一种利伐沙班晶体的制作方法

本发明属于医药合成领域，具体涉及一种利伐沙班晶体及其制备方法和用途。
背景技术：
：抗凝血药物利伐沙班(rivaroxaban)，其化学名称为5-氯-氮-({(5s)-2-氧-3-〔-4-(3-氧-4-吗啉基)苯基〕-1,3-唑烷-5-基}甲基)-2-噻吩-羧酰胺，其分子式为c19h18cln3o5s，分子量为435.88。结构如下所示：利伐沙班(rivaroxaban)是拜尔公司历经10年研发的新型抗凝药物，是一种高级选择性，直接抑制因子xa的口服药物。通过抑制因子xa可以中断凝血瀑布的内源性和外源性途径，抑制凝血酶的产生和血栓形成。具有生物利用度高，治疗疾病谱广，量效关系稳定，口服方便，出血风险低的特点。自2008年9月首次在加拿大上市后，目前在全球120个国家获批。利伐沙班存在多晶态形式，目前wo2007/039132公开了晶型ⅰ、晶型ⅱ、晶型ⅲ、无定形、水合物、nmp和thf溶剂化合物的晶型表征数据和它们的制备方法；cn02292332a报道了利伐沙班的apo-a新晶型；ep2573084a1报道了利伐沙班的b1、b2和e晶型及彼此之间相互转化的制备方法；cn104211693a报道了利伐沙班ⅳ晶型。利伐沙班属于多晶态化合物，不同的利伐沙班晶型具有不同的稳定性、物理性质、溶解度等，而这些性质可以直接影响原料药和制剂的稳定性和生物利用度。但现有晶型的溶解性和稳定性还有待进一步提高。技术实现要素：鉴于现有技术的不足，本发明的一个目的是提供一种利伐沙班晶型；本发明的另一个目的是提供一种利伐沙班晶型的制备方法；本发明的还一个目的是提供一种利伐沙班晶型在制备抗凝血药物中的用途。本发明的具体技术内容如下：一种如式i的利伐沙班晶体，所述晶体状利伐沙班为利伐沙班甲酸溶剂化晶体，使用cu-kα辐射，以2θ表示的x射线衍射谱图在3.5±0.2°，4.8±0.2°，7.1±0.2°，7.8±0.2°，8.9±0.2°，9.7±0.2°有特征峰；优选地，所述利伐沙班晶体使用cu-kα辐射，以2θ表示的x射线衍射谱图在3.5±0.2°，4.8±0.2°，7.1±0.2°，7.8±0.2°，8.9±0.2°，9.7±0.2°，13.1±0.2°，15.8±0.2°，19.5±0.2°，22.4±0.2°，26.5±0.2°有特征峰。优选地，所述利伐沙班晶体使用cu-kα辐射，以2θ表示的x射线衍射谱图在3.5±0.2°，4.8±0.2°，7.1±0.2°,7.8±0.2°，8.9±0.2°，9.7±0.2°，11.9±0.2°，13.1±0.2°,14.4±0.2°，15.8±0.2°，19.5±0.2°，19.8±0.2°，21.7±0.2°，22.4±0.2°，25.5±0.2°，26.5±0.2°有特征峰。优选地，所述利伐沙班晶体使用cu-kα辐射，其特征峰符合如图1所示的x射线粉末衍射谱图。优选地，所述的利伐沙班晶体，其晶体学参数是：三斜晶系，手性空间群为p-1；晶胞参数为：a＝9.1107(6)，b＝9.4028(7)，c＝24.7182(2)，α＝96.1124(6)°，β＝94.4983(6)°，γ＝100.8370(6)°，晶胞体积一种如式i的利伐他班晶体的制备方法，具体包括以下步骤：将利伐沙班晶型i加入甲酸中，加热搅拌至利伐沙班晶型i完全溶解，缓慢降温后，过滤，置于小烧杯中，封口膜封口，扎孔，挥发，结晶，过滤，减压干燥得利伐沙班甲酸溶剂化晶体。优选地，所述利伐他班晶体的制备方法，利伐沙班与甲酸的质量体积比5～20：1，其中质量以mg计，体积以ml计。优选地，所述利伐他班晶体的制备方法，加热溶解温度为：40～80℃，加热时间为1～5h；降温温度为0～25℃。一种如式i的利伐沙班晶体作为活性成分制备抗凝血药物的应用。一种药物组合物，该组合物含有本发明所述的利伐沙班晶体，并混有其它组分。优选地，本发明的药物组合物的制备方法如下：使用标准和常规的技术，使本发明化合物与制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形剂结合制备成可用剂型。优选的，所述的其它组分包括可联合使用的其它活性成分、赋形剂、填充剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。更加优选地，所述稀释剂选自淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇中的一种或几种；所述粘合剂选自甲基纤维素、羟丙纤维素、羟丙甲纤维素、羟甲基纤维素钠、乙基纤维素和聚维酮中的一种或几种；所述崩解剂选自羧甲淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲纤维素钠和交联聚维酮中的一种或几种；所述润滑剂选自硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉和十二烷基硫酸钠中的一种或几种。优选的，所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂和丸剂等。晶体结构的确认:本发明所述利伐沙班晶型测试中x-射线粉末衍射测试仪器及测试条件为：帕纳科empyreanx-射线粉末衍射仪；光源铜靶，平板样品台，bbhd入射光路，pzxcel衍射光路，电压45kv，电流40ma，发散狭缝为1/4°，防散射狭缝为1°，索拉狭缝为0.04rad，每步计数时间0.5s，扫描范围3～50°。本发明所述利伐沙班晶型用tga/dsc热分析测试条件为：梅特勒-托利多tga/dsc热分析仪(型号：tga/dsc3+)，动态温度段：30～250℃，加热速率：10℃/min，程序段气体n2，流量：50ml/min，坩埚：铝坩埚40μl。如图2所示，所述利伐沙班晶型经tga/dsc检测在45.96℃处有微弱的吸热峰和微弱的失重，为利伐沙班晶型表面的溶剂失去所致；在137.39～142.46℃有强的吸热峰和对应失重了8.43％，为失去一分子甲酸；在231.74～233.98℃有强的吸热峰，为利伐沙班晶型i的熔点，所以此利伐沙班晶型为利伐沙班甲酸溶剂化晶体。本发明所述利伐沙班晶型用x-射线单晶衍射测试条件为：理学xtalabsynergyx-射线单晶衍射仪；光源铜靶，温度293k，电压50kv，电流1ma，收集方法为正交法，扫描时间45min。采用cu-ka靶射线扫描进行数据收集，进一步进行结构解析得到x-射线单晶衍射图(sxrd)，如图2所示。其晶胞参数为a＝9.1107(6)，b＝9.4028(7)，c＝24.7182(2)，α＝96.1124(6)°，β＝94.4983(6)°，γ＝100.8370(6)°，晶胞体积从sxrd图3中可以看出，一个晶胞中一分子的利伐沙班含有一分子的甲酸，所以判断此晶型为利伐沙班甲酸溶剂化晶型。表1.利伐沙班甲酸溶剂化晶体i主要的xrd峰与现有技术相比，本发明的优势在于：1)本发明所提供的利伐沙班甲酸溶剂化晶体i在水中、0.01mol/l盐酸、ph4.5醋酸和ph6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度显著高于现有的利伐沙班晶体，从而能在胃酸环境下更充分的溶解，从而提高药效。2)本发明所提供的利伐沙班甲酸溶剂化晶体i无论是在固态还是溶液状态下都具有较好的化学稳定性，从而可以更好的储存。3)本发明所提供的利伐沙班甲酸溶剂化晶体i制备的片剂药物快速溶出，从而能够快速起效，抑制凝血酶的产生和血栓形成。4)动物试验结果显示：本发明所提供的利伐沙班甲酸溶剂化晶体i制备的片剂可明显增加大鼠断尾出血时间和出血量，抗凝血效果显著。附图说明图1：利伐沙班甲酸溶剂化晶体i的x射线粉末衍射图谱。图2：利伐沙班甲酸溶剂化晶体i的dsc-tga图。图3：利伐沙班甲酸溶剂化晶体i的ortep图。图4：利伐沙班甲酸溶剂化晶体i氢键图。具体实施方式现通过以下实施例来进一步描述本发明的有益效果，实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围，同时本领域普通技术人员根据本发明所做的显而易见的改变和修饰也包含在本发明范围之内。实施例1-5中所制备的所有样品都具有相同的晶体学参数及x射线粉末衍射谱图。实施例1：将1g利伐沙班晶型i加入100ml甲酸中，配制成10mg/ml的利伐沙班甲酸溶液，加热至70℃，搅拌2h利伐沙班晶型i完全溶解，缓慢降温至10℃后，过滤，置于小烧杯中，封口膜封口，扎孔，挥发，结晶3天，过滤，50℃减压干燥得利伐沙班甲酸溶剂化晶体i。收率：98.1％，hplc纯度：99.95％。实施例2：将1g利伐沙班晶型i加入50ml甲酸中，配制成20mg/ml的利伐沙班甲酸溶液，加热至80℃，搅拌2h利伐沙班晶型i完全溶解，缓慢降温至25℃后，过滤，置于小烧杯中，封口膜封口，扎孔，挥发，结晶2天，过滤，50℃减压干燥得利伐沙班甲酸溶剂化晶体i。收率：96.2％，hplc纯度：99.93％。实施例3：将1g利伐沙班晶型i加入200ml甲酸中，配制成5mg/ml的利伐沙班甲酸溶液，加热至40℃，搅拌2h利伐沙班晶型i完全溶解，缓慢降温至0℃后，过滤，置于小烧杯中，封口膜封口，扎孔，挥发，结晶5天，过滤，50℃减压干燥得利伐沙班甲酸溶剂化晶体i。收率：95.7％，hplc纯度：99.91％。实施例4：将1g利伐沙班晶型i加入33ml甲酸中，配制成30mg/ml的利伐沙班甲酸溶液，加热至75℃，搅拌3h利伐沙班晶型i完全溶解，缓慢降温至30℃后，过滤，置于小烧杯中，封口膜封口，扎孔，挥发，结晶2天，过滤，50℃减压干燥得利伐沙班甲酸溶剂化晶体i。收率：92.6％，hplc纯度：99.70％。实施例5：将1g利伐沙班晶型i加入20ml甲酸中，配制成50mg/ml的利伐沙班甲酸溶液，加热至40℃，搅拌2h利伐沙班晶型i完全溶解，缓慢降温至25℃后，过滤，置于小烧杯中，封口膜封口，扎孔，挥发，结晶2天，过滤，50℃减压干燥得利伐沙班甲酸溶剂化晶体i。收率：90.7％，hplc纯度：99.52％。实施例6：含有利伐沙班甲酸溶剂化晶体i的片剂的制备方法(1)处方成分投料量利伐沙班甲酸溶剂化晶体i依利伐沙班计2g微晶纤维素8乳糖5.58交联羧甲基纤维素钠0.6羟丙甲纤维素0.6十二烷基硫酸钠0.1硬脂酸镁0.12共制成200片(2)片剂制备采用如下工艺进行压片。预处理：将利伐沙班微粉化，备用。黏合剂配制：配制8％的羟丙甲纤维素水溶液，备用。预混：称取利伐沙班、微晶纤维素、乳糖、交联羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠混合均匀。制粒：制软材，20目筛制粒。干燥：55～60℃干燥。整粒：20目筛整粒。总混：加入硬脂酸镁总混均匀。压片：直径6mm浅凹冲压片。生物利用度实验：利伐沙班甲酸溶剂化晶体i对大鼠出血模型的影响(1)材料①药物ⅰ、利伐沙班片(拜瑞妥)(内含利伐沙班规格为10.0mg，bayerpharmaag生产，批号bxheb31)，给药时使用聚乙二醇400–乙醇–水(3∶1∶1)溶解至所需浓度的灌胃液，分别按照2.5mg·kg-1·d-1、1mg·kg-1·d-1的剂量灌胃。ii、试验药，包括对比实施例5中制得的利伐沙班γ环糊精晶体制备的片剂，给药时使用聚乙二醇400–乙醇–水(3∶1∶1)溶解至所需浓度的灌胃液，分别按照2.5mg·kg-1·d-1、1mg·kg-1·d-1的剂量灌胃。iii、试验药，包括实施例1中制得的利伐沙班甲酸溶剂化晶体i制备的片剂，给药时使用聚乙二醇400–乙醇–水(3∶1∶1)溶解至所需浓度的灌胃液，分别按照2.5mg·kg-1·d-1、1mg·kg-1·d-1的剂量灌胃。②动物wistar大鼠，清洁级，雌雄兼用，250～300g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证号scxk(京)2012-0001。(2)方法：利伐沙班对大鼠断尾出血时间和出血量的影响wistar大鼠，雌雄各半，按体质量随机分为7组，即对照组(1组)、拜瑞妥组(2组)、利伐沙班γ环糊精组(2组)、利伐沙班甲酸溶剂化晶体i组(2组)，每组10只。拜瑞妥组(2组)、利伐沙班γ环糊精组(2组)、利伐沙班甲酸溶剂化晶体i组(2组)，剂量分别为2.5、1.0mg/kg，对照组给予等体积的溶剂，给药体积均为1ml/100g体质量。大鼠给药1.5h后，采用断尾法测定出血时间和出血量，即大鼠尾部清洗消毒后，在距尾尖部5mm处切断鼠尾，然后将创面置于1ml37℃水浴生理盐水内，记录从断尾部到停止流血的时间，即为出血时间；通过比色法测定生理盐水内蛋白量，计算大鼠出血量。(3)结果：利伐沙班对大鼠断尾出血时间和出血量的影响大鼠给予拜瑞妥、利伐沙班γ环糊精组、利伐沙班甲酸溶剂化晶体i组后，断尾出血时间均有不同程度的延长，其中给予利伐沙班甲酸溶剂化晶体i制备的片剂的大鼠，其断尾出血时间和出血量均较另外两组显著延长和提高。结果见表2。表2不同晶型利伐沙班对大鼠断尾出血时间和出血量的影响本实验通过对大鼠断尾出血时间和出血量的检测，结果表明给药2.5mg/kg、1.0mg/kg时，给予利伐沙班甲酸溶剂化晶i体制备的片剂，大鼠出血时间和出血量均比给予拜瑞妥、利伐沙班γ环糊精片剂的大鼠出血时间和出血量延长及提高28％～59％，表明本发明制备的利伐沙班甲酸溶剂化晶体i可以有效抑制凝血酶活性及血栓形成，具有较高的生物利用度。对比实施例1将利伐沙班粗品10g加入到50ml无水甲酸中，搅拌加热至30℃，完全澄清后过滤，得澄清溶液。向滤液中滴加150ml乙酸乙酯，搅拌析晶；混合物冷却至室温后置于冰水浴中搅拌析晶2h；过滤。滤饼于45～55℃减压干燥至恒重，得9.2g白色固体即晶型。收率：88％，纯度：97.8％。对比实施例2将2g利伐沙班(晶型i)悬浮于13g甲酸中，水浴加热混合物至约55℃，得到溶液。加入55g乙腈，将混合物冷却至室温，然后将悬浮液存储于冰箱(+4℃)中过夜。过滤分离晶体，真空干燥(约20mbar)过夜。产量1.6g，收率72.4％：纯度：96.4％。对比实施例3将对比实施例2制得的利伐沙班甲酸晶体0.5g悬浮于水中，室温搅拌约1小时，向悬浮液中加入1.25ml(1.2eq)1m的naoh溶液，混合物在室温下搅拌16h，过滤，水洗固体，抽滤15min，得到无色湿的结晶固体，为利伐沙班二水合物。hplc纯度：97.4％。对比实施例4将4.5g(10.32mmmol)利伐沙班多晶型i(hplc纯度：99.6％)溶于9.5ml2,2,2-三氟乙醇(70～80℃)中，向上述热溶液中加入1.29g(10.15mmol)二水草酸。将溶液在该温度下搅拌5min，搅拌反应物冷却至室温，4h后，过滤产物并用红外灯干燥，得到3.5g(64％)白色固体，为利伐沙班-草酸(1:1)共晶。纯度：97.5％。熔点168-169℃。对比实施例51.56g(3.58mmol)利伐沙班晶型i溶于70-80℃的2,2,2-三氟乙醇(17.1ml)和蒸馏水(3.6ml)的混合溶液中，向热溶液中加入4.68g(3.61mmol)γ环糊精，在此温度搅拌5min，滴加18ml甲醇，混合物继续搅拌10min，然后冷却至室温。24h后，过滤得沉淀产物。收率72.3％，hplc纯度：93.9。对比实施例6将2120g含溶剂的利伐沙班粗产物(剩余含水量)悬浮在12kg乙酸中，将其加热到110～115℃。在此温度下搅拌所得溶液10min，在溶液澄清过滤后，将其冷却至20℃。用抽吸滤出沉淀的产物，用乙酸和水洗涤，干燥，得1783g，收率92.9％，纯度：93.7％。熔点：230℃。稳定性试验利伐沙班甲酸晶体在溶液状态的稳定性考察取实施例制备得到的利伐沙班甲酸晶体溶解于水中，将利伐沙班溶液放置于25℃的环境中，考察利伐沙班甲酸晶体在溶液状态下的稳定性，每隔两小时取样测试其中杂质的含量，测试结果见表3。表3利伐沙班甲酸晶型在溶液状态下的稳定性试验结果已知现有的利伐沙班晶型，总杂质的含量都随着溶解时间的延长呈增大趋势。经试验得知，本发明的利伐沙班甲酸晶体溶液在25℃的环境中，样品的纯度及总杂质含量均未发生明显改变；而对比例1晶型至对比例6晶型在同样的条件下，其总杂质的含量在不断的增大，由此可见，相比于现有的利伐沙班晶型，本发明制备的利伐沙班甲酸晶体在溶液状态下具有较好的稳定性。3.2利伐沙班温湿度及光照试验取实施例制备得到的利伐沙班甲酸溶剂化合物晶体i，参照中国药典原料药和药物制剂的稳定性试验指导原则的方法考察利伐沙班甲酸溶解化合物晶体的稳定性，测试结果见表4。表4利伐沙班甲酸晶体在光照、高温及高湿条件下的稳定性试验结果经试验得知，本发明制备得到的利伐沙班甲酸晶体在光照、高温及高湿的条件下其纯度、外观均未发生比较明显的变化，而对比例1晶型至对比例6晶型在相同的实验条件下其纯度大幅降低，其杂质含量都有较明显的升高，即出现了变质的情况，可见本发明制备的利伐沙班甲酸晶体相比于现有的晶型具有较好的化学稳定性。溶解性试验参考国家食品药品监督管理局进口药品注册标准。醋酸盐缓冲液的制备：取2.99g醋酸钠，置于1000ml水中，加1.66ml冰醋酸和20ml的10％sds溶液，用氢氧化钠或冰醋酸调节ph值至4.5±0.1。900ml为溶出介质。分别测定实施例在水及不同ph溶液中的溶解度。分别量取900ml的介质(水、0.01mol/lhcl溶液、ph4.5的醋酸缓冲液、ph6.8的pbs)于西林瓶中，加入过量的药物，将西林瓶密封置37℃水浴恒温搅拌1小时，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液在250nm的波长处分别测定吸光度，通过测试标准对照品的吸光度来计算其溶解度。表5利伐沙班甲酸晶体在不同介质中的溶解度(μg/ml)本实验结果证实了以本申请方法制备的利伐沙班甲酸晶型在不同ph溶液中溶解度均高于其他晶型。经验证，各种方法所得本申请晶型优于晶型ⅰ、晶型ⅱ、晶型ⅲ、无定形、水合物、nmp、thf溶剂化合物的晶型、晶型b1、晶型b2、晶型e、apo-a晶型和γ环糊精晶型。溶出试验溶出度测定将实施例产品按照原研制剂处方制备片剂后，测定溶出。过80目筛，分别称取过筛后粉末10mg，按照《中国药典》2010年版二部附录xc第二法(桨法)装置，溶出介质分别为900ml水，转速75rpm，温度37℃。分别于5、10、15、30、45min取样2ml，样品过0.22μm滤膜，进样于hplc，计算溶出度。结果见表6。固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：40％乙腈-60％水流速：1.0ml/min检测波长：250nm柱温：25℃表6不同利伐沙班晶型片剂在水中的溶出百分量/％本申请所得晶型制备的片剂溶出度高于其他晶型制备的片剂溶出度。经验证高于晶型i、晶型ii、晶型iii、晶型iv、晶型b1、晶型b2、晶型e、无定形、apo-a晶型、丙二酸共晶、水合物、nmp和thf溶剂化合物。当前第1页12