本发明涉及植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种铁皮石斛多糖的提取工艺。
【背景技术】
铁皮石斛是我国传统名贵中草药，已有2000多年的药用历史，其主要化学成分包括生物碱类、多糖类、多酚类等，其中多糖是铁皮石斛中最有效的成分之一，药理研究表面，铁皮石斛多糖具有较强的抗衰老、抗氧化、抗肿瘤和增强机体免疫力等药理活性。随着近年来人们保健意识的增强，铁皮石斛多糖的需求量在不断增加，市场需求量旺盛，供不应求，需进一步改进铁皮石斛多糖提取技术，增加提取量。目前铁皮石斛多糖提取存在含蛋白质、色素等杂质较多，纯度低的问题，过多杂质会影响其生物活性，使品质降低。且现阶段去除色素主要使用活性炭进行，活性炭虽然吸附效果好，但活性炭在吸附色素的同时也会吸附部分多糖，导致多糖成分受损，提取率变低。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种铁皮石斛多糖的提取工艺，该方法通过优化提取方法，有效提高了铁皮石斛多糖的提取率和纯度，并增强了生物活性。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种铁皮石斛多糖的提取工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜铁皮石斛洗净，冷冻干燥，粉碎，过40-60目筛，加入石油醚，于60℃-90℃下提取至无色，过滤，挥干溶剂，得药渣，备用；
(2)向上述药渣中加入3-5重量倍的乙醇，静置提取5-7h，过滤，挥干滤渣上的溶剂后，加蒸馏水回流提取2-3次，过滤，将滤液减压浓缩至原体积的1/3，得多糖原液，备用；
(3)向上述多糖原液中加入0.05-0.1％的蛋白质水解酶，于35℃-40℃下水浴酶解1-2h，得酶解液，将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀，振摇20-30min，离心，去除凝胶物后，加入明胶，过滤，将滤液浓缩、干燥，即得。
进一步地，步骤(1)中，所述冷冻干燥的温度为－30℃～－20℃。
进一步地，步骤(1)中，所述石油醚的加入量为所述粉碎后铁皮石斛重量的3-6倍。
进一步地，步骤(2)中，所述乙醇的体积浓度为60-70％。
进一步地，步骤(3)中，所述蛋白质水解酶为木瓜蛋白酶或链霉蛋白酶。
进一步地，步骤(3)中，所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的1-3％。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明通过优化提取方法，有效提高了铁皮石斛多糖的提取率和纯度，并增强了生物活性。经试验，使用本发明方法提取率高达31.95％-33.91％，多糖含量为79.8％-82.4％，2mg/ml浓度下的吸光度为1.86-1.98。采用酶解法结合明胶吸附来去除杂质，酶解可去除多糖中的蛋白质，而明胶可结合色素和其它酶解后的杂质，进而提高了纯度，同时，明胶不会吸附多糖，可防止纯化中多糖的损失，提高了提取率。
【具体实施方式】
以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明。
实施例1
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜铁皮石斛洗净，于－30℃下冷冻干燥，粉碎，过40目筛，加入3重量倍的石油醚，于60℃下提取至无色，过滤，挥干溶剂，得药渣，备用。
(2)向上述药渣中加入3重量倍的体积浓度为60％的乙醇，静置提取5h，过滤，挥干滤渣上的溶剂后，加蒸馏水回流提取2次，过滤，将滤液减压浓缩至原体积的1/3，得多糖原液，备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.05％的木瓜蛋白酶，于35℃下水浴酶解1h，得酶解液，将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀，振摇20min，离心，去除凝胶物后，加入明胶，过滤，将滤液浓缩、干燥，即得；所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的1％。
实施例2
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜铁皮石斛洗净，于－20℃下冷冻干燥，粉碎，过60目筛，加入6重量倍的石油醚，于90℃下提取至无色，过滤，挥干溶剂，得药渣，备用。
(2)向上述药渣中加入5重量倍的体积浓度为70％的乙醇，静置提取7h，过滤，挥干滤渣上的溶剂后，加蒸馏水回流提取3次，过滤，将滤液减压浓缩至原体积的1/3，得多糖原液，备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.1％的链霉蛋白酶，于40℃下水浴酶解2h，得酶解液，将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀，振摇30min，离心，去除凝胶物后，加入明胶，过滤，将滤液浓缩、干燥，即得；所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的3％。
实施例3
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜铁皮石斛洗净，于－25℃下冷冻干燥，粉碎，过50目筛，加入5重量倍的石油醚，于70℃下提取至无色，过滤，挥干溶剂，得药渣，备用。
(2)向上述药渣中加入4重量倍的体积浓度为65％的乙醇，静置提取6h，过滤，挥干滤渣上的溶剂后，加蒸馏水回流提取3次，过滤，将滤液减压浓缩至原体积的1/3，得多糖原液，备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.06％的木瓜蛋白酶，于38℃下水浴酶解1.5h，得酶解液，将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀，振摇25min，离心，去除凝胶物后，加入明胶，过滤，将滤液浓缩、干燥，即得；所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的2％。
实施例4
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜铁皮石斛洗净，于－22℃下冷冻干燥，粉碎，过60目筛，加入4重量倍的石油醚，于80℃下提取至无色，过滤，挥干溶剂，得药渣，备用。
(2)向上述药渣中加入4重量倍的体积浓度为69％的乙醇，静置提取6h，过滤，挥干滤渣上的溶剂后，加蒸馏水回流提取2次，过滤，将滤液减压浓缩至原体积的1/3，得多糖原液，备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.09％的链霉蛋白酶，于38℃下水浴酶解1.5h，得酶解液，将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀，振摇25min，离心，去除凝胶物后，加入明胶，过滤，将滤液浓缩、干燥，即得；所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的2.5％。
对比实验：
组1、组2、组3、组4分别用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的方法提取多糖；
对比组1：步骤(3)未用酶处理，而是直接加入氯仿、正丁醇振摇，其他步骤均与实施例3相同；
对比组2：步骤(3)只用酶处理，未加入氯仿、正丁醇振摇，其他步骤均与实施例3相同；
对比组3：步骤(3)用去除凝胶物后滤液重量的0.1-0.5％活性炭代替明胶，其他步骤均与实施例3相同。
统计各组多糖提取率，并采用高效凝胶渗透色谱法分别对各组石斛多糖的均一性进行鉴定；通过测定吸光度判断还原力来判定各组的生物活性。结果为：
(1)组1、组2、组3、组4中多糖提取率分别为31.95％、32.72％、33.91％、31.98％，对比组1提取率为22.3％，对比组2提取率为24.6％，对比组3提取率为20.1％，因此，本发明提取方法提高了多糖提取率。
(2)色谱法结果为：组1、组2、组3、组4多糖含量分别为79.8％、81.0％、82.4％、79.9％，对比组1多糖含量为50.8％，对比组2多糖含量为48.9％，对比组3多糖含量为42.3％，因此，本发明提取方法多糖损失少，纯度较高。
(3)吸光度测定结果为：在多糖浓度均为2mg/ml时，组1、组2、组3、组4的吸光度分别为1.86、1.89、1.98、1.87，对比组1的吸光度为0.93，对比组2的吸光度为1.12，对比组3的吸光度为0.78，因此，本发明提取方法可提高多糖生物活性(吸光度越高，还原力越强，抗氧化能力越强，生物活性越强)。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。