本发明涉及生物技术领域，具体涉及长链非编码rnaslc25a25-as1的应用。
背景技术：
近年来，长链非编码rnas的研究引起人们足够的重视。众多的研究开始报道lncrna在生命过程中所扮演的角色，这些研究也为理解lncrna在肿瘤形成过程中所发挥的功能提供了新的角度。研究者们通过高通量手段，对肿瘤患者的组织及对照进行了大样本的芯片表达谱检测，以期找寻到多种层面、水平的差异表达谱。海量的数据亟待研究者们更为充分及有效的挖掘。
slc25a25-as1是基于geo数据库下载得到的crc基因表达谱队列研究资料—gse39582检测集(n＝585)，建立了基于大规模结直肠癌患者的lncrna差异表达谱中发现的，并在结直肠癌组织和血清中证实了基因芯片中的结果，通过生物功能学研究发现slc25a25-as1在结直肠癌发生发展中发挥抑癌作用(decreasedexpressionoflncrnaslc25a25-as1promotesproliferation,chemoresistance,andemtincolorectalcancercells，lietal.,2016)。目前，除了在结直肠中的功能研究，还没有其他关于slc25a25-as1在肿瘤中的研究报道。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供slc25a25-as1在多种领域的新应用。
slc25a25-as1是基于geo数据库下载得到的crc基因表达谱队列研究资料—gse39582检测集(n＝585)，建立了基于大规模结直肠癌患者的lncrna差异表达谱中发现的，其序列如seqidno.1所示(lncrna通用的序列表达方法在本领域以dna的序列来表示)；目前的研究结果只显示其能够抑制结直肠癌，但是对于在其他癌症中的作用并未有进一步的研究结论。
本发明检测了slc25a25-as1在宫颈癌患者与正常对照者血清中的含量，发现血清中slc25a25-as1含量呈现从健康对照者-宫颈上皮样瘤变患者-宫颈癌患者梯度降低的趋势，这表明了slc25a25-as1可作为诊断宫颈癌的肿瘤标志物，通过能够检测slc25a25-as1表达量的诊断试剂，比如引物、探针等，或整套试剂盒，比如扩增体系、引物、探针、酶等，可对宫颈癌进行诊断。因此，本发明提出了slc25a25-as1作为宫颈癌诊断标志物在制备宫颈癌诊断试剂和/或试剂盒中的应用。
表型研究结果显示，在slc25a25-as1高表达的宫颈癌hela细胞系中，其细胞增殖、克隆形成能力、迁移与侵袭能力受到明显的抑制；裸鼠皮下成瘤实验证实slc25a25-as1在体内对宫颈癌的肿瘤形成有抑制作用；信号通路活化情况检测发现过表达slc25a25-as1则能促进抑癌基因p53和p21的活化。各项试验结果表明，slc25a25-as1可对宫颈癌有显著抑制作用。因此，本发明提出了slc25a25-as1在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。
slc25a25-as1在耐药的hela细胞中表达下降，这暗示slc25a25-as1可能与药物耐受情况相关。为此，本发明进一步在slc25a25-as1过表达细胞中检测了其对顺铂的反应情况。采用mtt检测法，实验组加入对应的药物，对照组加入等体积的dmso，12小时和24小时后分别检测od值，并计算存活细胞的比例。结果显示，在slc25a25-as1过表达后，化疗药物顺铂的杀伤作用显著增强，此结果提示slc25a25-as1可以提高肿瘤细胞对应化疗的敏感性。因此，本发明提出了slc25a25-as1在制备增强化疗药物对宫颈癌细胞杀伤性的药物中的应用。其中，所述化疗药物优选为顺铂。
由以上技术方案可知，本发明提供了slc25a25-as1在以诊断和治疗宫颈癌领域为主的多个领域的新应用，从而为相关领域的疾病提供了新的治疗手段和途径，也补充了长链非编码rnaslc25a25-as1的研究成果。
附图说明
图1所示为slc25a25-as1在正常对照组(normal)、宫颈上皮样瘤变(cin)和宫颈癌(cancer)患者血清中的表达水平；
图2所示为mtt检测slc25a25-as1对hela细胞增殖能力的影响结果；
图3所示为slc25a25-as1对hela细胞集落形成的影响的结果；
图4所示为过表达slc25a25-as1抑制宫颈癌细胞系hela细胞周期进程的结果；其中，柱形图中每个柱形从上至下依次代表g2/m、s和g0/g1周期；
图5所示为slc25a25-as1对hela细胞药物敏感性的影响的结果；
图6所示为过表达slc25a25-as1抑制hela的迁移能力的结果；
图7所示为过表达slc25a25-as1抑制hela的侵袭能力的结果；
图8所示为过表达slc25a25-as1抑制hela的在裸鼠内的成瘤能力的结果。
具体实施方式
本发明公开了长链非编码rnaslc25a25-as1的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明通过构建表达slc25a25-as1的慢病毒表达载体转染293t细胞获得病毒液来进行相关试验，其中所涉及的步骤如下：
一、人工合成(捷瑞生物工程有限公司，上海)获得编码slc25a25-as1全长的cdna序列
1、血清的收集和总rna的提取
用血清收集管收集约5ml静脉血，室温静止1h后，用4℃离心机820g离心10分钟。将上层血清转移到新的收集管后，4℃，16,000g离心10分钟，以除去任何细胞碎片，-80℃保存。
取250μl血清，加入750ultrizolls,用枪彻底混匀，室温裂解5分钟。
加入200μl三氯甲烷，加速rna相的分离，此步骤来回摇晃ep管15s，室温静止10分钟后，12000rpm离心10分钟。
取上清液体400μl加入等体积异丙醇，放在-20℃冰箱过夜，12000rpm离心10分钟。
用75％乙醇洗沉淀，8000rpm离心5分钟后，室温晾干。
加26μlrna-free的水溶解沉淀，-80℃保存。
2、细胞总rna的提取
在长满细胞的6孔板中，加入1mltrizol，用枪彻底混匀，室温裂解5分钟。
加入200μl三氯甲烷，加速rna相的分离，此步骤来回摇晃ep管15s，室温静止10分钟后，12000rpm离心10分钟。
取上清液体400μl加入等体积异丙醇，室温静置10分钟后，12000rpm离心10分钟。
用75％乙醇洗沉淀，8000rpm离心5分钟后，室温晾干。
加30μlrna-free的水溶解沉淀，-80℃保存或立即逆转录为cdna。
3、cdna合成
cdna第一条链的合成
按照reversetranscriptasem-mlvforfirststrandcdna试剂盒说明书进行。具体操作如下：
(1)取用rnasefree的pcr管，依次加入下列试剂：
dna-freetotalrna12μl
randomprimer(25μm)2μl
混匀并离心。
(2)70℃保温10min后迅速在冰上急冷2min以上，离心数秒。
(3)在上述pcr管中配制下列反转录反应液：
30℃孵育10分钟后，42℃保温一小时。
(4)70℃保温15min后冰上冷却，灭活逆转录酶。
(5)向cdna产物中添加rnasefreeddh2o补足至100ul，存于-20℃或者-80℃冰箱中，备用。取2ul稀释液进行下一步realtimepcr反应。
4、实时定量pcr分析
以上述cdna为模板，用
(1)根据基因转录本序列，设计跨内含子引物；
(2)反应体系：
(3)反应条件：95℃预变性30秒，然后95℃15秒，60℃30秒，45个循环；
(4)融解曲线反应：在上述循环结束后，进行融解曲线绘制，条件为95℃15秒，60℃1分钟，95℃15秒。每个样品均重复三次取平均值，以保证定量精确。
二、慢病毒表达载体plvx-puroslc25a25-as1构建
人工合成(捷瑞生物工程有限公司，上海)获得编码slc25a25-as1全长的cdna序列，且其5’端和3’端各自包含限制性内切酶bamhi和xbai酶切位点序列。合成后的片段经限制性内切酶bamhi和xbai(fermentas，usa)双酶切纯化后连接到plvx-puro慢病毒表达载体上，命名为plvx-puroslc25a25-as1。测序验证了重组慢病毒表达载体插入片段的正确性。
三、慢病毒制备及稳转细胞系的构建
1、293t的培养
(1)复苏293t细胞：按照常规方法复苏293t细胞，待细胞汇合度达到80％左右时进行传代。
(2)293t细胞的传代：吸去旧培养基，贴壁小心加入无菌的pbs磷酸盐缓冲液，293t细胞系贴壁不牢，容易脱落，切勿直接滴加在细胞上。轻轻晃动细胞培养皿后，弃掉pbs缓冲液。贴壁小心加入1ml预温的胰蛋白酶后，37℃孵育约2分钟，加入完全培养基，吹打贴壁细胞后将细胞悬液转移至15ml离心管内，800转/分，离心3分钟，弃去上清液。
(3)加入预温的完全培养基重悬细胞后，按照1:3-1:5比例传至新的培养皿中。转染前显微镜下观察细胞，融合度应达约80％，细胞状态要好，无污染，干净透亮。
2、293t细胞的转染
(1)转染：取两个无菌的1.5mlep管，分别标记为过表达组与对照组，并在每管中加入dmem培养基，500μl/管。在过表达组管中依次加入plvx-puroslc25a25-as1重组慢病毒表达质粒(5μg)与慢病毒包装质粒pmd2.g(2.5μg)，pspax2(5μg)。对照组管中依次加入plvx-puro空载过表达质粒(5μg，简写为plvx-purovector)与慢病毒包装质粒pmd2.g(2.5μg)，pspax2(5μg)，振荡混匀30s-1min，室温静置。每管中分别加入40μgpei转染试剂，振荡混匀30s-1min，室温静置20分钟。期间用不含抗生素的含10％fbs的dmem培养基对293t细胞进行换液，10ml/孔。将配制的转染体系缓慢加入培养基中，轻轻晃匀培养基。
(2)换液：12小时后换液，手法要轻柔，避免将细胞吹打起来。此时转染效率已达最高，换液可去掉pei对细胞的毒性作用。
(3)收病毒：48小时后第一次收集病毒液，将上清装入15ml的离心管中，放在4℃冰箱保存，加入新的培养基继续培养，72小时后第二次收集病毒液，吸取上清至新的15ml离心管中。将两次上清液合并后，3,000×g离心5分钟除去残余细胞，再使用0.45μl滤器进行过滤，获得过表达plvx-puroslc25a25-as1的病毒和对照组病毒，将病毒液分装后，-80℃保存备用。
3、慢病毒感染目的细胞系
(1)铺板：在感染前一天，将处于对数生长期、状态良好的宫颈癌细胞系hela按常规方法进行胰酶消化，使用完全培养基重悬并制成均一的细胞悬液，细胞传代至六孔板中，37℃，5％co2培养过夜，24小时后细胞密度达到20-30％左右为佳。
(2)感染目的细胞系：对细胞进行换液，1ml培养基，加入1ml病毒液，另加入8μg/ml的polybrene(sigma-aldrich,shanghai,china)增强侵染效率，轻轻晃匀培养基，2500rpm离心30分钟后，放入37℃细胞培养箱中孵育24小时换液。
(3)嘌呤霉素筛选：细胞继续培养48小时，视细胞生长密度，若细胞已满则进行传代，若细胞密度低于80％可直接换液，使用2μg/ml嘌呤霉素(sigma-aldrich,shanghai,china)进行筛选，每天及时观察细胞状态，视细胞死亡情况，每2天更换一次含嘌呤霉素的完全培养基，换液时可用pbs缓冲液进行润洗，以去除死亡的细胞及细胞死亡后的细胞碎片。
(4)感染效率验证：嘌呤霉素筛选7天后，提取总rna，采用rt-pcr验证过表达效率。连续培养约1星期后得到稳转克隆，进行扩大培养及鉴定。
同时，具体的试验方法如下：
1、mtt法测定细胞生长曲线
将对数生长期的细胞，用胰蛋白酶消化计数后，用含10％胎牛血清的培养基配置成适合浓度的细胞悬液。
将细胞接种到96孔培养板中，每孔接种1000个细胞，设6个平行孔，37℃，5％co2，培养24小时。
分别在1、2、3、4、5天以mtt法检测其492nm光密度(od)值：检测前弃去上清液，用pbs清洗细胞1次，每孔加入新鲜配制的110μlmtt染液(20μl5mg/mlmtt+90μl无血清培养液)，37℃，5％co2培养4小时。
小心弃尽上清，加入150μldmso溶解mtt甲臜沉淀，混匀后，在酶标仪上于波长492nm处测定od值。
以测量天数为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制生长曲线。
2、平板克隆形成实验
取对数生长期细胞，常规消化，制备单细胞悬液并计数。
接种细胞于六孔板，1000个/2ml/孔，以十字方向轻轻晃动培养皿，使细胞分散均匀，37℃、5％co2中常规培养10-14天。
当培养皿中出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃培养液，pbs小心清洗2次，空气干燥。甲醇固定15min，弃甲醇后空气干燥。用吉姆萨染液染色10min，流水缓慢洗去染液，空气干燥。拍照、计数。
3、流式检测细胞周期实验
细胞周期(cellcycle)是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可分为间期(interphase)和有丝分裂期(mphase)，细胞间期又常划分为休眠期(g0)，dna合成前期(g1)，dna合成期(s)，dna合成后期(g2)，整个周期可表示为g1→s→g2→m。dna周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。利用细胞内dna能够和荧光染料(如碘化丙啶pi)结合的特性，细胞各个时期其dna含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。
细胞固定：预处理过的细胞小心消化成单细胞悬液，收入1.5ml的ep管中，1000g离心5min，将细胞收集到管底。用冰预冷的pbs洗涤一遍后，将细胞轻柔重悬于70％乙醇中，-20℃固定过夜。
染色：将固定好的细胞离心1000g，5min。弃去乙醇后，用冰预冷的pbs洗涤一遍，离心，弃去pbs，加入pi染液至终浓度为50μg/ml，tritonx-100终浓度0.25％(体积比)以及终浓度为100μg/ml的rnase。
室温避光作用30min左右，上机检测。
4、细胞迁移实验
收集细胞：按照常规方法消化细胞后，无血清培养基洗涤两遍，用1ml无血清的培养基重悬细胞并进行细胞计数。
transwell下室加入600μl含10％fbs的dmem培养液，上室加200μldmem重悬的细胞(8×104～10×104个/well)，注意：滴加前吹打混匀细胞悬液，在小室上方悬空逐滴加入小室，另外保证小室膜与液体接触面无气泡。37℃，5％co2培养12～24h。
小心取出小室，吸去小室上层的液体，用棉签蘸取pbs后，擦洗小室上层5次，
注意不要太用力，以防使聚碳酸酯膜变形，用冰预冷的甲醇室温固定20min。
染色：取0.5％结晶紫染色液加入24孔板中，每孔600μl。将固定后的小室从甲醇中取出，用棉签小心轻柔擦拭小室上层，然后将其放入结晶紫染色液中染色10分钟，取出小室，用流水轻柔冲洗小室数次，用棉签小心擦拭小室上层的未冲洗干净的染色液和未擦拭干净的细胞后，空气干燥。
置膜于载玻片上，膜底面朝上，镜下随机选取5个视野拍照并计数。
5、细胞侵袭实验
细胞侵袭实验使用的是chambermarigelinvasion24well,bdbiocoat。
枪头，离心管，matrigel和transwell小室，置于4℃过夜预冷。
次日，将matrigel用无血清的dmem培养液1:8稀释后，25μl/well加入到小室内，室温固化一小时，弃稀释液后，用37℃预热的dmem培养液清洗两次后，供侵袭实验使用。
后续步骤同迁移实验。
6、裸鼠皮下成瘤实验
本研究中的实验动物选用balb/ca-nu无特定病原体级的雌性裸鼠，从北京华阜康生物科技股份有限公司购买。无特定病原体是指裸鼠机体内无特定的病原微生物和寄生虫存在，但是允许存在非特定的微生物和寄生虫。balb/ca-nu裸鼠是由crj(charlesriverjapan)公司通过对balb/cabon-nu和balb/canncrj-nu进行交配和会交得到该品系的小鼠，主要特征是全身无毛，发育迟缓，自身抵抗力低下，尤以雌性小鼠抵抗力更低，容易发生严重的致命性感染，胸腺先天性缺失，为第11号染色体的隐性遗传，t细胞免疫缺陷，但是b细胞免疫正常，天生具有较高的nk细胞(自然杀伤细胞)活力，无接触敏感性，无移植排斥反应。
本研究使用balb/ca-nu裸鼠，4-5周龄，体重在16g至18g之间，全部为雌性，饲养于中国医学科学院肿瘤医院动物实验中心。在恒定温度25℃至27℃之间，恒定湿度45％至50％，新鲜除菌过滤空气，除尘除菌的无特殊病原菌饲养室条件下进行饲养。将动物放入经消毒的有机玻璃饲养盒中，每个饲养盒内饲养5只裸鼠，然后再将饲养盒编号排放在超净生物层流架上，经过高压灭菌处理的水和饲料供裸鼠自由摄取，每隔3天更换经过高压消毒的饲料和垫料，饲养笼具以及饮水瓶每三天要经过紫外线消毒处理一次，每次处理饲料及饲养笼具时要确保严格遵守无菌操作。实验动物要在动物饲养房内经过7天的适应期再进行肿瘤细胞的接种。
在裸鼠进行适应实验环境的同时，体外扩增过表达hela稳转细胞系，以及对照组细胞。
当细胞在培养皿中的融合度达到80-90％以上时，使用胰酶消化细胞，使用全培养基制成细胞悬液，800转/分，离心3分钟，弃去上清，然后使用无菌的pbs溶液重悬洗涤细胞，800转/分，离心3分钟，弃去上清，再次使用pbs缓冲液制备单细胞悬液，使用细胞计数仪使细胞悬液的浓度达到2.5×107个/ml，将计数完成后的细胞悬液放置在冰上保存，准备给裸鼠皮下注射种植肿瘤细胞。
实验前，首先给实验动物使用耳钉进行编号，做好分组记录，避免裸鼠在注射成瘤时发生意外死亡。
以容量为1ml的皮试针作为注射用针，抽吸细胞悬液之前充分混匀细胞，然后吸取0.5ml到注射器管中，排出针头处的气泡，用针头轻轻钝性剥离腋下皮肤，将细胞集中注射到小鼠背部后上方位置，并缓慢推注100μl，使细胞悬液集中到特定的成瘤部位。
定期观察小鼠的生活状态以及成瘤情况。
在接种25天后引颈法处死实验动物，处死动物之后小心完整剥离出皮下瘤组织，用电子游标卡尺测量成瘤部位的长径宽径，以1/2(长径×宽径×宽径)计算瘤的体积。pbs缓冲液清洗组织上的血迹，拍照后，将组织浸入福尔马林固定以备石蜡包埋。
此外，在具体实施例中的对比试验中，除了各组应有的区别外，其他试验条件均保证一致，确保实验结果的可对比性；统计方法采用ibmspssstatisticsv20_32bit软件进行分析。分析连续变量时，二组检验结果间采用t检验(student'sttest)，三组检验结果间采用单因素方差分析非连续变量时，采用chi-square检验。p<0.05被认为具有统计学意义。realtimepcr实验结果使用配对样本t检验、非配对样本t检验、mann-whimey检验方法、spearman秩和相关分析等进行统计分析。采用graphpadprism6.0和photoshopc5进行实验结果绘图。
以下就本发明所提供的长链非编码rnaslc25a25-as1的应用做进一步说明。
实施例1：slc25a25-as1在宫颈癌患者及宫颈上皮样瘤变(cin)患者血清中的表达
本发明检测了slc25a25-as1在76例宫颈癌患者、67例宫颈上皮样瘤变患者与76例健康对照者外周血中的表达情况(血清提供者的人口学资料见表1)。研究结果发现，血清中slc25a25-as1含量呈现从健康对照者-宫颈上皮样瘤变患者-宫颈癌患者梯度降低的趋势(图1)。
表1健康对照、cin及宫颈癌患者人口统计学资料
实施例2：slc25a25-as1抑制宫颈癌细胞系hela的增殖能力
为了研究slc25a25-as1对细胞增殖的影响，本发明使用mtt比色法检测了前述稳转细胞系的增殖能力。实验结果显示，上调表达slc25a25-as1明显降低了hela细胞的增殖能力(图2)。
实施例3：slc25a25-as1对宫颈癌细胞系hela集落形成的影响
为了反映单个细胞的增殖能力，本发明又进行了平板克隆形成实验。在孔板中种植很少的细胞使之成为单个细胞，能形成可见克隆的细胞必为贴壁且有增殖能力的细胞。实验结果显示，与对照组细胞相比较，上调表达slc25a25-as1显著抑制宫颈癌细胞hela的集落形成(图3)。该结果提示slc25a25-as1对单个细胞增殖具有显著抑制的作用。
实施例4：过表达slc25a25-as1抑制宫颈癌细胞系hela细胞周期进程
前述mtt与平板克隆实验都证明，过表达slc25a25-as1能够抑制肿瘤细胞的恶性增殖。为研究过表达slc25a25-as1抑制增殖的原因，本发明将slc25a25-as1稳定高表达和对照组细胞系扩大培养后，胰酶消化并收取细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期变化情况(图4)。实验结果显示，与对照组细胞相比较，上调表达slc25a25-as1导致处于g0/g1期的细胞比例显著增加，g0/g1期细胞比例由51.4％上升至59.3％，处于s期的细胞比例则减少，由16.7％减少至15.8％，处于g2/m期的细胞比例也显著减少，由31.8％减少至24.8％。这些研究结果提示，高表达slc25a25-as1引起hela细胞发生g0/g1期阻滞，导致细胞不能正常通过细胞周期。数据经t检验均具有统计学意义(p<0.05)。
实施例5：过表达slc25a25-as1对宫颈癌细胞顺铂化疗耐受情况的影响
在本发明前期的研究中，对宫颈癌细胞hela进行顺铂处理12h，对照组无药物处理。提取rna后，利用realtimepcr检测slc25a25-as1表达变化情况。结果显示，经过顺铂处理的hela细胞中slc25a25-as1的表达水平相比对照组显著下调，表明slc25a25-as1在肿瘤中的表达下降可能与化疗耐受有关。
由于上述结果显示slc25a25-as1在耐药的hela细胞中表达下降，这暗示slc25a25-as1可能与顺铂耐受情况相关。为此，本发明进一步在slc25a25-as1过表达细胞中检测了其对顺铂的反应情况。采用mtt检测法，实验组加入适量的顺铂，对照组加入等体积的dmso，12小时和24小时后分别检测od值，并计算存活细胞的比例(实验组od值/对照组od值)。结果显示，在slc25a25-as1过表达后，化疗药物顺铂的杀伤作用显著增强(图5)。
实施例6：过表达slc25a25-as1抑制hela的迁移能力
本发明采用了transwell实验来检测slc25a25-as1过表达后对hela细胞系迁移能力的影响。检测细胞迁移能力常用方法有划痕愈合法和transwell小室法等。transwell实验利用血清诱导的方式，使无血清培养基中的细胞穿过transwell小室膜上的微孔，到达膜下层的富血清培养基中，利用穿过微孔膜的细胞数目来比较细胞的运动能力。transwell这一方法较划痕愈合法更为准确，也更易进行数据分析。本发明将对照plvx-purovector与过表达plvx-puroslc25a25-as1稳转hela细胞系，进行胰酶消化并计数，分别接种8×104个/well于transwell小室，18h后固定染色，显微镜下观察小室下层穿过的细胞，随机选取5个不同的视野进行拍照并计数统计。肿瘤细胞从上室穿过8μm微孔进入下层小室的能力反应了细胞的体外迁移能力。结果显示，plvx-purovector细胞迁移至膜下层的细胞数为140.0±10.0个，而plvx-puroslc25a25-as1细胞迁移至膜下层的细胞数为27.0±3.0个，在过表达slc25a25-as1的状态下，hela细胞的迁移能力降低了5.2倍，t检验显示，该差异具有统计学意义(p＝0.0084)(图6)。该结果说明，在宫颈癌细胞系hela中过表达slc25a25-as1基因抑制了细胞的迁移能力。
实施例7：过表达slc25a25-as1抑制hela的侵袭能力
本发明利用transwell小室法检测slc25a25-as1对细胞侵袭能力的影响。matrigel是从富含胞外基质蛋白的ehs小鼠肿瘤中提取的基底膜基质，主要成份包括层粘连蛋白、iv型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等。在一定条件下，matrigel可聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的组成、结构、物理特性和功能。在transwell小杯上层铺有一定浓度的matrigel，细胞经过分泌蛋白水解酶，分解基底膜，才能穿过微孔进入下室。这一过程反映了细胞的体外侵袭能力。结果显示，plvx-purovector侵袭至下层的细胞个数为157.5±4.5个，细胞plvx-puroslc25a25-as1侵袭至下层的个数分别为91.5±3.5个。过表达slc25a25-as1后，hela细胞的侵袭能力降低了1.7倍，t检验显示p＝0.0074，该差异具有统计学意义。该结果显示，过表达slc25a25-as1基因抑制了hela细胞的侵袭能力(图7)。
实施例8：过表达slc25a25-as1抑制hela在裸鼠体内的成瘤能力
为了研究slc25a25-as1过表达对裸鼠移植瘤生长的影响,本发明利用plvx-purovector与plvx-puroslc25a25-as1稳转hela细胞系构建裸鼠移植瘤模型，25天后采用引颈处死法处死动物，取肿瘤组织拍照并称重，测量皮下瘤长径和短径两次，以公式v＝1/2×(长径×短径×短径)计算瘤体积。实验结果显示，在注射plvx-purovector的对照组中，肿瘤的体积为498.9±101.3mm3，而注射plvx-puroslc25a25-as1的实验组中，肿瘤体积为127.7±36.43mm3，明显小于对照组(p＝0.017)。注射plvx-purovector的对照组中，肿瘤的重量为334.0±69.87mg，而注射plvx-puroslc25a25-as1的实验组中，肿瘤重量为127.1±28.00mg，轻于对照组(p＝0.0413)。此结果说明，与空过表达载体对照组相比，上调表达slc25a25-as1能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长，与体外实验结果相一致(图8)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110>遵义医学院附属医院
中国医学科学院肿瘤医院
<120>长链非编码rnaslc25a25-as1的应用
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>3842
<212>dna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>1
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taatttttgtatttttagtagagatggggtttcaccttgttggccaggctggtctcgaac3600
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tgatgggtgtctggactgtttccagtttttggctgttacaaatgaagcctctgtgagcca3840
cg3842