本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种环烷烃并噻吩衍生物及其制备方法和医药应用，尤其在制备抗肿瘤药物及自身免疫性疾病中的应用。
背景技术：
信号转导和转录活化因子3(signaltransducersandactivatorsoftranscription3,stat3)是一些细胞因子以及生长因子介导的信号转导的转录因子，在正常细胞内调控生长、增殖、分化以及凋亡等一系列生理功能。stat蛋白家族包括7个成员：stat1、stat2、stat3、stat4、stat5a、stat5b和stat6，其中stat3过表达和活化在很多恶性的组织类型肿瘤中均呈现高表达，并在对很多实体瘤和血液瘤的发生进程起促进作用，包含卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、前列腺癌、肾癌、肝癌、膀胱癌、口腔癌、肉瘤、前列腺癌、头颈鳞状细胞癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病。
stat3蛋白的分子量大小约为89～92kd,由750～795个氨基酸组成，该蛋白包含6个功能结构：n端氨基酸保守序列、螺旋区、dna结合域、连接区、sh2结构域和c端转录活化区。作为一种广泛表达于人和鼠各组织细胞的转录调节因子，stat3主要通过细胞因子(如il-6)和生长因子(如vegf)诱导的jak-stat信号途径以及mapk途径激活。细胞因子或生长因子与相应的受体结合后形成二聚体，使细胞质jaks发生聚集，邻近的jaks之间相互磷酸化而被激活，从而催化受体的络氨酸残基磷酸化。通过招募stat3单体使之发生络氨酸705位磷酸化，磷酸化stat3单体通过相互识别对方的sh2结构域形成二聚体跨过核膜从细胞质转运到细胞核并利用其dna结合域与核内特定dna序列结合，然后启动下游的调控信号传导关键蛋白(bc1)-x1，(mcl-1)，cyclind1/d2和c-myc等的转录表达从而调控细胞生长，增殖，分化和凋亡。
stat3激活后，会增强细胞周期蛋白和抗凋亡的表达，从而促进异常细胞增殖和肿瘤细胞抗凋亡能力，还可通过激活表达mmp2、mmp9和vegf来促进肿瘤细胞的侵袭和小血管的形成。此外，活化的stat3可通过调节炎症因子和趋化因子的分泌来提高肿瘤细胞的免疫逃逸能力。研究证实，活化后的stat3主要通过调节肿瘤细胞微环境(如il-12/il-23失衡)，导致il-12分泌减少而促进癌变的发生；il-23通过调节t细胞而提高肿瘤微环境中的免疫抑制分子活性。
stat3除了在肿瘤中起到非常重要的作用，同时在其他疾病中也发现了stat3的活化，异常活化的stat3促进了疾病的发生和发展。这些疾病包含肾纤维化、肺纤维化、类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、炎性肺病和炎性肠病。
大多数肿瘤的发生、发展涉及异常的jak-stat3信号途径，此信号途径最终又集中于转录调节因子stat3，异常持续的stat3活化，导致肿瘤细胞的无限增殖、抗凋亡、侵袭、血管再生以及逃逸免疫监视。阻断stat3，即可阻断异常的肿瘤信号途径，因此以stat3为靶点的抑制剂来治疗癌症的研发也越来越受到国际生物公司和机构的重视。目前，许多特异性stat3小分子抑制剂被发现并应用于肿瘤治疗研究，其中活性较好机制研究比较明确的小分子stat3抑制剂如下所示。
通过对上述小分子stat3抑制剂结构分析以及临床表现分析，发现目前小分子stat3抑制剂都有明显的缺陷：其中以sta-21、cryptotanshinone、stattic、bbi608和jmc-9为代表的小分子抑制剂由于都含有醌类或类醌类结构，在临床上表现出很大的毒性；另外部分一部分化合物如s3i-201、sh5-07和bp-1-102这类化合物多是拟肽类化合物，在体内代谢不稳定，难以开发成临床化合物，目前还没有报道这一类小分子stat3抑制剂进入临床研究。因此本申请涉及一类新型特异性小分子stat3抑制剂，以期能够解决目前已有小分子stat3抑制剂的缺陷，为stat3小分子抑制剂的临床应用提供更好的选择。
技术实现要素：
鉴于已有小分子stat3抑制剂的不足，本发明的目的是提出一类新型环烷烃并噻吩衍生物，其可以作为stat3抑制剂，用于开发抗肿瘤药物。
一种环烷烃并噻吩衍生物及其药学上可接受的盐、代谢产物或前药，其结构如式(i)所示：
其中，
x为ch、n；
y为c＝o、c＝s、-c(o)nh-、-c(o)o-、-c(o)s-、-c(s)nh-、-c(s)o-、-c(s)s-、nh、o、s；
m为0～3；
ar为含0-3个n原子和0-1个o或s原子的5-6元芳香环，包括苯环、噻吩环、呋喃环、吡咯环、噻唑环、
r1为芳香环/芳香杂环上的取代基，选自下列基团中的一个或多个：卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2；
r2为氢、羟基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5、5-6元芳香基、5-6元杂环芳香基；任选地，所述5-6元芳香基和5-6元杂环芳香基各自独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2。
本发明所述式(i)中，当x为ch时，其结构如下式(ii)所示：
其中，
y为c＝o、c＝s、-c(o)nh-、-c(o)o-、-c(o)s-、-c(s)nh-、-c(s)o-、-c(s)s-、nh、o、s；
m为0～3；
ar为含0-3个n原子和0-1个o或s原子的5-6元芳香环，包括苯环、噻吩环、呋喃环、吡咯环、噻唑环、
r1独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2；
r2为氢、羟基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5、5-6元芳香基、5-6元杂环芳香基；任选地，所述5-6元芳香基和5-6元杂环芳香基各自独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2。
本发明所述式(i)中，当x为n原子，y为羰基时，其结构如下(iii)所示：
其中，
m为0～3；
ar为含0-3个n原子和0-1个o或s原子的5-6元芳香环，包括苯环、噻吩环、呋喃环、吡咯环、噻唑环、
r1独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2；
r2为氢、羟基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5、5-6元芳香基、5-6元杂环芳香基；任选地，所述5-6元芳香基和5-6元杂环芳香基各自独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2。
本发明所述式(i)中，当x为n原子，y为-c(o)nh-时，其结构如下式(iv)所示：
其中，
m为0～3；
ar为含0-3个n原子和0-1个o或s原子的5-6元芳香环，包括苯环、噻吩环、呋喃环、吡咯环、噻唑环、
r1独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2；
r2为氢、羟基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5、5-6元芳香基、5-6元杂环芳香基；任选地，所述5-6元芳香基和5-6元杂环芳香基各自独立地被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8环烷基、3-8元杂环基、c5-10芳香基、5-10元杂芳香基、c1-6烷氧基、c3-8环烷氧基、-s(o)pr3、-c(o)r3、-c(o)or3、-nr4r5或-c(o)nr5的取代基取代，其中r3、r4、r5各自独立地为氢或c1-4烷基，p为0、1或2。
本技术领域人员可以理解，根据本领域使用的惯例，在本申请的结构式中，
由此，在本说明书通篇中，本领域技术人员可对式(i)-(iv)所示化合物中所述r1～r2的基团及其取代基、以及x、y、m、p和ar进行选择，以提供本发明的实施例中所述的、稳定的式(i)-(iv)所示化合物或其可药用盐、水合物、溶剂化物、代谢产物或前药。
根据本发明的实施例，本发明所述式(i)-(iv)所示的化合物或其药学上可接受的盐，水合物、溶剂化物、代谢产物或前药，包括:
4-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环丁基[2,3]并噻吩
4-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环戊基[2,3]并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
4-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环庚基[2,3]并噻吩
4-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环辛基[2,3]并噻吩
2-(1-甲-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-4-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-h-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6,6-二甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-丙基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苯基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙氧基羰基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-氧-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-羟基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6,2’-[1,3]二氧戊环-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙氧基羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-叔丁氧羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-3-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-5-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-咪唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(4-
2-(4-噻唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-苯甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(2-吡啶)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(4-嘧啶)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-氢-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-(2-羟乙基)-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-(2-甲氧基乙基)-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-(2-(2-羟乙氧基)乙基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-羟乙酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲氧基乙酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(1-甲基吡唑-3-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(1-甲基吡唑-4-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(1-甲基吡唑-5-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(噻唑-4-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲氧基苯并噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(苯并噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲基苯并呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-甲基呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氯噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氯呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(实施2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-溴噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴甲基呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(吡咯烷-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(吗啉环-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(4-甲基哌嗪-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙胺基羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苯胺基羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苄胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-β苯乙胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苯丁胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(呋喃-2-亚甲基)氨酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-吡啶乙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-吡啶丙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对溴苯乙胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(対氟苯乙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对氯苯乙胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-邻氟苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-间氟苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对氟苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-邻甲氧基苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-间甲氧基苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对甲氧基苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲酸甲酯苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(邻乙氧苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-氯-3-三氟甲基苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-((2-吡啶胺基)羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲氧基-3-吡啶胺)酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-甲氧基-3-吡啶胺)酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2,4-二甲氧基苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-(2-(叔丁氧酰胺基)乙氧基)苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-甲氧基-4-(2-(叔丁氧酰胺基)乙氧基)苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(喹啉-8-胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(异喹啉-8-胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-甲基吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-甲氧基吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氟吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氯吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(6-溴吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩
2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(7-溴吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩。
在本发明所使用的术语中，c1-6选自c1、c2、c3、c4、c5和c6；c1-8选自c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7和c8；c2-8选自c2、c3、c4、c5、c6、c7和c8；c3-8选自c3、c4、c5、c6、c7和c8；c5-10选自c5、c6、c7、c8、c9和c10。本发明所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
本发明所采用的术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。
当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、胺、有机胺或镁盐或类似的盐。
当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实施包括无机酸盐，所述无机酸盐包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡萄糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有酸性和碱性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
优选地，以常规方式使碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
本发明所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括：碱基比如胺的无机盐或有机盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机酸形成的盐等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季胺盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。
常规的无毒性的包括那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2‐乙酰氧基苯甲酸、2‐羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸眼、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本发明所描叙的化合物的前药容易在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。可在体内转化以提供生物活性物质(即式(i)～(iv)所示化合物)的任何化合物是在本发明的范围和主旨内的前药。例如，含有羧基的化合物可形成生理上可水解的酯，其通过在体内水解已得到式((i)～(iv))所示化合物本身而充当前药。所述前药优选口服给药，这是因为水解在许多情况下主要在消化酶的影响下发生。当酯本身具有活性或水解发生在血液中时，可使用肠胃外给药。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转化到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映异构体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及他们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用同位素标记化合物，比如氘(2h)，氚(3h)，碘-125(125i)或c-14(14c)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射与否，都包括在本发明的范围之内。
本发明所采用的术语“赋形剂”通常是指配置有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，本发明所采用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
本发明所采用的术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效治疗目标紊乱、疾病或病症。
本发明所采用的术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即c＝o时)意味着两个氢原子被取代。酮取代不会直接发生在芳香基上。本发明所采用的术语“任意被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如r)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个r所取代，则所述基团可以任意地至多被两个r所取代，并且每种情况下的r都是独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团是直接相连，比如a-l-z中l代表单键时表示该结构实际上是a-z。
在本发明的上下文中，所有涉及到的术语“烷基”或“烷”或“烷基基团”在此处可交换使用，其中所述烷基可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。一些实施方案中，烷基基团含有1-8个碳原子；另一些实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；另一些实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子。烷基基团的实例包含，但并不限于：甲基(me、-ch3)、乙基(et、-ch2ch3)、正丙基(n-pr、-ch2ch2ch3)、异丙基(i-pr、-ch(ch3)2)、正丁基(n-bu、-ch2ch2ch2ch3)、异丁基(i-bu、-ch2ch(ch3)2)、仲丁基(s-bu、-ch(ch3)ch2ch3)、叔丁基(t-bu、-c(ch3)3)、正戊基(-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch3ch(ch3)ch2ch3)、正己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3-3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)、正庚基、正辛基等。
本发明所采用的术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另外详细说明，所述的烷氧基团含有1-6个碳原子。烷氧基基团的实例包括，但并不限于：甲氧基(meo、-och3)、乙氧基(eto、-och2ch3)、丙氧基(n-pro、-och2ch2ch3)、异丙氧基(i-pro、-och(ch3)2)、正丁氧基(n-buo、-och2ch2ch2ch3)、异丁氧基(i-buo、-och2ch(ch3)2)、仲丁氧基(s-buo、-och(ch3)ch2ch3)、叔丁氧基(t-buo、-oc(ch3)3)、正戊氧基(-och2ch2ch2ch2ch3)、2-戊氧基(-och(ch3)ch2ch2ch3)3-戊氧基(-och(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁氧基(-oc(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁氧基(-och(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁氧基(-och2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁氧基(-och3ch(ch3)ch2ch3)、正己氧基(-och2ch2ch2ch2ch2ch3)等。
本发明所采用的术语“环烷基”表示含有3-8个碳原子的，单价或多价的饱和单环、双环或三环体系，其中，所述环烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。在一些实施方案中，环烷基包含3-8个碳原子。这样的实例包括，但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。
本发明所采用的术语“卤素”是指氟(f)、氯(cl)、溴(br)、或碘(i)。
本发明所采用的术语“烷氧氨基”包括“n-烷氧氨基”和“n,n-烷氧氨基”，其中，氨基基团分别独立地被一个或两个烷基基团所取代。其中，烷基基团具有如本发明所述的含义。合适的烷氧氨基基团可以是单烷氧氨基或二烷氧氨基，这样的实例包括，但并不限于：n-甲氨基，n-乙胺基、异丙基氨基、丙氨基、叔丁氨基、正丁氨基、1-甲基丙基氨基、正戊基氨基、正己基氨基、n,n-二甲氨基、n,n-二乙胺基等。
本发明所采用的术语“c1-6酰基”是指r-c(＝o)-，其中r为c1-6烷基，c1-6烷基具有如本发明所述的含义。
本发明所采用的术语“烷氧基吗啉”是指被一个或多个烷基取代的吗啉基。
本发明所采用的术语“c1-6酰基哌嗪”是指被一个或多个c1-6酰基取代的哌嗪基。
本发明所采用的术语“羟基c1-6烷基哌嗪”是指被一个或多个羟基取代的c1-6烷基取代的哌嗪基。
本发明所采用的术语“烷基氨基哌啶基”是指被一个或多个烷基取代的氨基取代的哌啶基。
本发明所采用的术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但不排除其他方面的内容。
本发明所述的各反应步骤所使用的反应溶剂没有特别限制，任何在一定程度上能溶解起始原料并且不抑制反应的溶剂均包含在本发明中。另外，本领域的许多类似改动，等同替换，或等同与本发明所描述的溶剂，溶剂组合，及溶剂组合的不同比例，均视为本发明的包含范围。
根据本发明的第二方面，本发明提出了一种制备式(i)-(iv)所示环烷烃并噻吩衍生物的方法。该类化合物的通用合成方法是先合成2-氨基-3氰基噻吩衍生物，然后通过一系列反应与中间体2-氨基-3氰基噻吩衍生物连接而成。
根据本发明的实施例，本发明提供一种制备式(i)-(iv)所示化合物的方法，是通过如下的合成路线(1)制备得到的：
路线(1)；
其中，r1、r2、x、y、m、a如本发明所定义。
本发明人发现，利用本发明实施列的合成方法能够快速有效地制备式(i)-(iv)所示化合物，且合成路线短、环境友好、目标产物的收率和纯度较高，原料易得、操作及后处理简单、适合工业化生产。
根据本发明的第三个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗剂量的前述化合物。
所述药物组合物包含环烷烃并噻吩衍生物及其药学上可接受的盐、代谢产物或前药。
所述药物组合物用于下列至少之一：
抑制信号转导和转录活化因子3(stat3)的工具化合物；
治疗stat3活化引起或调控的疾病的药物组合物；
治疗stat3活化引起或调控的癌症的药物组合物；
抑制stat3活化引起的癌细胞增殖和迁移的工具化合物。
“药物组合物”表示含有一种或多种本发明所述化合物或其生理学上/可药用的盐、代谢产物或前体药物与其他化学组分的混合物，或其他组分例如生理盐水/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
根据本发明的具体实施例，该药物组合物含有前面所述的式(i)-(iv)所示化合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物用于抑制stat3；抑制stat3的磷酸化和下游基因的表达；治疗或者预防stat3介导的癌症；所述癌症为恶性肿瘤包括卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、肾癌、肝癌、肉瘤、前列腺癌、头颈鳞状细胞癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病。所述药物组合物还可用于p-stat3过表达而引起的其他疾病；所述疾病为自身免疫性疾病包括肾纤维化、肺纤维化、类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、炎性肺病和炎性肠病等。
根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括第二药剂，所述第二药剂不同于前面所述化合物并且用于治疗或者预防癌症、肾纤维化、肺纤维化、类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、炎性肺病和炎性肠病等。根据本发明的实施例，第二药剂与式(i)-(iv)所示化合物的联用，使得所述药物组合物更加有效地用于抑制stat3，并且用于治疗或者预防癌症、肾纤维化、肺纤维化、类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、炎性肺病和炎性肠病等。
根据本发明的具体实施例，药物组合物进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或其组合。
根据本发明的具体实施例，药物组合物呈片剂、胶囊、注射剂，粉针剂，粉剂、糖浆、溶液状、悬浮液或气雾剂。由此可以显著提高该药物组合物的适用性。并且本发明上述实施例的药物组合物可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中和适宜的用于注射或滴注的消毒容器中。
本发明的药物组合物的各种剂型可按照药学领域的常规制备方法制备。本发明的化合物和药物组合物可对哺乳动物临床使用，包括人和动物，可以通过口、鼻、皮肤、肺或者胃肠道等的途径给药。不管采用何种服用方法，个人的最佳剂量应依据具体的治疗方案而定。通常情况下是从小剂量开始，逐渐增加剂量一直到找到最合适的剂量。最优选的给药途径为口服或者皮肤给药。
根据本发明的第四方面，本发明提出了前面所述的化合物、前面所述的方法制备得到的化合物或前面所述的药物组合物在制备药物中的用途。
根据本发明的具体实施例，所述药物用于下列至少之一：用作stat3抑制剂，用于治疗或者预防癌症、肾纤维化、肺纤维化、类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、炎性肺病和炎性肠病等。
根据本发明的具体示例，本发明所述式(i)-(iv)所示化合物对stat3有明显的结合作用，其活性显著优于阳性对照物bp-1-102。
根据本发明示例，本发明所述式(i)-(iv)所示化合物能够对多种癌细胞的增殖和迁移都有明显的抑制作用。
根据本发明示例，本发明所述式(i)-(iv)所示化合物显示了良好的代谢稳定性，为进一步临床研究提供了重要依据。
根据本发明示例，本发明所述式(i)-(iv)所示化合物能够在体内对肿瘤的生长和转移都有明显的抑制作用，并且很明显的优于阳性对照物bp-1-102。
因此，本发明所述药物能够有效作为stat3抑制剂，用于治疗一种或一种以stat3活化有关的疾病，所述疾病包括卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、肾癌、肝癌、肉瘤、前列腺癌、头颈鳞状细胞癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病、肾纤维化、肺纤维化、类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、炎性肺病和炎性肠病等。
本发明的有益效果在于：本发明所述的作为stat3抑制剂的环烷烃并噻吩衍生物(式(i)-(iv)所示化合物)，其作为stat3抑制剂，具有良好的临床应用和医药用途。
附图说明
图1.stat3抑制剂7r在体内抑制骨肉瘤的生长(1a)并抑制向肺的转移(1b)。
图2.stat3抑制剂5p和7r对银屑病的治疗作用。
图3.stat3抑制剂5p和7r促进毛发的生长。
具体实施方式
实施例1-14-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环丁基[2,3]并噻吩(1a)的合成。
目标产物1a-1e，2a-2j如式1-1所示，将环丁酮(或者其它环烷酮)、丙二腈、固态硫和脯氨酸溶于dmf中，在60℃下搅拌10小时反应完毕；将反应液缓慢滴加到搅拌的冰水中，含有中间体2-氨基-3-氰基-噻吩衍生物中间体的粗产物大量析出，经过过滤、干燥和纯化后；将该中间体、1-甲基吡唑-4-羧酸、2-氯-1-甲基吡啶碘化物和dmap溶于二氯甲烷中，在搅拌下滴加三乙胺然后加热到回流过夜，得到目标产物1a-1e，2a-2j。
式1-11a-1e，2a-2j的合成步骤
称取环丁酮(210mg，3.0mmol)、丙二腈(218mg，3.3mmol)、硫(144mg，4.5mmol)和l-脯氨酸(35mg，0.3mmol)溶解于5毫升dmf中，在60摄氏度下搅拌反应10小时；冷却后将反应液缓慢滴加到搅拌的水中，将析出的固体过滤、干燥，经过柱层析纯化后得到中间体4-氰基-5-胺基-环丁基[2,3]并噻吩(261mg，53％)。将4-氰基-5-胺基-环丁基[2,3]并噻吩(261mg，1.6mmol)、1-甲基吡唑-4-羧酸(202mg，1.6mmol)、2-氯-1-甲基吡啶碘化物(409mg，1.6mmol)和dmap(39mg，0.32mmol)溶解于10毫升二氯甲烷中，在搅拌中缓慢滴加三乙胺(0.89ml，6.4mmol)并加热回流4小时，柱层析后得到4-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环丁基[2,3]并噻吩(1a，223mg，54％)。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.49(s,1h),8.05(s,1h),3.90(s,3h),3.08-3.02(m,1h),2.96-2.89(m,1h),2.86-2.80(m,1h),2.78-2.72(m,1h).
实施例1-24-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环戊基[2,3]并噻吩(1b)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为环戊酮，最后得到1b，产率67％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.32(s,1h),8.43(s,1h),8.05(s,1h),3.91(s,3h),2.85(t,j＝6.5hz,2h),2.75(t,j＝6.4hz,2h),2.40-2.36(m,2h).
实施例1-32-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(1c)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为环己酮，最后得到1c，产率63％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.31(s,1h),8.44(s,1h),8.05(s,1h),3.90(s,3h),2.61-2.60(m,2h),2.51-2.50(m,2h),1.76-1.75(m,4h).
实施例1-44-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环庚基[2,3]并噻吩(1d)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为环庚酮得到1d，产率57％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.23(s,1h),8.43(s,1h),8.03(s,1h),3.90(s,3h),2.72-2.67(m,4h),1.82-1.81(s,2h),1.61-1.60(m,4h).
实施例1-54-氰基-5-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-环辛基[2,3]并噻吩(1e)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为环辛酮得到1e，产率64％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.29(s,1h),8.44(s,1h),8.04(s,1h),3.91(s,3h),2.76(t,j＝5.6hz,2h),2.68(t,j＝5.8hz,2h),1.60-1.59(m,4h),1.25-1.23(m,4h).
实施例1-62-(1-甲-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-4-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2a)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为1-甲基环己酮得到2a，产率37％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.25(s,1h),8.43(s,1h),8.04(s,1h),3.91(s,3h),2.86-2.85(m,1h),2.65-2.62(m,1h),2.57-2.55(m,1h),1.80-1.76(m,3h),1.60-1.59(m,1h),1.23(d,j＝6.8hz,3h).
实施例1-72-(1-h-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2b)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为4-甲基环己酮最后得到2b，产率58％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.32(s,1h),8.44(s,1h),8.04(s,1h),3.90(s,3h),2.73-2.69(m,1h),2.60-2.57(m,1h),2.53-2.52(m,1h),2.23-2.18(m,1h),1.97-1.84(m,2h),1.42-1.34(m,1h),1.03(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-82-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6,6-二甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2c)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为4,4-二甲基环己酮得到2c，产率58％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.32(s,1h),8.44(s,1h),8.05(s,1h),3.90(s,3h),2.57–2.50(m,2h),2.40(s,2h),1.53(t,j＝6.4hz,2h),0.96(s,6h).
实施例1-92-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2d)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为4-乙基环己酮得到2d，产率63％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.31(s,1h),8.44(s,1h),8.04(s,1h),3.90(s,3h),2.76-2.73(m,1h),2.61-2.58(m,1h),2.50-2.49(m,1h),2.24-2.19(m,1h),1.93-1.90(m,1h),1.63-1.62(m,1h),1.37-1.35(m,3h),0.93(t,j＝7.1hz,3h).
实施例1-102-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-丙基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2e)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为4-丙基环己酮得到2e，产率64％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.31(s,1h),8.44(s,1h),8.05(s,1h),3.91(s,3h),2.76-2.72(m,1h),2.61-2.57(m,1h),2.24-2.19(m,1h),1.92-1.89(m,1h),1.74-1.73(m,1h),1.40-1.35(m,5h),0.90(t,j＝6.6hz,3h).
实施例1-112-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苯基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2f)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为4-苯基环己酮得到2f，产率71％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.38(s,1h),8.45(s,1h),8.06(s,1h),7.33-7.32(m,4h),7.24-7.22(m,1h),3.91(s,3h),3.00-2.99(m,1h),2.93-2.89(m,1h),2.76-2.73(m,1h),2.71-2.67(m,2h),2.05-2.03(m,1h),1.99-1.90(m,1h).
实施例1-122-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙氧基羰基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2g)的合成
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为对环己酮甲酸乙酯得到2g，产率67％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.38(s,1h),8.45(s,1h),8.05(s,1h),4.12-4.09(m,2h),3.90(s,3h),2.90-2.74(m,3h),2.62.59(m,2h),2.15-2.13(m,1h),1.84-1.81(m,1h),1.20(t,j＝7.1hz,3h).
实施例1-132-(1-甲基4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-氧-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2h)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为1,4-环己二酮得到2h，产率69％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.50(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),3.91(s,3h),3.54(s,2h),2.93(t,j＝6.5hz,2h),2.63(t,j＝6.7hz,2h).
实施例1-142-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-羟基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2i)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为4-羟基环己酮得到2i，产率41％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.32(s,1h),8.44(s,1h),8.05(s,1h),4.94(s,1h),4.00-3.99(m,1h),3.90(s,3h),2.86-2.83(m,1h),2.64-2.61(m,1h),2.52.50(m,2h),1.88-1.86(m,1h),1.73-1.70(m,1h).
实施例1-152-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6,2’-[1,3]二氧戊环-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(2j)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为1,4-环己二酮单乙二醇缩酮得到2j，产率71％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.51(s,1h),8.47(s,1h),8.06(s,1h),6.17-6.14(m,1h),5.75-5.73(m,1h),4.75(s,1h),4.64(s,1h),3.91(s,3h),3.85(d,j＝5.7hz,2h),2.68-2.62(m,2h),1.26-1.23(m,2h).
实施例1-162-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙氧基羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(2k)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为n-乙氧羰基-4-哌啶酮得到2k，产率56％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.50(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),4.51-4.50(m,2h),4.09-4.08(m,2h),3.91(s,3h),3.67-3.66(m,2h),2.62-2.61(m,2h),1.21-1.20(m,3h).
实施例1-172-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-叔丁氧羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(2l)的合成。
采用制备化合物1a相同方法，将环丁酮更换为n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮得到2l，产率89％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.47(s,1h),8.06(s,1h),4.46(s,2h),3.91(s,3h),3.62(t,j＝5.3hz,2h),2.60-2.59(m,2h),1.42(s,9h).
实施例1-182-(1-甲基-3-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3a)的合成。
3a-3h合成步骤如式1-2所示，将对甲基环己酮、丙二腈、固态硫和脯氨酸溶于dmf中，在60℃下搅拌10小时反应完毕；将反应液缓慢滴加到搅拌的冰水中，含有中间体2-氨基-3-氰基-噻吩衍生物中间体的粗产物大量析出，经过过滤、干燥和纯化后；将该中间体、各种商业化的羧酸、2-氯-1-甲基吡啶碘化物和dmap溶于二氯甲烷中，在搅拌下滴加三乙胺然后加热到回流过夜，得到目标产物3a-3h。
式1-23a-3h的合成步骤
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为1-甲基吡唑-3-羧酸最后得到3a，产率54％。1hnmr(500mhz,dmso)δ10.95(s,1h),7.90(s,1h),6.83(s,1h),3.99(s,3h),2.74-2.71(m,1h),2.60-2.57(m,2h),2.24-2.19(m,1h),1.86-1.85(m,2h),1.39-1.38(m,1h),1.03(d,j＝5.3hz,3h).
实施例1-192-(1-甲基-5-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3b)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为1-甲基吡唑-5-羧酸最后得到3b，产率47％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.65(s,1h),7.57(d,j＝2.1hz,1h),7.13(d,j＝2.1hz,1h),4.08(s,3h),2.77-2.73(m,1h),2.63-2.60(m,1h),2.57-2.51(m,1h),2.26-2.21(m,1h),1.88-1.86(m,2h),1.43-1.35(m,1h),1.04(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-202-(1-甲基-4-咪唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3c)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为1-甲基咪唑-4-羧酸最后得到3c，产率61％。1hnmr(500mhz,dmso)δ10.52(s,1h),7.96(s,1h),7.84(s,1h),3.75(s,3h),2.74-2.69(m,1h),2.60-2.57(m,1h),2.54-2.51(m,1h),2.23-2.18(m,1h),1.86-1.84(m,2h),1.41-1.33(m,1h),1.03(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-212-(4-
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为
实施例1-222-(4-噻唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3e)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为噻唑-4-羧酸最后得到3e，产率48％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.16(s,1h),9.32(s,1h),8.65(s,1h),2.76-2.72(m,1h),2.62-2.59(m,1h),2.56-2.51(m,1h),2.25-2.20(m,1h),1.87-1.85(m,2h),1.42-1.34(m,1h),1.03(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-232-苯甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3f)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为苯甲酸最后得到3f，产率78％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.72(s,1h),7.95(d,j＝7.2hz,2h),7.64(dd,j＝7.4,7.4hz,1h),7.56(dd,j＝7.8,7.4hz,2h),2.75-2.71(m,1h),2.62-2.59(m,1h),2.56-2.52(m,1h),2.25-2.19(m,1h),1.87-1.85(m,2h),1.42-1.34(m,1h),1.03(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-242-(2-吡啶)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3g)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为2-吡啶甲酸最后得到3g，产率64％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.32(s,1h),8.80(d,j＝4.2hz,1h),8.17(d,j＝7.8hz,1h),8.11(dd,j＝7.8,7.6hz,1h),7.75(dd,j＝7.5,7.4hz,1h),2.78-2.74(m,1h),2.63-2.60(m,1h),2.58-2.54(m,1h),2.27-2.22(m,1h),1.88-1.85(m,2h),1.43-1.33(m,1h),1.04(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-252-(4-嘧啶)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(3h)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为嘧啶-4-甲酸最后得到3h，产率45％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.63(s,1h),9.49(s,1h),9.17(d,j＝5.0hz,1h),8.14(d,j＝4.9hz,1h),2.77(dd,j＝16.3,4.4hz,1h),2.60(dd,j＝31.4,12.1hz,2h),2.26(dd,j＝16.1,9.8hz,1h),1.87(d,j＝7.9hz,2h),1.39(dt,j＝11.0,6.2hz,1h),1.04(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-262-(1-氢-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(4a)的合成。
采用制备化合物2b相同方法，将1-甲基吡唑-4-羧酸更换为1h-吡唑-4-羧酸最后得到4a，产率37％。1hnmr(500mhz,dmso)δ13.39(s,1h),11.29(s,1h),8.49(s,1h),8.09(s,1h),2.74-2.70(m,1h),2.61-2.53(m,2h),2.24-2.18(m,1h),1.87-1.85(m,2h),1.42-1.34(m,1h),1.03(d,j＝6.4hz,3h).
实施例1-272-(1-(2-羟乙基)-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(4b)的合成。
4b-4d合成步骤如式1-3所示，利用式1-3的方法合成中间体4a，然后将4a和k2co3溶于丙酮中，在搅拌下缓慢滴加溴化物，然后加热回流3小时得到目标产物4b-4d。
式1-32-(1-氢-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-噻吩上吡唑取代衍生物的合成步骤
将中间体4a(286mg，1.0mmol)和k2co3(415mg，3.0mmol)溶于5毫升丙酮中，在搅拌下缓慢滴加溴乙醇(0.11ml，1.5mmol)，在加热回流反应3小时；经过萃取，柱层析得到4b(178mg,54％)。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.33(s,1h),8.48(s,1h),8.06(s,1h),4.98(t,j＝5.1hz,1h),4.21(t,j＝5.1hz,2h),3.76-3.75(m,2h),2.74-2.70(m,2h),2.61-2.58(m,2h),2.24-2.18(m,1h),1.87-1.85(m,2h),1.42-1.34(m,1h),1.04(d,j＝6.3hz,3h).
实施例1-282-(1-(2-甲氧基乙基)-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(4c)的合成。
采用制备化合物4b相同方法，将溴乙醇更换为溴乙基甲基醚得到4c，产率43％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.34(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),4.34(t,j＝5.1hz,2h),3.71(t,j＝5.1hz,2h),3.24(s,3h),2.74-2.70(m,1h),2.61-2.53(m,2h),2.23-2.18(m,1h),1.87-1.85(m,2h),1.41-1.35(m,1h),1.03(d,j＝6.5hz,3h).
实施例1-292-(1-(2-(2-羟乙氧基)乙基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩(4d)的合成。
采用制备化合物4b相同方法，将溴乙醇更换为2-(2-溴乙氧基)乙醇得到4d，产率38％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.33(s,1h),8.48(s,1h),8.08(s,1h),4.61-4.58(m,1h),4.33(t,j＝5.0hz,2h),3.80(t,j＝5.0hz,2h),3.72-3.70(m,1h),3.68-3.66(m,1h),3.51-3.50(m,1h),3.47-3.46(m,2h),3.43-3.52(m,1h),2.61-2.58(m,2h),2.23-2.18(m,1h),1.87-1.85(m,2h),1.42-1.34(m,1h),1.03(d,j＝6.3hz,3h).
实施例1-302-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-羟乙酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5a)的合成。
5a-5r合成步骤如1-4所示，利用式1-1的方法合成中间体2m，然后将r4cooh、edc.hcl和hobt溶于dmf中，冰浴下搅拌15分钟然后加入2m，然后常温下反应3小时得到目标产物5a-5r。
式1-42-胺基-3-氰基-哌啶并噻吩上哌啶酰基取代衍生物的合成步骤
将中间体2l(387mg,1.0mmol)溶解于10毫升二氯甲烷中，在冰浴下缓慢滴加4nhcl气体的1,4-二氧六环溶液1毫升，常温下搅拌过夜，蒸干溶剂得到2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-氢-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻(2m)287mg,产率100％；将乙醇酸(114mg,1.5mmol)、edc.hcl(383mg,2.0mmol)和hobt(196mg,1.7mmol)溶于5毫升dmf中，反应30分钟后加入2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-羟乙酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(2m)(287mg,1.0mmol)，继续反应3个小时，萃取，柱层析得到5a，产率为42％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.51(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),4.75(s,1h),4.59-4.53(m,2h),4.21-4.14(m,2h),3.91(s,3h),3.78-3.65(m,2h),2.69-2.60(m,2h).
实施例1-312-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-甲氧基乙酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5b)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为甲氧基乙酸得到5b，产率62％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.51(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),4.57(s,2h),4.20-4.14(m,2h),3.91(s,3h),3.76-3.67(m,2h),3.32(s,3h),2.69-2.59(m,2h).
实施例1-322-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(1-甲基吡唑-3-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5c)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为1-甲基吡唑-3-甲酸得到5c，产率73％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.78(s,1h),6.59(s,1h),5.08-4.11(m,2h),4.15(s,2h),3.91(s,6h),2.73-2.71(m,2h).
实施例1-332-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(1-甲基吡唑-4-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5d)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为1-甲基吡唑-4-甲酸得到5d，产率74％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.48(s,1h),8.46(s,1h),8.14(s,1h),8.06(s,1h),7.74(s,1h),4.72(s,2h),3.91(s,3h),3.87-3.86(m,5h),2.73-2.72(m,2h).
实施例1-342-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(1-甲基吡唑-5-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5e)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为1-甲基吡唑-5-甲酸得到5e，产率80％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.51(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.51(s,1h),6.60(s,1h),4.73(s,2h),3.91(s,3h),3.86(s,3h),3.77-3.76(m,2h),2.75-2.74(m,2h).
实施例1-352-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为
实施例1-362-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(噻唑-4-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5g)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为噻唑-4-甲酸得到5g，产率61％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.64(s,1h),8.55(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),5.02-4.71(m,2h),4.11-3.91(m,5h),2.76-2.75(m,2h).
实施例1-372-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲氧基苯并噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5h)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为3-甲氧基苯并噻吩-2-羧酸得到5h，产率39％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),8.02(d,j＝6.8hz,1h),7.86(d,j＝8.3hz,1h),7.51-7.46(m,2h),4.73(s,2h),3.91(s,3h),3.77(s,2h),2.72-2.71(m,2h),2.38(s,3h).
实施例1-382-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(苯并噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5i)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为苯并噻吩-2-羧酸得到5i，产率56％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.58(s,1h),8.38(s,1h),8.04-7.96(m,3h),7.87(s,1h),7.47-7.46(m,2h),4.80(s,2h),3.96-3.95(m,2h),3.90(s,3h),2.80-2.79(m,2h).
实施例1-392-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲基苯并呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5j)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为3-甲基苯并呋喃-2-羧酸得到5j，产率71％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.73(d,j＝7.6hz,1h),7.64(d,j＝6.0hz,1h),7.46(t,j＝7.8,7.6hz,1h),7.35(t,j＝7.5，7.4hz,1h),4.78(s,2h),3.91-3.90(m,5h),2.79-2.78(m,2h),2.37(s,3h).
实施例1-402-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-甲基呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5k)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-甲基呋喃-2-甲酸得到5k，产率63％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.47(s,1h),8.06(s,1h),6.98(s,1h),6.28(s,1h),4.77-4.76(m,2h),3.91-3.90(m,5h),2.75-2.74(m,2h),2.35(s,3h).
实施例1-412-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5l)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为噻吩-2-甲酸得到5l，产率67％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.56(s,1h),8.39(s,1h),8.01(s,1h),7.80(d,j＝4.7hz,1h),7.54(d,j＝3.9hz,1h),7.17(dd,j＝3.9,4.0hz,1h),4.75(s,2h),3.90-3.89(m,5h),2.75-2.74(m,2h).
实施例1-422-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氯噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5m)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-氯噻吩-2-甲酸得到5m，产率71％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.47(s,1h),8.06(s,1h),7.46(s,1h),7.20(s,1h),4.78(s,2h),3.91-3.90(m,5h),2.77-2.76(m,2h).
实施例1-432-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5n)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-溴噻吩-2-羧酸得到5n，产率48％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.41(s,1h),7.30(s,1h),4.77(s,2h),3.91-3.90(m,5h),2.76-2.75(m,2h).
实施例1-442-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氯呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5o)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-氯呋喃-2-甲酸得到5o，产率72％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.57(s,1h),8.14(s,1h),7.82(s,1h),7.16(d,j＝3.3hz,1h),6.70(d,j＝3.3hz,1h),4.66-4.65(m,2h),3.90-3.89(m,2h),3.86(s,3h),2.73-2.64(m,2h).
实施例1-452-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5p)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-溴呋喃-2-羧酸得到5p，产率51％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.13(d,j＝2.9hz,1h),6.80(d,j＝3.2hz,1h),4.76(s,2h),3.92-3.91(m,5h),2.76-2.75(m,2h).
实施例1-462-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-溴噻吩-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5q)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-溴呋喃-2-羧酸得到5q，产率54％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.47(s,1h),8.14(s,1h),8.07(s,1h),7.28(s,1h),4.74(s,2h),3.91-3.90(m,5h),2.77-2.76(m,2h).
实施例1-472-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴甲基呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(5r)的合成。
采用制备化合物5a相同方法，将乙醇酸更换为5-溴甲基呋喃-2-羧酸得到5r，产率39％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.51(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.05(d,j＝3.3hz,1h),6.72(d,j＝3.3hz,1h),5.75(s,1h),4.84(s,1h),4.77(s,2h),3.94-3.93(m,2h),3.91(s,3h),2.77-2.76(m,2h).
实施例1-482-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(吡咯烷-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(6a)的合成。
6a-6d合成步骤如式1-5所示，利用式1-4的方法合成中间体5r，然后将r5nh2和k2co3溶于丙酮中，在搅拌下缓慢加入5r，然后常温反应3小时得到目标产物6a-6d。
式1-52-胺基-3-氰基-哌啶并噻吩上呋喃环取代衍生物的合成步骤
将四氢吡咯(214mg，3.0mmol)和k2co3(415mg，3.0mmol)溶于5毫升丙酮中，在搅拌下缓慢加入5r(474mg，1.0mmol)，在常温下反应3小时；经过萃取，柱层析得到6a(316mg,68％)。取1hnmr(500mhz,dmso)δ11.19(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.03(d,j＝3.1hz,1h),6.52(d,j＝3.0hz,1h),4.77(s,2h),3.94(s,2h),3.91(s,3h),3.84-3.83(m,2h),2.75-2.74(m,2h),2.65-2.64(m,4h),1.74-1.73(m,4h).
实施例1-492-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(吗啉环-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(6b)的合成。
采用制备化合物6a相同方法，将四氢吡咯更换为吗啉得到6b，产率79％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.03(d,j＝3.4hz,1h),6.49(d,j＝3.3hz,1h),4.78(s,2h),3.92-3.91(m,5h),3.59-3.57(m,6h),2.76-2.75(m,2h),2.42-2.41(m,4h).
实施例1-502-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(4-甲基哌嗪-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(6c)的合成。
采用制备化合物6a相同方法，将四氢吡咯更换为4-甲基哌嗪得到6c，产率62％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.11(s,1h),8.42(s,1h),8.03(s,1h),7.02(d,j＝3.3hz,1h),6.47(d,j＝3.3hz,1h),4.75(s,2h),3.92-3.90(m,5h),3.33-3.32(m,6h),2.75-2.74(m,2h),2.44-2.43(m,4h),2.21(s,3h).
实施例1-512-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-亚甲基)呋喃-2-羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(6d)的合成。
采用制备化合物6a相同方法，将四氢吡咯更换为4-羟乙基哌嗪得到6d，产率54％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.45(s,1h),8.43(s,1h),8.04(s,1h),7.02(d,j＝3.3hz,1h),6.46(d,j＝3.2hz,1h),5.75(s,1h),4.75(s,2h),3.93(s,2h),3.90(s,3h),3.49-3.48(m,2h),3.33-3.32(m,2h),2.75-2.74(m,2h),2.45-2.44(m,10h).
实施例1-522-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-乙胺基羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7a)的合成。
7a-7u，8a-8h和9a-9g合成步骤如式1-6所示。利用式1-1的方法合成中间体2m，然后将r-nh2和cdi溶于二氯甲烷中，常温下搅拌15分钟然后加入2m和三乙胺，继续反应过夜得到目标产物7a-7u，8a-8h和9a-9g。
式1-62-胺基-3-氰基-哌啶并噻吩上哌啶脲类取代衍生物的合成步骤
将2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-氢-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(287mg,1.0mmol)溶解于5毫升二氯甲烷中，缓慢滴加乙基异氰酸酯(0.12ml,1.5mmol)和三乙胺(0.42ml,3.0mmol)，常温下反应3小时，柱层析得到7a，产率为87％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.47(s,1h),8.45(s,1h),8.05(s,1h),6.66(s,1h),4.43(s,2h),3.91(s,3h),3.61-3.60(m,2h),3.06-3.05(m,2h),2.56-2.55(m,2h),1.02-1.01(m,3h).
实施例1-532-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苯胺基羰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7b)的合成。
将苯胺(186mg,2.0mmol)和n,n'-羰基二咪唑(324mg,2.0mmol)溶解于10毫升二氯甲烷中，常温下搅拌反应30分钟；然后将2-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-氢-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(287mg,1.0mmol)加入反应液中并缓慢滴加三乙胺(0.56ml,4.0mmol)，常温下反应过夜，柱层析得到7b,产率为52％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.67(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.46(d,j＝7.9hz,2h),7.24(t,j＝7.7hz,2h),6.95(t,j＝7.2hz,1h),4.60-4.59(m,2h),3.91(s,3h),3.79-3.78(m,2h),2.68-2.67(m,2h).
实施例1-542-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苄胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7c)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为苄胺得到7c，产率61％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.31-7.28(m,3h),7.25(d,j＝7.1hz,2h),7.20(dd,j＝7.0,7.0hz,1h),4.49(s,2h),4.26(d,j＝5.5hz,2h),3.91(s,3h),3.68(t,j＝5.3hz,2h),2.60-2.59(m,2h).
实施例1-552-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-β苯乙胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7d)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-苯乙胺得到7d，产率57％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.50(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.28-7.25(m,2h),7.19-7.16(m,3h),6.80(dd,j＝5.4,5.3hz,1h),4.44(s,2h),3.91(s,3h),3.61(t,j＝5.6hz,2h),3.27-3.23(m,2h),2.74-2.71(m,2h),2.53(t,j＝5.5hz,2h).
实施例1-562-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-苯丁胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7e)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为苯基-4-丁胺得到7e，产率63％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.50(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.27-7.24(m,2h),7.17-7.15(m,3h),6.67(s,1h),4.43(s,2h),3.91(s,3h),3.62-3.61(m,2h),3.07-3.05(m,2h),2.56-2.55(m,4h),1.55-1.52(m,2h),1.43-1.41(m,2h).
实施例1-572-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(呋喃-2-亚甲基)氨酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7f)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-呋喃甲胺得到7f，产率65％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.54(s,1h),7.20(dd,j＝5.3,5.1hz,1h),6.36(s,1h),6.18(d,j＝5.1hz,1h),4.47(s,2h),4.24(d,j＝5.3hz,2h),3.91(s,3h),3.65(t,j＝5.2hz,2h),2.58-2.57(m,2h).
实施例1-582-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-吡啶乙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7g)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-(2-氨乙基)吡啶得到7g，产率47％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.48-8.46(m,2h),8.06(s,1h),7.66(dd,j＝7.0,6.5hz,1h),7.20-7.19(m,2h),6.81(s,1h),4.43(s,2h),3.91(s,3h),3.60-3.59(m,2h),3.41-3.37(m,2h),2.88(t,j＝7.3hz,2h),2.54-2.5(m,2h).
实施例1-592-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-吡啶乙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7h)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-噻吩乙胺得到7h，产率52％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.31(d,j＝4.8hz,1h),6.94-6.89(m,2h),6.84(s,1h),4.45(s,2h),3.91(s,3h),3.62(s,2h),3.29-3.27(m,2h),2.94(t,j＝7.0hz,2h),2.57-2.56(m,2h).
实施例1-602-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-吡啶丙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7i)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-吡啶丙胺得到7i，产率48％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.46-8.43(m,3h),8.06(s,1h),7.23-7.22(m,2h),6.73(s,1h),4.44(s,2h),3.91(s,3h),3.62(s,2h),3.07(d,j＝5.7hz,2h),2.59-2.58(m,4h),1.75-1.72(m,2h).
实施例1-612-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对溴苯乙胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7j)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-溴苯乙胺得到7j，产率54％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.47(s,1h),8.46(s,1h),8.07(s,1h),7.49-7.48(m,2h),7.33(s,1h),7.22-7.21(m,2h),4.49(s,2h),4.22(s,2h),3.91(s,3h),3.68-3.67(m,2h),2.60-2.59(m,2h).
实施例1-622-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(対氟苯乙胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7k)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-氟苯乙胺得到7k，产率55％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.19(m,2h),7.05(m,2h),6.78(dd,j＝5.0,4.9hz,1h),4.43(s,2h),3.91(s,3h),3.60(t,j＝5.2hz,2h),3.26-3.22(m,2h),2.71(t,j＝7.2hz,2h),2.54-2.53(m,2h).
实施例1-632-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对氯苯乙胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7l)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-氯苯乙胺得到7l，产率61％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.50(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.30(d,j＝8.4hz,2h),7.19(d,j＝8.4hz,2h),6.78(t,j＝5.4hz,1h),4.43(s,2h),3.91(s,3h),3.60(t,j＝5.6hz,2h),3.27-3.23(m,2h),2.72(t,j＝7.2hz,2h),2.54-2.51(m,3h).
实施例1-642-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-邻氟苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7m)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-氟苯胺得到7m，产率57％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.16(s,1h),8.50-8.46(m,2h),8.06(s,1h),7.42(s,1h),7.19-7.17(m,1h),7.13-7.12(m,2h),4.59(s,2h),3.91(s,3h),3.79-3.78(m,2h),2.68-2.67(m,2h).
实施例1-652-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-间氟苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7n)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-氟苯胺得到7n，产率64％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.56(s,1h),8.88(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.45-7.43(m,1h),7.27-7.26(m,2h),6.76(s,1h),4.61(s,2h),3.91(s,3h),3.79-3.78(m,2h),2.69-2.68(m,2h).
实施例1-662-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-対氟苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7o)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-氟苯胺得到7o，产率60％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.71(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.47-7.46(m,2h),7.10-7.06(m,2h),4.60-4.59(m,2h),3.91(s,3h),3.78-3.77(m,2h),2.67-2.66(m,2h).
实施例1-672-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-邻甲氧基苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7p)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-甲氧基苯胺得到7p，产率42％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.87(s,1h),7.57-7.55(m,1h),7.01-7.00(m,2h),6.88-6.87(m,1h),4.59(s,2h),3.91(s,3h),3.81-3.76(m,5h),2.68-2.67(m,2h).
实施例1-682-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-间甲氧基苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7q)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为3-甲氧基苯胺得到7q，产率51％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.65(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.15-7.07(m,3h),6.53(s,1h),4.60(s,2h),3.91(s,3h),3.78-3.77(m,2h),3.71(s,3h),2.68-2.67(m,2h).
实施例1-692-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-对甲氧基苯胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7r)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-甲氧基苯胺得到7r，产率52％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.51(s,1h),8.52(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.34(d,j＝8.9hz,2h),6.83(d,j＝8.9hz,2h),4.58(s,2h),3.91(s,3h),3.77(t,j＝5.4hz,2h),3.70(s,3h),2.667-2.66(m,2h).
实施例1-702-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲酸甲酯苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7s)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为3-氨基苯甲酸甲酯得到7s，产率54％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.55(s,1h),8.93(s,1h),8.47(s,1h),8.13(s,1h),8.07(s,1h),7.80(d,j＝7.3hz,1h),7.55(d,j＝7.3hz,1h),7.39(dd,j＝7.7,7.3hz,1h),4.62(s,2h),3.91(s,3h),3.84(s,3h),3.81-3.80(m,2h),2.69-2.68(m,2h).
实施例1-712-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(邻乙氧苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7t)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-乙氧基苯胺得到7t，产率51％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.85(s,1h),7.56(d,j＝7.8hz,1h),7.03-6.97(m,2h),6.87(dd,j＝7.6,7.5hz,1h),4.59(s,2h),4.04(q,j＝6.8hz,2h),3.91(s,3h),3.77(t,j＝5.2hz,2h),2.70-2.69(m,2h),1.33(t,j＝6.8hz,3h).
实施例1-722-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-氯-3-三氟甲基苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(7u)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为3-三氟甲基-4-氯苯胺得到7u，产率39％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),9.11(s,1h),8.47(s,1h),8.07-8.05(m,2h),7.82(d,j＝7.9hz,1h),7.59(d,j＝8.6hz,1h),4.62(s,2h),3.91(s,3h),3.81-3.80(m,2h),2.70-2.69(m,2h).
实施例1-732-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-((2-吡啶胺基)羰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8a)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-氨基吡啶得到8a，产率57％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.44(s,1h),9.37(s,1h),8.46(s,1h),8.25(s,1h),8.06(s,1h),7.78-7.69(m,2h),6.99(s,1h),4.62-4.60(m,2h),3.91(s,3h),3.81-3.80(m,2h),2.68-2.67(m,2h).
实施例1-742-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(3-甲氧基-3-吡啶胺)酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8b)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为3-氨基-2-甲氧基吡啶得到8b，产率37％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),8.02(s,1h),7.90-7.89(m,1h),7.86-7.85(m,1h),6.95-6.93(m,1h),4.60(s,2h),3.91(s,3h),3.90(s,3h),3.77(t,j＝5.5hz,2h),2.69-2.68(m,2h).
实施例1-752-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(4-甲氧基-3-吡啶胺)酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8c)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为4-氨基-3-甲氧基吡啶得到8c，产率39％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),8.47(s,1h),8.44(s,1h),8.22(d,j＝5.5hz,1h),8.11(s,1h),8.07(s,1h),7.07(d,j＝5.5hz,1h),4.59(s,2h),3.91(s,3h),3.85(s,3h),3.78(t,j＝5.3hz,2h),2.68-2.67(m,2h).
实施例1-762-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2,4-二甲氧基苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8d)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2,4-二甲氧基苯胺得到8d，产率38％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.80(s,1h),7.26(d,j＝8.6hz,1h),6.59-6.57(m,1h),6.46-6.44(m,1h),4.56(s,2h),3.91(s,3h),3.76(s,3h),3.74(s,3h),3.73-3.72(m,2h),2.66-2.65(m,2h).
实施例1-772-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-(2-(叔丁氧酰胺基)乙氧基)苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8e)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-(2-(叔丁氧酰胺基)乙氧基)苯胺得到8e，产率58％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.52(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.88(s,1h),7.71(d,j＝7.7hz,1h),7.11-7.10(m,1h),6.97-6.96(m,2h),6.88-6.87(m,1h),4.63(s,2h),3.99(s,2h),3.91(s,3h),3.80-3.79(m,2h),3.37-3.35(m,2h),2.71-2.70(m,2h),1.37(s,9h).
实施例1-782-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-甲氧基-4-(2-(叔丁氧酰胺基)乙氧基)苯胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8f)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-甲氧基-4-(2-(叔丁氧酰胺基)乙氧基)苯胺得到8f，产率47％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.60(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.81(s,1h),7.25(d,j＝8.6hz,1h),7.02-7.00(m,1h),6.58(s,1h),6.45(d,j＝8.6hz,1h),4.55(s,2h),3.93(t,j＝5.8hz,2h),3.91(s,3h),3.76(s,3h),3.74(t,j＝5.6hz,2h),3.29-3.26(m,2h),2.66-2.65(m,2h),1.38(s,9h).
实施例1-792-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(喹啉-8-胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8g)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为8-氨基喹啉得到8g，产率51％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.53(s,1h),9.43(s,1h),8.93(s,1h),8.47-8.39(m,3h),8.07(s,1h),7.63-7.57(m,3h),4.74(s,2h),3.91(s,3h),3.88-3.87(m,2h),2.78-2.77(m,2h).
实施例1-802-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(异喹啉-8-胺酰基)-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(8h)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为8-氨基异喹啉得到8h，产率59％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.43(s,1h),9.68(s,1h),9.55(s,1h),8.56(d,j＝4.9hz,1h),8.46(s,1h),8.23(dd,j＝6.9,6.9hz,1h),8.09-8.06(m,1h),7.84(d,j＝4.5hz,1h),7.78-7.75(m,1h),7.68(d,j＝7.5hz,1h),7.53(s,1h),7.07(s,1h),4.68(s,2h),3.91(s,3h),3.75-3.74(m,2h),2.81-2.80(s,2h).
实施例1-812-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(2-甲基吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9a)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为2-甲基色胺得到9a，产率63％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),10.70(s,1h),8.48(s,1h),8.07(s,1h),7.41(d,j＝7.7hz,1h),7.21(d,j＝7.9hz,1h),6.95(dd,j＝7.7,7.4hz,1h),6.88-6.84(m,2h),4.45(s,2h),3.91(s,3h),3.62(t,j＝5.2hz,2h),3.18-3.15(m,2h),2.76(t,j＝7.3hz,2h),2.54-2.53(m,2h),2.28(s,3h).
实施例1-822-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-甲氧基吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9b)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为5-甲氧基色胺得到9b，产率49％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.46(s,1h),10.59(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.21(d,j＝8.7hz,1h),7.08(s,1h),7.03(s,1h),6.80(s,1h),6.71(d,j＝8.6hz,1h),4.46(s,2h),3.91(s,3h),3.74(s,3h),3.63(s,2h),3.17(s,2h),2.82-2.79(m,2h),2.56(s,2h).
实施例1-832-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氟吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9c)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为5-氟色胺得到9c，产率46％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.47(s,1h),10.87(s,1h),8.46(s,1h),8.07(s,1h),7.33-7.28(m,2h),7.22(s,1h),6.90-6.87(m,1h),6.82(dd,j＝5.0,4.9hz,1h),4.46(s,2h),3.92(s,3h),3.64(t,j＝5.2hz,2h),3.31-3.30(m,2h),2.81(t,j＝7.3hz,2h),2.57(m,2h).
实施例1-842-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-氯吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9d)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为5-氯色胺得到9d，产率51％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.49(s,1h),10.98(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.57(s,1h),7.34(d,j＝8.5hz,1h),7.21(s,1h),7.04(d,j＝8.5hz,1h),6.81(s,1h),4.45(s,2h),3.91(s,3h),3.63(s,2h),3.17-3.16(m,2h),2.83-2.81(m,2h),2.56(m,2h).
实施例1-852-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(5-溴吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9e)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为5-溴色胺得到9e，产率47％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.50(s,1h),11.01(s,1h),8.46(s,1h),8.06(s,1h),7.72(s,1h),7.31-7.29(m,1h),7.21-7.20(m,1h),7.17-7.15(m,1h),6.83(t,j＝5.4hz,1h),4.45(s,2h),3.91(s,3h),3.63(t,j＝5.5hz,2h),3.30-3.26(m,2h),2.81(t,j＝7.4hz,2h),2.57-2.56(s,2h).
实施例1-862-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(6-溴吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9f)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为6-溴色胺得到9f，产率32％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.54(s,1h),10.96(s,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.48(s,1h),7.17(s,1h),7.06(d,j＝8.4hz,1h),6.88-6.86(m,1h),4.45(s,2h),3.91(s,3h),3.62(t,j＝5.3hz,2h),3.29(t,j＝6.7hz,2h),2.81(t,j＝7.4hz,2h),2.55-2.54(m,2h).
实施例1-872-(1-甲基-4-吡唑)-甲酰胺基-3-氰基-6-(7-溴吲哚-3-乙基)胺酰基-4,5,6,7-四氢[2,3-c]哌啶并噻吩(9g)的合成。
采用制备化合物7b相同方法，将苯胺更换为7-溴色胺得到9g，产率52％。1hnmr(500mhz,dmso)δ11.45(s,1h),11.00(d,j＝4.9hz,2h),8.45(s,1h),8.05(s,1h),7.55(d,j＝7.8hz,1h),7.26(m,1h),7.19(s,1h),6.93-6.88(m,1h),6.80(s,1h),4.44(s,2h),3.90(s,3h),3.61-3.60(m,2h),3.27-3.26(m,2h),2.85-2.83(m,2h),2.54-2.53(m,2h).
实施例2式((i)-(iv))所示化合物与stat3的结合活性、对stat3转录抑制活性以及对骨肉瘤143b和肝癌huh-7细胞增殖活性的测定。
式((i)-(iv))所示化合物与stat3的结合活性采用表面等离子共振技术(surfaceplasmonresonancetechnology，spr)实验测定，以stat3抑制剂bp-1-102和stattic为阳性对照，其中bp-1-102在spr试验中kd＝1.79μm，stattic在spr试验中kd＝31.03μm。spr技术基于spr检测生物传感芯片(biosensorchip)上配体与分析物作用的前沿技术，与传统手段比较，spr具有无需对样品进行标记、能实时监测、灵敏度高等突出优点。国外实验室通过该技术检测了stat3全长蛋白与其小分子抑制剂bp-1-102结合情况，其体外kd值为504nm，我们同样以该化合物与stat3蛋白进行spr实验，实验结果表明，两者有很好的结合，并且具有良好的浓度依赖性，得到kd为1.79μm，与文献报道kd值接近。
式((i)-(iv))所示化合物与stat3的结合活性还同时用荧光偏振实验(fp)测试。我们纯化的stat3(127-722位氨基酸)重组蛋白，该段保留了stat3sh2domain的结合能力，同时合成能与stat3sh2domain特异性结合的荧光多肽5-carboxyxuorescein-gpylpqtv-nh2用于荧光偏振实验，该试验具体原理为：当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期(对于荧光素约持续4纳秒)保持静止，发射光将位于同样的偏振平面。如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。由于我们标记的荧光多肽分子量很小，当其以未结合stat3形式存在时，其激发后发生的运动大，发射光相对于激发光平面将去偏振化，检测到的偏振光信号比较低。当荧光多肽结合到stat3时，由于整体分子量变大，其激发时发生的运动极小，发射光偏振光信号强，我们以此为基础来评价药物加入后偏振光信号的变化来判断待测化合物是否影响了stat3和其sh2domian特异性多肽的结合，从侧面确定待测化合物与stat3是否存在直接结合作用。
2015年ptgunning&mwdeininger教授课题组报道了bp-1-102在荧光偏振实验(fp)中测得其与stat3sh2结构域的竞争性结合活性为23.2±5.9μm,我们以同样的试验方法测得bp-1-102与stat3sh2结构域抑制活性ic50值为32.12μm，与文献报道一致。另外我们自己合成的2-氨基-3氰基噻吩衍生物中代表性化合物9e与stat3sh2结构域抑制活性ic50值为10.46μm，优于阳性化合物bp-1-102。
式((i)-(iv))所示化合物对stat3的转录抑制活性用荧光素酶(luciferase)实验测定。stat3在细胞内起着重要的信号传导作用，负责将细胞外的信号传递到细胞核，通过诱导靶基因转录表达生物刺激的效应作用。我们在体外通过构建stat3报告基因系统来进行其转录活性研究。我们首先为将stat3特异性结合dna元件序列插入到pgl4.17报告基因载体上，当stat3活化后能特异性结合到dna元件序列上从而驱动报告基因荧光素酶(luciferase)的表达，荧光素酶可以催化其底物荧光素发出荧光，通过检测荧光的强度便能检测雄激素受体激活的程度；renila内参报告基因带有海肾荧光素酶，能表达海肾荧光素酶，通过该质粒可以确定每组细胞的转染效率是否一致，同时也将加入il-6或osm作为stat3特异性激活剂，以此提高报告基因检测的特异性和灵敏度，并且il-6或osm对renila内参报告基因质粒没有影响。我们用这一对质粒同时转染293t细胞内，随后用待测化合物处理一段时间，随后测定读值，即可用于筛选化合物对stat3转录活性的影响。
2015年ptgunning&mwdeininger教授课题组同时报道了bp-1-102在荧光素酶(luciferase)实验中测得其活性大概为20μm左右，我们以同样的试验方法测得bp-1-102活性与文献报道一致。另外我们自己合成的2-氨基-3氰基噻吩衍生物中代表性化合物9e其活性为10μm左右，优于阳性化合物bp-1-102。
式((i)-(iv))所示化合物对癌细胞增殖抑制活性用mts法测定。细胞增殖实验细胞增殖实验采用mts实验，mts实验是一种运用比色法间接测定活细胞数量的方法。mts是一种新合成的四唑类化合物，通过被活细胞内线粒体内的琥珀酸脱氢酶还原成橙黄色的甲瓒，在490nm处测量还原产物的吸光值与活细胞的数量呈正比，从而反映细胞活力情况。此实验可以用于评价化合物对胰腺癌细胞增殖的影响，从而判断化合物对胰腺癌细胞增殖的抑制作用并计算半数抑制浓度(ic50)。
各细胞以5×103个/孔的密度，每孔100μl均匀接种到96孔板，在37℃恒温培养箱中放置24小时之后，对照组加入相应的培养基，实验组给予不同浓度的化合物，药物处理48小时之后取出在显微镜下观察细胞状态，避光每孔加入20μlmts，混合均匀后避光放置在37℃恒温培养箱，用酶标仪490nm处测定读取光吸收值，至对照组的od值范围在0.8-1.2之间，实验重复三次，ic50用graphpad5prism软件计算得到。
本发明所述化合物的生物活性通过以上实验进行测定，本发明所述化合物测得的ic50值实验结果见表1。其中活性值为“a”代表化合物的ic50值小于0.1μm；活性值为“b”代表化合物的ic50值为0.1-1μm；活性值为“c”代表化合物的ic50值为1-10μm，活性值为“d”代表化合物的ic50值为大于10μm。
表1式((i)-(iv))所示化合物生物活性列表
实施例3stat3抑制剂5p对不同癌细胞的抑制活性。
我们测试了stat3抑制剂5p对骨肿瘤、肝癌、肾癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、胃癌的抗增殖作用，结果见表2所示：
表2stat3抑制剂5p对不同癌细胞的抑制活性
实施例4stat3抑制剂7r抑制骨肉瘤的生长和转移。
我们设计了骨肉瘤胫骨向肺转移的动物模型，以stat3抑制剂bp-1-102为阳性化合物，给药剂量为20mg/kg隔天腹腔注射一次，同时7r给药剂量为10mg/kg和20mg/kg隔天腹腔注射一次。持续在给药四周，结果如图1所示。
实验结果显示7r能够剂量依赖性的抑制骨肉瘤原位生长，与bp-1-102相比7r在10mg/kg的剂量下就能达到bp-1-10220mg/kg给药剂量组的效果(图1a)；并且在抑制向肺转移的效果上7r也表现出了同样的效果，7r在20mg/kg的剂量下几乎完全抑制了骨肉瘤向肺的转移(图1b)。
实施例5stat3抑制剂5p和7r对银屑病的治疗作用
咪喹莫特(imq)作为tlr-7/8人工合成激动剂，常用作治疗由乳头状瘤病毒引起的人类生殖器疣。通过tlr-7/8激活和炎症细胞浸润，咪喹莫特局部处理可以诱导银屑病样皮肤炎症；咪喹莫特处理的小鼠体内机制已证明与人类银屑病的相似性：共同的细胞因子信号通路，共同依赖于il-17/il-23轴，常作为人类银屑病诱导动物模型。
在所有实验中，使用8至11周c57bl/6小鼠(购于上海斯莱克生物技术有限公司)，饲养在华东师范大学动物研究中心的spf级动物房。用含有5％imq(四川明欣药业有限公司)的62.5mgaldara乳膏连续5天每天处理剃刮的小鼠背部皮肤。实验中，50μlaldara乳膏与终浓度为500μm的5p和7r(在dmso溶液中)混合。为评分背部皮肤炎症的严重程度，基于临床牛皮癣面积和严重程度指数(pasi)开发客观评分系统，除了对于小鼠模型而言，在整体评分中未考虑受影响的皮肤区域。红斑，鳞屑和增厚独立评分0至4：0，无；1，轻微；2，温和；3，标注；4，非常明显。使用带有红色污点的计分表对红斑水平进行评分。累积评分(红斑加标度加增厚)用作炎症严重程度的量度(评分0-12)。
在这项研究中，我们研究表明stat3小分子抑制剂5p(500μm)和7r(500μm)强烈抑制咪喹莫特(imq)诱导的小鼠中的牛皮癣样皮肤炎症。每日评分背部皮肤的红斑，结垢和厚度。计算并描绘了累积评分，另外，第6天的皮肤炎症(红斑，鳞屑和厚度)的参数分别描述，每组3只小鼠。统计显著差异(p≤0.05)表示。我们表明，stat3小分子抑制剂5p和7r局部治疗减少了imq诱导的皮肤增生，炎性单核细胞浸润和小鼠皮肤中促炎介质的表达(图2)。
实施列6stat3抑制剂5p和7r促进毛发的生长
毛囊离体培养模型研究不仅是进行毛囊细胞生物学研究、毛囊生长调控、毛囊重建和毛囊药物筛选等研究的基础，而且游离毛囊的体外培养可以控制影响因素，有利于毛囊生长调控机制的研究。已有多篇文献报道利用离体毛囊的培养进行了相应药物或因子的促毛发生长的验证。除此之外，目前国内外学者对促毛发生长的药物的评价研究主要采用体内和体外两种实验方法，而体外实验主要采用的便是动物离体毛囊器官进行培养，然后评价治疗前后毛囊生长的变化。由于人发毛囊来源困难，而且小鼠触须毛囊较大，容易分离，鼠龄容易控制，实验结果稳定。所以我们选择c57bl/6小鼠触须毛囊对促毛发生长药物进行器官水平的筛选。
选取适宜周龄的c57bl/6小鼠——用剪刀和镊子取下来两侧胡须——用75％酒精消毒，pbs冲洗——在显微镜下将每个单独的毛囊剥离出来，进行清理——选择处于生长期的毛囊进行培养。每隔一定时间，测量毛干伸张长度，最后进行统计学分析。
结果显示(图3)我们通过器官水平发现stat3抑制剂5p和7r能够促进毛发的生长。特别是药物7r，在离体培养毛囊器官水平上，与control组相比促毛发生长具有***明显性差异，而与阳性药物ruxolitinib相比，也有**的差异。
本发明保护内容不限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。