本发明属于生物工程技术领域，涉及一种细胞外基质的制备，具体用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究。
背景技术
将肿瘤细胞接种到鸡胚上进行异种移植建立移植瘤，是研究肿瘤较好的活体模型，其具有易于复制、操作简单、适用范围广等特点，可广泛应用于肿瘤血管生成机制及抗肿瘤药物筛选等研究。实验是通过收集指数生长期的肿瘤细胞，按照一定细胞浓度进行接种，在无菌环境下进行培养。鸡胚自身具有特异的生物环境，不同的肿瘤细胞对于鸡胚生物相容性不同，导致细胞移植成瘤率差异性较大。
目前肿瘤细胞悬液的溶剂多以pbs为主，具有盐平衡、可调整的适宜ph缓冲作用，但是要维持较佳的条件保证生物活性物质和增强生物相容性，就需要在细胞悬液中加入更多的成分，但是pbs为水溶性，稀释细胞液，降低了细胞的粘附作用，从而降低了细胞的生物活性物质。如何在保证细胞悬液生物相容性的同时，还可以提高细胞的粘附作用，这是我们研究的方向。
技术实现要素：
本发明针对上述现有技术中存在的问题提供一种细胞外基质，参入细胞悬液中，一方面提高细胞的粘附性和生物相容性，另一方面促进细胞的增殖，增强抗药性，提高肿瘤细胞移植的成功率。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种细胞外基质，所述细胞外基质由基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸组成。
优选地，所述多聚赖氨酸的浓度为0.01%~0.09%。
优选地，所述基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸的质量比依次为（1~10）:（1~8）:1。
优选地，所述基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸的质量比依次为（2~6）:（1~4）:1。
优选地，所述基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸的质量比依次为4:2:1。
一种细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：
s1、在低温无菌环境下，将称量好的基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸吸取到一个容器内混合；
s2、在混合溶液中加入交联剂；
s3、将混合溶液进行吹打混匀，反复吹打3~5次；
s4、混匀后的溶液在低温条件下静置超过0.5个小时。
优选地，在4℃无菌条件下，用移液器吸取基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸混合并进行吹打混匀；吹打混匀后静置在4℃条件下，不低于0.5小时即可使用。
优选地，所述交联剂为双环氧化合物、京尼平和原花青素的混合物，质量比为1：3：4，所述交联剂的添加量为总溶液的3%~5%。
一种细胞外基质的应用，所述细胞外基质应用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究。
优选地，所述细胞外基质与细胞悬液的混合比例为（v/v）=1:（1~5）。
优选地，所述细胞外基质与细胞悬液的混合比例为（v/v）=1:2。
本发明的有益效果：本发明所获得的细胞外基质，具有较好的生物相容性、可增强细胞的抗药性、可促进细胞增殖，尤其可增加细胞的粘附作用；应用于用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究，提高肿瘤细胞的移植成活率。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种细胞外基质，由基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸按照一定质量比组成，多聚赖氨酸的浓度为0.03%；基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸质量比依次为6:4:1。
制备方法：
s1、在4℃无菌环境下，按照重量比6:4:1依次称量基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸，将称量好的基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸用移吸器吸到一个容器内；
s2、在混合溶液中加入交联剂，交联剂为质量比为1：3：4的双环氧化合物、京尼平和原花青素的混合物，添加量为总溶液的3%；
s3、将混合溶液进行吹打混匀，反复吹打3次；
s4、混匀后的溶液在4℃条件下静置超过2个小时。
生物学性能：无菌检验(gb/t19973.2~2005)人工细胞外基质符合无菌规定；细胞毒性试验(gb/t16886.5~2003)检测人工细胞外基质的细胞毒性为0～1级；细菌内毒素试验(en455~3~2000)检测人工细胞外基质的细菌内毒素小于0.5eu/ml。ames试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性；染色体畸变试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性；微核试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性。致敏试验(gb/t16886.10~2005)检测无致敏反应；急性供毒试验(iso10993~11：2006)检测无急性生身毒性反应。
实施例2
一种细胞外基质，由基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸按照一定质量比组成，多聚赖氨酸的浓度为0.05%；基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸质量比依次为5:3:1。
制备方法：
s1、在4℃无菌环境下，按照重量比5:3:1依次称量基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸，将称量好的基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸用移吸器吸到一个容器内；
s2、在混合溶液中加入交联剂，交联剂为质量比为1：3：4的双环氧化合物、京尼平和原花青素的混合物，添加量为总溶液的4%；
s3、将混合溶液进行吹打混匀，反复吹打4次；
s4、混匀后的溶液在4℃条件下静置超过1个小时。
生物学性能：无菌检验(gb/t19973.2~2005)人工细胞外基质符合无菌规定；细胞毒性试验(gb/t16886.5~2003)检测人工细胞外基质的细胞毒性为0～1级；细菌内毒素试验(en455~3~2000)检测人工细胞外基质的细菌内毒素小于0.5eu/ml。ames试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性；染色体畸变试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性；微核试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性。致敏试验(gb/t16886.10~2005)检测无致敏反应；急性供毒试验(iso10993~11：2006)检测无急性生身毒性反应。
实施例3
一种细胞外基质，由基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸按照一定质量比组成，多聚赖氨酸的浓度为0.07%；基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸质量比依次为4:2:1。
制备方法：
s1、在4℃无菌环境下，按照重量比4:2:1依次称量基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸，将称量好的基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸用移吸器吸到一个容器内；
s2、在混合溶液中加入交联剂，交联剂为质量比为1：3：4的双环氧化合物、京尼平和原花青素的混合物，添加量为总溶液的5%；
s3、将混合溶液进行吹打混匀，反复吹打5次；
s4、混匀后的溶液在4℃条件下静置超过1个小时。
生物学性能：无菌检验(gb/t19973.2~2005)人工细胞外基质符合无菌规定；细胞毒性试验(gb/t16886.5~2003)检测人工细胞外基质的细胞毒性为0～1级；细菌内毒素试验(en455~3~2000)检测人工细胞外基质的细菌内毒素小于0.5eu/ml。ames试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性；染色体畸变试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性；微核试验(gb/t16886.3~2008)检测为阴性。致敏试验(gb/t16886.10~2005)检测无致敏反应；急性供毒试验(iso10993~11：2006)检测无急性生身毒性反应。
实施例1~3制备的细胞外基质的应用，所述细胞外基质应用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究；所述细胞外基质与细胞悬液的混合质量比为（v/v）=1:（1~5）；优选地，所述细胞外基质与细胞悬液的混合质量比为（v/v）=1:2，这个比例可以发挥出细胞外基质的促进作用，可增强细胞的抗药性、促进细胞增殖，增加细胞的粘附作用。
纤连蛋白属于一种糖蛋白的细胞外基质，在细胞粘附，生长和迁移的过程中起关键作用。有证据表明，纤连蛋白促进肺癌增殖和生存以及抗药性。多聚赖氨酸可改变器皿表面的电荷，促进细胞的粘附。基质胶含有上皮生长因子，可促进细胞增殖，层粘连蛋白促进细胞粘附。在室温状态下基质胶自发性聚合形成三维基质。上述成分均适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞移植研究等。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说~~~明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
最后需要说明的是，以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。