本发明涉及食（药）用菌多糖的提取技术领域，具体涉及一种香菇多糖的制备方法。
背景技术
香菇属担子菌纲、伞菌目、口蘑科、香菇属，学名lentinusedodes，是继双孢菇之后的世界第二大食用菌，也是我国久负盛名的珍贵食用菌，在民间素有“山珍”之称。中国香菇出口贸易量近10年逐步上升，目前在全球占有80％以上，居世界第一位。我国的香菇产量已居世界前列，香菇中含有丰富的营养物质，其中的香菇多糖，具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒以及降血脂等多种的生理活性功能，可以用来预防和治疗多种疾病，因此被广泛地应用于医药及食品保健领域，既可以直接制成终端产品，被人体吸收利用；也可用作下游产品开发的中间体，成为多种医药类和保健食品类产品开发不可或缺的原料，因此，香菇多糖的开发与应用具有广阔的前景。
近年来关于香菇多糖提取的方法主要有浸提、热回流、碱法、聚乙二醇法提取等，辅助提取方法有超声波、微波等，分离纯化的方法主要有吸附层析、超滤、色谱法等，干燥方法有热风、冻干，真空干燥等。现有技术中存在的问题包括有机溶剂过量引入、某些方法工序繁锁、精制过程成本过高、生产周期长且操作连续性差等，影响了产出效率。因此，针对干香菇利用技术现状有必要改进其工艺，开发一种适合于快速规模化的快速方法。
基于上述分析，本发明提供了一种以蒸汽爆破联合微波辅助提取香菇多糖的方法，同时采用非极性大孔吸附树脂进行脱色、脱蛋白等处理，获得的多糖杂质少、多糖保留率高，避免了二次污染，干燥时间短，耗能低等优点。
技术实现要素：
鉴于上述不足，本发明提供了一种以蒸汽爆破联合微波辅助提取香菇多糖的方法，同时采用非极性大孔吸附树脂进行脱色、脱蛋白等处理，获得的多糖杂质少、多糖保留率高，避免了二次污染，干燥时间短，耗能低等优点。
本发明提供了一种香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）粉碎：将干燥的香菇或香菇柄加入生物质粉碎机，粉碎后过80目筛，得香菇粉；
（2）蒸汽爆破：将100g香菇粉放入蒸汽爆破装置中完成爆破，得爆破香菇粉；
（3）微波辅助提取：将爆破香菇粉加入微波提取装置中，加水进行微波提取，得料液混合物；
（4）蛋白酶解：将料液混合物加入反应罐内，控制反应罐中料液的温度与ph值，投入蛋白酶，持续搅拌1~2h进行蛋白酶解；
（5）纤维酶解：再次控制反应罐中料液的温度与ph值，随后投入纤维素酶，持续搅拌1~2h进行纤维酶解，得酶解液；
（6）灭酶活：将酶解液升温至75~85℃，保持10~15min，得灭酶活液；
（7）脱色：灭酶活液离心处理，回收料液置于脱色罐中脱色，循环水冷却至40~60℃，投入非极性大孔吸附树脂，于搅拌状态下脱色1h，得脱色料液；
（8）减压浓缩：脱色料液过滤，低温减压浓缩至原体积的1/3，获得香菇多糖浓缩液；
（9）冷冻干燥：香菇多糖浓缩液经冷冻干燥至水份低于5%，得香菇多糖固体粉末。
进一步的，所述蒸汽爆破压力为1.5mpa~2.0mpa、温度为100℃~200℃、时间为2min~5min。
进一步的，所述加水微波提取的料液比为1:10~20。
进一步的，所述微波功率为400~600w。
进一步的，所述蛋白酶解温度为45~60℃，ph值6.0~8.0，蛋白酶用量占香菇粉重量比0.5~1.5%。
进一步的，所述纤维酶解温度为45~60℃，ph值3.0~6.0，纤维素酶用量占香菇粉重量比1.0~3.0%。
进一步的，所述非极性大孔吸附树脂用量占离心料液重量比5.0~10.0%。
进一步的，所述低温减压浓缩温度为50~80℃。
本发明的有益效果：
1、采用蒸汽爆破法联合微波辅助提取，应用蒸汽弹射原理将渗进植物组织内部的蒸汽分子瞬时释放完毕，使蒸汽内能转化为机械能并作用于生物质组织细胞层间，从而避免了化学处理的二次污染问题，又解决了目前生物处理效率低的问题，提取时间短，效率高等优点。
2、采用低温减压浓缩技术，与传统的热力浓缩相比，低温操作，无相变，热敏性成分得以保护，多糖活性得以保留，设备规模小、能耗低、分离效率高。
3、真空低温干燥传热效率较高，粘液中的水分可直接吸收，且在真空条件下可以低温干燥让水分迅速变为水蒸汽逸出，能较好地保护物料中的多糖成分，具有干燥时间短，耗能低等优点。
具体实施方式
实施例1
一种香菇多糖的提取方法
（1）粉碎：将干燥的香菇或香菇柄粉碎，过80目筛，得香菇粉；
（2）蒸汽爆破：将100g香菇粉放入蒸汽爆破装置中完成爆破，压力1.5mpa、温度为100℃、维持爆破5min，得爆破香菇粉；
（3）微波辅助提取：将爆破香菇粉加入装置中，按照料液比1:20加入水进行提取，微波功率为400w，得料液混合物；
（4）蛋白酶解：控制反应罐中料液的温度50℃、ph值6.0，向反应罐中投入香菇粉重量比0.5%的蛋白酶，于搅拌状态下酶解2h；
（5）纤维酶解：控制反应罐中料液的温度50℃、ph值3.0，向反应罐中投入香菇粉重量比1.0%的纤维素酶，于搅拌状态下酶解2h；
（6）灭酶活：将酶解液升温至85℃，保持15min，得酶解液；
（7）脱色：灭酶活液离心处理，回收料液置于脱色罐中脱色，循环水冷却至55℃，投入离心料液7.5%的非极性大孔吸附树脂（树脂提供厂家：罗门哈斯，树脂型号：amberlitexad16大孔吸附树脂），于搅拌状态下脱色1h，得脱色料液；
（8）减压浓缩：脱色料液过滤，50~80℃下低温减压浓缩至可溶性固形物含量为30%，获得香菇多糖浓缩液；
（9）冷冻干燥：香菇多糖浓缩液经冷冻干燥至水份低于5%，得香菇多糖固体粉末。
实施例2
一种香菇多糖的提取方法
（1）粉碎：将干燥的香菇或香菇柄粉碎，过80目筛，得香菇粉；
（2）蒸汽爆破：将100g香菇粉放入蒸汽爆破装置中完成爆破，蒸汽爆破压力1.7mpa、温度为150℃、维持爆破2.5min，得爆破香菇粉；
（3）微波辅助提取：将爆破香菇粉加入装置中，按照料液比1:15加入水进行提取，微波功率为500w，得料液混合物；
（4）蛋白酶解：控制反应罐中料液的温度55℃、ph值7.0，向反应罐中投入香菇粉重量比1.0%的蛋白酶，于搅拌状态下酶解1.5h；
（5）纤维酶解：控制反应罐中料液的温度55℃、ph值4.5，向反应罐中投入香菇粉重量比2.0%的纤维素酶，于搅拌状态下酶解1.5h；
（6）灭酶活：将酶解液升温至85℃，保持15min，得酶解液；
（7）脱色：酶解液离心后，回收料液于脱色罐中，循环水冷却至55℃，投入离心料液5.0%的非极性大孔吸附树脂，于搅拌状态下脱色1h，得脱色料液；
（8）减压浓缩：脱色料液过滤，75℃下低温减压浓缩至可溶性固形物含量为32%，获得香菇多糖浓缩液；
（9）冷冻干燥：香菇多糖浓缩液经冷冻干燥至水份低于5%，得香菇多糖固体粉末。
实施例3
一种香菇多糖的提取方法
（1）粉碎：将干燥的香菇或香菇柄粉碎，过80目筛，得香菇粉；
（2）蒸汽爆破：将100g香菇粉放入蒸汽爆破装置中完成爆破，蒸汽爆破压力2.0mpa、温度为200℃、维持爆破2min，得爆破香菇粉；
（3）微波辅助提取：将爆破香菇粉加入装置中，按照料液比1:20加入水进行提取，微波功率为600w，得料液混合物；
（4）蛋白酶解：控制反应罐中料液的温度55℃、ph值7.0，向反应罐中投入香菇粉重量比1.0%的蛋白酶，于搅拌状态下酶解2h；
（5）纤维酶解：控制反应罐中料液的温度55℃、ph值4.5，向反应罐中投入香菇粉重量比2.0%的纤维素酶，于搅拌状态下酶解2h；
（6）灭酶活：将酶解液升温至85℃，保持15min，得酶解液；
（7）脱色：灭酶活液离心处理，回收料液置于脱色罐中脱色，循环水冷却至50℃，投入离心料液10.0%的非极性大孔吸附树脂，于搅拌状态下脱色1h，得脱色料液；
（8）减压浓缩：脱色料液过滤，75℃下低温减压浓缩至可溶性固形物含量为30%，获得香菇多糖浓缩液；
（9）冷冻干燥：香菇多糖浓缩液经冷冻干燥至水份低于5%，得香菇多糖固体粉末。
对比例1
提取步骤与实施例1相同，只是取消蒸汽爆破处理。
对比例2
提取步骤与实施例1相同，只是取消微波处理。
对比例3
提取步骤与实施例1相同，只是取消蒸汽爆破处理与微波处理。
试验例
试验例
对实施例1~3与对比例1~3中所提取的多糖含量进行检测，以及蛋白脱除率、色素脱除率和多糖保留率的计算。其中多糖含量(%)=总糖的含量(%)-还原糖的含量(%)，比较不同提取方式的提取效果。
总糖含量测定采用苯酚-硫酸法；还原糖含量测定采用dns法；蛋白含量测定采用bradford法。
色素脱除率(%)=(a0-a1)/a0×100.0%（1）
注：式（1）中a0、a1分别代表脱色前和脱色后溶液处于450nm处的吸光度。
蛋白脱除率(%)=(c0-c1)/c0×100.0%（2）
注：式（2）中c0、c1分别代表脱色前和脱色后溶液处于450nm处的吸光度。
多糖保留率(%)=(m0-m1)/m0×100.0%（3）
注：式（3）中m0、m1分别代表处理前后的多糖。
表1不同组别多糖提取情况
由表1可知，实施例1~3制备的香菇多糖得率均在80%以上，对比例1相比实施例1取消蒸汽爆破处理，香菇多糖得率为52.4%明显低于实施例1；对比例2相比实施例1取消微波处理，香菇多糖得率为57.8%明显低于实施例1但高于对比例1；对比例3相比实施例1取消蒸汽爆破处理与微波处理，香菇多糖得率为46.3%明显低于对比例1。说明只有在蒸汽爆破和微波处理的协同处理下，不仅能去蛋白、去色素，还能制得纯度较高的香菇多糖，提高香菇多糖得率。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。