EPAS1基因标签单核苷酸在筛选适应高原环境人群中的应用及筛选方法与流程

文档序号:15469690发布日期:2018-09-18 19:59阅读:来源:国知局

技术特征:

1.EPAS1基因标签单核苷酸在筛选适应高原环境人群中的应用,所述标签的位点包括rs13419896、rs1868092、rs1868093和rs1868094;

所述rs13419896处的核苷酸为A;所述rs1868092处的核苷酸为A;所述rs1868093处的核苷酸为A;所述rs1868094处的核苷酸为T。

2.一种适应高原环境人群的筛选方法,包括以下步骤:

1)提取待测样本基因组DNA,将所述待测样本基因组DNA进行PCR扩增,得到扩增产物;

所述PCR扩增使用的引物包括rs13419896引物对、rs1868092引物对、rs1868093引物对或rs1868094引物对;

所述rs13419896引物对的上游引物的序列如SEQ ID No.1所示,所述rs13419896引物对的下游引物的序列如SEQ ID No.2所示;

所述rs1868092引物对的上游引物的序列如SEQ ID No.3所示,所述rs1868092引物对的下游引物的序列如SEQ ID No.4所示;

所述rs1868093引物对的上游引物的序列如SEQ ID No.5所示,所述rs1868093引物对的下游引物的序列如SEQ ID No.6所示;

所述rs1868094引物对的上游引物的序列如SEQ ID No.7所示,所述rs1868094引物对的下游引物的序列如SEQ ID No.8所示;

2)将所述步骤1)得到的扩增产物进行测序,根据所述测序确定的核苷酸序列确认rs13419896处、rs1868092处、rs1868093处和rs1868094处的核苷酸种类;

所述测序使用的引物包括rs13419896测序引物、rs1868092测序引物、rs1868093测序引物或rs1868094测序引物;

所述rs13419896测序引物的序列如SEQ ID No.9所示;

所述rs1868092测序引物的序列如SEQ ID No.10所示;

所述rs1868093测序引物的序列如SEQ ID No.11所示;

所述rs1868094测序引物的序列如SEQ ID No.12所示;

3)当所述rs13419896处的核苷酸为A、rs1868092处的核苷酸为A、rs1868093处的核苷酸为A且rs1868094处的核苷酸为T,判断待测样本属于适应高原环境的人群。

3.根据权利要求2所述的筛选方法,其特征在于,所述步骤1)PCR扩增的体系每50μl包括:2×高保真PCR酶体系25μl,ddH2O 19μl,浓度为10μM的上游引物0.5μl,浓度为10μM的下游引物0.5μl,样本基因组DNA5μl。

4.根据权利要求2所述的筛选方法,其特征在于,所述步骤1)PCR扩增的条件包括:94℃5min,94℃30s,60℃30s,72℃30s,30个循环后72℃延伸10min。

5.一种试剂盒,包括权利要求2所述的SEQ ID No.1~12所示序列的引物和2×高保真PCR酶体系。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述rs13419896引物对的上游引物的浓度为10μM的,所述rs13419896引物对的下游引物的浓度为10μM;

所述rs1868092引物对的上游引物的浓度为10μM,所述rs1868092引物对的下游引物的浓度为10μM;

所述rs1868093引物对的上游引物的浓度为10μM,所述rs1868093引物对的下游引物的浓度为10μM;

所述rs1868094引物对的上游引物的浓度为10μM,所述rs1868094引物对的下游引物的浓度为10μM;

所述rs1868094测序引物的浓度为10μM;

所述rs13419896测序引物的浓度为10μM;

所述rs1868092测序引物的浓度为10μM;

所述rs1868093测序引物的浓度为10μM;

所述2×高保真PCR酶体系的体积为3~8ml。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒,其特征在于,所述rs13419896引物对的上游引物的体积为50~150μl,所述rs13419896引物对的下游引物的体积为50~150μl;

所述rs1868092引物对的上游引物的体积为50~150μl,所述rs1868092引物对的下游引物的体积为50~150μl;

所述rs1868093引物对的上游引物的体积为50~150μl,所述rs1868093引物对的下游引物的体积为50~150μl;

所述rs1868094引物对的上游引物的体积为50~150μl的,所述rs1868094引物对的下游引物的体积为50~150μl;

所述rs1868094测序引物的体积为50~150μl;

所述rs13419896测序引物的体积为50~150μl;

所述rs1868092测序引物的体积为50~150μl;

所述rs1868093测序引物的体积为50~150μl。

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