本发明属于分子生物学和遗传学领域，特别涉及一种影响番茄果色形成调控基因yft2的可变剪切子及应用。
背景技术：
番茄(solanumlycopersicum；2n＝24)属于茄科(solanaceae)番茄属(lycopersicon)植物，是世界上极其重要蔬菜作物之一。番茄果实属于浆果，是番茄经济性状最重要的部分，可以生吃，烹饪或加工。番茄果实颜色是番茄果实成熟变化的外在体现，是由植物色素分子叶绿素、黄酮类化合物和类胡萝卜素的共同决定的。这些色素分子对番茄自身繁衍后代和对人类抵抗癌症和心血管疾病都有积极作用。随着人们生活水平的提高，番茄果实营养价值已提到重要位置，而作为外部品质性状果色更是吸引消费者购买的直接因素。因此果实颜色是一个十分重要的番茄育种性状，关系到其营养价值和市场需求。研究番茄果色性状会提高番茄品质育种进程，产生一定的经济价值。目前研究表明番茄果色的形成和调控是一个复杂的代谢网络，番茄果色形成受到植物众多生物合成代谢途径(类胡萝卜素合成、黄酮类化合物合成、叶绿素合成与降解)及相关调控基因调控；也受到植物质体发育的影响；同时还和乙烯、aba、光信号转导通路的相关。番茄成熟果实中主要色素分子是番茄红素，早些时候的研究主要关注于类胡萝卜素代谢途径，目前该途径上的结构基因已经清楚。现在人们开始注意到番茄色素化合物的积累还和质体发育，植物激素，光信号转导相关，但是现有的研究结果很难全面阐明番茄果实颜色形成和调控机制。因此筛选新的番茄果色突变体以及通过图位克隆鉴定参与番茄果实颜色形成和调控的基因尤为重要。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种影响番茄果色形成调控基因yft2的可变剪切子及应用；具体是提供一个控制番茄黄果色性状的基因和导致黄果性状产生的原因，可用于今后筛选黄果番茄品种，进行品质改良。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：本发明涉及一种黄果番茄果色调控基因yft2，其dna序列如sedidno:1所示。优选的，所述基因yft2编码的蛋白的氨基酸序列如sedidno:2所示。优选的，所述调控基因yft2的前体mrna具有两种可变的如sedidno:4和sedidno:5所示的剪切形式。本发明还涉及一种所述的黄果番茄果色调控基因yft2在调控番茄黄果色中的应用。本发明还涉及一种所述的黄果番茄果色调控基因yft2在番茄育种中的应用。本发明还涉及一种黄果番茄果色调控蛋白，其氨基酸序列如sedidno:2所示。本发明还涉及一种所述的黄果番茄果色调控蛋白在调控番茄黄果色中的应用。本发明还涉及一种所述的黄果番茄果色调控蛋白在番茄育种中的应用。本发明还涉及一种黄果番茄果色调控基因yft2的启动子，编码所述启动子的碱基序列如sedidno:3所示。本发明还涉及一种所述的启动子在调控番茄黄果色中的应用。本发明还涉及一种所述的启动子在番茄育种中的应用。本发明还涉及一种黄果番茄果色调控基因yft2的可变剪切子，其可变的mrna序列如sedidno:4所示。本发明还涉及一种所述的如sedidno:4所示的可变剪切子在调控番茄黄果色中的应用。本发明还涉及一种所述的如sedidno:4所示的可变剪切子在番茄育种中的应用。本发明还涉及一种黄果番茄果色调控基因yft2的可变剪切子，其可变的mrna序列如sedidno:5所示。本发明还涉及一种上述的如sedidno:5所示的可变剪切子在调控番茄黄果色中的应用。本发明还涉及一种上述的如sedidno:5所示的可变剪切子在番茄育种中的应用。本发明以黄果番茄突变体黄樱桃22号(solanumlycopersicumvar.cerasiformeno.22)为母本，红果野生番茄醋栗番茄la1585(s.pimpinellifolium)为父本杂交获得f1，f1再自交获得f2群体，再利用f2群体的380株个体，其中黄果85株、红果295株，结合公布的42个番茄caps和dcaps标记对黄果番茄突变体果色调控基因进行初步定位。之后再利用f2群体的1800株个体结合公布的番茄基因组序列开发10对caps和dcaps标记，使用染色体步移技术将黄果色调控基因定位于429w和438w之间的候选区域含有95.7kb的核苷酸序列内，该含有95.7kb的核苷酸序列包含11个基因，其中yft2基因参与类葫芦萝卜素通路合成。构建过表达载体，在黄樱桃22号中对yft2进行转基因互补实验，可以恢复番茄果色为红色，证明正是yft2基因的低表达导致了黄色果的产生。通过rapidamplificationofcdnaends(race)得到了该基因的转录本全长，发现在黄樱桃22号中存在一个可变剪切，除了产生正常的yft2转录本之外，主要产生一个异常的转录本，导致yft2蛋白不能正常合成，进而影响果色。最后得出yft2基因的可变剪切就是控制黄果番茄突变体黄樱桃22号黄果色性状的原因。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：1、根据本发明中提供的控制番茄黄果色性状的基因序列，通过可变剪切，形成一个异常的转录本，进而产生黄果表型。2、研究该剪切机制可以为一步番茄果色的形态建成机理打下坚实的基础。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1杂交群体构建和各亲本及后代果实颜色表型；图2突变基因定位图；图3yft25’端和3’端的qrt-pcr结果；图4黄樱桃22号和phb-yft2过表达植株的果实示意图。具体实施方式下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。实施例1一、番茄黄果色突变体黄樱桃22号的遗传分析为了确定突变体黄樱桃22号的黄果色的表型是否由单基因控制，本发明对黄樱桃22号(cn102676546a)进行了相应的遗传分析。分别利用黄果番茄突变体黄樱桃22号为母本和红果野生番茄醋栗番茄la1585(gao,l.,zhao,w.,qu,h.,wang,q.andzhao,l.(2016)theyellow-fruitedtomato1(yft1)mutanthasalteredfruitcarotenoidaccumulationandreducedethyleneproductionasaresultofageneticlesioninethyleneinsensitive2.theoreticalandappliedgenetics,129,717-728.)为父本构建杂交群体并对后代果色进行分析，具体步骤如下：1.遗传分析群体的构建分别以黄果番茄突变体黄樱桃22号为母本和红果野生番茄醋栗番茄la1585为父本进行杂交获得f1代，f1代自交得到f2代，如图1所示。记录每一个f1代和f2代植株成熟果实颜色，在黄樱桃22号×la1585杂交得到的f1代单株中果实颜色都为红色。f2代单株中，分别获得了正常表型的红果植株和突变表型的黄果植株。通过卡方分析法进行验证，f2代中红果植株和黄果植株的分离比符合3:1的分离比(见表1)。遗传分析结果表明黄樱桃22号突变体的表型是由单隐性核基因突变引起的。表1杂交群体中红果植株和黄果植株的分离情况二、yft2图位克隆遗传分析表明，突变体黄樱桃22号的黄果色表型是由一个隐性核基因控制。利用黄果番茄突变体黄樱桃22号和红果野生番茄醋栗番茄la1585杂交衍生的f2群体的390株，其中85株黄果、295株红果，进行初定位，将突变基因定位在位于3号染色体上caps分析标记03-52和30m2之间的27.35mb区域内。进一步增加1800株f2群体进行细定位，最终将突变基因定位在3号染色体caps分析标记429w和438w之间的95.7kb区域内。利用番茄基因组注释信息，发现共有11个基因位于95.7kb的定位区间。其中solyc03g031860编码的yft2是内胡萝卜素合成途径上的关键酶之一，和果实发育相关。测序结果发现在黄果突变体黄樱桃22号中yft2翻译起始密码子上游-2005bp存在t变成了c(seqidno.3所示的dna序列)，基因第四个内含子a变成了g(seqidno.1所示的dna序列)。荧光定量pcr(qrt-pcr)结果显示黄樱桃22号突变体yft2的表达量在5’端和3’端存在明显差异，如图3所示。具体步骤如下：1.基因定位从黄樱桃22号×la1585杂交群体f2代中选取1800株个体作为定位群体。每株取1克左右的嫩叶，用来提取总dna进行基因定位。突变基因定位图如图2所示。1.1番茄基因组dna的提取用ctab法提取亲本及f2分离群体的叶片总dna。1)取一小片新鲜叶片，放入1.5mlep管中，加入500μlmicroprepbuffer；2)研磨后，65℃水浴30min，期间每10min颠倒混匀一次。3)冷却至室温后，加入等体积(500μl)的氯仿：异戊醇(v:v＝24:1)，轻轻混匀30sec，10000rpm离心10min。4)吸取上清350μl到新的ep管中，加入等体积异丙醇(-20℃预冷)，轻轻混匀，于-20℃冰箱中沉淀30min。5)10000rpm离心10min，弃异丙醇。dna白色沉淀用70％乙醇吹洗两遍。6)将乙醇残留尽量吸取干净后置于60℃恒温箱中干燥至刚出现半透明，加入35μlddh2o溶解后置于-20℃冰箱保存。1.2突变基因的初步定位和精细定位在突变基因的初步定位中，用85株具有突变表型黄果和295株具有正常表型红果f2个体进行caps分析。首先根据公布的番茄分子遗传图谱，选取近似均匀分布于12条染色体上的42个分子标记主要是caps标记进行初定位。之后选取1800株f2个体，根据发布的番茄基因组序列，增加10对caps标记进行精细定位。具体实验条件如下：表2pcr反应体系：试剂体积/μldna模板4.010×rtaqbuffer2.5dntpmix(2mm)2.0forwardprimer(10μm)1.0reverseprimer(10μm)1.0ddh2o14.25rtaq(5u/μl)0.25pcr反应条件为：95℃变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min(根据实际caps标记扩增产物长度调整)，35个循环；最后72℃延伸10min。表3酶切反应体系：pcr产物加入量根据caps分子标记实际扩增情况确定后加ddh2o补足总反应体系15μl。酶切反应2h，产物用2.0％-3.0％琼脂糖凝胶电泳检测，并在uvp凝胶成像系统(transilluminatorwhite/uv，uvp，inc.，usa)紫外光下拍照，统计带型。2.基因预测和序列分析利用已经公布的番茄基因组注释信息，发现精细定位的95.7kb区域内包括11个基因。其中solyc03g031860编码的yft2是类胡萝卜素通路的关键酶基因psy1，和果实颜色形成相关。根据已知yft2序列，设计引物对yft2基因全长和启动子进行扩增，回收目的条带，连接克隆载体pmd19-t-simplevector(takara)，转化大肠杆菌dh5α，送生物公司进行测序。扩增yft2基因全长引物序列5’-tggccattgttgaaagagag-3’(forward，sedidno:6)和5’-tcatgctttatctttgaagagagg-3’(reverse，sedidno:7)，扩增yft2启动子引物序列5’-aaagaggaacaaaagaggcaagaac-3’(forward，sedidno:8)和5’-ttacacaaattccaccctctctttc-3’(reverse，sedidno:9)。3.基因表达分析采用qrt-pcr对基因转录水平进行分析。花后不同阶段(dayspostanthesis，dpa)的果实样品(25dpa，35dpa和45dpa)总rna提取使用天根公司植物总rna提取试剂盒(rnapreppureplantkit)。样本cdna单链合成使用takara公司反转录试剂盒(primescripttmrtmastermixkit)，并按如下反应体系和反应条件进行。表4反转录反应体系：试剂使用量5×primescriptbuffer(forrealtime)2μltotalrna500ngrnase-freeddh2oupto10μl反转录反应条件：37℃20min，85℃5s，4℃10min。产物-70℃超低温冰箱保存。本实验根据数据库已知的yft2mrna序列设计荧光定量引物，分别在yft2的5’端和3’端设计定量引物，检测的yft2的表达水平，发现yft2的定量结果在5’端和3’端存显著性差异，如图3所示。用于鉴定yft25’端表达量的定量pcr引物序列为5’-tgaaagagagggtggaatttgtaag-3’(forward，sedidno:10)和5’-gaccacagacaggcaaaccaac-3’(reverse，sedidno:11)。鉴定yft23’端表达量的定量pcr引物序列为5’-ggaagggtgaccgataaatggag-3’(forward，sedidno:12)和5’-gagaggcagtttttgtaggaggc-3’(reverse，sedidno:13)。用于内参actin引物为5’-ttgctgaccgtatgagcaag-3’(forward，sedidno:14)和5’-ggacaatggatggaccagac-3’(reverse，sedidno:15)。荧光定量pcr采用takara公司的sybrpremixextaqii试剂盒，具体反应体系和反应条件如下：表5荧光定量pcr反应体系试剂使用量sybrpremixextaqii(2×)10.0μlpcrforwardprimer(10μm)0.8μlpcrreverseprimer(10μm)0.8μlcdna模板2.0μlddh2o6.4μltotal20.0μl反应条件：94℃120s；94℃20s，55℃20s，72℃20s，40个循环。反应结束后将ct值导出在excel表格中进行数据处理，本实验利用2-δct计算目的基因相对于内参基因的相对表达量。计算方法为：δct＝ctt-ctr；相对表达量＝2-δct；其中ctt表示目的基因的ct值；ctr表示同一样品内参基因的ct值。三、在黄樱桃22号中过表达yft2设计引物，将yft2在黄樱桃22号中过表达，果实可以恢复红色表型，如图4所示。验证了yft2的可变剪切导致了黄果表型的出现。具体步骤如下：1.在黄樱桃22号中过表达yft21.1yft2蛋白编码区的克隆根据所述黄樱桃22号中正常的yft2基因的编码序列(seqidno.4所示的mrna序列)，设计扩增出完整编码框的上游引物psy1-cds-5'-hindiii(ttcttgaagcttatgtctgttgccttgttatgggtt，sedidno:16)和下游引物psy1-cds-3'-xbai(cttcattttctagattatctttgaagagaggcagt，sedidno:17)，并在上游和下游引物上分别引入限制性内切酶位点(下划线部分)通过高保真酶kod，以红樱桃cdna文库为模板，扩增正常的yft2基因蛋白编码区并测序。dna序列测定由上海铂尚生物技术有限公司测序完成。测序结果表明，所克隆的序列与ncbi中所报道的番茄psy1基因的氨基酸编码序列(genbankid：m84744)一致。1.2含有yft2基因的植物双元表达载体的构建以phb(phb表达载体为在pcambia3301表达载体上改造获得并保存，mao,j.,zhang,y.-c.,sang,y.,li,q.-h.andyang,h.-q.(2005)aroleforarabidopsiscryptochromesandcop1intheregulationofstomatalopening.proceedingsofthenationalacademyofsciencesoftheunitedstatesofamerica,102,12270-12275.)为表达载体，将上述yft2基因编码区连入其对应的酶切位点位置。具体地，hindiii和xbai双酶切表达载体phb和扩增的yft2基因片段，回收yft2基因片段和phb载体大片段，连接转化，挑取单克隆，提取质粒。由上海铂尚生物技术服务有限公司测序确认基因的正确性。1.3含yft2基因双元植物表达载体根癌农杆菌工程菌的获得将上述含yft2基因的植物双元表达载体转入根癌农杆菌(如eha105，为市场有公开出售的生物材料，可以从澳大利亚cambia公司购得，菌株编号为gambar1)，并进行pcr验证。1.4根癌农杆菌介导的psy1基因转化黄樱桃22号1.4.1外植体的预培养将用75％的酒精和10％的次氯酸纳灭菌后的黄樱桃番茄22号(solanumlycopersicumvar.cerasiformeyellowcherryno.22)种子播于ms发苗培养基(ms粉0.22％，蔗糖3％，植物凝胶0.26％，余量为ddh2o，ph＝5.8)上无菌培养光照和暗培养交替进行，取生长10天的小苗，以下胚轴和子叶作外植体进行转化，其中75％的酒精杀菌50s，10％的次氯酸纳消毒10min。1.4.2农杆菌和外植体的共培养将含有过表达yft2质粒的eha105工程菌在含三种抗生素(50mg/lrif，100mg/lstr，100mg/lkan)的lb液体中于28℃摇菌培养至od600为0.5～0.8时，室温4,000rpm离心10min；弃上清，菌体用灭菌的ms液体培养基(ms粉0.44％，蔗糖3％，余量为ddh2o，ph＝5.8)重悬，然后加入无菌外植体浸泡8min，期间轻轻摇动几次。取出转化后的外植体，用灭菌纸吸去残余菌液，置于共培养基上(ms粉0.44％，蔗糖3％，植物凝胶0.26％，6-苄氨基嘌呤0.0002％，3-吲哚乙酸0.00002％，余量为ddh2o，ph＝5.8)在25℃共培养36小时。1.4.3抗性再生植株的筛选培养共培养结束后将外植体转移到愈伤组织诱导培养基(ms粉0.44％，蔗糖3％，植物凝胶0.26％，6-苄氨基嘌呤0.0002％，3-吲哚乙酸0.00002％，潮霉素0.001％，羧苄青霉素0.025％，余量为ddh2o，ph＝5.8)上，在25～28℃光照下培养，光周期为16h/8h(光照/黑暗)培养12～15天可见切口片愈伤组织的形成，待愈伤组织成簇，转移到分化培养基30～35天后可见有小芽从外植体边缘长出。1.4.4抗性植株的生根和移栽入土待再生芽长至3～4cm时，将其移植到生根培养基(ms粉0.44％，蔗糖3％，植物凝胶0.26％，6-苄氨基嘌呤0.0002％，3-吲哚乙酸0.00002％，潮霉素0.0005％，羧苄青霉素0.025％，余量为ddh2o，ph＝5.8)上生根培养，7～10天可见有白色再生根长出；形成完整根系后，将再生植株取出并用水小心洗去附着在根系上的固体培养基，移植到珍珠岩中驯化，开始驯化阶段用保鲜膜保护幼苗，3周后移入土中用于后续分析。1.4.5抗性植株的检测和果实表型观察根据包含目的基因yft2所在的t-box区域的筛选标记潮霉素基因序列分别设计正向引物hygromycin-f(ggacattgttggagccgaaatccgc，sedidno:18)和反向引物hygromycin-r(gggcgaagaatctcgtgctttcagc，sedidno:19)对目的基因进行检测。结果表明，利用所设计的pcr特异引物，能扩增出523bp的特异dna片段。而以eha105空菌侵染的番茄苗为模板时，没有扩增出任何片段。阳性植株种植后，果实表型恢复为红色，如图4所示。四、yft2cdna全长的获得和比对根据ncbi数据库中的yft2cdna(genbankid：m84744)的保守序列设计引物，通过rapidamplificationofcdnaends(race)获得黄樱桃22号中的cdna全长，发现与数据库中以及另一个红果材料红樱桃中的cdna全长存在差异。黄樱桃22号中除了含有类似于红樱桃等红果番茄中的正常的yft2cdna(seqidno.4所示的dna序列)之外，还具有一种异常的长转录本，命名为yft2-long(seqidno.5所示的dna序列)。具体步骤如下：1.黄樱桃22号中yft2基因全长的获得提取黄樱桃22号和红樱桃35dpa的果实的rna，将rna分别在-80摄氏度和37℃中放置2h后，比较二者的浓度差异并通过琼脂糖凝胶电泳查看rna的纯度和完整性。二者没有明显差别的rna才用作后续cdna文库构建。根据数据库已有的yft2mrna序列，设计巢式引物，采用rapidamplificationofcdnaendsrace方法进行cdna全长的克隆(clontech，usa)：1.1cdna第一条链的合成配备用于5’race所用的cdna文库的反应液：10μlrna，1μl5’-cdsprimera，1μlsmarteriiaoligonucleotide(在配备3’race的cdna文库时，将1μlsmarteriiaoligonucleotide替换成无菌水)，将race反应液混匀，72℃孵育3min后，42℃放置2min，依次加入4.0μl5×first-strandbuffer，0.5μldtt(100mm)，1.0μldntps(20mm)，0.5μlrnaseinhibitor(40u/μl)和2.0μlsmartscribereversetranscriptase(100u)，轻柔混匀后，依次42℃放置90min，70℃放置10min，加入90μltricine-edta稀释成工作浓度，-20℃储存。1.25’race用clontech提供的5’通用引物(upm和upm-short)和设计的特异性引物gsp-5'race(gattacgccaagcttgcccttcttctctcgggagtcattagc，sedidno:20)以及巢式引物gsp-5'race-nest(gattacgccaagcttgatggagtagccaaaatagcagacc，sedidno:21)，以5’race-readycdna为模板进行，反应条件按照clontech说明书设置。用琼脂糖凝胶电泳进行检测并对产物进行胶回收，将胶回收的目的片段连接到plb载体上(tiangen，china)，连接产物转化大肠杆菌dh5α感受态后，进行测序。1.33’race用clontech提供的3’通用引物(upm和upm-short)和设计的特异性引物gsp-3'race(gattacgccaagctttgctggaagggtgaccgataaatggag，sedidno:22)以及巢式引物gsp-3'race-nest(gattacgccaagcttgcagagaaaggcgtgacagaattgagc，sedidno:23)，以3’race-readycdna为模板进行，反应条件按照clontech说明书设置。用琼脂糖凝胶电泳进行检测并对产物进行胶回收，将胶回收的目的片段连接到plb载体上，连接产物转化大肠杆菌dh5α感受态后，进行测序。1.4黄樱桃22号中存在2种yft2的cdna形式根据数据库中的yft2的cds序列以及得到的5’race和3’race结果，进行拼接后，分别在黄樱桃22号和红樱桃中得到了不同的yft2全长片段序列信息。黄樱桃22号中得到的yft2全长具有一个和红樱桃中的yft2不同的3’末端，命名为yft2-long(seqidno.5所示的dna序列)。在得到的基因全长的基础上，在黄樱桃22号中以总cdna为模板扩增两种yft2的转录本，psy1-cdna-f(aaaccaacaaattgcattctcc，sedidno:24)为正向引物，psy1-cdna-r(ggtatatcaattatcatgcccacag，sedidno:25)为反向引物，扩增yft2。psy1-cdna-f为正向引物，psy1-long-cdna-r(tatgccatgtaaattacgacatgac，，sedidno:26)为反向引物，扩增yft2-long。具体实验条件如下：表6pcr反应体系：试剂体积/μl50×cdna模板4.010×kodbuffer2.5dntpmix(2mm)2.5mg2+(25mm)1forwardprimer(10μm)0.75reverseprimer(10μm)0.75ddh2o13.0kod(5u/μl)0.5pcr反应条件为：95℃变性3min；98℃变性10sec，55℃退火30sec，68℃延伸3min，40个循环；最后72℃延伸10min。如期得到一条1987bp的yft2目标特异条带和一条2060bp的yft2-long的目标特异条带。然后按常规方法对pcr扩增产物进行连接plb测序，分别获得seqidno.4和seqidno.5所示的序列。综上所述，本发明公开了一种调控番茄果实颜色蛋白质的基因核苷酸序列、启动子序列和该蛋白的氨基酸序列，以及基因可变剪切的2种方式。本发明利用自然黄果番茄突变体黄樱桃22号(solanumlycopersicumvar.cerasiforme)，通过构建黄樱桃22号×la1585突变群体，f1代果实均为红色，而f2代果色出现红黄色分离，经卡方检测，符合孟德尔单基因隐形遗传3:1比例，推测黄樱桃22号黄果表型为单基因隐形控制。在突变群体黄樱桃22号×la1585的f2代中，用以caps分子标记为主的图位克隆技术，成功地将影响黄樱桃22号黄果色的基因定于番茄3号染色体上429w和438w间的95.7kb区间内的yft2基因。构建过表达载体，在黄樱桃22号中对yft2进行转基因互补实验，可以恢复番茄果色为红色。通过rapidamplificationofcdnaends(race)得到了该基因的转录本全长，发现在黄樱桃22号中存在一个可变剪切，导致yft2蛋白不能正常合成，进而影响果色。本发明为通过可变剪切影响番茄果色提供基础。以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。sequencelisting<110>上海交通大学<120>影响番茄果色形成调控基因yft2的可变剪切子及应用<130>dag36337<160>26<170>patentinversion3.5<210>1<211>3302<212>dna<213>solanumlycopersicum<400>1atgtctgttgccttgttatgggttgtttctccttgtgacgtctcaaatgggacaagtttc60atggaatcagtccgggagggaaaccgtttttttgattcatcgaggcataggaatttggtg120tccaatgagagaatcaatagaggtggtggaaagcaaactaataatggacggaaattttct180gtacggtctgctattttggctactccatctggagaacggacgatgacatcggaacagatg240gtctatgatgtggttttgaggcaggcagccttggtgaagaggcaactgagatctaccaat300gagttagaagtgaagccggatatacctattccggggaatttgggcttgttgagtgaagca360tatgataggtgtggtgaagtatgtgcagagtatgcaaagacgtttaacttaggttagctt420cttcaatctattcattcgtttaccaaatattatttggtaagcactaattatgaatatata480tatgttcatgttattgatgaagacaaaatttgatctttgtttgtttattcaggaactatg540ctaatgactcccgagagaagaagggctatctgggcaatatatggtgaggtttctagccat600ttaataacagttacgcgcacaaacacatatgattaatcggggacgagaaaaaaagaaatg660aagtttgagttttgagggtcatatgtaataggtaaatccgagcttgactagcttgagatg720tttattgtcatatcatgctcaatactaaccaaaacactgaaaaagaacttgattatattt780acatactaatattttcatttgcgttgctgttcacatttttacctatggaactggtttttg840tgatttgttatacttcatattcgatgttaataaaatatatcattcctccctttttctcca900cttcaagctttactgtagtgttgaaaggggaaactccttttaatgattgcatatataaac960gaacttcttgagttgaatagtttctcattatgatctgtttaaacagtatggtgcagaaga1020acagatgaacttgttgatggcccaaacgcatcatatattaccccggcagccttagatagg1080tgggaaaataggctagaagatgttttcaatgggcggccatttgacatgctcgatggtgct1140ttgtccgatacagtttctaactttccagttgatattcaggttagtctaccaattctatgg1200tctttatatttgttcaatttgcgtttgatgtcacttttgctgagggcttttctaatagct1260tacttcagcctagcggaaatgtttgtagttgaatctctagttctgtctcctatatctgtt1320tctctcgtcctagatactacacatacttcatttctgttttaacattttattcgtcttttg1380gtgttgttttgtatgtgaatcatatatttggaacagaatcattattagttcacatgattt1440catttgctttcttcaatagcgtaattgtctaaccttccaatatatgttgcagccattcag1500agatatgattgaaggaatgcgtatggacttgagaaaatcgagatacaaaaacttcgacga1560actatacctttattgttattatgttgctggtacggttgggttgatgagtgttccaattat1620gggtatcgcccctgaatcaaaggcaacaacagagagcgtatataatgctgctttggctct1680ggggatcgcaaatcaattaactaacatactcagagatgttggagaagagtaagtacaaag1740ctgtgttttacgcacataattttttttgctaatatttacatatcaaaatataggaaaatg1800agctcttcggttatccggtttatattttttttatgtcaacataatagtataaagtaatta1860gtatcagtcgttctgggaataaaattgcagaactcaatttagccgtgttgtgaaatcctg1920cttgttttgagagcttaaagctcattagttagtcgttagagacgaagaaattcttcgttg1980tccatctttattccaccttgaagttgtgatattttcattattggtacatttggcaaaaac2040acctgaacaaatttatgacggatgccttttgaaagtcactatacctgtctagtcggcgtt2100tatcacatttctttgacatattgaactttgaaacatgatatcagctctagacagtgacga2160gccatgatcaatttctttcctttattctttctttggaagtgccgtatttaggcttccgtt2220gttcttatatattgctttccctgcagtgccagaagaggaagagtctacttgcctcaagat2280gaattagcacaggcaggtctatccgatgaagatatatttgctggaagggtgaccgataaa2340tggagaatctttatgaagaaacaaatacatagggcaagaaagttctttgatgaggcagag2400aaaggcgtgacagaattgagctcagctagtagattccctgtaagcattcgtaaactcttt2460agttttatgaaatgattcttttttcgcgttattagatgaatatggttgcttgtgttgagt2520atttctaggtcgatgaagttgagacaagggtttttaagttttaacgacttttacggggtg2580ccatgttatctgctacctaatcttaggtagttgaccggaagggctagaattttaacctca2640tgttcaccctaccaaccaagaaatgaacctcgcatagagctcgtagttatgaatatttgc2700tttggcatgacattgtgcggatcatgaaatgtcttagattatatggaaaaatcattctat2760tacatcgaatagatacattagatctaagaagcacgccgtgttgtaaatgagaaattctat2820agctcagatctttagttttctctgaacgacctacaaaccaacggataaccttgtattgag2880cttgtcgttctcagtatttgcactaacattacgtcgtgtggatcctgaaatggcttggat2940tgctattattctggatatggcaaaaccattttattagtactagatatcgaataactacat3000ttgaccctacaagtaccctgggttggagttacaatatcccatacctcgtatctttagtgt3060tctcttatttatcacctttgtctactattctggcaaaataacctcactcgttactcggtg3120ttttccaggtatgggcatctttggtcttgtaccgcaaaatactagatgagattgaagcca3180atgactacaacaacttcacaaagagagcatatgtgagcaaatcaaagaagttgattgcat3240tacctattgcatatgcaaaatctcttgtgcctcctacaaaaactgcctctcttcaaagat3300aa3302<210>2<211>412<212>prt<213>solanumlycopersicum<400>2metservalalaleuleutrpvalvalserprocysaspvalserasn151015glythrserphemetgluservalarggluglyasnargphepheasp202530serserarghisargasnleuvalserasngluargileasnarggly354045glyglylysglnthrasnasnglyarglyspheservalargserala505560ileleualathrproserglygluargthrmetthrsergluglnmet65707580valtyraspvalvalleuar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