瓜蒌瓤中总糖的提取方法与流程

本发明涉及糖类提取，更具体地，涉及瓜蒌瓤中总糖的提取方法。

背景技术

瓜蒌，别名栝楼，葫芦科多年生藤本植物，大多生长于深山峻岭，山崖石缝中。秋季果实成熟时，连果梗剪下，置通风处阴干。性味甘、微苦、寒，具有清热涤痰，宽胸散结，润燥滑肠的功效。瓜蒌由于独特的药用价值，近年来开始被开发利用，但是开发的方向各有不同，不具有统一的意见，而且由于取材的产地不同，其生长环境的不同造成其品质上的差异，据我们观察发现瓜蒌中糖分的含量对瓜蒌的品质有一定代表性意义。期望一种较好地提取瓜蒌中总糖的方法。

技术实现要素：

本发明提供了一种高效地提取瓜蒌中总糖的方法，为瓜蒌中总糖的利用做好基础和铺垫。

本发明提供了一种提取瓜蒌瓤的总糖的方法，包括：称取瓜蒌瓤粉放置于第一容器中，向所述第一容器中加入石油醚，进行超声脱脂，过滤得到脱脂后的瓜蒌瓤粉；将所述脱脂后的瓜蒌瓤粉放入第二容器中，向所述第二容器加入蒸馏水，进行热水浸提，之后过滤，得到总糖提取液；脱除所述总糖提取液中的蛋白，得到除蛋白后的总糖提取液。

在上述方法中，其中，所述超声脱脂的时间为30min。

在上述方法中，其中，所述热水浸提采用的温度为90～100℃。

在上述方法中，其中，所述热水浸提的时间为2h。

在上述方法中，其中，利用sevag法脱除所述总糖提取液中的蛋白。

本发明先以超声法除去瓜蒌瓤中的脂质，然后用热水浸提法以水提取有效成分提取瓜蒌瓤中总糖，最后再用sevag法去除提取液中的蛋白质及杂质，提取的总糖得率相对较高，是一种高效地提取瓜蒌瓤中的总糖的方法。

附图说明

图1示出了葡萄糖的标准曲线图。

具体实施方式

下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

1实验材料

1.1实验原料

瓜蒌，取自阜阳市临泉县，已风干的瓜蒌成熟果实。

1.2实验试剂

葡萄糖-水、石油醚、正丁醇、无水乙醇、苯酚、氯仿、乙醚、浓硫酸等为分析纯。

6％苯酚溶液的配制：精确称取0.600g苯酚于烧杯中再加入9.4ml蒸馏水溶解，倒入棕色试剂瓶中备用(防止苯酚溶液氧化)。

配制sevag除蛋白剂：氯仿与正丁醇按照4:1的比例混合于试剂瓶中备用。

1.3实验仪器

ja1003n电子天平(上海菁海仪器有限公司)，722可见分光光度计(上海佑科仪器仪表有限公司)，hh-4j数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)，mb1002多功能食品加工机(宁波美居电器有限公司)，dgt-g135电热鼓风干燥箱(合肥华德利科学器材有限公司),jk-3simga3-18ks冷冻离心机,200型超声波清洗器(合肥金尼克机械制造有限公司)。

2实验内容

风干瓜蒌去籽，取瓤，得到的瓜蒌瓤在105℃条件下在恒温干燥箱中烘干至恒重，取出后打成粉状密封保存备用(防止瓜蒌瓤再次吸收空气中的水分变潮湿，影响到最后的实验结果)。

2.1瓜蒌瓤除脂

取6支250ml锥形瓶按1,1'，2，2',3，3'的序号对应标记,洗净后晾干备用。

①除脂方法一：超声除脂：首先取2支100ml锥形瓶分别标记1,1'，然后再分别精密称取了瓜蒌瓤粉5.010g，4.994g于2支锥形瓶中，最后加入30ml石油醚,封口,超声脱脂30min后,过滤,滤液倒入回收瓶中。将脱脂后的瓜蒌瓤粉取出后晾干，放到对应的250ml锥形瓶里。

②除脂方法二：有机除脂：首先取2支100ml锥形瓶分别标记2,2'，然后再分别精密称取瓜蒌瓤粉5.018g，5.004g于2支锥形瓶中，最后加入按1：1比例配制的乙醇乙醚混合液30ml,水浴加热并不断搅拌约2h进行脱脂。将脱脂后的瓜蒌瓤粉取出后晾干，放到对应的250ml锥形瓶里。

③除脂方法三：首先取2支100ml锥形瓶分别标记3,3'，然后再分别精密称取瓜蒌粉5.012g,5.009g置于2支锥形瓶中，最后根据以上除脂方法一和方法二，对3,3'锥形瓶先进行超声除脂再进行有机除脂。将脱脂后的瓜蒌瓤粉取出后晾干，放到对应的250ml锥形瓶里。

2.2提取瓜蒌瓤中总糖

①提取方法一:超声提取：将1,2和3号锥形瓶精密加入沸蒸馏水150ml(进行称重、记录)，超声提取40min，取出待自然冷却后加蒸馏水补足至原重，摇匀，过滤(需勤换滤纸)，得总糖提取液。

②提取方法二：热水浸提:首先应提前将水浴锅进行加热，将温度设置在90-100℃之间，然后将1'，2'和3'锥形瓶号精密加入蒸馏水150ml(进行称重，记录)，最后将两只锥形瓶放置到提前加热好的水浴锅中提取2h，取出待自然冷却后加蒸馏水补足至原重，摇匀，过滤(需勤换滤纸)，得总糖提取液。

2.3脱蛋白处理

sevag法脱蛋白：取6支15ml离心管分别按以上250ml锥形瓶对应标记1，1'，2，2'，3，3',对应移取4ml总糖提取液加入离心管中，再精确移取1mlsevag试剂加入，振荡45min，离心(6000r/min，10min)(离心前对六支离心管进行称重，并调整，使得在离心机中对应位置重量差不超过50mg)，离心之后液体分为三层，上层为多糖溶液，中间一层为蛋白质凝胶层，底层为有机溶剂，取上层的溶液层按体积对应加入1/4sevag试剂，振荡45min，离心，重复上述操作多次，直到蛋白质凝胶层完全消失，表明蛋白质已经除尽，得到除蛋白提取液。

取6支容量瓶(100ml)，洗净，按上述标记1，1'，2，2'，3，3',对应移取0.1ml除蛋白提取液至6支容量瓶中，定容至刻度，作为待测总糖的样品溶液。

2.4总糖的测定方法

苯酚-浓硫酸法测总糖：取6支试管按上述分别对应标记1，1'，2，2'，3，3',对应移取容量瓶中1ml总糖的供试品溶液至6支试管中，精确移取1ml事先配制好的6％苯酚溶液，然后再加入5ml浓硫酸，静置约5min后振荡10min，放置，待自然冷却后，用可见分光光度计在490nm下测定其吸光度值。

3.5标准曲线的绘制

取8支试管分别标记0、1、2、3、4、5、6、7，洗净后晾干，备用。

首先用分析天平精密称取0.100g无水葡萄糖在烧杯中用蒸馏水溶解后移至100ml容量瓶中定容至刻度，则有1mg/ml葡萄糖标准溶液，然后再分别精密移取0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5ml葡萄糖标准溶液至50ml容量瓶中，定容至刻度；取上述定容的溶液1ml按浓度梯度由低到高的顺序至于8支试管中，再精确移取6％苯酚溶液1ml和浓硫酸5ml，放置5min，然后再振荡使其充分反应，待自然冷却后，用可见分光光度计在490nm下测定并记录吸光度值(以0号试管为空白组对可见分光光度计进行校零)。其具体的吸光度值如下表：

表1

将上述的吸光度值进行线性回归，横坐标是含糖量(mg)，纵坐标为吸光度值，绘制得葡糖糖标准曲线图，见图1。

3结果分析

3.1瓜蒌瓤中总糖含量的计算

x：为样品总糖的含量(mg/g)

c：为根据吸光度从标准曲线上查出的含量(mg)

v：为提取总糖时加入的蒸馏水，v＝150ml

k：为最后定容时稀释的倍数,k＝1000

m：为一开始称得的样品质量(g)

3.2计算的结果

将上述提取总糖的实验重复3次，根据3次所得的吸光度值取平均数，并记录，具体数值如下：

表2

根据表中的数据可以得知除脂方法的不同很大程度上影响了最后提取的总糖的含量，提取方法的不同，最后总糖得率差别明显。

经过超声除脂的瓜蒌瓤比有机除脂最后的总糖提取率普遍高1-2％，而经过超声和有机相结合的除脂方法与超声除脂的方法所得的总糖提取率略微有所下降，在实验误差范围内。

用热水浸提法比超声提取法的提取率要高出3-5％。

瓜蒌籽中含脂量高，不同产地瓜蒌中含脂量均超过37.8％，可知瓜蒌本身油脂含量较高，所以在提取总糖前需进行除脂，植物脱脂有很多方法，常用的方法有超声波除脂，有机溶剂萃取等。超声波除脂可有效除去样品中的脂质，且除脂时间短，不会影响提取液中其他物质的提取，超声波除脂是利用超声波产生的强烈震动，使细胞外脂质与细胞剥离，细胞内脂质流出，有利于细胞中待提取物质的提取。有机溶剂脱脂法原理是提取物中油脂与其他成分在有机溶剂中的溶解度不同，最后通过过滤除去油脂，通常用到的有机溶剂有甲醇，无水乙醇，石油醚等。但由于各种除脂方法对各类实验样品的油脂去除率受样品本身含脂量影响，所以在本实验中采用两种不同的除脂方法去除瓜蒌瓤中的油脂，根据最后的实验数据选择较好的一种方法，使得更有利于之后的总糖的提取。

总糖提取方法有：水提法，超声波辅助提取法等。本发明采取热水浸提法和超声提取法，对所得的实验结果进行对比，以选取较好的方法。其中植物中总糖在化学性质上表现为极性大，而水则是强极性溶剂，所以易于提取，且水对植物细胞具有强穿透力，在浸提过程中细胞被破坏，多糖溶于水中，其过程危险性低，工艺成本低，适用于大规模总糖提取。用水提法提取瓜蒌瓤中的多糖时，影响到总糖提取率的因素有很多，如提取的温度、时间等。而超声波提取过程则相对简单，其过程因为超声波的高频振动和各种效应，加快固体的溶解，促进溶液混合均匀。另外，因高频振动所产生的冲击波可以将细胞破坏，并有效阻止酶与底物相结合，使细胞的内容物更容易穿透细胞或者直接浸出，同时还可以有效提高浸取速度，而且整个浸提过程仅仅为物理过程，所以被提取的糖分结构和性质不会发生变化，且操作简单，不仅提高了提取率还将提取时间减短。所以这两种提取方法各有优势。

sevag法脱蛋白对总糖提取液中的糖分影响不大，所以较可取。

通过对以上的步骤分析及实验结果可以得出，先以超声法除去瓜蒌瓤中的脂质，然后用热水浸提法以水提取有效成分提取瓜蒌瓤中总糖，最后再用sevag法去除提取液中的蛋白质及杂质，提取的总糖得率最高，为65.0％，而先用有机除脂的方法去除瓜蒌瓤中脂质，再用超声法提取多糖，再用sevag法去除提取液中的蛋白质及杂质，提取的总糖得率最低，为59.8％，前者比后者提取率提高8.7％。所以先以超声法除去瓜蒌瓤中的脂质，然后用热水浸提法以水提取有效成分提取瓜蒌瓤中总糖，再用sevag法去除提取液中的蛋白质及杂质，提取的总糖得率最高，且工艺简单，使用安全性强，可操作性强，在之后的工业化提取过程中具有可推广的意义。

本领域技术人员应理解，以上实施例仅是示例性实施例，在不背离本申请的精神和范围的情况下，可以进行多种变化、替换以及改变。