本发明涉及酶解技术领域，具体涉及一种降血糖植物活性肽及其制备方法。
背景技术
目前，糖尿病已成为继肿瘤、心血管疾病之后严重威胁人类健康的慢性病，是威胁人类健康的三大慢性疾病之一。糖尿病是一种内分泌代谢紊乱性疾病，临床以高血糖、葡萄糖耐量减低及胰岛素释放试验异常为主要标志。糖尿病分为i型糖尿病和ii型糖尿病，其中i型糖尿病多发于青少年，胰岛素分泌缺乏，依赖于胰岛素的体外供给，ii型糖尿病多发于中老年，病发原因不是由于胰岛素的缺乏，而是由于胰岛素受体不敏感，可利用药物及饮食控制血糖升高及并发症。
现有技术中，用于口服的降糖药主要包括磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类和α-葡萄糖苷酶抑制剂。磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类和α-葡萄糖苷酶抑制剂这几类药物同时具有导致低血糖、引起胃肠道不适(腹胀、腹泻、腹痛等)、导致肝肾损伤等副作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种降血糖植物活性肽及其制备方法，用于提供一种可长期服用，无毒副作用的降血糖产品。
为实现上述目的，本发明实施例第一方面提供了一种降血糖植物活性肽，所述降血糖植物活性肽的制备原料包括：9-10重量份的荞麦、5-6重量份山楂、1-2重量份胡萝卜、1-2重量份薏仁米、1-2重量份枸杞、1-2重量份山药。
在一种可能的实现方式中，所述荞麦为苦荞麦。
在一种可能的实现方式中，所述降血糖植物活性肽的制备原料为：10重量份的苦荞麦、6重量份山楂、2重量份胡萝卜、2重量份薏仁米、1重量份枸杞、1重量份山药。
在一种可能的实现方式中，所述降血糖植物活性肽用于抑制动物肠道内α-葡萄糖苷酶的活性。
在一种可能的实现方式中，所述降血糖植物活性肽为粉剂，所述粉剂以水冲服。
本发明实施例第二方面提供了一种如第一方面所述降血糖植物活性肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)将9-10重量份的荞麦、5-6重量份山楂、1-2重量份胡萝卜、1-2重量份薏仁米、1-2重量份枸杞、1-2重量份山药加入到100重量份水中，粉碎匀浆，得到第一浆液；
(2)将所述第一浆液进行超声波处理30-40分钟，得到第二浆液；
(3)加酶酶解第二浆液3小时，酶解期间，持续搅拌，得到第三浆液；
(4)将第三浆液依次过截留分子量为10万超滤膜和截留分子量为1万的超滤膜，将滤液进行干燥，得到所述降血糖植物活性肽。
在一种可能的实现方式中，所述步骤(1)还包括：在粉碎匀浆后，过120目筛，得到所述第一浆液，所述第一浆液的粒度≤125μm。
在一种可能的实现方式中，在所述步骤(2)中的超声波处理中，超声波的频率为40—45khz。
在一种可能的实现方式中，在所述步骤(3)加酶酶解第二浆液中，按每毫升第二浆液使用1000—1100u木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃-60℃、ph为6.5-7。
在一种可能的实现方式中，在所述步骤(4)中，将滤液进行干燥为将滤液进行冷冻干燥。
本发明实施例第三方面提供了第一方面所述的降血糖植物活性肽在制备降血糖药物的用途。
在一种可能的实现方式中，所述降血糖植物活性肽为粉剂，所述粉剂以水冲服。
本发明实施例提供的降血糖植物活性肽由药食同源的植物制备而成，长期食用无毒副作用；效果好，在体外实验中对α-葡萄糖苷酶的活性的抑制率在80％左右，可显著降低动物的血糖；本发明实施例提供的制备方法过程简单、易于实施，可用于工业化生产。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
在本实施例中介绍一种降血糖植物活性肽的制备方法，具体如下。
(1)将10重量份的苦荞麦、6重量份山楂、2重量份胡萝卜、2重量份薏仁米、1重量份枸杞、1重量份山药加入到100重量份水中，粉碎匀浆，过120目筛，得到第一浆液，所述第一浆液的粒度≤125μm。
其中，山楂为新鲜山楂；胡萝卜为去皮后的胡萝卜；山药为去皮后的山药；枸杞为市售的晾晒后的枸杞。
(2)将所述第一浆液进行超声波处理30分钟，得到第二浆液；其中，超声波处理所用的超声波的频率为40khz。
(3)加酶酶解第二浆液3小时，具体为，按每毫升第二浆液使用1100u木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃-60℃、ph为6.5-7；酶解期间，持续搅拌，得到第三浆液。
具体可以使用1.0mol/l的naoh溶液调节ph。
(4)将第三浆液依次过截留分子量为10万超滤膜和截留分子量为1万的超滤膜，将滤液进行冷冻干燥，得到降血糖植物活性肽。得到的降血糖植物活性肽为粉剂。
实施例2
在本实施例中介绍一种降血糖植物活性肽的制备方法，具体如下。
(1)将9重量份的苦荞麦、6重量份山楂、1重量份胡萝卜、1重量份薏仁米、1重量份枸杞、1重量份山药加入到100重量份水中，粉碎匀浆，过120目筛，得到第一浆液，所述第一浆液的粒度≤125μm。
其中，山楂为新鲜山楂；胡萝卜为去皮后的胡萝卜；山药为去皮后的山药；枸杞为市售的晾晒后的枸杞。
(2)将所述第一浆液进行超声波处理40分钟，得到第二浆液；其中，超声波处理所用的超声波的频率为45khz。
(3)加酶酶解第二浆液3小时，具体为，按每毫升第二浆液使用1000u木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃-60℃、ph为6.5-7；酶解期间，持续搅拌，得到第三浆液。
具体可以使用1.0mol/l的naoh溶液调节ph。
(4)将第三浆液依次过截留分子量为10万超滤膜和截留分子量为1万的超滤膜，将滤液进行冷冻干燥，得到降血糖植物活性肽。得到的降血糖植物活性肽为粉剂。
实施例3
在本实施例中介绍一种降血糖植物活性肽的制备方法，具体如下。
(1)将10重量份的苦荞麦、5重量份山楂、2重量份胡萝卜、2重量份薏仁米、2重量份枸杞、2重量份山药加入到100重量份水中，粉碎匀浆，过120目筛，得到第一浆液，所述第一浆液的粒度≤125μm。
其中，山楂为新鲜山楂；胡萝卜为去皮后的胡萝卜；山药为去皮后的山药；枸杞为市售的晾晒后的枸杞。
(2)将所述第一浆液进行超声波处理30分钟，得到第二浆液；其中，超声波处理所用的超声波的频率为45khz。
(3)加酶酶解第二浆液3小时，具体为，按每毫升第二浆液使用1000u木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃-60℃、ph为6.5-7；酶解期间，持续搅拌，得到第三浆液。
具体可以使用1.0mol/l的naoh溶液调节ph。
(4)将第三浆液依次过截留分子量为10万超滤膜和截留分子量为1万的超滤膜，将滤液进行冷冻干燥，得到降血糖植物活性肽。得到的降血糖植物活性肽为粉剂。
实施例4
在本实施例中介绍一种降血糖植物活性肽的制备方法，具体如下。
(1)将9重量份的苦荞麦、6重量份山楂、1重量份胡萝卜、1重量份薏仁米、2重量份枸杞、2重量份山药加入到100重量份水中，粉碎匀浆，过120目筛，得到第一浆液，所述第一浆液的粒度≤125μm。
其中，山楂为新鲜山楂；胡萝卜为去皮后的胡萝卜；山药为去皮后的山药；枸杞为市售的晾晒后的枸杞。
(2)将所述第一浆液进行超声波处理40分钟，得到第二浆液；其中，超声波处理所用的超声波的频率为45khz。
(3)加酶酶解第二浆液3小时，具体为，按每毫升第二浆液使用1100u木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃-60℃、ph为6.5-7；酶解期间，持续搅拌，得到第三浆液。
具体可以使用1.0mol/l的naoh溶液调节ph。
(4)将第三浆液依次过截留分子量为10万超滤膜和截留分子量为1万的超滤膜，将滤液进行冷冻干燥，得到所述降血糖植物活性肽。得到的降血糖植物活性肽为粉剂。
实施例5
在本实施例中介绍一种降血糖植物活性肽的制备方法，具体如下。
(1)将10重量份的苦荞麦、5重量份山楂、1重量份胡萝卜、2重量份薏仁米、1重量份枸杞、1重量份山药加入到100重量份水中，粉碎匀浆，过120目筛，得到第一浆液，所述第一浆液的粒度≤125μm。
其中，山楂为新鲜山楂；胡萝卜为去皮后的胡萝卜；山药为去皮后的山药；枸杞为市售的晾晒后的枸杞。
(2)将所述第一浆液进行超声波处理30分钟，得到第二浆液；其中，超声波处理所用的超声波的频率为45khz。
(3)加酶酶解第二浆液3小时，具体为，按每毫升第二浆液使用1100u木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃-60℃、ph为6.5-7；酶解期间，持续搅拌，得到第三浆液。
具体可以使用1.0mol/l的naoh溶液调节ph。
(4)将第三浆液依次过截留分子量为10万超滤膜和截留分子量为1万的超滤膜，将滤液进行冷冻干燥，得到所述降血糖植物活性肽。得到的降血糖植物活性肽为粉剂。
实施例6
在本实施例中，对实施例1-5提供的降血糖植物活性肽对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用进行研究，具体如下。
本实施例的实验设6个组：1个空白对照组，5个实施例测定组。5个实施例测定组分别为实施例1测定组，实施例2测定组，实施例3测定组，实施例4测定组，实施例5测定组。
本实施例采用的α-葡萄糖苷酶购自上海禾午生物科技有限公司，货号为r4044，10万u/g。其他试剂均为分析纯，水为超纯水，安捷伦1260高效液相色谱仪，上海精密科学仪器有限公司phs-2f型ph计，上海越平科学仪器有限公司fa电子天平，水浴锅，电炉等。
溶液制备：磷酸盐缓冲液(1l)：1mol/lk2hpo4497ml，1mol/lkh2po4503ml，缓冲液ph值6.8。将α-葡萄糖苷酶稀释至100u/ml。
配置浓度为2.5mg/ml的蔗糖溶液作为底物，将实施例1-5提供的降血糖植物活性肽制备成10mg/ml的溶液，进行试验。
空白对照组：100μl磷酸钾缓冲液加入100μl稀释后的α-葡萄糖苷酶稀释液，37℃保温10min，加入200μl底物后，37℃反应30min，放入沸水中5min终止反应，用hplc测定葡萄糖产量。
实施例测定组分别如下。
实施例1测定组：100μl实施例1制备的降血糖植物活性肽溶液中加入100μl稀释后的α-葡萄糖苷酶稀释液，37℃保温10min，加入200μl底物后，37℃反应30min，放入沸水中5min终止反应，用hplc测定葡萄糖产量。
实施例2测定组：100μl实施例2制备的降血糖植物活性肽溶液中加入100μl稀释后的α-葡萄糖苷酶稀释液，37℃保温10min，加入200μl底物后，37℃反应30min，放入沸水中5min终止反应，用hplc测定葡萄糖产量。
实施例3测定组：100μl实施例3制备的降血糖植物活性肽溶液中加入100μl稀释后的α-葡萄糖苷酶稀释液，37℃保温10min，加入200μl底物后，37℃反应30min，放入沸水中5min终止反应，用hplc测定葡萄糖产量。
实施例4测定组：100μl实施例4制备的降血糖植物活性肽溶液中加入100μl稀释后的α-葡萄糖苷酶稀释液，37℃保温10min，加入200μl底物后，37℃反应30min，放入沸水中5min终止反应，用hplc测定葡萄糖产量。
实施例5测定组：100μl实施例5制备的降血糖植物活性肽溶液中加入100μl稀释后的α-葡萄糖苷酶稀释液，37℃保温10min，加入200μl底物后，37℃反应30min，放入沸水中5min终止反应，用hplc测定葡萄糖产量。
α-葡萄糖苷酶活性的抑制率＝(空白对照组葡萄糖产量-实施例测定组葡萄糖产量)/空白对照组葡萄糖产量。
实验结果如表1所示。
表1
从表1中看出，本发明实施例提供的降血糖植物活性肽可明显抑制α-葡萄糖苷酶活性。
本发明实施例提供的降血糖植物活性肽有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性，因此可应用于制备具有降血糖作用药物，或者其他产品，通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性，来减少人体或动物体对蔗糖的吸收，进而达到降低血糖的效果。
实施例7
在本实施例中，对实施例1-5提供的降血糖植物活性肽的降血糖功效进行研究，具体如下。
选取成年雄性小鼠150只进行造模。造模方法为，小鼠禁食24h后给予四氧嘧啶(120mg/kgbw)1次腹腔注射造模。5d后禁食4h，眼内眦取血测血糖，若血糖值为10～25mmol/l，则可认为造高血糖模型成功。135只小鼠造模成功，选取其中120只进行试验。
将120只小鼠分成，按禁食4h血糖水平进行分层随机分成六组，每组20只，分别为空白对照组、实施例1治疗组，实施例2治疗组，实施例3治疗组，实施例4治疗组，实施例5治疗组。
实施例1治疗组，实施例2治疗组，实施例3治疗组，实施例4治疗组，实施例5治疗组分别喂服实施例1提供的降血糖植物活性肽、实施例2提供的降血糖植物活性肽、实施例3提供的降血糖植物活性肽、实施例4提供的降血糖植物活性肽、实施例5提供的降血糖植物活性肽。喂服方式为每g体重灌胃0.5mg降血糖植物活性肽，可按照1mg用0.04ml水灌胃。空白对照组喂服同样体积水。
连续喂服30天，每天三次。30天后采血测空腹血糖值(禁食、采血等同试验前)，比较各组动物空腹血糖值及血糖下降百分率。血糖下降百分率＝(实验前血糖值－实验后血糖值)/实验前血糖值×100％。结果如表2所示。
表2
本实施例中的试验前是指小鼠造模后，但未进行喂服降血糖植物活性肽的阶段。
从表2中可得出，本发明实施例提供的降血糖植物活性肽可显著降低高血糖模型小鼠的血糖。
本发明实施例提供的降血糖植物活性肽由药食同源的植物制备而成，长期食用无毒副作用；效果好，在体外实验中对α-葡萄糖苷酶的活性的抑制率在80％左右，可显著降低动物的血糖；本发明实施例提供的制备方法过程简单、易于实施，可用于工业化生产。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。