本发明属于化学药物领域，特别的涉及塞来昔布新杂质及其药物组合物。
背景技术：
塞来昔布（celecoxib）是1,5-二芳基取代吡唑类化合物，化学名为4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-1-基]苯磺酰胺（式1），商品名为“西乐葆”（celebrex），由美国g.d.希尔公司开发，于1998年12月31日在美国上市。作为第一个选择性环氧合酶-2（cox-2）抑制剂，塞来昔布可用于风湿性关节炎、骨关节炎及这些疾病引起的疼痛治疗，相对于传统非选择性的非甾体抗炎药，塞来昔布不仅镇痛疗效显著，能有效减轻关节触痛、疼痛和关节肿胀，而且引起上消化道并发症的几率大大降低，具有优越的胃肠道安全性。塞来昔布作为治疗类风湿性关节炎等引起的疼痛的药物，需要长期服用，所以安全性对于本品的研究非常重要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种安全性更高的塞来昔布药物组合物。
本发明一方面提供了塞来昔布的新杂质，即杂质l、杂质w1、以及杂质w2，并证明杂质l、杂质w1、杂质w2为基因毒性杂质。
杂质l的结构如下所示：
杂质l是塞来昔布的过氧化降解产物，属于降解杂质。
杂质w2的结构如下所示：
杂质w2是工艺降解杂质，在塞来昔布的合成过程中产生，塞来昔布的合成过程如下：
在上述反应过程中，第一步反应需要加入大量乙醇淬灭过量氢化钠，并在淬灭完毕后，用盐酸调节ph值至2-4方可继续下一步的反应。所以该反应过程中存在盐酸和乙醇，而成品塞来昔布在盐酸的作用下，会与乙醇发生胺酯交换，生成杂质w2。同理，杂质w1为塞来昔布与甲醇发生胺酯交换而产生的相应的甲酯工艺杂质，结构如下所示：
本发明另一方面还提供了一种含有塞来昔布的药物组合物，其中含有塞来昔布的含量不低于98%，优选的不低于99%，更优选的不低于99.5%。
本发明还提供了一种含有塞来昔布的药物组合物，其中含有塞来昔布杂质l含量不高于3.75ppm、不高于3.0ppm、不高于2.5ppm、不高于2.0ppm、不高于1.5ppm、或不高于1.0ppm。
本发明还提供了一种含有塞来昔布的药物组合物，其中含有塞来昔布杂质w1的含量不高于3.75ppm、不高于3.0ppm、不高于2.5ppm、不高于2.0ppm、不高于1.5ppm、或不高于1.0ppm。
本发明还提供了一种含有塞来昔布的药物组合物，其中含有塞来昔布杂质w2的含量不高于3.75ppm、不高于3.0ppm、不高于2.5ppm、不高于2.0ppm、不高于1.5ppm、或不高于1.0ppm。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
（1）首次发现了塞来昔布的新杂质，并证明其是对人体有害的基因毒性杂质；
（2）对上述杂质规定了限度并进行了控制；
（3）有效解决现有技术对塞来昔布基因毒性杂质的控制不足的问题、提高了塞来昔布产品的安全性。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，本发明实施例仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1塞来昔布杂质l的检测方法
采用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱型号为lc-dp），检测波长为249nm；流速为1.5ml/min；柱温为60℃；流动相如下：
流动相a为：水-乙醇=73:27；
流动相b为：水-乙腈=30:70；
梯度洗脱程序如下：
表1梯度洗脱程序
测定法：取本品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml含80.0mg杂质l（以干燥品计）的溶液。精密量取15μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算。
实施例2杂质w1的检测方法
采用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱型号为lc-dp），检测波长为215nm；流速为1.5ml/min；柱温为60℃；流动相配制过程如下：
（1）0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲溶液：0.02mol/l磷酸二氢钾溶液适量，用磷酸调节ph值至3.0±0.2；
（2）有机相：按体积比40:3量取甲醇:乙腈，混匀，作为有机相；
（3）将（1）中的0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲溶液与（2）中的有机相按体积比62:38的比例混匀，作为流动相。
测定法：取本品适量，精密称定，加75%甲醇溶解并定量稀释制成每1ml含80.0mg杂质w1（以干燥品计）的溶液。精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算。
实施例3杂质w2的检测方法
采用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱型号为lc-dp），检测波长为215nm；流速为1.5ml/min；柱温为60℃；流动相配制过程如下：
（1）0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲溶液：0.02mol/l磷酸二氢钾溶液适量，用磷酸调节ph值至3.0±0.2；
（2）有机相：按体积比40:3量取甲醇:乙腈，混匀，作为有机相；
（3）将（1）中的0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲溶液与（2）中的有机相按体积比62:38的比例混匀，作为流动相。
测定法：取本品适量，精密称定，加75%甲醇溶解并定量稀释制成每1ml含80.0mg杂质w2（以干燥品计）的溶液。精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算。
实施例4杂质的基因毒性评价
使用独立评估软件derek和sarah对杂质l、杂质w1及杂质w2进行基因毒性评价。
人用药物注册技术要求国际协调会（ich）发布ichm7《诱变性杂质评估和控制》中提出，应使用两种互补的预测细菌致突变性测定结果的（q）sar（结构-活性关系）方法进行计算毒理学评估。具体而言，这两种方法中，一种方法应该是基于专业性的，第二种方法应该是基于统计学的。sarahnexus软件是一种新的预测致突变性的统计学工具，dereknexus软件是一种专业性的毒性预测工具，两者独立预测后，将预测结果结合起来，即是满足ichm7指南的计算毒理学评估要求的方法。
杂质l、w1、w2在derek及sarah软件中预测结果如下：
表2derek及sarah软件预测结果
软件derek及sarah中显示杂质l、杂质w1、杂质w2应是基因毒性杂质，属于基因毒性杂质中的3类化合物。
根据ichm7中的要求，计算塞来昔布中基因毒性杂质的限度：将毒理学关注阈值(ttc)作为评价大部分遗传毒性杂质的阈值，塞来昔布是需要长期服药的药物，遗传毒性杂质摄入量最大限值为1.5μg/d。塞来昔布说明书中每日最大剂量为400mg，按此计算，杂质l、w1、w2的控制限度为3.75ppm(限度＝ttc/最大日用剂量)。
实施例5杂质l的制备
将塞来昔布、乙腈、30%过氧化氢长时间加热回流。反应完成后，用柱层析分离纯化杂质，再用液相制备进一步纯化得到纯度较高的杂质l。（[m+h]+=414.07）
实施例6杂质w1的制备
（1）塞来昔布磺酸杂质的制备
将氢化钠分散于甲基叔丁基醚中，控制温度加入对甲基苯乙酮、三氟乙酸乙酯及甲基叔丁基醚混合液，反应至薄层层析显示对甲基苯乙酮点消失。加入95%乙醇淬灭，加入1mhcl调节体系ph为2-4。静置、分层、分液，水相用甲基叔丁基醚萃取，合并有机相并用水洗，有机相减压浓缩得中间体1-对甲苯基-4,4,4,-三氟-1,3-丁二酮（式2）。将1-对甲苯基-4,4,4,-三氟-1,3-丁二酮、对肼基苯磺酸、乙醇加热回流数小时。反应体系用柱层析分离纯化得中间体塞来昔布磺酸杂质（式3）。
（2）杂质w1的制备
将塞来昔布磺酸杂质溶于原甲酸三乙酯，回流反应数小时。反应后体系柱层析分离纯化得塞来昔布磺酸甲酯杂质w1。（[m+h]+=397.08）
实施例7杂质w2的制备
（1）塞来昔布磺酸杂质的制备
将氢化钠分散于甲基叔丁基醚中，控制温度加入对甲基苯乙酮、三氟乙酸乙酯及甲基叔丁基醚混合液，反应至薄层层析显示对甲基苯乙酮点消失。加入95%乙醇淬灭，加入1mhcl调节体系ph为2-4。静置、分层、分液，水相用甲基叔丁基醚萃取，合并有机相并用水洗，有机相减压浓缩得1-对甲苯基-4,4,4,-三氟-1,3-丁二酮（式2）。将1-对甲苯基-4,4,4,-三氟-1,3-丁二酮、对肼基苯磺酸、乙醇加热回流数小时。反应体系用柱层析分离纯化得塞来昔布磺酸杂质（式3）。
（2）塞来昔布磺酰氯的制备
将塞来昔布磺酸杂质溶于二氯甲烷中，分批加入五氯化磷，室温下反应数小时。反应后，体系用乙酸乙酯、水萃取，水相用乙酸乙酯反萃，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠或无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩后得塞来昔布磺酰氯（式4）。
（3）杂质w2的制备
将塞来昔布磺酰氯溶于无水乙醇中，室温下过夜反应。反应体系用柱层析纯化分离得塞来昔布磺酸乙酯杂质w2。（[m+h]+=411.10）。