一种蛋白纯化系统及方法与流程

本发明涉及蛋白纯化领域，尤其是涉及一种蛋白纯化系统及方法。

背景技术：

近年来，生物制药产业在我国蓬勃发展。生物药所具有的低毒副作用、高特异性治疗功效为我国广大的患者带来了福音。尽管如此，生物制药的制造工艺还比较落后，生产率较低。其中一个限制生产率的因素是批次式的生产方式浪费了很多有效的生产时间。与之相对比，连续式生产可以大大提高生产效率。由于采用新的生产工艺往往会带来风险，并增加了固定资产投资。因此，在现有的生产设施和生产方式的基础上，进行改造，以达到连续流式的生产，可以降低风险，减少公司的成本。同时，也更容易获得国家法规的认可。

在长时间的连续流式的生产过程中，最大的挑战在于，要防止蛋白产品微生物污染。过滤和降低温度是控制微生物污染的有效方式之一。在低温(不结冰)和无菌过滤(0.22微米孔径)的条件下，层析可以长时间连续地运行，以达到较高的生产效率，然而目前并没有出现一种可以将低温、无菌过滤和层析能连续在一起的相关设备。

有鉴于此，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明的第一目的在于提供一种蛋白纯化系统，该系统通过增加两个过滤器，并在两个过滤器之间增加换热器解决了低温灭菌与常温亲和层析之间无法实现连续性纯化的问题，提高了纯化效率。

本发明的第二目的在于提供一种蛋白纯化方法，该纯化方法相比传统方法具有效率高、产率高、成本低、稳定可靠、微生物污染小等优点。

为了解决以上技术问题，本发明提供了以下技术方案：

一种蛋白纯化系统，包括依次连接的第一除菌过滤器、换热器、第二除菌过滤器和蛋白a亲和层析柱。

以上蛋白纯化系统的工作原理是：

蛋白溶液通过第一除菌过滤器，经过一次过滤除菌，之后经过换热器，经过换热器的缓慢加热，蛋白溶液温度在一定的缓冲时间内达到常温(10-30℃)，再经过第二除菌过滤器的过滤除菌，即可进入蛋白a亲和层析柱进行层析处理。由于在此过程中，蛋白溶液可通过连续化的处理进入蛋白a亲和层析柱，既节省了间断操作的时间，提高了纯化效率，又保证了蛋白a亲和层析的工作温度始终处于最佳范围，进而能够长时间连续运行。

另一方面，本发明采用了两次过滤除菌，蛋白溶液中细菌和病毒含量更低，同时通过换热器的缓慢加热避免了蛋白溶液从低温直接接触室温环境导致的气泡析出问题。

在此基础上，上述系统还可以做如下改进，具体如下。

优选地，所述第一除菌过滤器中滤膜的孔径为0.20～0.22μm。

优选地，所述第二除菌过滤器中滤膜的孔径为0.20～0.22μm。

优选地，所述换热器为水浴加热器。

优选地，所述蛋白a亲和层析柱的填料为mabselectsure、mabselectlx、amspherea3、praestojetteda50或prisma。

本发明中，mabselectlx、amspherea3、praestojetteda50、prisma填料通常为固定的厂家，分别为gehealthcare公司、jsr公司和purolite公司、gehealthcare公司。

与上述纯化系统相对应的蛋白纯化方法如下。

将蛋白溶液进行第一次过滤除菌，之后对其加热，然后进行第二次过滤除菌，在进行蛋白a亲和层析处理。

优选地，所述蛋白a亲和层析的方法为：在上样之后和用洗脱液洗脱目标抗体之前，先用中间清洗缓冲液洗涤柱床；

所述中间清洗缓冲液为：ph值为5～6，电导率为20～100ms/cm的缓冲液。

以上方法利用ph值为5～6，电导率为20～100ms/cm的缓冲液清洗样品，脱除其中的hcp、dna。相比无中间清洗步骤的层析工艺，本发明对hcp、dna的脱除率有显著改进，所得洗脱液中hcp含量低于1000ppm，残留dna的含量低于100pg/mg。

中间清洗缓冲液的ph值和电导率使脱除hcp、dna的关键参数，ph可采用5～6范围内的任意值，例如5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0等，电导率可采用20～100ms/cm范围内的任意值，例如20ms/cm、25ms/cm、30ms/cm、35ms/cm、40ms/cm、45ms/cm、50ms/cm、55ms/cm、60ms/cm、65ms/cm、70ms/cm、75ms/cm、80ms/cm、85ms/cm、90ms/cm、95ms/cm、100ms/cm等。

在以上增加中间清洗的基础上，还可以进行以下改进。

优选地，所述缓冲液为醋酸盐缓冲体系、磷酸盐缓冲体系或柠檬酸盐缓冲体系。

这些缓冲液不会引来外源性杂质，而且原料易得。

对于缓冲液的浓度没有特定限定，例如50mmnaac-hac或1mnaac-hac等。

优选地，所述缓冲液为用氯盐调整电导率的缓冲液，所述氯盐优选氯化钠。

当然，也可以采用其他溶解性好的盐调节电导率，且不仅限于加入一种盐，或者多种组合后加入。

经考察，在以上填料的层析柱中增加中间清洗的步骤，可达到事半功倍的效果，对hcp、dna的去除能力显著提高。

优选地，所述中间清洗缓冲液的ph值为5.5～6，优选5.5～5.8。

优选地，电导率为50～100ms/cm，优选50～80ms/cm。

优选地，所述蛋白a亲和层析的流程依次为：消毒、平衡液洗涤、上样、平衡液洗涤、所述中间清洗缓冲液洗涤、平衡液洗涤、所述洗脱液洗脱目标抗体。

优选地，所述平衡液为tris-hcl+150～160mmnacl、ph7.4～7.6的缓冲液，优选50～55mmtris-hcl。

优选地，所述目标抗体为cho细胞表达的单抗时，所述洗脱液为naac-hac、ph3.0～3.5的缓冲液，优选50～55mmnaac-hac。

优选地，在所述蛋白a亲和层析之后还包括对收集的洗脱液进行阴离子交换层析：

依次消毒、平衡液洗涤、上样、平衡液洗涤。

优选地，所述阴离子交换层析时的平衡液为tris-hcl、ph8.0～8.2的缓冲液。

优选地，所述阴离子交换层析的填料为poros50hq、qsepharoseff、captoq或eshmunoq。

综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：

(1)通过增加两个过滤器，并在两个过滤器之间增加换热器解决了低温灭菌与常温亲和层析之间无法实现连续性纯化的问题，提高了纯化效率；

(2)通过在蛋白a亲和层析提纯抗体时增加中间清洗步骤，提高了对hcp、dna的去除能力，并且相比传统层析有实质性提高；

(3)通过优化蛋白a亲和层析和阴离子交换层析中的其他工艺参数，进一步改善了纯化工艺对hcp、dna的去除能力。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明提供的蛋白纯化系统的示意图；

附图标记：

1-第一除菌过滤器，2-换热器，3-第二除菌过滤器，4-蛋白a亲和层析柱。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

一种蛋白纯化系统如图1所示，图中箭头指示蛋白溶液的流向，包括依次连接的第一除菌过滤器1(膜孔径0.22μm)、换热器2、第二除菌过滤器3膜(孔径0.22μm)和蛋白a亲和层析柱4。

以填料prisma(ge)，层析柱econoline5/250(essentiallife)，直径0.5cm，柱高20.5cm，柱体积4ml的层析柱为例，操作流速300cm/h。

样品来源为cho细胞表达的单抗(mab1)。依次经过第一除菌过滤器、换热器和第二除菌过滤器，其中换热器将蛋白溶液加热至25℃，之后经过除菌过滤进入层析柱。

层析柱中的纯化流程为：用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液平衡层析柱50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1mnacl，ph5.5)洗涤柱床，再用3cv中间清洗缓冲液冲洗柱床(50mmnaac-hac，ph5.5)；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；再用3cv的1mol/l的醋酸溶液冲洗层析柱，用2cv的平衡液平衡层析柱后。以此循环14天。所得洗脱液中的hcp杂质含量为565ppm。

实施例2

一种蛋白纯化系统如图1所示，图中箭头指示蛋白溶液的流向，包括依次连接的第一除菌过滤器1膜孔径0.22μm)、换热器2第二除菌过滤器3膜孔径0.22μm)和蛋白a亲和层析柱4

以填料praestojetteda50(purolite)，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积20ml的层析柱为例，操作流速300cm/h。

样品来源为cho细胞表达的单抗(mab2)。依次经过第一除菌过滤器、换热器和第二除菌过滤器，其中换热器将蛋白溶液加热至25℃，之后经过除菌过滤进入层析柱。

层析柱中的纯化流程为：用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液平衡层析柱50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1mnacl，ph5.5)洗涤柱床，再用3cv中间清洗缓冲液冲洗柱床(50mmnaac-hac，ph5.5)；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；再用3cv的1mol/l的醋酸溶液冲洗层析柱，用2cv的平衡液平衡层析柱后。以此循环14天。所得洗脱液中的hcp杂质含量为835ppm

对比例1

蛋白纯化系统为常规的设置。即产品不经过温度控制和无菌过滤，直接连接层析系统。

以填料prisma(ge)，层析柱econoline5/250(essentiallife)，直径0.5cm，柱高20.5cm，柱体积4ml的层析柱为例，操作流速300cm/h。

样品来源为cho细胞表达的单抗(mab1)。经过了深层过滤澄清处理。

层析柱中的纯化流程为：用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液平衡层析柱50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1mnacl，ph5.5)洗涤柱床，再用3cv中间清洗缓冲液冲洗柱床(50mmnaac-hac，ph5.5)；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；再用3cv的1mol/l的醋酸溶液冲洗层析柱，用2cv的平衡液平衡层析柱后。以此循环2天后，层析柱明显滋生细菌。层析柱变色，柱压力上升。终止层析实验。所得洗脱液中的hcp杂质含量为1288ppm。

对比例2

蛋白纯化系统为常规的设置。即产品不经过温度控制和无菌过滤，直接连接层析系统。

以填料prisma(ge)，层析柱econoline5/250(essentiallife)，直径0.5cm，柱高20.5cm，柱体积4ml的层析柱为例，操作流速300cm/h。

样品来源为cho细胞表达的单抗(mab2)。经过了深层过滤澄清处理。依次经过降温和除菌过滤进入层析柱。

层析柱中的纯化流程为：用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液平衡层析柱50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1mnacl，ph5.5)洗涤柱床，再用3cv中间清洗缓冲液冲洗柱床(50mmnaac-hac，ph5.5)；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；再用3cv的1mol/l的醋酸溶液冲洗层析柱，用2cv的平衡液平衡层析柱后。以此循环1小时后，层析系统和层析柱产生气泡(因为冷的液体遇到室温下的系统和层析柱，析出空气)。终止层析实验。所得洗脱液中的hcp杂质含量为753ppm。

实施例1、2和对比例1、2的结果对比：

比较实施例1、2和对比例1、2发现，采用过滤换热流程，能够让层析系统能够长时间高效地运行14天，而没有采用该装置的层析系统，则因为细菌滋生在层析系统或者因为气泡析出而无法做到长期稳定运行(至多运行2天)。此外，杂质(hcp)的去除，并没有因为采用了新的装置而收到影响。层析去除hcp的效果反而更佳。

实施例3

mabselectsurelx，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速220cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(编号mab1)。用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为50g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1mnacl，ph5.5，电导率88.5ms/cm)洗涤柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为900ppm，dna残留量为85pg/mg。

poros50hq，层析柱benchmark06/25(omnifit)，直径0.66cm，柱高20cm，柱体积6.8ml，操作流速220cm/h。样品来源为上步亲和洗脱液，调整ph至7.5，并且经0.22μm滤膜过滤，x-mulv的添加量为1％(v/v)。用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液(50mmtris-hcl，ph7.5)平衡层析柱；将ph调整和澄清后的样品上样到层析柱，上样载量为100g/l；再用3cv的平衡液洗涤柱床，收集流穿液；最后再用再生溶液(50mmtris-hcl+1mnacl，ph7.5)对层析柱再生；用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，最后用3cv的保存液保存层析柱。该步骤对x-mulv的清除能力可以达到5.1log10。

对比例3

mabselectsurelx，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速220cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(编号mab1)。用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为50g/l；用3cv的平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为3600ppm，dna残留量为400pg/mg。

poros50hq，层析柱benchmark06/25(omnifit)，直径0.66cm，柱高20cm，柱体积6.8ml，操作流速220cm/h。样品来源为上步亲和洗脱液，调整ph至7.5，并且经0.22μm滤膜过滤，x-mulv的添加量为1％(v/v)。用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液(50mmtris-hcl，ph7.5)平衡层析柱；将ph调整和澄清后的样品上样到层析柱，上样载量为100g/l；再用3cv的平衡液洗涤柱床，收集流穿液；最后再用再生溶液(50mmtris-hcl+1mnacl，ph7.5)对层析柱再生；用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，最后用3cv的保存液保存层析柱。该无亲和层析中间清洗步骤的清除能力除能力为4.0log10。

比较实施例3和对比例3，可看出：亲和中间清洗步骤可有效提高x-mulv的清除能力。

实施例4

mabselectsure，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速200cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(mab2)。用3cv的0.1mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(20mmtris-hcl+1mnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为30g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(1mnaac-hac，ph5.8，电导率47.3ms/cm)洗涤柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(100mmhac，ph3.0)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.1mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为960ppm，dna残留量为90pg/mg。

qsepharoseff，层析柱benchmark06/25(omnifit)，直径0.66cm，柱高20cm，柱体积6.8ml，操作流速200cm/h。样品来源为上步亲和洗脱液，调整ph至8.0，并且经0.22μm滤膜过滤，mvm的添加量为1％(v/v)。用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液(50mmtris-hcl，ph8.0)平衡层析柱；将ph调整和澄清后的样品上样到层析柱，上样载量为60g/l；再用3cv的平衡液洗涤柱床，收集流穿液；最后再用再生溶液(50mmtris-hcl+1mnacl，ph8.0)对层析柱再生；用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，最后用3cv的保存液保存层析柱。该步骤对mvm的清除能力可以达到4.5log10。

对比例4

mabselectsure，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速200cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(mab2)。用3cv的0.1mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(20mmtris-hcl+1mnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为30g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(100mmhac，ph3.0)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.1mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为3710ppm，dna残留量为524pg/mg。

qsepharoseff，层析柱benchmark06/25(omnifit)，直径0.66cm，柱高20cm，柱体积6.8ml，操作流速200cm/h。样品来源为上步亲和洗脱液，调整ph至8.0，并且经0.22μm滤膜过滤，mvm的添加量为1％(v/v)。用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用3cv的平衡液(50mmtris-hcl，ph8.0)平衡层析柱；将ph调整和澄清后的样品上样到层析柱，上样载量为60g/l；再用3cv的平衡液洗涤柱床，收集流穿液；最后再用再生溶液(50mmtris-hcl+1mnacl，ph8.0)对层析柱再生；用3cv的0.5mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，最后用3cv的保存液保存层析柱。无亲和层析中间清洗步骤的清除能力除能力为3.3log10。

比较实施例4和对比例4，可看出：亲和中间清洗步骤可有效提高mvm的清除能力。

实施例5

mabselectsurelx，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速220cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(mab1)。用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为50g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1mnacl，ph5.0，电导率91.3ms/cm)洗涤柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为810ppm，dna残留量为78pg/mg。

实施例6

mabselectsurelx，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速220cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(mab1)。用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为50g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(1mnaac-hac+nacl，ph6.0，电导率85.1ms/cm)洗涤柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为970ppm，dna残留量为90pg/mg。

实施例7

mabselectsurelx，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速220cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(编号mab1)。用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为50g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+0.2mnacl，ph5.5，电导率20ms/cm)洗涤柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为990ppm，dna残留量为98pg/mg。

实施例8

mabselectsurelx，层析柱vantage11/250(millipore)，直径1.1cm，柱高20cm，柱体积19.0ml，操作流速220cm/h。样品来源为cho细胞表达的单抗(编号mab1)。用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，再用5cv的平衡液(50mmtris-hcl+150mmnacl，ph7.4)平衡层析柱；将澄清后的细胞培养收获液(hccf)上样到层析柱，上样载量为50g/l；用3cv的平衡液清洗柱床，用3cv的中间清洗缓冲液(50mmnaac-hac+1.2mnacl，ph5.5，电导率100ms/cm)洗涤柱床，再用3cv平衡液清洗柱床；再用3.5cv的洗脱液(50mmnaac-hac，ph3.5)洗脱，收集洗脱液；最后再用3cv的0.2mol/l的氢氧化钠溶液冲洗层析柱，用3cv的平衡液平衡层析柱后，最后用3cv的保存液保存层析柱。洗脱液的hcp含量为890ppm，dna残留量为90pg/mg。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。