括两次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第二乙醇回流提取两次，每次第二乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤两次后所得。第二次浓缩为在-0.06mpa的条件下，将合并后的第三滤液浓缩至合并后的第三滤液的体积的0.52倍。实施例3一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，包括：s1.于0.05mpa，30℃的条件下，将山乌龟饮片经2wt％的盐酸冷浸提取三次，每次盐酸冷浸提取后第一次过100目筛，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加naoh溶液调节至ph值为9，加入naoh溶液的过程伴随以40r/min的速度搅拌30分钟。静置分离，得沉淀。s2.将沉淀经95vt％的回流提取三次，每次乙醇回流提取后第二次过120目筛，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。其中，沉淀的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。第一乙醇回流提取时，于首次回流提取中加热回流2h，于首次后的其余加热回流中加热回流1h。第一次浓缩为在-0.05mpa的条件下，将合并后的第二滤液浓缩至合并后的第二滤液的体积的0.48倍。s3.将粗品经95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤三次后，铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。其中，粗品的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：5。第二乙醇回流提取时，每次回流提取2h。晶体铺设为晶体层前，还包括两次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第二乙醇回流提取两次，每次第二乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤两次后所得。第二次浓缩为在-0.06mpa的条件下，将合并后的第三滤液浓缩至合并后的第三滤液的体积的0.52倍。实施例4一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，包括：s1.于0.05mpa，30℃的条件下，将山乌龟饮片经2wt％的盐酸冷浸提取三次，每次盐酸冷浸提取后经功率为1700w，频率40khz的超声波提取30min后第一次过100目筛，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加naoh溶液调节至ph值为9，加入naoh溶液的过程伴随以40r/min的速度搅拌30分钟。静置分离，得沉淀。s2.先将沉淀经95vt％的第一乙醇浸泡30min后，经第一乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第二次过120目筛，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。其中，沉淀的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。第一乙醇回流提取时，于首次回流提取中加热回流2h，于首次后的其余加热回流中加热回流1h。第一次浓缩为在-0.05mpa的条件下，将合并后的第二滤液浓缩至合并后的第二滤液的体积的0.48倍。s3.将粗品经95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤三次后，铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。其中，粗品的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：5。第二乙醇回流提取时，每次回流提取2h。第二次浓缩为在-0.06mpa的条件下，将合并后的第三滤液浓缩至合并后的第三滤液的体积的0.52倍。实施例5一种高纯度药用级罗通定原料的生产方法，包括：s1.将山乌龟饮片经1.8wt％的盐酸冷浸提取两次，每次盐酸冷浸提取后经功率为1650w，频率38.5khz的超声波提取28min后第一次过95目筛，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加naoh溶液调节至ph值为10，加入naoh溶液的过程伴随以35r/min的速度搅拌25分钟。静置分离，得沉淀。s2.先将沉淀经85vt％的第一乙醇浸泡35min后，经第一乙醇回流提取两次，每次乙醇回流提取后第二次过125目筛，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品。其中，沉淀的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4.5。第一乙醇回流提取时，于首次回流提取中加热回流2.2h，于首次后的其余加热回流中加热回流1.3h。第一次浓缩为在-0.065mpa的条件下，将合并后的第二滤液浓缩至合并后的第二滤液的体积的0.49倍。s3.将粗品经83vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用85vt％的第三乙醇洗涤两次后，铺设厚度为2.5cm的晶体层，于53.5℃的热风条件下干燥4h，冷却。其中，粗品的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：4.5。第二乙醇回流提取时，每次回流提取1.6h。晶体铺设为晶体层前，还包括至少两次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第二乙醇回流提取两次，每次第二乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤两次后所得。第二次浓缩为在-0.07mpa的条件下，将合并后的第三滤液浓缩至合并后的第三滤液的体积的0.52倍。对比例1将山乌龟饮片以10％的氨水浸润后，在苯中浸泡1周后，以2wt％的盐酸萃取，萃取液放置，析出沉淀，过滤，沉淀用热水溶解后再次过滤，滤液用氨水碱化后，采用乙醚萃取，蒸干得到的乙醚萃取液，于残留物中加入三氯甲烷-乙醇的混合液结晶，过滤，得片状的罗通定。试验例1)罗通定的检测以本发明提供的罗通定为样品，其制作方法为：将山乌龟饮片经2wt％的盐酸冷浸提取三次，每次盐酸冷浸提取后第一次过滤，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加强碱溶液调节至ph值为9，静置分离，得沉淀；将沉淀经95vt％的第一乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第二次过滤，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品；将粗品经95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤至少两次后，铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。以中国药品生物制品检定所；批号为100452-200301的罗通定为对照组。采用本发明提供的罗通定作为样品，进行元素分析、红外吸收光谱、紫外吸收光谱、高效液相色谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱、质谱(ms)以及热分析。以中国药品生物制品检定所；批号为100452-200301的罗通定为对照组。①元素分析：采用仪器型号：美国热电iris1000icp-aes型元素分析仪，测试方法：燃烧法，进行元素分析，结果如表1所示。表1元素分析测试数据元素chno第一次测定值(％)70.947.043.9118.01第二次测定值(％)70.897.033.9518.03第三次测定值(％)70.917.053.9618.08平均值(％)70.917.043.9418.04理论值(％)70.907.033.9418.01结论：样品的三次元素分析测定值基本一致,且与理论值基本相符。元素分析结果表明，样品中各元素的含量与按分子式所计算的罗通定的理论值基本一致。②红外光谱测试：采用仪器型号：岛津ftir-7600/bv0190红外光谱仪，测试条件：kcl压片法，进行本发明提供的罗通定红外光谱测试，结果如表2所示。表2样品红外光谱测试数据由表2可得，该样品中含有叔胺、与叔胺相连的亚甲基、苯环、甲氧基等特征结构，与罗通定分子结构信息一致。接着，对上述样品进行红外吸收光谱数据的验证，结果如表3所示：表3验证结果验证结果进一步表明，样品的红外特征谱带与罗通定一致。③紫外光谱分析：制备测试样品，采用北京谱析tu1810紫外可见分光光度计进行紫外光谱分析。具体测试样品包括中性溶液：称取适量样品以95％乙醇溶液配制成适量浓度的溶液。含量项下的流动相溶液：称取适量样品以含量项下的流动相配制成适量浓度的溶液。酸性溶液：称取适量样品以0.1mol/l盐酸配制成适量浓度的溶液。碱性溶液：称取适量样品以0.1mol/l氢氧化钠、甲醇溶液配制成适量浓度的溶液。结果如表4所示。表4紫外光谱数据在四种溶剂中，本发明提供的样品均与罗通定对照品一致，在210nm和281nm附近有吸收峰。④高效液相色谱：采用仪器型号：安捷伦1100系列高效液相色谱仪，采用测试方法：(方法编号：xea-qc-006)在含量测定项下记录的色谱图中，比较供试品溶液主峰的保留时间应与罗通定对照品溶液主峰的保留时间是否一致。结论：采用罗通定对照品进行试验，在含量测定项下记录的色谱图中，罗通定对照品溶液的保留时间为12.999分钟，供试品溶液主峰的保留时间为12.927分钟，保留时间一致。⑤核磁共振氢谱测试：以测试仪器：bruker-400m，测试条件：溶剂：cdcl3；内标：tms，进行核磁共振氢谱测试，结果如表5以及图1-2所示。为了便于对核磁共振氢谱和核磁共振碳谱的信息进行解析，对罗通定分子中的氢原子和碳原子位置和归属进行说明，特将罗通定结构式中各骨架原子进行了编号，结构式：(非系统命名，仅供结构确证)表51h-谱数据及解析结果序号化学位移(ppm)峰型质子数归属1δ6.873～6.894d12-位芳氢质子2δ6.780～6.801d11-位芳氢质子3δ6.735s17-位芳氢质子4δ6.621s110-位芳氢质子5δ4.229～4.268d15-位次甲基氢质子6δ3.848～3.890m1218-位、19-位、20-位、21-位甲氧基氢质子7δ3.529～3.568m214-位亚甲基氢质子8δ3.248～3.297dd14-位亚甲基氢质子9δ3.156～3.228m213-位亚甲基氢质子10δ2.805～2.873m14-位亚甲基氢质子11δ2.622～2.700m212-位亚甲基氢质子由表5以及图1-2可得，分子式：c21h25no4，18-位、19-位、20-位及21-位甲氧基氢质子具有相似的化学环境，其化学位移应相距很近；7-位、10-位芳氢质子均无相邻氢原子，应呈现出单峰；1-位、2-位氢质子相邻，均应呈现出2重峰，分子结构中所有的氢质子均应在1h-核磁共振谱中出峰。经过对1h-核磁共振谱的解析，我们确认样品分子含有25个氢质子，与罗通定分子式一致；6.621～6.894ppm为苯环芳氢质子，共4个；4.229～4.268ppm为1个次甲基氢质子；3.848～3.890ppm为甲氧基氢质子，共4个甲氧基，12个氢质子；其他峰为亚甲基氢质子，我们对每个质子峰进行了归属，其结果符合罗通定钠的分子结构信息。⑥核磁共振碳谱(13c-nmr)测试仪器：bruker-400m测试条件：溶剂：cdcl3；内标：tms为了便于对核磁共振氢谱和核磁共振碳谱的信息进行解析，结果如表6以及图3-4所示。对罗通定分子中的氢原子和碳原子位置和归属进行说明，特将罗通定结构式中各骨架原子进行了编号，结构式：(非系统命名，仅供结构确证)表613c-谱数据及解析结果经过对13c-核磁共振谱的解析，我们确认样品分子含有21个碳原子，其所处化学环境与罗通定结构一致。6.621～6.894ppm为苯环芳氢质子，共4个；4.229～4.268ppm为1个次甲基氢质子；3.848～3.890ppm为甲氧基氢质子，共4个甲氧基，12个氢质子；其他峰为亚甲基氢质子，我们对每个质子峰进行了归属，其结果符合罗通定钠的分子结构信息。⑦质谱(ms)制备方法：将罗通定成品适量放入的圆底烧瓶中，加入4倍量95％乙醇，回流提取2小时，过滤，合并滤液。将滤液吸入旋转蒸发器中减压浓缩至液体体积的0.48～0.52倍后，室温放置24小时，析出结晶，抽滤，并用0.2～0.3倍95％乙醇洗涤结晶，将得到的精制品放于不锈钢盘中，在50～55℃条件下，热风循环干燥4小时，放冷至室温后，装于洁净塑料袋中检验合格后即得结构确认样品。测试仪器：bruker-400m。测试方法：esi源，正离子模式在esi-ms正离子质谱图中，质荷比(m/z)356处的离子峰为样品的[m+h]+峰，推导样品的分子量为355，与罗通定分子量一致。⑧热分析(tg，dcs)测试单位：兵器工业自然环境试验中心，测试仪器：q600sdt同步热分析仪，测试条件：在高纯氮气氛保护下，升温速率10℃/min，温度范围为室温至400℃。解析：热重检测结果：室温至120℃失重3.9％，室温至140℃失重4.8％，室温至200℃失重4.9％，热重检测结果与罗通定的水分、熔点相呼应。差示扫描量热检测结果：在升温过程中，依次出现3个吸热峰，峰顶温度分别为109.7℃、126.0℃、145.3℃。综上，分子式推断本发明提供的样品为：c21h25no4，分子量为355.43的罗通定。由1h-nmr、1h-1hcosy、13c-nmr、hmqc、hmbc对谱图中所有的c、h峰都给出具体的归属，对c-h关联关系给出了充分合理的解析，结合红外光谱紫外光谱中给出的官能团特征吸收峰，由质谱，元素分析推出的分子式，由tg、dsc给出的性状描述确定的空间构型可以推出所测样品的结构为：2)依据《中国药典》2010版二部及《罗通定质量标准》为依据，首先进行试验组1-5的合格度检测。结果如表7所示。表7试验结果本发明提供的罗通定按罗通定放行标准检验，各检验项结果均符合规定，同时也表明该生产工艺下，连续生产样品质量稳定、一致性较好。3)其中试验组1-5均采用250kg的山乌龟进行试验。采用250kg的山乌龟采用药典(2010)延胡索项中记载的方法作为对照组，即以95％的乙醇为溶剂，进行罗通定的提取。将实施例1-5以及对照组1中，每组得到的罗通定的粗品按照《罗通定质量标准/qs-cp220》粗品质量标准检验，检验合格者进行记录，不合格者进行记录。需要说明的是，以上试验组以及对照组，每组重复5次，其中，得到的粗品为无臭，无味的微黄色至黄色的结晶。每组得到的罗通定粗品的产率，同时得到实施例1-5得到的罗通定的产率，结果如表8所示。表8产率结果取实施例1-5制的罗通定为试验组1-5，经hplc法检测试验组1-5中罗通定的纯度如表9所示。表9试验组1-5产品的纯度由表8以及表9可得，本发明提供的纯化方法制得的罗通定的纯度高，同时收率高，具体为纯化后罗通定的含量高达99.8％及以上，同时山乌龟中罗通定的提取率为0.45％-0.5％，有效提高纯化效率。4)巴马汀检测试验色谱条件及测定方法如下：色谱条件:色谱柱：kromasil100-5c18250x4.6mm5μm；流动相：(0.05mol/l磷酸二氢钾溶液和0.05mol/l庚烷磺酸钠溶液(1:1)，含0.2％三乙胺，用磷酸调ph至6.5±0.05)-甲醇(35:65)；检测波长：280nm；流速：1ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；运行时间：30分钟。溶液配制:空白溶液：甲醇：流动相(1:9，v:v)。供试品溶液：取实施例1-5以及对比例各约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入10ml甲醇超声处理5分钟使溶解，用流动相稀释到刻度，混匀滤过即得。(供试品浓度：0.2mg/ml)。对照溶液：精密量取1ml上述供试品溶液置于200ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，混匀滤过即得。(罗通定浓度：0.001mg/ml)，对实施例1-5以及对比例1进行巴马汀检测，结果如表10所示。表10巴马汀检测试验结果实施例巴马汀(％)实施例10.003实施例20.003实施例30.004实施例40.003实施例50.003对比例10.6由表10所示，本发明采用的方法制得的罗通定，有效降低巴马汀含量。5)右旋四氢巴马汀检测试验色谱条件及测定方法如下：色谱条件：色谱柱：kcromasilcellucoat(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：无水乙醇；测波长：230nm；流速：0.5ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃溶液配制：系统适用性溶液：精密称取罗通定对照品和右旋四氢巴马汀对照品适量，加入流动相溶解稀释制成罗通定浓度为0.3mg/ml、右旋四氢巴马汀浓度为0.45μg/ml的混合溶液。供试品溶液：分别取实施例1-5以及对比例1的产品各约15mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入流动相溶解并稀释到刻度，混匀滤过即得。(供试品浓度：0.3mg/ml)自身对照溶液：精密量取3ml上述供试品溶液置于100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，混匀；再取1ml置于20ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，混匀滤过即得，(罗通定浓度：0.45μg/ml)，测试结果参见表11：表11右旋四氢巴马汀测试结果由表11可得，本发明提供的方法有效去除右旋四氢巴马汀。综上，本发明实施例的罗通定的生产方法，操作方便，有效提高罗通定的提取率，提高原料的利用率，同时得到的罗通定的纯度高，同时有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀，有效解决现有的纯度不高导致的存在临床安全风险的问题。以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。当前第1页12