本发明涉及系列新化合物α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物制备及方法，一种表面改性的污泥炭催化剂在厚朴酚类化合物o-h插入反应，构筑c-o键中的应用。尤其是一系列可能具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、降糖降脂等作用的新化合物的制备及用途。
背景技术
以药用植物为主体发展起来的药物，在历史上对人类的防病治病、康复保健和生育繁衍起到了巨大的作用。天然药物来源途径甚多，大多来源于植物；据估计，全球约有40～50万种植物，但仅有极少部分进行过化学成分及其活性测试研究，我国也是植物资源最丰富的国家之一，因此充分挖掘和利用自然界结构多样性的化合物开发新的天然药物，促进我国医药科技高速前进，开拓新的市场，推动我国天然药物的发展，迎接医药经济全球化挑战具有重要的意义。药用植物是开发新药的重要来源，目前，全球批准的新药中，接近半数是天然药物，药物来自天然产物或其结构改造物。现今，世界上还有近60％的人口还完全依靠植物药来防治疾病。
上述中系列新化合物α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物，其联苯氧基母核源自厚朴酚类化合物，厚朴酚类化合物为药用植物厚朴中的有效成分，主要包括厚朴酚及和厚朴酚(厚朴酚及和厚朴酚互为同分异构体)；临床上已用于多种疾病的治疗；厚朴酚具有明显的持久的中枢性肌肉松弛，中枢神经抑制作用，抗炎、抗菌、抗病原微生物、抗溃疡、抗氧化、抗肿瘤抑制吗啡戒断反应等药理作用，用于治疗急性肠炎、细菌性或阿米巴痢疾、慢性胃炎等。和厚朴酚临床上主要用作消除胸腹满闷、镇静中枢神经、运动员肌肉松弛、抗真菌、抗溃疡等药。其中，在抗菌作用方面，厚朴酚和和厚朴酚对格兰氏阳性菌、耐酸性菌、丝状真菌有显著的抗菌活性，对变形链球菌有更加显著的抗菌作用，对葡萄球菌的抑制作用最强。厚朴酚可以抑制血小板聚集，和厚朴酚可以降低胆固醇，甚至新用途还可以拓展到精神类疾病(journalofneuroinflammation,2013,10:786；archpharmacalres,2009,32:1281)。基于上述背景研究，为选择α-(联苯氧基)，即厚朴酚及和厚朴酚为母核提供了重要依据，同时为本发明中所述该系列新化合物将来的药理活性研究指明方向，突出本发明将来潜在的应用价值。
卡宾插入o-h反应，是有机合成中构筑c-o键的重要方法之一，通常该类反应需要过渡金属的催化，常用的过渡金属催化剂包括：螺-双恶唑啉配体的铁络合物(naturechemistry,2010，2:546)、铜盐或铜络合物(journaloftheamericanchemicalsociety,2007,129:12616)和钯催化(angewandtechemie,internationaledition,2014,53:2978)等。此类催化剂虽然催化效率高，但价格高昂，且反应结束后处理繁琐，处理过程中易造成重金属污染。
本发明中所述厚朴酚类化合物o-h插入反应，所需催化剂为一种表面改性的污泥炭，由城市污水处理后的剩余污泥经特殊处理所得，来源广、成本低、易制备且环境友好。实现了废弃物的再利用，且同时缓解城市污水处理难的问题，符合绿色环保、绿色化学的宗旨。目前以表面改性的污泥炭为催化剂，通过形成金属卡宾及o-h插入反应，实现c-o键的构筑，一步反应生成α-(苯氧基)乙酸酯衍生物还未见相关文献报导，具有很好的创新性，同时为有机合成中催化剂的选择提供了一种新思路。
此外，本发明中α-重氮酯与厚朴酚或和厚朴酚卡宾插入o-h反应，构筑c-o键，增长碳链，合成大分子化合物，也属于天然活性产物结构修饰范畴，此方法和思路也是开发新药的一个重要途径。α-重氮酯与厚朴酚或和厚朴酚为起始原料，在上述条件下，一步反应生成α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物。所生成的系列衍生物均为新化合物，未见相关文献报告。所得系列衍生物与厚朴酚或和厚朴酚相比，看其某些药理作用能否增强或产生新的药理作用，这些都是未知不可预料的，也是现有技术中没有任何公开或报道的，新颖性足，同时也是本发明的价值所在。基于此，本申请发明人通过大量探索研究，得到了以下的
技术实现要素：
。
发明内容
本发明的目的在于基于上述技术背景而提供一种以改良污泥炭为催化剂制备系列α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物的新化合物及方法。合成系列不同结构α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物的新化合物，为新药来源提供更多的选择。同时所述系列化合物均为新化合物，其药理研究领域还处于空白，根据其具有厚朴酚或和厚朴酚母核结构，提示可能具有厚朴酚或和厚朴酚样作用，厚朴酚或和厚朴酚目前临床上已用于多种疾病的治疗。间接突出本发明将来可能具有的在制备药物方面的实际应用价值。目前药理活性还在测试阶段，本发明不做过多阐述。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
以高氯酸处理的改良污泥炭为催化剂，在1,2-二氯乙烷溶剂中，空气氛围下，进行分子间o-h插入反应(反应式1，2)。反应结束后按常规反应的分离纯化方法进行产物分离和表征，得到α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物3或4。所得系列α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物3或4均为新化合物，制备方法新，所得化合物结构新。
技术方案特征在于：
1.α-重氮酯类化合物1和化合物2(厚朴酚或和厚朴酚)为原料，其取代基为：
r1为甲基、乙基、酰基、含有氢、卤素、三氟甲基、甲基、甲氧基取代的芳基或苄基等；r2为甲基、乙基等烷基、烯丙基或芳基(芳基取代基为：三氟甲基、甲基、甲氧基、卤素：f、cl、br、i中一种或几种)。
2.催化剂为盐酸、硫酸、硝酸、高氯酸、磷酸、醋酸、过氧化氢处理的污泥炭中的一种，催化剂的用量为α-重氮酯1投料量质量比为0.5-2.0，最佳质量比为0.5；
3.反应溶剂为二氯甲烷、乙腈、1,2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、丙酮、n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、甲苯、1,4-二氧六环中的一种或几种的混合溶剂；其中，非质子性极性溶剂1,2-二氯乙烷，对原料溶解性好、沸点低、易回收，反应效果最佳。
4.α-重氮酯1生成3或4的反应中α-重氮酯1与化合物2(厚朴酚或和厚朴酚)的优选摩尔比为1:1.4。
5.α-重氮酯1生成3或4的反应中最佳反应温度为70℃。
6.α-重氮酯1生成3或4的反应中最佳反应时间24小时。
7.α-重氮酯1生成3或4的反应中α-重氮酯于反应溶剂中的最佳摩尔浓度0.1m
8.α-重氮酯1生成3或4的反应中最佳催化剂为经高氯酸处理的污泥炭，以sw-hclo4表示(注：经其它酸处理的污泥炭采用类似的表示方法)。改良污泥炭催化剂为盐酸、硫酸、硝酸、高氯酸、磷酸、醋酸、过氧化氢处理的污泥炭中的一种或几种；
催化剂的制备：取生活污水污泥，马弗炉中80℃-200℃干燥至恒重(最优温度105℃)，并在流速为200-1000ml/min的高纯氮(最佳流速500ml/min)和加热速率为1-10℃/min(最佳加热速率3℃/min)的条件下加热至400-800℃(最佳温度600℃)，持续碳化2-8h(最佳碳化时间4h)，待炉内温度降至室温，便可得到污水污泥衍生的炭质材料(sw)；
为了改变sw的表面活性，使用不同的酸来处理sw。在酸处理过程中，通过将碳化的sw与相同体积的hcl(浓度：10-50wt％，最佳浓度20.5wt％)、hclo4(浓度：10-70wt％，最佳浓度35.4wt％)、h2so4(浓度：10-80wt％，最佳浓度63.4wt％)、hno3(浓度：10-80wt％，最佳浓度40.5wt％)、h3po4(浓度：10-80wt％，最佳浓度50.3wt％)、hac(浓度：20-90wt％，最佳浓度60.4wt％)、h2o2(浓度：10-70wt％，最佳浓度40.5wt％)分别浸渍12-48小时(最优24小时)来制备不同酸处理的sws。然后，用去离子水分别洗涤sw-hcl、sw-hclo4、sw-h2so4、sw-hno3、sw-h3po4和sw-hac直至分别洗涤液的ph达到3-7(最优ph6-7)，sw-h2o2直至洗涤液的phh6-7，回收固体并在室温下干燥便可得到相应的酸处理的表面改性的污泥炭催化剂sw-hcl、sw-hclo4、sw-h2so4、sw-hno3、sw-h3po4、sw-hac和sw-h2o2)。
本发明具有以下优点：
1)该催化剂由城市污水处理后的剩余污泥制备所得，来源广、廉价易得、制备简单，易于大规模生产；用于有机合成反应，可以实现废弃物的再利用，符合绿色环保、绿色化学的宗旨。
2)该催化剂具有较大的比表面积，活性组分在其上具有良好的分散性，能够有效的促进反应发生；
3)利用污泥中含有的金属与表面负载的高氯酸作为活性组分，减少了活性组分的浸渍量；
4)利用该催化剂可以实现非均相催化，便于产物的分离纯化；
5)α-重氮酯1易制备，且具有结构多样性，可以用来合成不同类型和结构的α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物3或4，为新药来源提供了更多选择。
6)使用表面改性的污泥炭催化此类反应可以达到克级规模，具备工业化前景。
7)反应原料、溶剂均为市售产品，价格低廉；反应条件温和，收率良好，最高达85％。
8)在该方法下合成的系列α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物3或4均为新化合物，还未见相关文献报告；制备方法新，所得化合物结构性，创新性足。
总之，本发明利用表面改性的污泥炭催化剂，以α-重氮酯1和化合物2(厚朴酚或和厚朴酚)为起始原料，在加热条件下，空气氛围中，通过形成金属卡宾及o-h插入反应，一步生成α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物。制备方法新，所得化合物结构新，创新性足。催化剂来源广、成本低、易制备；原料廉价易得、反应条件温和、收率良好，且能达到克级规模，具备工业化前景，具有实际应用价值，同时实现废弃物的再利用，符合绿色环保、绿色化学的宗旨。
具体实施方式
催化剂的制备：取自中国大连污水处理厂的污泥，马弗炉中105℃干燥至恒重，并在流速为500ml/min的高纯氮和加热速率为3℃/min的条件下加热至600℃，持续碳化4小时，待炉内温度降至室温，便可得到污水污泥衍生的炭质材料(sw)；为了改变sw的表面活性，使用不同的酸来处理sw。在酸处理过程中，通过将碳化的sw与相同体积的hcl(20.5wt％)、hclo4(35.4wt％)、h2so4(63.4wt％)和hno3(40.5wt％)分别浸渍24小时来制备50ml不同酸处理的sws；然后，用去离子水分别洗涤sw-hcl、sw-hclo4、sw-h2so4和sw-hno3直至洗涤液的ph达到6-7，回收固体并在室温下干燥便可得到相应的酸处理的表面改性的污泥炭催化剂sw-hcl、sw-hclo4、sw-h2so4和sw-hno3。注：经其它酸处理的污泥炭催化剂的制备及表示方法同上。
本发明实施例公开了一种表面改性的污泥炭催化剂在卡宾插入o-h反应，构筑c-o键，一步反应生成α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物，底物适用范围广，可适用于多种不同官能团取代的α-重氮酯。
本发明的内容并不仅限于此，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们均被视为包括在本发明，同为本发明的保护范围。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明，实施例中的反应条件均基于上述发明中所述的最优反应条件。实施例中所用原料及试剂均为市售产品，所合成化合物收率计算公式为：实际反应生成量/理论反应生成量×100％。
实施例1(下述实施例中的催化剂参考权利要求4中催化剂的制备)
在室温条件下，依次称取对氯苯基重氮乙酸甲酯1a(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3a(168mg,收率75％)，目标产物经核磁共振谱和高分辨质谱确认。
实施例2(对比例：不同催化剂对比)
在室温条件下，依次称取对氯苯基重氮乙酸甲酯1a(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hcl(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3a(96mg,收率43％)，目标产物经核磁共振谱和高分辨质谱确认确认。
实施例3(对比例：不同催化剂对比)
在室温条件下，依次称取对氯苯基重氮乙酸甲酯1a(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、fecl3(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3a(101mg,收率45％)，目标产物经核磁共振谱和高分辨质谱确认。
注：通过实施例1、2、3的不同催化剂对比，实施例2、3的收率不及实施例1，突出了经高氯酸处理的污泥炭sw-hclo4的催化作用，优于经盐酸处理的污泥炭sw-hcl及金属催fecl3的催化作用，进一步阐明本发明选择sw-hclo4为最优催化剂的合理性。
实施例4(对比例：不同反应温度对比)
在室温条件下，依次称取对氯苯基重氮乙酸甲酯1a(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置40℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3a(78mg,收率35％)，目标产物经核磁共振谱和高分辨质谱确认。
实施例5(对比例：不同反应温度对比)
在室温条件下，依次称取对氯苯基重氮乙酸甲酯1a(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置85℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3a(150mg,收率67％)，目标产物经核磁共振谱和高分辨质谱确认。
注：通过实施例1、4、5的不同反应温度对比，实施例4、5的收率不及实施例1，突出了本发明选择最优反应温度为70℃的合理性。
实施例6
在室温条件下，依次称取邻氯苯基重氮乙酸甲酯1b(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到无色透明粘稠状的目标产物3b(161mg,收率72％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
实施例7
在室温条件下，依次称取苯基重氮乙酸烯丙酯1c(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应12小时，tlc监测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到无色透明粘稠状的目标产物3c(176mg,收率80％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
实施例8
在室温条件下，依次称取苯基重氮苯乙酸甲酯1d(0.5mmol)、厚朴酚2a(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3d(172mg,收率70％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
实施例9
在室温条件下，依次称取苯基重氮乙酸乙酯1e(0.5mmol)、厚朴酚2e(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到无色透明粘稠状的目标产物3e(184mg,收率86％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
实施例10
在室温条件下，依次称取乙基重氮乙酸乙酯1f(0.5mmol)、厚朴酚2f(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到无色透明粘稠状的目标产物3f(114mg,收率60％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
实施例11
在室温条件下，依次称取苯基重氮乙酸乙酯1e(0.5mmol)、和厚朴酚2b(0.70mmol)、sw-hclo4(50mg)于干燥洁净的25mlschlenk反应管中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷5ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应48小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝10:1)，得到无色透明粘稠状的目标产物4e(64mg,收率32％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
实施例12(克级规模放大反应)
在室温条件下，依次称取对氯苯基重氮乙酸甲酯1a(5mmol)、厚朴酚2a(7mmol)、sw-hclo4(500mg)于干燥洁净的250ml三口圆底烧瓶中，在空气氛围下，加入1,2-二氯乙烷50ml，在室温下搅拌2-5分钟，移置70℃的油浴磁力搅拌加热器中反应24小时，tlc检测原料已反应完全，停止反应，将反应液冷却至室温，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗至滤液无色，减压浓缩除去挥发性组份，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯，v/v＝5:1)，得到白色固体的目标产物3a(1.61g,收率72％)，目标产物经核磁共振谱和气相质谱联用色谱确认。
典型化合物表征数据
α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物(3a)，白色固体，1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40(d,j＝8.5hz,2h),7.28(dd,j＝15.4,4.3hz,2h),7.20–7.10(m,3h),6.99(t,j＝12.2hz,2h),6.83(d,j＝8.3hz,1h),6.06–5.91(m,2h),5.71(s,1h),5.09(ddd,j＝20.4,13.6,5.5hz,4h),3.74(s,3h),3.38(dd,j＝15.4,6.7hz,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ171.02,152.27,151.63,138.01,137.32,135.37,134.87,133.28,132.75,132.15,131.25,129.61,129.26,129.18(2c),128.69(2c),128.05,125.50,117.24,116.23(2c),115.63,111.79,53.43,39.54,39.47.
α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物(3e)，无色透明粘稠状物，1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.49(dd,j＝6.5,3.0hz,2h),7.40–7.28(m,3h),7.21–7.08(m,3h),7.03(d,j＝8.5hz,2h),6.86(d,j＝8.4hz,1h),6.13–5.79(m,2h),5.75(s,1h),5.36–4.87(m,4h),4.39–4.02(m,2h),3.38(dd,j＝15.4,6.7hz,4h),1.20(t,j＝7.1hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.93,152.47,151.80,138.06,137.43,134.48,134.27,133.27,132.02,131.26,129.48,129.26,129.12,128.91(2c),128.06,127.29(2c),125.79,117.40,116.12(2c),115.57,78.06,62.55,39.56,39.47,14.07.
药理活性测试，选择本发明α-重氮酯1e(苯基重氮乙酸乙酯)与厚朴酚反应产物3e，与和厚朴酚反应产物4e为受试样，通过与厚朴酚，和厚朴酚及阳性对照药对比，测试比较其药理活性。通过药理活性研究，进一步突出本发明专利的实际运用价值。
实施例13本发明部分化合物的抗菌效果实验
(一)实验材料、实验仪器、试剂
1、实验材料
菌株(临床分离耐药白色念珠球菌103、100、953和j28由长海医院菌种保存中心赠送)，所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(sda)划板活化，于30℃培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置sda斜面，用上述方法培养后于4℃保存以备用。
(1)培养液
rpmi1640液体培养液的配制：rpmi1640(gibcobrl)10g，nahco32.0g，吗啡啉丙磺酸(mops)(sigma)34.5g(0.165m)，加三蒸水900ml溶解，1nnaoh调ph至7.0(25℃)，三蒸水定容至1000ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装后于4℃保存备用。
(2)沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(sda)
蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，调整ph至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121℃，15min)后于4℃保存备用。
(3)yepd培养液
酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121℃，15min)后于4℃保存备用。
2试剂
青霉素注射液由大连辉瑞药业有限公司提供，厚朴酚，和厚朴酚市售(berberinechloride,bbr)由上海长海医院提供。二甲基亚砜(dimethylsulphoxide，dmso)中国医药集团上海化学试剂公司出品。
3实验仪器
multiskanmk3型酶标检测仪(芬兰labsystems产品)，隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)，mjx型智能霉菌培养箱(宁波江南仪器厂)thz－82a台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)；sw-ct-if型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)；倒置显微镜(amershampharmacia产品)；微量加样器(芬兰finnpette产品)；96孔细胞培养板(丹麦nunclon公司产品)
(二)实验方法
1、真菌悬液的配制
实验前，用接种圈从4℃保存的sda培养基上挑取各种白念珠菌少量，接种至1mlyepd培养液，于30℃，200rpm振荡培养，活化16h使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至1mlyepd培养液中，用上述方法再次活化16h后，用血细胞计数板计数，以rpmi1640培养液调整菌液浓度至1×103-5×103cfu/ml。
2、药敏反应板的制备
取无菌96孔板，于每排1号孔加rpmi1640液体培养基100μl作空白对照；3-12号孔各加新鲜配制的菌液100μl；2号孔分别加菌液160μl和受试化合物溶液40μl；12号孔不含药物，只加菌液100μl作阳性生长对照。2-11号孔进行倍比稀释，使各孔的最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/ml，各孔中dmso含量均低于1％。受试化合物均采用上述方法测试，每次配制药敏板的同时均制备一质控菌药敏板，各药敏板于30℃恒温箱培养。
3、最低抑菌浓度(mic)的判定
在30℃恒温箱中，念珠菌培养24h后用酶标分析仪于620nm测各孔od值。阳性对照孔的od值控制在0.2左右，与阳性对照孔比，以od值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为mic80(真菌生长80％被抑制时的药物浓度)。当药物的mic80值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计：mic80值高于最高浓度64μg/ml时，计为“>64μg/ml”；mic80值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125μg/ml”。上述实验均平行操作2到3次，当mic80值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为mic80值；当mic80值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。
实验结果表明：本发明化合物3e与和厚朴酚对该菌的抗菌效果相接近。说明本发明化合物3e，化合物4e对该菌具有一定的抗菌效果，但其效果不及厚朴酚或和厚朴酚。
通过上述实施例，已现有的最佳反应条件给出了α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物的制备方法，所得衍生物均为新化合物，反应条件温和，收率良好，具备工业化前景，且通过药理活性测试，表明所制备α-(联苯氧基)乙酸酯衍生物可能具有某些药理活性，进一步突出本发明专利的实际运用价值。
最后应当说明的时，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。